小剂量氢化可的松对脓毒症大鼠海马组织HMGB1表达的影响及机制研究

目的 研究小剂量氢化可的松(HC)对内毒索(LPS)诱导的脓毒症大鼠晚期炎症介质高迁移率蛋白B-1(HMGB1)表达的影响及核因子κB(NF-κB)信号转导途径在发病机制中的作用.方法 实验用雄性Wistar大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、小剂量HC干预组(C组).B组和C组设立2、8、16、24四个时段点,分别为B2、B8、B16、B24、C2、C8、C16、C24组.腹腔注射LPS(1 mg/kg)建立脓毒症大鼠模型,尾静脉注射小剂量HC(6 mg/kg)作为干预.72只大鼠每组8只采集各组大鼠海马组织,进行蛋白免疫印迹分析检测HMGB1水平.54只大鼠每组6只,采用免疫组化SP法及医学图像分析系统检测大鼠海马NF-κB、IκB的表达.结果 HMGB1在A组可见微量表达,B8组表达量始增加,以B16、B24组为高(P<0.05),B组HMGB1表达有持续增加趋势.C组HMGB1表达较B组呈减少趋势,以C16、C24组减少明显,差异有统计学意义(P<0.05).B组NF-κB表达较A组显著上调,以B8组最高(P<0.05),IκB表达先降低后逐步上升,较A组也明显增加,以B24组为高(P<0.05),C组NF-κB表达较B组显著下调,以C2、C8组为著(P<0.05);IκB表达较B组明显增加,以C8、C16、C24组为著(P<0.05).结论 小剂最HC对晚期炎症介质HMGB1有明显抑制作用,NF-κB信号转导途径在其中起到重要作用.     

小剂量氢化可的松对脓毒症大鼠海马组织核因子kB表达的影响

目的 研究小剂量氢化可的松（HC）对内毒素诱导的脓毒症大鼠海马组织核因子-kB（NF-kB）、抑制因子kB（IkB）表达的影响。方法雄性Wistar大鼠54只随机分为：对照组（A组）6只，模型组（B组）24只、小剂量HC干预组（C组）24只。腹腔注射脂多糖（LPS）1mg／kg建立脓毒症大鼠模型，尾静脉注射小剂量HC（6mg／kg）作为干预，分别在注射后2、8、16、24h分时段麻醉并灌注固定取脑。B组和C组每个时段点各6只。采用免疫组织化学方法及医学图像分析系统检测大鼠海马NF-kB、IkB的表达。结果模型组NF-kB表达较正常对照组显著上调（P〈0．05），IkB表达先降低后逐步上升，较对照组亦明显增加（P〈0．05），以8h为最高；干预组海马NF-kB表达较模型组显著下调（P〈0．05）；IkB表达较模型组明显增加（P〈0．05）。结论小剂量HC可通过诱生IkB来抑制NF-kB的表达，进而调控LPS诱导的脓毒症脑功能障碍，NF-kB信号转导途径在其发病机制中起重要作用。     

肾上腺素对内毒素血症大鼠细胞因子的影响

目的观察肾上腺素(EPI)对内毒素(LPS)血症大鼠体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)的影响。了解其在大鼠体内是否有抗炎作用。方法2006-11—2007-09,于广州医学院实验动物中心将50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):正常对照组大鼠静脉输注生理盐水2·4mL·kg-1·h-1;LPS组大鼠静脉注射内毒素6mg·kg-1后静脉输注生理盐水2·4mL·kg-1·h-1;低、中和高剂量EPI组大鼠静脉注射内毒素6mg·kg-1后,分别静脉输注肾上腺素0·12μg·kg-1·min-1、0·3μg·kg-1·min-1和0·6μg·kg-1·min-1。在当即、第2小时、第6小时三个时点取血,检测血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果与对照组比较,LPS组大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平均升高。与LPS组比较,高剂量EPI组血清TNF-α水平明显下降(P<0·05),血清IL-10水平明显升高(P<0·05),而血清IL-1β水平在两组间差异无显著性(P>0·05)。TNF-α、IL-1β和IL-10水平在中低剂量EPI组与LPS组间差异无显著性(P>0·05)。结论肾上腺素对内毒素血症大鼠具有抗炎作用,提示肾上腺素对于调控脓毒症时过度炎症反应具有潜在的临床应用价值。     

氢化可的松对严重脓毒症伴心肌损伤大鼠循环及心肌炎症介质的影响

目的观察不同剂量氢化可的松（HC）对埃希大肠杆菌（E.cdi）致严重脓毒症伴心肌损伤大鼠循环中及心肌炎症介质的影响。方法灭活E．coli二次注射法建立Wistar大鼠严重脓毒症合并心肌损伤模型。40只雄性大鼠随机均分为5组：正常对照组、模型组、大剂量组（HC150mg／kg）、中剂量组（20mg／ks）和小剂量组（6mg／kg）,给药后2h采血及左右心室肌标本,检测血浆心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）、IL-1β、NO、总NOS和心肌匀浆上清液NO、总NOS,并观察心肌iNOS表达情况。结果模型组上述指标均较正常对照组显著升高（P〈0．05）。小剂量组cTnⅠ与正常组无显著性差异,大、中剂量组cTnⅠ反较模型组明显升高。三种剂量HC对血浆TNF—α无明显影响,但均可降低IL-1β,以小剂量更显著,与正常对照组无显著差异;大、中剂量HC均未能降低血浆NO、总NOS,小剂量则能显著降低两者水平（P均〈0．05）;左、右心室肌匀浆含量差异无统计学意义。正常组心肌细胞无iNOS表达,模型组强表达。随HC剂量的递减,iNOS表达逐级减弱。结论不同剂量HC对严重脓毒症大鼠循环中及心肌炎症介质的影响不尽相同,小剂量可明显降低上述炎症介质水平、对心肌细胞iNOS表达的抑制也最显著。提示小剂量HC对严重脓毒症大鼠的心肌损伤有一定的保护作用。     

肺泡巨噬细胞核转录因子κB和核转录因子抑制物κB-α在肺透明膜病中的表达

目的 探讨新生儿肺透明膜病（HMD）支气管肺泡灌洗液（BALF）中肺泡巨噬细胞（AM）核转录因子κB（NF-κB）和核转录因子抑制物κB-α（IκB-α）的表达及其在HMD中的发病机制。方法 31例HMD机械通气治疗的早产儿,分为存活组22例和死亡组9例,另19例无呼吸系统疾病的早产儿为对照组。收集BALF,分离和培养AM;离体实验用细菌内毒素（LPS）刺激各组AM,提取细胞核蛋白。NF-κB的表达检测采用电泳迁移率实验（EMSA）;应用免疫斑点杂交（Western blot）检测IκB-α的表达;用酶连免疫法（ELISA）测定BALF上清液中细胞因子IL-1β和IL-8含量。结果 存活组在上机后24地h和72hAM中NF-κB表达均明显高于对照组。死亡组在上机后24hAM中NF-κB表达明显增高,而72h时减低,并经LPS刺激后无NF-κB表达明显增高。在上机后24和72h对照组的AM中IκB-α表达高于存活组和死亡组。死亡组在上机后24和72h,AM中IκB-α表达差异无统计学意义,并经LPS刺激后也无IκB-α的再表达。NF-κB表达与IL-1β和IL-8明显正相关。结论 NF-κB的过度表达参与了新生儿肺透明膜病的病理生理发病机制,其途径可能降低IκB-α的表达和增加了IκB-α降解或两者都有。     

高迁移率族蛋白1在新生儿败血症中的表达与机制

目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在新生儿败血症中的表达与机制。方法 选取62例新生儿败血症患儿为败血症组,66例局部感染新生儿为局部感染组,70例健康新生儿为健康对照组。检测三组新生儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、C反应蛋白（CRP）和降钙素原（PCT）的含量,外周血单个核细胞中HMGB1、Toll样受体4（TLR4）、核转录因子κB（NF-κB）mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、HMGB1处理组、HMGB1+TAK-242（TLR4抑制剂）组、HMGB1+PDTC（NF-κB抑制剂）组,检测各组TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。将健康新生儿的外周血单个核细胞分为对照组、LPS处理组、LPS+甘草甜素（HMGB1抑制剂）组,检测HMGB1、TLR4、NF-κB、IL-8 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果 败血症组患儿血清中IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、CRP、PCT含量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。败血症组患儿外周血单个核细胞中HMGB1、TLR4、NF-κBmRNA及TLR4、NF-κB蛋白的相对表达量均显著高于局部感染组和健康对照组（P < 0.05）。HMGB1可以显著诱导外周血单个核细胞高表达TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白（P < 0.05）;使用TAK-242可抑制TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用PDTC可抑制NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,并进而抑制IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）。LPS可显著诱导HMGB1 mRNA,以及TLR4、NF-κBmRNA及其蛋白的高表达,进而刺激IL-8 mRNA的表达（P < 0.05）;使用甘草甜素可抑制HMGB1 mRNA的高表达,抑制TLR4、NF-κB mRNA及其蛋白的高表达,进而降低IL-8 mRNA的高表达（P < 0.05）。结论 HMGB1可能通过激活TLR4/NF-κB信号通路诱导IL-8等炎症因子的高分泌在新生儿败血症的发病中起重要作用,HMGB1阻断剂甘草甜素可抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化及炎症因子的分泌。     

小剂量氢化可的松对脓毒症大鼠海马组织核因子κB表达的影响

目的研究小剂量氢化可的松(HC)对内毒素诱导的脓毒症大鼠海马组织核因子-κB(NF-κB)、抑制因子κB(IκB)表达的影响。方法雄性Wistar大鼠54只随机分为:对照组(A组)6只,模型组(B组)24只、小剂量HC干预组(C组)24只。腹腔注射脂多糖(LPS)1 mg/kg建立脓毒症大鼠模型,尾静脉注射小剂量HC(6 mg/kg)作为干预,分别在注射后2、8、16、24 h分时段麻醉并灌注固定取脑。B组和C组每个时段点各6只。采用免疫组织化学方法及医学图像分析系统检测大鼠海马NF-κBI、κB的表达。结果模型组NF-κB表达较正常对照组显著上调(P<0.05),IκB表达先降低后逐步上升,较对照组亦明显增加(P<0.05),以8 h为最高;干预组海马NF-κB表达较模型组显著下调(P<0.05);IκB表达较模型组明显增加(P<0.05)。结论小剂量HC可通过诱生IκB来抑制NF-κB的表达,进而调控LPS诱导的脓毒症脑功能障碍,NF-κB信号转导途径在其发病机制中起重要作用。     

白细胞介素-1受体拮抗剂对多柔比星肾病大鼠的治疗作用

目的 探讨IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对多柔比星(ADR)肾病大鼠的治疗作用.方法 采用前瞻性随机方法 ,通过查随机数字表将无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(A组,n=10),ADR肾病组(B组,n=10),ADR肾病IL-1Ra治疗组(C组,n=10),ADR肾病9 g/L盐水治疗组(D组,n=10).检测治疗前及治疗后2周各组大鼠尿蛋白、血清IL-1、TNF-α、清蛋白(Alb)、总胆固醇(TC)、BUN、肌酐(Scr)水平.结果 B、D组及C组大鼠治疗前血清IL-1、TNF-α水平均明显高于A组(Pa<0.01);血清BUN、Scr与A组比较均无显著性差异(Pa>0.05);C组大鼠IL-1Ra治疗2周后,24 h尿蛋白、血清IL-1、TNF-α、TC水平均较B、D组及C组治疗前明显降低(Pa<0.01),24 h尿蛋白、血清IL-1、TNF-α均接近A组水平(Pa>0.05),血清Alb仍较A组低,二者比较有显著性差异(P<0.01),但高于治疗前水平(P<0.01),TC明显低于治疗前水平(P<0.01),但较A组高,有显著性差异(P<0.01),血清BUN、Scr水平各组间比较,均无显著性差异(Pa>0.05).结论 IL-1Ra能从多方面阻断IL-1在肾病综合征大鼠的发生发展的作用,对改善预后等方面起重要作用,可使ADR肾病大鼠尿蛋白排出减少、提高血清Alb、降低血清TC和IL-1、TNF-α水平;对血清BUN、Scr水平无无影响.     

TNF-α和IκBα在内毒素致新生大鼠肺出血中的作用研究(英文)

目的：探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核因子-κB抑制 蛋白α(IκBα)在内毒素脂多糖(LPS)致新生大鼠肺出血发生机制中的作用。方法：将48只7～10日龄Wistar大鼠分为LPS组和生理盐水(NS)组。LPS组腹腔注射LPS 5 mg/kg,按LPS⑸浜蠊鄄斓氖奔浞治0 min,1 h,2 h,4 h,8 h,16 h和24 h组,每组6只;NS组腹腔注射等量生理盐水作为对照。对鼠肺进行大体和光镜观察,分别采用酶联免疫 吸附(ELISA)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot杂交法动态观察肺组织TNF-α蛋白和mRNA表达及IκBα表达的变化。结果：LPS注射后1 h可引起新生 大鼠明显的肺出血及炎性改变。肺组织TNF-α蛋白含量从LPS注射后1 h增加,2 h达高峰; TNF-α mRNA的表达从LPS注射后 0.5 h 明显增强(P<0.01),2 h达高峰;而I κBα于LPS注射后 1 h 起表达很快减弱,明显低于NS组(P<0.05),8 h表达最 弱(P<0.01)。结论：LPS可致新生大鼠肺出血。新生大鼠肺出血可 能与肺组织IκBα蛋白表达减弱,导致NF-κB活化、TNF-α基因转录上调及蛋白合成增加有关。     

缺锌对哮喘大鼠Th1/Th2型细胞因子的影响

目的 探讨缺锌对哮喘大鼠Th1／Th2型细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）的影响。方法 建立缺锌及哮喘模型，SD大鼠32只，体质量45～65g，按体质量随机分为4组，每组8只。A组为缺锌饲料＋卵清蛋白（OVA）激发组；B组为正常锌饲料＋OVA激发组；C组为正常锌饲料配对饲养＋OVA激发组；D组为正常锌饲料＋生理盐水激发组。利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织IFN-γ和IL-4水平；逆转录PCR（RT-PCR）检测肺组织IFN-γ、IL-4mRNA表达。结果 与D组比较，A～C组大鼠肺组织匀浆IFN-γ水平、IFN-γ mRNA表达均明显减少（P均〈0．05），而IL-4水平、IL-4mRNA表达均明显增加（P均〈0．05）。与B组比较，A组大鼠IFN-γ水平、IFN-γmRNA明显减少（P均〈0．05）；IL-4水平无显著性差异（P〉0．05），IFN-γ／IL-4比例明显减少（P〈0．05）。B与C组比较检测结果均无显著性差异。结论 哮喘大鼠缺锌时其IFN-γ明显减少，而IL-4不受影响，Th1／Th2细胞比例严重失衡，是缺锌时呼吸道炎症反应增加原因之一。