铜绿假单胞菌整合子分布及基因盒携带情况分析

目的 了解烟台地区临床分离铜绿假单胞菌整合子的分布及耐药基因盒携带情况,探讨整合子与菌株耐药的相关性.方法 菌株鉴定及药敏试验采用VITEK 2全自动细菌分析仪.整合子及可变区检测采用PCR法,并采用限制性片段长度多态性分析和测序分析进一步确定可变区耐药基因盒类型.结果 在100株铜绿假单胞菌中38株(38%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子常见基因盒类型为aac(6′)Ⅱ-aadA13-clmA8-oxA10a和aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a,其中aac(6′)Ⅱ-aadA13-oxA10a基因盒为首次出现的新基因盒排列方式,并已登录Genbank:JN118546.结论 烟台地区铜绿假单胞菌整合子类型分布为Ⅰ类整合子,整合子携带菌株与铜绿假单胞菌耐药密切相关.     

铜绿假单胞菌整合子基因盒的相关研究

目的对北京大学人民医院不同年度临床分离的铜绿假单胞菌进行整合子基因盒检测,分析其变化趋势及其与细菌耐药性的相关性。方法应用PCR对2006—2008年临床分离的420株铜绿假单胞菌进行整合子检测,对阳性PCR产物采用HinfⅠ内切酶作限制片段多态性(RFLP)分析进行整合子分类,并对整合子阳性株进行耐药基因盒的扩增与测序。结果 420株铜绿假单胞菌中116株(27.6%)检出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。对2006年及2008年的整合子阳性菌株可变区基因盒扩增得到7种不同的基因盒图谱,片段大小在710～2526bp,基因盒为介导氨基糖苷类抗生素耐药的aadB、aadA族和介导甲氧苄啶耐药的dfrA1和dhfrXVB。结论该院铜绿假单胞菌中整合子检出率随年度呈上升趋势,携带的基因盒与其耐药表型有相关性。     

天津地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌整合子的检测及其耐药机制研究

目的 调查天津地区临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IRPA)的整合子流行情况,探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制.方法 收集天津地区60株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,检测其耐药情况.应用PCR限制片段长度多态性(PCR-RFLP)初筛整合子并分型,用PCR扩增整合子的可变区并测序.结果 60株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中有11株检出整合子(18.3%);PCR-RFLP结果显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅰ类和Ⅱ类整合子.IRPA对多数药物均有较高的耐药率.结论 Ⅰ类整合子为天津地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌携带的主要类型,整合子中包括多种耐药基因.     

1株携带新型耐药基因盒Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌分析

目的对1株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌进行基因盒整合子分析。方法利用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对整合子进行检测及分型,用长片段PCR(Long-PCR)扩增整合子的可变区并进行DNA测序,分析整合子可变区含有的耐药基因。结果该株铜绿假单胞菌PA27携带Ⅰ类整合子,其可变区大小为3.0kb,含有编码对氨基糖苷类、氯霉素和β-内酰胺类抗生素耐药的基因,经与gene bank数据库进行同源性分析(BLAST),确定为一种新型基因盒组合形式:aac(6′)-Ⅱ—cmlA8—OXA-10,gene bank登录号为EU708817。结论本菌株携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子为天津地区首次报道。     

多重耐药铜绿假单胞菌整合子中发现2种新基因盒组合形式

目的研究多重耐药铜绿假单胞菌携带整合子的类型及耐药基因组合。方法 PCR检测多重耐药铜绿假单胞菌整合酶基因intI 1、intI 2、intI 3,Ⅰ类整合子恒定区基因qacEΔ1-sul1及可变区基因,扩增产物经胶回收、限制性片段长度多态性(RFLP)分析及基因测序分析。结果 30株临床分离铜绿假单胞菌中16株(53.3%)Ⅰ类整合酶基因及恒定区qacEΔ1-sul1基因扩增阳性,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。Ⅰ类整合子可变区共检出5种不同的耐药基因组合形式,含有对氨基糖苷类、β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药耐药的基因,其中有2种为新型基因盒组合形式,包括aacA4-VIM2和aadA2-OXA10-aacA4-blaIMP-9-aatI1,GenBank登录号分别为GQ890658和GU122165,另外3种与GenBank登录号分别为FJ917747、FJ817423、GU367339的序列基本吻合。结论多重耐药铜绿假单胞菌携带的整合子主要为Ⅰ类整合子,在Ⅰ类整合子上首次发现2种新型基因盒组合形式。     

南京地区铜绿假单胞菌的整合子流行性调查

目的调查南京地区铜绿假单胞菌的整合子流行情况,并分析整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性。方法收集98株南京地区临床分离的铜绿假单胞菌,K-B法测定其药敏情况,简并引物PCR法扩增整合子的整合酶基因,对阳性PCR产物采用HinfⅠ内切酶作限制片段长度多态性(RFLP)分析进行整合子分类。结果98株铜绿假单胞菌对哌拉西林等14种抗菌药的耐药率从14.3%到82.7%。40.8%(40/98)的铜绿假单胞菌中检出整合子;PCR-RFLP结果显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。结论Ⅰ类整合子较广泛地存在于南京地区铜绿假单胞菌中;整合子与铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药具有相关性。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌整合子的鉴定与分析

目的 鉴定并分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)中整合子及其携带耐药基因盒的特点。 方法 收集2003～2007年临床分离IRPa共74株,用PCR-RFLP筛查携带整合酶的菌株,并对整合子进行分类。整合酶阳性菌株用普通PCR扩增检测整合子的qacE△1sul1基因、整合子可变区及膜微孔蛋白基因oprD2,并对整合子可变区扩增产物测序分析。 结果 74株菌中有16株菌（21.6%）携带整合酶基因,均为Ⅰ类整合子;有14株检出整合子可变区,经测序共得到7种整合子耐药基因盒的组合形式,其中有4种为首次发现,在GenBank上的登录号分别为FJ917747、FJ817422、FJ655384和FJ817423;另携带IMP-9基因2株。16株IRPa中有8株oprD2基因检测为阳性,其余为阴性。 结论 在本地区临床分离的IRPa中,仅2株菌的Ⅰ类整合子中携带的IMP-9与亚胺培南的耐药有关,其他菌株的整合子中携带的基因盒主要是介导对氨基糖苷类与β内酰胺类抗生素的耐药。金属酶的产生并不是其对亚胺培南耐药的主要原因。     

整合子与多耐药铜绿假单胞菌的相关性研究

目的 研究分离自烧伤患者的铜绿假单胞菌(Pa)整合子携带情况及其与多药耐药的相关性.方法 对50株Pa采用K-B法进行药敏实验,简并引物扩增法扩增整合子,限制性片段长度多态性(RFLP)分析确定整合子类型.结果 50株Pa对22种抗菌药物的耐药率达90%以上;49株(98%)携带Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子.结论 该院Pa临床菌株对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗菌药物耐药率较高,多药耐药性可能与Ⅰ类整合子有关.     

Ⅰ类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布与结构分析

目的 了解分离于镇江地区的铜绿假单胞菌对13种常用抗生素的耐药率;明确Ⅰ类整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用.方法 采用K-B纸片法检测71株铜绿假单胞菌的耐药率;煮沸法提取71株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ类整合子基因,并通过测序分析其所携带耐药基因盒.结果 71株铜绿假单胞菌对临床常用的13种抗生素的耐药率在18.3%～77.5%不等;Ⅰ类整合子检出率为38%,包括aadB、aac(6')-Ⅱ、PSE-Ⅰ、dfrA17和aadA5 5种基因盒,其中最常见者为dfrA17和aadA5.Ⅰ类整合子阳性菌株对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株.结论 不同铜绿假单胞菌临床株对13种常用抗生素的耐药率各不相同,整合子阳性菌株耐药率明显高于整合子阴性菌株,提示Ⅰ类整合子是铜绿假单胞菌多重耐药的重要因素.     

临床革兰阴性杆菌整合子携带情况及其与耐药性的相关性分析

目的研究临床分离的4种革兰阴性杆菌耐药性与整合子的关系。方法收集江苏大学附属医院2017年10月—12月临床分离的肺炎克雷伯菌56株、大肠埃希菌49株、铜绿假单胞菌45株及鲍曼不动杆菌48株,Vitek 2 Compact全自动鉴定和药敏分析仪及K-B法进行药敏试验;多重PCR法检测细菌携带Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子情况,并比较细菌耐药性与携带整合子之间的关系。结果 4种革兰阴性杆菌中共有37.37%的菌株检出Ⅰ类整合酶基因,其中鲍曼不动杆菌的阳性率为54.17%,大肠埃希菌的阳性率为46.94%,肺炎克雷伯菌的阳性率为39.29%,铜绿假单胞菌的阳性率为6.67%,所有菌株均未检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因。4种革兰阴性杆菌中,铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌携带Ⅰ类整合子菌株对部分药物的耐药率较未携带整合子菌株差异有统计学意义,而携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌的耐药率较未携带菌株差异均无统计学意义。结论Ⅰ类整合子在镇江地区临床分离革兰阴性杆菌中普遍存在,且与铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性存在一定的相关性。     

江阴地区三类整合子在多重耐药铜绿假单胞菌中的流行率及Ⅰ类整合子结构研究

目的了解2005—2006年度我院铜绿假单胞菌对几种常用抗生素的耐药率，分析我院三类整合子的流行情况；明确我院Ⅰ类整合子的基因结构。方法采用药敏纸片法检测100株铜绿假单胞菌对环丙沙星、头孢噻肟、庆大霉素和亚胺培南等的耐药率；用煮沸法提取100株铜绿假单胞菌的DNA模板；应用PCR技术检测三类整合子的流行率及其Ⅰ类整合子结构分析。结果100株铜绿假单胞菌对几种常用药物的耐药率分别为环丙沙星32％、头孢噻肟45％、庆大霉素82％、头孢西丁37％、妥布霉素39％和亚胺培南43％。三类整合子的流行率分别为Ⅰ类53％、Ⅱ类21％、Ⅲ类5％。序列分析表明，在Ⅰ类整合子可变区存在dfrA17、aadA2基因盒。结论4种药物的耐药率都有增高，以庆大霉素最显著，铜绿假单胞菌的多重耐药可能与Ⅰ类整合子的流行有重要的关系。     

多重耐药的铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与其多重耐药基因的相关性分析

目的 调查本院多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因的存在状况,Ⅰ类整合子的分布情况以及其与多重耐药基因相关性分析.方法 采用K-B法测定临床分离的铜绿假单胞菌对15种药物的耐药性,筛选出35株多重耐药菌株,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因、氨基糖苷类修饰基因和Ⅰ类整合子基因.结果 35株多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶编码基因CTX-M-1、TEM、SHV的检出率分别为51.4%、31.4%、14.0%;OPrD2基因的阳性率为28.6%;氨基糖苷类修饰基因aac(6′)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ和ant(3″)-Ⅱ的阳性率分别为20%、2.86%、14.3%和17.1%;Ⅰ类整合子阳性的菌株中,CTX-M-1、TEM、SHV、aac(6′)-Ⅱ和ant(3″)-Ⅰ的检出率为45.4%、9.1%、27.3%、36.4%和27.3%,未检出aac(6″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ基因.结论 本院多重耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,常见的有β-内酰胺酶编码基因、OPrD2基因和氨基糖苷类基因.Ⅰ类整合子广泛存在于多重耐药的铜绿假单胞菌中,并携带多种耐药基因参与形成铜绿假单胞菌的多重耐药.     

携带新型耐药基因盒组合形式Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌耐药特性分析

目的分析1株临床分离携有多重耐药基因盒整合子的铜绿假单胞菌的耐药特性。方法应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）对整合子进行检测及分型，用长片段PCR（Long—PCR）扩增整合子的可变区并进行DNA测序，分析整合子可变区含有的耐药基因。同时应用PCR扩增金属酶基因和oprD2基因。结果该株铜绿假单胞菌PA27携带Ⅰ类整合子，其可变区大小为3.0kb，含有编码对氨基糖苷类、氯霉素和β内酰胺类抗生素耐药的基因，经与GenBank数据库进行同源性分析（BLAST），确定为一种新型基因盒组合形式：aac（6’）-Ⅱ-cm1A8-OXA-10，GenBank登录号为EU708817。oprD2基因检测阳性，未检出IMP-1、VIM-2和IMP-2型金属酶基因。结论该地区首次报道携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌，并携有多重耐药基因，应引起临床高度重视。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的整合子检测及其与多重耐药相关性的研究

目的调查亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌携带整合子情况,了解其与多重耐药的相关性。方法采用Mi—croWlkway-96全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和药敏试验,PCR法对临床分离的120株亚胺培南耐药和80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌进行整合子检测。结果120株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为81．7％（98／120）、Ⅲ类整合子检出率为1．7％（2／120）,未检出Ⅱ类整合子;80株亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌中I类整合子的检出率为21．3％（17／80）,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子。整合子阳性的铜绿假单胞菌对临床常用抗菌药物的耐药率明显高于整合子阴性的铜绿假单胞菌,并且前者多重耐药现象较为严重。结论I类整合子广泛存在于亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中,并与其多重耐药性密切相关。     

鲍曼不动杆菌整合子与耐药性的相关性研究

目的调查鲍曼不动杆菌中Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子的存在情况,分析整合子与鲍曼不动杆菌耐药性的关系。方法测定93株鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性;应用简并引物PCR方法,同时扩增整合子5’保守区的I类、Ⅱ类和Ⅲ类整合酶基因,对阳性PCR产物用限制性内切酶Hinf I作限制片段长度多态性（RFLP）分析进行整合子分类。结果 22株鲍曼不动杆菌检测出Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性的菌株对抗菌药物的耐药率普遍比整合子阴性的菌株高。结论鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性强,细菌的多重耐药性与Ⅰ类整合子的存在相关。     

Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性相关性研究

目的 了解鲍曼不动杆菌整合子分布情况,探讨Ⅰ类整合子与其耐药性的关系.方法 琼脂稀释法检测65株鲍曼不动杆菌耐药率,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ～Ⅲ类整合子基因;对Ⅰ类整合子阳性菌株进行可变区扩增及序列分析.结果 Ⅰ类整合子检出率为60%(39/65),未检出Ⅱ、Ⅲ类整合子;Ⅰ类整合子阳性菌株对14种抗菌药物的耐药率高于阴性菌株(P＜0.05);92%(36/39)的Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性,序列分析显示携带3种耐药基因aacA4、aadA1和catB8.结论 Ⅰ类整合子与鲍曼不动杆菌耐药性密切相关,在鲍曼不动杆菌多药耐药性形成机制中起重要作用.