基于Au蛋白芯片技术的狼疮肾炎患者尿蛋白标志物研究

目的 寻找狼疮肾炎(LN)患者尿蛋白标志物,探讨基于Au蛋白芯片技术预测LN的应用价值.方法 采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au蛋白芯片检测166例LN患者和对照者尿蛋白指纹图,通过t检验评价蛋白表达差异性,筛选LN患者尿标志蛋白并结合人工神经网络(ANN)技术建立诊断模型,评价其预测LN的价值.对部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行初步鉴定.结果 LN患者与对照者尿中差异蛋白质峰有24个(t值为-6.44～10.14,P<0.05),通过BPS软件筛选4863、9744、8762、33 832、67 403和80 806质荷比(m/z)蛋白质建立的ANN模型预测LN的灵敏度为100%(26/26),特异度为95%(38/40).其中5个11 700、22 509、33 832、67 403和80 806 m/z蛋向与标准蛋白质谱比对显示可能为β_2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、α_1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白.结论 基于Au蛋白芯片技术的尿蛋白指纹图谱检测在LN的早期警示、判断蛋白尿类型及指导免疫抑制剂的使用中具有潜在应用价值.     

胱抑素C、尿β2-MG及mALB／Cr联合检测早期诊断糖尿病肾病的临床意义

目的探讨胱抑素C、尿β2-微球蛋白（β2-MG）、尿微量白蛋白（mALB）／肌酐（Cr）联合检测早期诊断糖尿病肾病（DN）的临床意义。方法选择DN患者20例（DN组）、糖尿病（DM）患者96例（DM组）及正常对照组29例,检测3组血清胱抑素C、β2-MG、mALB及Cr,并检测DM组的糖化血红蛋白（HbAlc）及尿蛋白定性。结果DN组的血清胱抑素C、尿β2-MG及mALB／Cr比值均高于DM组,DM组及其尿蛋白定性阴性者的各检测指标均高于对照组（P均〈0．01）;DM组HbAlc〉10％者与〈10％者的各检测指标比较均无统计学差异（P均〉0．05）。结论血清胱抑素C、尿β2-MG及mALB／Cr联合检测可作为早期诊断DN较敏感的指标,其对判断早期DN发生、病情发展程度有重要意义。     

非浓缩晨尿轻链蛋白检测在早期糖尿病肾损伤诊断中的价值

目的探讨非浓缩晨尿轻链蛋白检测诊断早期糖尿病患者。肾损伤的临床价值。方法选择124例2型糖尿病（T2DM）患者（T2DM组）及40例健康体检者（对照组）,均留取晨尿,用乳粒增强免疫散射比浊法检测轻链蛋白kapU、lamU及α1-微球蛋白（α1-MG）、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）。结果T2DM组尿kapU、lamU、α1-MG及NAG水平均显著高于对照组,尤以大量白蛋白（Alb）尿及微量Alb尿患者为著（P〈0．01或0．001）;T2DM组各蛋白阳性率均显著高于对照组,且正常Alb者kapU、lamU阳性率明显高于α1-MG、NAG阳性率（P〈0．01或0．001）。结论非浓缩晨尿轻链蛋白kapU、lamU可反映早期肾小管重吸收功能损伤情况,可作为诊断早期DN的指标。     

糖尿病肾病患者血浆动态蛋白质组学研究

目的探讨糖尿病肾病（DN）患者血浆差异蛋白表达情况,为寻找DN敏感血浆蛋白标志物提供依据。方法 4例确诊的DN患者（DN组）和4例健康人群（对照组）作为研究对象,应用荧光差异双向凝胶电泳分析两组血浆蛋白质组差异表达,以上调或下调1.5倍为截断值筛选出差异表达的蛋白质斑点进行质谱分析。结果成功构建DN患者血浆蛋白差异表达双向凝胶电泳图谱,并分析鉴定出6种差异表达蛋白;通过质谱分析和蛋白质数据库（UniProtKB/Swiss-Prot）比对鉴定出6种蛋白质,分别为补体C3、C4、凝溶胶蛋白前体、纤维蛋白原γ、载脂蛋白E和细胞骨架蛋白16。结论荧光差异双向凝胶电泳可鉴定筛选出DN患者与正常人群差异表达的血浆蛋白质,并为进一步筛选DN血浆蛋白标志物提供依据。     

尿白蛋白排泄率异常的2型糖尿病患者尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶、α1-微球蛋白及视黄醇结合蛋白检测的改变

目的检测不同尿白蛋白排泄率（UAER）的2型糖尿病（T2DM）患者尿N-乙酰-β葡萄糖苷酶（NAG）、α1-微球蛋白（α1-MG）、视黄醇结合蛋白（RBP）水平,探讨其对2型糖尿病早期肾损害诊断的应用价值。方法选择我院就诊的T2DM患者196例,健康体检者57名,检测12小时UAER水平。根据UAER水平将T2DM患者分为UAER正常组和异常组。分别检测尿NAG、α1-MG、RBP,肌酐（Cr）水平,并分析各组间差异。结果196例T2DM患者NAG／Cr、α1-MG／Cr及RBP／Cr水平较健康对照组明显升高（P〈0．05）;与对照组比较,T2DM患者中UAER正常组及异常组NAG／Cr、α1-MG／Cr及RBP／D水平具有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。在T2DM患者中,UAER与NAG／Cr、α1-MG／Cr及RBP／Cr之间没有相关性,而NAG／Cr与α1-MG／Cr及RBP／Cr之间存在相关性（P〈0．01）。T2DM患者中UAER、NAG、劬MG、RBP联合检测阳性率高于各单-指标的检测阳性率（P〈70．05）。结论T2DM患者联合检测尿NAG、α1-MG、RBP可以提高糖尿病早期肾损害的诊断的敏感性,利于糖尿病肾病的早期预防。     

鳞癌与腺癌患者血清差异蛋白质组分析

目的为鉴定鳞癌与腺癌的血清标志物和病理分型提供依据。方法采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术及其配套的金芯片（Gold Chip）对254份血清（鳞癌120份、腺癌82份,健康人52份）进行蛋白质谱指纹图分析,筛选鳞癌与腺癌的差异蛋白。结果 254份血清共筛选出83个差异表达的蛋白,其中5个差异表达最明显的蛋白质峰的质荷比（m/z）分别为2953、3285、6625、6646、9257。对5个峰强度分别进行F检验,P均〈0.05。结论鳞癌、腺癌患者血清具有明显表达差异的特征蛋白,为癌症的诊断和病理分型研究提供了新思路。     

肾脏结缔组织生长因子的检测及其对糖尿病肾病早期诊断的价值

目的探讨结缔组织生长因子（CTGF）在糖尿病（DM）患者肾组织中以及尿中的检测对早期诊断糖尿病肾脏损害的意义。方法40例DM患者根据尿白蛋白排泄率（UAER）分为正常白蛋白尿（N-UAlb）组（〈20μg／min，15例）、微量白蛋白尿（M-UAlb）组（20～200μg／min，13例）和大量白蛋白（L-UAlb）尿组（〉200μg／min，12例）。双抗体夹心ELISA法检测尿中CTGF的浓度，其中20例行肾活检，免疫组织化学技术检测肾组织中CTGF的表达，并与30例正常对照（NC）组进行比较。结果CTGF在正常肾组织中无或仅有基础量表达，随着DM肾脏损害的加重，表达逐步增强；与NC组相比，DM患者尿CTGF排泄在正常白蛋白尿组已显著升高（P〈0．01），且随着UAER增加其水平亦呈逐渐递增趋势，组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。相关分析表明：尿CTGF与UAER及之间呈显著正相关（P〈0．01），与肌酐清除率呈负相关（P〈0．01）。结论CTGF在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起着重要作用。测定DM患者尿CTGF的含量，不仅可作为诊断DN早期肾损害较敏感的指标，还将有助于监测、判断DN的病程进展。     

SELDI技术应用于肿瘤疗效监测的初步研究

目的应用表面增强的激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术对卵巢癌及喉癌患者治疗前后血清进行疗效相关标志分子的筛选，评价此技术在肿瘤疗效监测方面的可行性。方法应用SELDI-TOF-MS技术分别对20例卵巢癌患者化疗前后及51例喉癌患者手术前后血清蛋白质指纹图谱进行分析，用Biomarker WizaM软件对结果进行统计学分析。结果卵巢癌患者化疗后血清中质荷比（m／z）4475的蛋白峰（14／20）较化疗前表达增高；喉癌患者术前血清高表达m／z13741蛋白峰，术后21例患者该蛋白表达降低，其中11例（11／21）术后m／z13741、m／z5192和m／z15100的蛋白峰表达均较术前显著下降（P〈0．01）。结论SELDI-TOF-MS技术能灵敏的检测肿瘤患者手术及化疗前后血清中的差异蛋白峰。该技术的微创、灵敏、微量等特点将可能在肿瘤疗效监测及肿瘤的个体化治疗研究中具有较好的应用前景。     

检测2型糖尿病患者糖化血红蛋白、超敏C反应蛋白及尿微量蛋白的临床价值

目的：探讨检测2型糖尿病（T2DM）患者糖化血红蛋白（HbAlc）、超敏c反应蛋白（hsCRP）及尿微量白蛋白（UMA）、尿β2-微球白蛋白（β2-MG）的价值。方法：入选T2DM患者224例（T2DM组）,健康体检者197例（健康对照组）,检测两组HbAle、hsCRP、UMA、尿β2-MG,并进行比较分析。结果：与健康对照组比较,T2DM组HbAlc[（5．24±0．75）％比（8．72±0．92）％]、hsCRP[（1．13±0．89）mg／L比（6．21±1．31）mg／L]、UMA[-（14．9±9．24）mg／L比（72．5±15．6）mg／L]及尿β2-MG[（0．18±0．05）mg／L比（1．24±0．28）mg／L]水平明显升高（P〈0．05或〈0．01）;Pearson相关分析显示,HbAlc与糖尿病并发症发生率呈正相关（r=0．415,P〈0．05）结论：糖化血红蛋白、超敏c反应蛋白及尿微量蛋白检测对2型糖尿病患者的诊断具有重要价值。     

2型糖尿病肾病尿液蛋白质谱及诊断决策树模型的建立

收集72例2型糖尿病肾病患者、33例2型糖尿病不伴肾病患者和29例正常人晨尿上清，采用铜离子螯合表面芯片（IMAC3-Cu^2＋），经表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱测定得到蛋白质指纹图谱。建立了诊断决策树模型。糖尿病肾病组与非糖尿病肾病组相比较，17个蛋白峰强度相差2倍以上且有统计学意义（P〈0．01），其中4个蛋白建立了DN诊断模型，盲法验证该模型敏感性86．67％（26／30），特异性85．00％（17／20）。     

胸腔镜与蛋白指纹图谱技术在胸腔积液诊断中的应用

目的 探讨胸腔镜与蛋白指纹图谱检测技术（PFT）,在恶性和结核性胸腔积液早期诊断中的作用。 方法 2009年1月至2010年12月福建省福州肺科医院住院经影像学检查发现有胸腔积液,经内科胸腔镜检查、病理学（或细菌学）、胸腔积液蛋白指纹图谱检测临床确诊的121例住院患者,选择无其他并存病,经胸腔镜检测病理确诊的恶性胸腔积液患者30例（Ⅰ组）和结核性胸腔积液患者50例（Ⅱ组）,同时进行胸腔积液蛋白指纹图谱检测,分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理。 结果 Ⅰ组和Ⅱ组行蛋白指纹图谱检测,两组间有7个差异蛋白峰（分别为5335、8048、11 700、11 670、15 982、11 683、7700 m/z）,依据蛋白峰值表达情况,以11 670、11 700 m/z的蛋白峰用于建立恶性胸腔积液诊断模型,诊断Ⅰ组阳性率达83.3%（25/30）,Ⅱ组为24.0%(12/50),两组差异有显著统计学意义（χ²=26.55,P<0.01）,倾向于判定恶性胸腔积液;其敏感度为83.3%（25/30）,特异度为76.0%（38/50）;以5335、8048 m/z用于建立结核性胸腔积液诊断模型,2种蛋白峰建立Ⅰ组与Ⅱ组的鉴别诊断模型结果,诊断Ⅰ组阳性率达16.7%（5/30）,Ⅱ组为52.0%(26/50),两组差异有显著统计学意义（χ²=9.86,P<0.01）,倾向于判定结核性胸深积液;其敏感度为52.0%（26/50）,特异度为83.3%（25/30）。 结论 胸液蛋白指纹图谱检测技术简便、快速,是鉴别结核性与恶性胸腔积液特异性标志物的有效手段,但尚需在判读方法上做进一步深入研究。     

糖尿病肾病并发下肢动脉病变的相关因素分析

目的探讨糖尿病肾病（DN）和糖尿病并发下肢动脉病变（PAD）的相关影响因素。方法选取,DN患者235例（DN组）,单纯糖尿病患者102例（DM组）,测定两组踝肱指数（ABI）及其他相关指标,研究下肢动脉病变发生情况及其影响因素。结果DN组下肢动脉病变发生率（63．0％）高于DM组（11．8％）,差别有统计学意义;DNPAD＋组、DNPAD-组、DMPAD＋组、DMPAD-组的年龄、SBP、DBP、LDL-C、FPG、肾小球滤过率（GFR）、纤维蛋白原（FBG）、UAlb／Cr、24h尿蛋白定量差别均具有统计学意义;DN组发生下肢动脉病变的可能影响因素是SBP、UAlb／Cr、GFR、24h尿蛋白定量;DM组发生下肢动脉病变的可能影响因素是SBP、DBP、24h尿蛋白定量。结论收缩压、纤维蛋白原和尿蛋白可能是DN患者并发下肢动脉病变的预警因子,应对其进行筛查,并给予积极的治疗,从而减少或延缓下肢血管病变的发生及发展。     

中国人群PAI-1基因40／50多态性与2型糖尿病肾病关系的Meta分析

目的评价中国人群纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）基因4G／SG多态性与2型糖尿病肾病（T2DN）的关系。方法全面检索中国人群T2DN与PAI-1基因4G／5G多态性的病例对照研究,用Meta分析方法对PAI-1基因型分布和等位基因频率进行分析和比较,计算比值比（0R值）。结果共纳入9项符合条件的病例对照研究,Meta分析结果显示T2DN组较2型糖尿病非肾病（T2DM）组,4G／4G、4G／5G基因型及4G、5G等位基因合并OR值分别为3．01、0．61、1．95、0．51（P〈0．05）;T2DN组较正常对照（NC）组,4G／4G、4G／5G基因型及4G、5G等位基因合并OR值分别为2．96、0．70、2．34、0．41（P〈0．05）;T2DM组较NC组PAI-1基因4G／5G多态性各基因型及等位基因合并QR值无统计学差异（P〉0．05）。结论中国人群PAI-1基因4G／SG多态性与T2DN关系密切,4G／4G基因型及4G等位基因是T2DM人群及正常人群患T2DN的危险因素,4G／5G基因型及5G等位基因是患T2DN的保护性因素。     

蛋白芯片联合SELDI-TOF-MS在卵巢癌诊断中的应用

目的用蛋白芯片联合表面增强激光解析离子化/飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析卵巢癌与对照血清中的差异表达蛋白来筛选与卵巢癌早期诊断和预后相关的肿瘤标志物。方法采用联合SELDI-TOF-MS及WXC2蛋白质芯片,对21例卵巢癌患者（实验组）及24例健康妇女（对照组）血清标本进行检测。结果在相对分子质量0~50 000 Da范围内,检测出69个差异蛋白峰。卵巢癌差异表达明显（P〈0.01）的蛋白峰8个,其中高表达的波峰3个,质荷比分别为5 927.6,8 719.3和11 729.8 Da,低表达的波峰5个,质荷比分别为4 073.8,4 158.4,4 186.7,4 290.2和8 162.5 Da。其中11 729.8 Da蛋白峰已经鉴定为血清淀粉样蛋白A1（SAA1）。结论SELDI-TOF-MS联合蛋白质芯片能够直接检测出卵巢癌患者血清中相对特异的蛋白峰,对于卵巢癌的诊断具有一定的临床意义。     

肺结核蛋白指纹图谱诊断技术研究

目的探索应用蛋白质组学技术于肺结核诊断。方法从本院临床肺结核病例中,选择痰检测结核分枝杆菌培养阳性、阴性肺结核患者共130名,以健康者65名为对照,进行血清蛋白指纹图谱检测,分析其相关蛋白峰值并进行统计学处理。结果130例活动性肺结核患者,与65名正常人群血清蛋白质质谱数据的比较,5个蛋白峰(5335、8048、11683、11700 、11526m/z)有差异,有统计学意义(P<0.01)。该诊断模型判别的总准确率为92.3%（180/195）,特异度100%(65/65),灵敏度88.5%(115/130)。130例活动性肺结核患者中,菌（+）65例,质谱仪检测结果峰值为：5335 m/z 24例,11683 m/z 16例,8048 m/z 14例,11700m/z5例,占90.8%（59/65）;菌（ ）65例,峰值为：8048 m/z 20例,5335 m/z 14例,11526 m/z 8例,11683 m/z 7例,11700 m/z 6例,占84.6%（55/65）。结论血清蛋白质指纹图谱技术简便、快速,标本用量少,是筛选结核病特异性标志物的有效手段,有望成为活动性肺结核的早期辅助诊断指标。     

比较血清β-羟丁酸和尿酮体在糖尿病酮症诊断中的意义

目的比较血清β-羟丁酸和尿酮体的检测在糖尿病酮症诊断中的一致性、特异性和敏感性。方法215例糖尿病患者,其中糖尿病非酮症组52例,糖尿病酮症组患者163例,包括单纯酮症患者125例,酮症酸中毒患者38例。同时进行血清β-羟丁酸和尿酮体的检测,并对酮症组患者治疗后复查,直至酮症消失,观察治疗过程中两者的变化情况,共计观察309例次。结果非酮症组有13.5％的患者β羟丁酸增高;309例次的检测中,共计65次尿酮体与血β羟丁酸结果不统一,其中非DK组有7例尿酮体为阴性而血β羟丁酸为阳性。DK组共58例次不统一,其中49例次表现为尿酮体转阴,而血β羟丁酸仍为阳性,9例次表现为尿酮体为阳性,而血β羟丁酸为阴性。结论单纯尿酮体检测对糖尿病酮症的诊断有一定漏诊率,血清伊羟丁酸对糖尿病酮症的检测更敏感,更准确。     

IL-18基因型及血清IL-18水平与糖尿病肾病的相关性

目的观察IL-18基因型及血清IL-18水平与糖尿病肾病（DN）的相关性,探讨DN的发病机制。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测糖尿病（DM组）、DN组患者及正常对照组的IL-18基因多态性,用ELISA法检测其血清IL-18。结果DN组血清IL—18明显高于DM组和对照组（P均〈0．01）;IL-18基因-607C／A位点多态性三组比较无统计学差异（P〉0．05）,IL-18基因-137G／C多态性三组存在统计学差异（P〈0．05）;C等位基因携带者患DN的风险是G等位基因的1．876倍,携带C等位基因DN患者的血清IL-18明显高于未携带者（P〈0．05）。结论IL-18基因-137G／C多态性与DN发病有相关性,C等位基因可能是其发病的遗传易感基因;携带C等位基因的个体可能通过促进IL-18高度表达而增加DN发病风险。     

糖尿病肾病患者血清晚期蛋白氧化产物水平及其临床意义的研究

目的通过检测不同时期糖尿病肾病（DN）患者血清晚期蛋白氧化产物（AoPP）水平,分析其与超氧化物歧化酶（SOD）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的相关性,研究蛋白氧化与DN的关系及临床意义。方法66例2型糖尿病（T2DM）患者根据尿白蛋白排泄率（UAER）将患者分为以下3组：正常白蛋白尿（N-UAlb）组20例（UAER〈30mg／24h）、微量白蛋白尿（M-UAlb）组24例（UAER30-300mg／24h）和大量白蛋白尿（L-UAlb）组22例（UAER〉300mg／24h）,并与20名正常对照（NC）组比较。用Wikto-sarsat介绍的方法改进后测定各组的血清AOPP水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平,ELISA法测定血清MCP-1水平。结果随着UAER的增加,血清中AOPP水平逐渐增高,各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）;血清中SOD水平逐渐降低,除N—UAlb组与NC组间相比外,其余各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）;血清MCP-1水平逐渐增加,除L-UAlb组与M-UAIb组间相比外,其余各组间比较均有统计学意义（P〈0．05）。相关分析表明血清AOPP与SOD呈显著负相关,与BUN、Cr、TG、UAER呈显著正相关,与MCP-1、HDL-C、LDL-C、TC、HbA1c、BMI无相关性。血清SOD与BUN、Cr、UAER、MCP-1呈显著负相关,与TG、TC、LDL-C、HDL-C、HbA1c、BMI无相关性。多重线性回归分析结果显示Cr、1℃、UAER对AOPP有显著影响;Cr、UAER、MCP-1对SOD有显著影响。结论增加的蛋白氧化损伤及氧化应激状态可能在DN的发生发展中起重要作用,增加的蛋白氧化应激可能与DN的氧化应激状态和慢性炎症相关。     

蛋白质指纹图谱技术在肺结核、肺癌鉴别诊断中的应用研究

目的 探索应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术于肺结核、肺癌的鉴别诊断。 方法 肺结核、肺癌患者及正常人各65例,收集其血清标本,采用WCX2芯片技术对血清蛋白进行捕获,用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。 结果65例活动性肺结核与65例肺癌患者血清蛋白质谱数据的比较,4个蛋白峰(5 335 m/z、8 048 m/z、11 700 m/z、11 683 m/z)倾向于肺结核,以此鉴别肺癌差异有统计学意义(P<0.01)。该诊断模型判别的总准确率为74.6%（97/130）,灵敏度80.0%(52/65),特异度69.2%(45/65)。 结论 此方法简便、快速,标本用量少,为肺结核、肺癌患者提供了1种新的无创诊断和鉴别诊断方法 。