高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化及其电镜表现

目的观察高磷条件体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是否发生钙含量的变化及其电镜下的微观表现。方法应用大鼠原代血管平滑肌细胞进行体外实验,将培养细胞分为对照组和高磷组。在培养的10d内观察细胞的形态学变化,并应用原子分光光度计检测细胞钙含量,应用电镜观察细胞的微观变化。结果对照组细胞VSMCs钙含量在10d内无明显增加,高磷组VSMCs钙含量在培养第8天后明显增加,与换液当天比较差异有统计学意义(P<0.01)。2组细胞电镜下第10天VSMCs细胞外基质中均可见大量胶原纤维,高磷组还可见高密度电子致密物呈颗粒状沿胶原纤维沉积。结论高磷条件可诱导体外培养的大鼠VSMCs细胞钙含量增加。电镜下高密度电子致密物呈颗粒状并沿胶原纤维沉积。     

高血压对脑血管壁损伤病理改变的研究

目的探讨高血压（EH）与脑血管壁损伤的关系。方法对56例不同临床分级的高血压患者（实验组）及20例体检健康的正常人（对照组）分别行颅多普勒检查,并求出不同血管的搏动指数PI值。结果高血压1级组大脑动脉出现单支血管或多支血管单纯血流异常加速,脑血管痉挛,PI值正常。高血压2级组单支血管和多支血管出现血流速度趋于正常或降低,脑供血不足,PI升高。高血压3级组多支血管狭窄,供血不足且伴有脑动脉硬化的TCD表现,PI值加大更加明显。与正常组比较,有显着差异。结论通过经颅多普勒检测来对脑血管壁损伤作出定量诊断,可为临床工作提供客观指标和依据。     

暂时阻断夹对局部血管壁损伤的电镜研究

目的探导暂时阻断夹夹闭颈内动脉、大脑中动脉不同时限对局部血管壁损伤的情况。方法将SD大鼠64只随机分为颈内动脉和大脑中动脉两组,每组又随机分为四个亚组。手术暴露颈内动脉或大脑中动脉后,用动脉暂时阻断夹夹闭颈内动脉或大脑中动脉,分别阻断0．5h,lh,2h,2．5h后,再灌流至24h,然后处死动物。取夹闭段动脉,用电镜观察血管壁超微结构改变。结果夹闭30min组,偶见内皮细胞浆内出现空泡,细微处可见平滑肌细胞粗面内质网扩张;夹闭60min组可见平滑肌细胞线粒体轻度肿胀,肌层稍变厚,其间偶见有新分泌形成的胶原蛋白或／和弹性蛋白,内皮细胞浆内出现散在空泡,有少许疏松的细胞间质;夹闭120min组见肌层增厚明显,平滑肌线粒体肿胀,中膜平滑肌伸出较长的突起。穿越附近的平滑肌细胞及内弹力层而达内皮下层,其细胞突起周围则见有较多新分泌形成的胶原蛋白或／和弹性蛋白;部分可见内皮细胞层与内弹力膜层分离;夹闭150min组内皮细胞核出现固缩,部分内皮细胞层脱落。结论夹闭60min是血管壁能耐受的最大极限,如进一步延长夹闭时间,可引起局部血管壁的损伤和管腔的狭窄,以及内皮细胞的脱落形成栓子,造成不可逆的脑缺血损害。     

过度劳累对大鼠动脉血管壁细胞外基质的影响

目的 探讨过度劳累(OW)对大鼠动脉血管壁细胞外基质的影响。方法 清洁级SD大鼠18只,采用随机数字分组法分为3组(n=6):对照组无特殊处理;OW组每日强迫游泳2次,连续15 d;睡眠限制(SD)+OW组每日强迫游泳2次后放入水上平台限制睡眠,连续15 d。第16天深度麻醉大鼠,心脏取血后分离大鼠腹主动脉与颈总动脉,取部分腹主动脉进行胶原纤维Masson染色,颈总动脉行弹性纤维EVG染色,用Image J图像软件定量分析胶原纤维和弹性纤维含量,用免疫组织化学法进行Ⅰ型胶原(Col-1)蛋白定量,透射电镜检查血管基质超微结构;其余腹主动脉采用实时荧光定量PCR分析方法测定基质金属蛋白酶(MMP)-1、 MMP-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及Col-1的mRNA表达。结果 胶原纤维定量分析显示,与对照组相比,OW组与SD+OW组胶原纤维含量差异均无统计学意义(P均>0.05);弹性纤维定量分析显示,与对照组相比,OW组与SD+OW组弹性纤维含量均显著下降(P均<0.001),OW组与SD+OW组比较差异无统计学意义(P>0.05);透射电镜显示,与对照组相比,OW组血管壁出现轻微纤维断裂,SD+OW组血管壁纤维出现虫蛀样或海绵状纤维碎裂;实时荧光定量PCR分析结果显示,与对照组相比,OW组和SD+OW组MMP-1与MMP-2的mRNA表达均显著增加(P均<0.001),OW组与SD+OW组比较差异无统计学意义(P>0.05);3组MMP-9、TIMP-1的mRNA表达差异均无统计学意义(P均>0.05);OW组与SD+OW组Col-1的mRNA表达均显著低于对照组(P均<0.001),Col-1的蛋白表达也显著低于对照组(P均<0.001),OW组与SD+OW组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OW可降低动脉血管细胞外基质中Col-1与弹性纤维含量,破坏血管壁的弹性板层,增加MMP-1与MMP-2的表达,造成动脉血管损伤。     

应用MRI和电镜观察pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓的修复作用

目的：探讨ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰雪旺氏细胞（ＳＣ）对损伤脊髓再生修复的作用。方法：采用切割法制备健康ＳＤ大鼠脊髓半横断损伤模型，随机植入ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰的ＳＣ（Ａ组），高纯化的ＳＣ（Ｂ组），仅植入明胶海绵的损伤对照组（Ｃ组）。受体鼠存活３月，行ＭＲＩ扫描，取材作电镜（ＴＥＭ）观察。结果：ＭＲＩ发现：Ａ组动物，脊髓损伤（ＳＣＩ）区脊髓信号已基本恢复正常，Ｂ组动物未恢复正常，而Ｃ组动     

实验性动脉内膜损伤后抑制血管平滑肌细胞增生的研究

目的 :观察血管内膜损伤后 c- m yc反义 RNA在抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)增生、迁移及防止动脉粥样硬化形成和血管再狭窄中的作用。方法 :选雄性日本大白兔 36只 ,经球囊造成腹主动脉内膜损伤的同时 ,局部给予 c- myc反义 RNA、正义 RNA及盐水 ,高胆固醇喂养 12周处死。测量内膜厚度 ,计数增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞数。结果 :盐水及正义 RNA对照组动脉内膜明显增厚 (317μm) ,PCNA阳性细胞数明显增多 (6 2 % ) ,可见明显的粥样斑块灶形成。而反义 RNA治疗组内膜增厚度为 2 17μm,PCNA阳性细胞为 30 .5 % ,明显低于对照组 (P <0 .0 1)。结论 :c- myc反义 RNA具有显著抑制 VSMC增生 ,减轻粥样斑块形成的作用。     

实验性光损伤大鼠视网膜病理改变的电镜观察

目的：观察实验性光损伤大鼠视网膜组织病理学特点。方法：取健康成年SD大鼠40只，随机分成正常对照组（CON）、光损伤后１天（D1）、３天（D3）、５天（D５）组，每组１０只。D1、D3、D5组大鼠采用4178Lux照度的可见光进行１２小时间歇光照射，连续３天，总计36小时，然后在正常环境中分别饲养1天、３天、５天。灌流固定，摘取眼球，制成超薄切片，应用电镜技术方法进行研究。结果：正常大鼠视网膜组织结构层次清楚，染色均匀，细胞形态规整。光照后１天，光感受器外节膜盘叠状结构解离，外核层核染色质开始固缩。光照后３天，视网膜内节线粒体肿胀，空泡性变，外核层核染色质向中心聚集，呈岛状。光照后５天，视网膜光损伤达到高峰，视网膜内、外节空泡变明显增多，外核层出现细胞核碎裂，边集，光感受器细胞内线粒体空泡变，核膜皱缩，内陷。光照后各组大鼠视网膜色素上皮、内核层及节细胞未见明显改变。结论：实验性光损伤大鼠视网膜组织病理特点是光感受器的退行性变。     

动脉内膜损伤模型中合成型平滑肌细胞的培养

目的 建立更新近在体情况的合成型血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的培养体系。方法 培养细胞取材于兔动脉内膜损伤后的增生内膜。结果 培养细胞１０天后光镜下表现典型的“峰”、“谷”样排列,免疫组化证实昌ＶＳＭＣ,电镜下细胞表现有全成型细胞的特点。结论直接对合成型ＶＳＭＣ的培养优于单纯中膜ＶＳＭＣ培养。     

环孢霉素A和FK506对高脂血症大鼠血管内皮的影响

目的对比观察免疫抑制剂FK506和环孢霉素A(CsA)对高脂血症大鼠血管内皮细胞的影响。方法建立高脂血症大鼠模型,分别采用CsA〔2mg/(kg.d)〕和FK506〔0.2mg/(kg.d)〕灌喂7d进行干预,取胸主动脉HE染色观察对血管内皮的影响。采用RT-PCR和免疫组织化学染色观察血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、补体促衰变因子(DAF)和C反应蛋白(CRP)基因和蛋白的表达;取血清检测活性氧簇(ROS)水平。结果与FK506相比,CsA损伤高脂血症大鼠血管内皮细胞,破坏血管内皮的完整性。CsA明显抑制高脂血症大鼠血管内皮中VEGF和DAF基因和蛋白的表达,上调CRP基因和蛋白的表达,而FK506无上述干预效应。此外,CsA还能明显上调ROS水平,FK506无相似的效应。结论在高脂环境中,CsA能通过VEGF/DAF和ROS/CRP途径激活补体系统,从而导致补体所介导的血管内皮细胞的损伤;而FK506对VEGF/DAF通路和ROS/CRP表达均没有明显的影响。     

全反式维甲酸对大鼠腹主动脉球囊损伤后血管重塑的影响

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对球囊损伤大鼠腹主动脉血管重塑的影响。方法:制作球囊损伤的大鼠腹主动脉剥脱模型,12只Wistar大鼠随机分为①对照组:6只腹腔内注射intralipid(1mL/d),②ATRA组:6只腹腔内注射溶解于intralipid的ATRA(4mg·kg~(-1)·d~(-1)).球囊损伤14d后,损伤区域的血管段用10％福尔马林固定,然后染色,进行形态学分析。结果:ATRA明显减小新生内膜面积(IA),增加管腔面积(LA)和外弹力膜包绕面积(EEL)。结论:ATRA具有促进有益的血管重塑的作用。     

催产素舒张血管的作用及其机制

目的观察催产素（OT）的血管舒张作用并探讨其可能机制。方法采用大鼠离体血管功能实验装置,描记张力变化,血管按随机数表分组,每组6枚血管环,分别保留或去除内皮,各阻断剂预处理30min之后做OT舒张曲线。结果 OT不能舒张苯肾上腺素（PE）预收缩的内皮完整非孕大鼠血管环。而OT（0.1U-3.2U）浓度依赖性地舒张苯肾上腺素（PE）预收缩的内皮完整或去除内皮的大鼠胸主动脉环。一氧化氮合成酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）可抑制PE诱导的血管舒张作用（P〈0.01）;环氧合酶抑制剂吲哚美辛（Indo）对PE诱导的血管舒张作用无影响。钾通道阻断剂四乙胺（TEA）3mmol/L预处理可减弱OT对内皮完好血管的舒张效应。OT对PE诱导的血管舒张作用与Ca2＋浓度无关。结论 OT具有舒张孕鼠血管作用,其机制与NO-cGMP途径和血管平滑肌钾通道有关。     

卡托普利对大鼠左向右分流模型肺小动脉重构的影响

目的观察血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对肺循环容量负荷过重导致的肺血管重构的影响。方法采用腹主动脉一下腔静脉瘘制造大鼠容量负荷性肺动脉高压（PH）模型,并应用卡托普利进行干预,6周后观察各组肺动脉收缩压（PASP）、舒张压（PADP）、右室收缩压（RVSP）变化;心室重量变化;采用免疫组化染色比较肺血管平滑肌细胞（VSMC）α-平滑肌肌动蛋白（α-actin）及增殖细胞核抗原（PCNA）的阳性表达,比较15-50μm无肌性动脉肌性化程度以及肺小动脉50～100μm和101150μm血管厚度与血管外径之比（％WT）。结果手术组动物RVSP、PASP、PADP较对照组显著升高（P〈0．05）,手术＋卡托普利组RVSP、PASP、PADP均低于手术组（P〈0．05）;手术组RV／（LV＋S）、RV／BW、（LV＋S）／BW较对照组显著增加（P〈0．001）,而手术＋卡托普利组则较手术组明显降低（p〈0．01）,同对照组比较,手术组α-actin染色IOD值显著降低（P〈0．01）,而手术＋卡托普利组IOD值则高于手术组（P〈0．05）,手术组细胞PCNA阳性率显著升高（P〈0．01）,而手术＋卡托普利组低于手术组（P〈0．05）;手术组同其他两组比较,50～100μm、101～150μm血管％WT及15～50μm血管肌性化百分比显著增加（P〈0．01,）。结论卡托普利能有效地抑制肺动脉VSMC由收缩表型向合成表型转化,抑制VSMC的增生和肥厚,防止无肌性肺小动脉的肌性化,减缓PH肺血管重构进程,提示ACEI对左向右分流型先心病肺动脉高压有治疗前景。     

细胞内胆固醇含量对血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 探讨细胞内胆固醇含量对血管平滑肌细胞钙化的影响。方法 分别采用生长培养基（磷1.4mmol/L）和钙化培养基（磷3.0mmol/L）,培养人脐静脉血管平滑肌细胞,使用甲基酚酞络合铜法检测细胞基质钙、比色法检测碱性磷酸酶活性、荧光酶标法检测细胞内胆固醇含量,茜素红S染色观察细胞基质钙盐沉积。在钙化培养基下,细胞给予不同浓度的胆固醇刺激,观察上述指标的变化。结果 与生长培养基比较,钙化培养基培养细胞3天、7天时均能增加细胞基质钙、碱性磷酸酶活性和细胞内胆固醇含量,组间和组内差异有统计学意义（P<0.05）,培养14天时茜素红染色显示大量染色阳性的钙质沉积。在钙化培养基下,分别添加10、15、20、25μmol/L胆固醇刺激细胞72h,呈剂量依赖式地增加细胞基质钙、碱性磷酸酶活性和细胞内胆固醇含量,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。细胞内胆固醇含量与基质钙、ALP活性呈正相关（P<0.05）。结论 细胞内的高胆固醇含量,能加重高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化。     

丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP1)对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法 转染MKP1质粒72h后，收集培养的血管平滑肌细胞(VSMC)，利用P^42／P^44磷酸化抗MAPK抗体通过免疫印迹法测定MAPK活性，用流试细胞仪测定细胞周期、细胞周期素和P27蛋白的表达。结果 转染MKP1质粒后，MAPK活性明显下降，VSMC阻滞于G0-G1期，同时抑制了细胞周期素D、E的表达，P27蛋白表达却明显增加。结论 MKP1抑制VSMC增殖可能是通过降低MAPK活性，抑制细胞周期素表达和增加P27蛋白表达途径实现的。     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,对原癌基因c-fos和bc l-2蛋白质以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用。方法以细胞计数法,流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。在凝血酶及葛根素作用24 h后,用W estern印迹法检测c-fos和bc l-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TR mRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值(细胞计数凝血酶组8.64×104/m l±0.12×104/m l,对照组4.20×104/m l±0.11×104/m l,P<0.05),且凝血酶浓度在0.1~1.0 U/L之间呈剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bc l-2蛋白的表达(葛根素浓度为1.5×10-3mol/L时,抑制率分别为42.6%±5.2%、58.2%±7.9%、44.5%±7.5%和39.6%±6.4%,均P<0.05);高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TR mRNA上调(抑制率为17.6%±1.7%,P<0.05)。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bc l-2蛋白有关,并部分与其抑制TR mRNA表达有关。     

人巨细胞病毒对兔平滑肌细胞LOX 1表达的影响

目的了解人巨细胞病毒(HCMV)感染对兔平滑肌细胞(SMC)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体 1(LOX 1)表达的影响,探讨HCMV在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的可能作用机制。方法采用RT PCR、Western blotting等技术检测HCMV ADl69株感染的兔SMC中LOX 1的表达。结果HCMV感染兔SMC后,LOX 1表达明显升高（P＜0.01）。结论HCMV可引起兔SMC中LOX 1的表达上调,这可能是HCMV参与AS的机制之一。     

金属硫蛋白、同型半胱氨酸对血管内皮细胞的作用

目的:观察金属硫蛋白(metallothionein MT)对同型半胱氨酸(homocysteine Hcy)损伤血管内皮细胞的保护作用及机制。方法:培养血管内皮细胞,培养液中分别加入Hcy及Hcy+MT孵育血管内皮细胞,自动生化分析仪测培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,硫代巴比妥酸法测细胞丙二醛(MDA)含量,化学比色方法测超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:与对照组相比,Hcy组细胞LDH及蛋白漏出增加,细胞MDA含量明显升高(P<0.01);外源性给予MT(10-9mol/L,5×10-9mol/L,10-8mol/L)呈浓度依赖性地抑制Hcy引起的血管内皮细胞损伤,与Hcy组比,LDH漏出分别降低16.3%(P<0.05)、23.5%(P<0.01)和37.2%(P<0.01)。MDA含量分别减少15.8%(P<0.05)、21.1%(P<0.01)和36.8%(P<0.01)。结论:MT拮抗Hcy对血管内皮细胞的脂质过氧化损伤。     

FK506对雪旺细胞体外增殖能力的影响

目的 研究普乐可夫(FK506)促进周围神经再生的作用和机制。方法 将纯化的兔雪旺细胞分3组:10μg/L FK506、100μg/L FK506和空白对照组,继续培养10 d,相差显微镜观察计数,绘制各自的增殖曲线。在24和72 h对各组细胞进行流式细胞分析。结果 FK506组雪旺细胞生长良好,而成纤维细胞可以发现细胞肿胀,胞质内出现空泡;活细胞计数对照组雪旺细胞的倍增时间为8d,10μg/L组和100μg/L组倍增时间6.2d。用FK506培养24、72 h后对雪旺细胞增殖的流式细胞分析处于S期的雪旺细胞较对照明显增高(P< 0.01)。结论 FK506有促进体外培养的雪旺细胞快速增殖和抑制成纤维细胞生长的作用。免疫抑制剂FK506的双重作用在神经再生治疗中具广阔的应用前景。