体外诱导牙髓干细胞成牙本质向分化的研究进展

牙髓干细胞在体内牙髓组织特殊的微环境中,能保持干细胞未分化状态,有分化形成多种细胞的功能特性. 在某些条件下,牙髓干细胞可以向成牙本质样细胞方向分化. 目前众多研究表明,在体外培养下不同的诱导因子,可以作为调控器通过相关的信号通路在一定程度上参与调控牙髓干细胞成牙本质向分化和定向诱导. 本文对近年来诱导因子与牙髓干细胞成牙本质分化的关系研究做一综述.     

体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法，对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长，形成细胞结节，并可进一步钙化；与成牙本质细胞相似，它们具有高碱性磷酸酶活性，可合成Ⅰ型胶原，其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征，胞间基质中可见膜被基质小泡，某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化，此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式，观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1（TGF-β1）的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织，剪碎后与牙本质陶瓷粉（CDP）及2μg／mL TGF-β1混合，将混合物以骨基质明胶（BMG）为载体构建牙髓组织培养模型，在培养3、7、14和21d后，通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成，免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白（DSP）的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化，甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积，免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型，该模型能维持牙髓细胞的生长和存活，可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察；该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细胞分泌的特异性基质蛋白是成牙本质细胞最为重要的表型[2 ] 。但是两者均有一定的复杂性 ,首先 ,成牙本质细胞形态经过一系列变化过程 ,最终才极化为成熟细胞。而随着分子生物学技术的进展 ,人们对牙本质特异蛋白的认识不断深入 ,业已进入分子水平 ,但仍有许多问题尚…     

成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细     

牙髓细胞成牙本质向分化过程中DSPP基因的表观遗传学修饰

目的:通过检测牙髓细胞(DPC)体外成牙本质向分化过程中牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因的表观遗传学修饰模式的变化。探讨表观遗传学机制在DPC成牙本质向分化中的作用。方法:在体外诱导DPC成牙本质向分化,采用Real-time PCR检测DSPP基因表达的改变,采用重亚硫酸盐测序法检测DSPP基因的甲基化水平改变,染色质免疫共沉淀检测DSPP启动子区组蛋白修饰(H3K27me3和H3K4me3)修饰的变化。结果:在DPC诱导分化后,DSPP的表达逐渐增高,伴随着基因启动区甲基化水平的降低,同时与转录激活相关的组蛋白修饰H3K4me3升高,而与转录抑制相关的组蛋白修饰H3K27me3降低。结论:DPC在成牙本质分化过程中DSPP表达的上调与DSPP启动子区域出现开放基因表达的表观遗传学修饰模式有关。这提示,表观遗传学调控参与到DPC成牙本质向分化的过程。     

钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达

目的:探讨钠钙交换体1(NCX1)型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达,进一步解释牙髓组织的修复和传感功能。方法:选取就诊患者因正畸减数或阻生拔出的新鲜健康第三磨牙24颗。取牙髓行牙本质涎磷蛋白抗体染色、改良Bielschowsky银染色以分别定位成牙本质细胞层、神经组织;用特异性抗体染色分析NCX1在人牙髓组织成牙本质细胞层、神经组织中的表达情况。结果:免疫组化染色显示,人牙髓成牙本质细胞胞体和神经组织的NCX1型通道蛋白均为阳性表达。Image-Pro Plus 6.0半定量分析显示,牙冠部和牙根部上段成牙本质细胞中的NCX1型通道蛋白表达水平分别为0.152±0.023、0.135±0.020,两者差异无统计学意义(t=1.425,P=0.352)。结论:人牙髓组织成牙本质细胞层及神经组织中均存在明显的NCX1型通道蛋白表达,其在牙冠部及牙根部上段牙本质细胞中的表达差异不明显。     

牙本质及成牙本质细胞体外培养的研究现状

龋病是造成牙体缺损与缺失的主要原因 ,是口腔科常见的多发病 ,也是严重危害人类身体健康的三大疾病之一。世界卫生组织已将龋病列为危害人类健康的三大疾病之一。根据我国各地调查资料的统计结果 ,我国总平均患龋率为37 3%。患龋者龋均为 2 4 7颗牙 ,因龋病拔除者约占5 6 6 %〔1〕。另一严重危害口腔健康的疾病是牙周病 ,因牙周病拔除者约占 31 1%。事实上牙周病患牙很多是自行脱落的 ,故事实上由牙周病而丧失的牙齿大于以上数字。由此看来 ,龋病和牙齿缺失是关系到我国广大人们身体健康的重要因素之一。人们对龋病的治疗主要沿袭传…     

牙髓干细胞研究现状

牙髓干细胞是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在牙髓修复和牙齿再生中发挥重要作用。近年来对牙髓干细胞的培养、细胞表型和功能等方面已进行了大量研究,本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述。     

鼠牙髓组织细胞培养的生长特性及形态特征研究

应用组织块培养法，对大白鼠牙髓组织细胞进行了原代和传代培养，同时对培养细胞来源、生长特性进行了初步观察和鉴定。结果证实，培养的鼠牙髓细胞为来自中胚层的成纤维细胞，该细胞的细胞器发达，４～５代后的细胞生长稳定，增殖速度快，提示培养的鼠牙髓细胞适合体外实验并以选择４～５代后的细胞进行实验为宜。     

血小板浓缩生长因子对人牙髓细胞存活及其增殖分化的影响

目的 探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF) 对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法 从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓细胞,在体外采用CGF或矿物三氧化物聚合体(mineral trioxide aggregate, MTA)处理人牙髓细胞,分别在第1、3、7天,CCK-8法测定各组细胞增殖水平、碱性磷酸酶活性、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果 与MTA组相比,CGF组的细胞增殖能力增强,S期细胞的比例增加,且第3、7天ALP活性增高（P<0.05）, 而第1、7天牙髓细胞凋亡率降低。结论 CGF在体外具有良好的促进牙髓细胞增殖,抗凋亡以及诱导成骨/成牙分化的能力。     

体外培养人牙髓细胞的生物学特征

为研究牙髓细胞的生物学特性 ,采用组织块原代培养方法体外培养人牙髓组织。原代培养组织块在接种后 7～ 1 0d开始长出细胞 ,培养约 30d ,细胞形成单层汇合后进行传代培养。传代至第 5代测定细胞生物学特征及来源。结果 :培养人牙髓细胞呈成纤维样 ,抗波形丝蛋白染色阳性 ;细胞内碱性磷酸酶 (ALP)阳性 ,细胞内ALP总活性随培养天数的增加逐渐增高 ;细胞Ⅰ型胶原、FN染色阳性 ;第 5代细胞培养至第 1 1天发现细胞生长成结节状 ,分泌网形胶原样物质 ,在其表面出现结晶样钙化小点 ,经VonKossa染色 ,呈阳性。实验证明 ,体外培养的人牙髓细胞为来源中胚层的成纤维样细胞 ,可分泌ALP、Ⅰ型胶原及FN ,在体外可发生矿化 ,是深入探讨牙髓生理及矿化机制的良好的实验材料     

体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

目的研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性。方法收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kap low氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达。结果诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成。结论分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征。     

牙髓淋巴管网的酶组织化学研究

目的 :观察实验动物和人的牙髓淋巴管网的结构与分布特点。方法 :将非脱钙组织和用EDTA溶液脱钙的组织冰冻切片 ,分别应用光镜和电镜HE、5′ Nase单染和 5′ Nase ALPase双重染色作比较观察。结果 :HE染色切片光镜观察仅见管腔样结构 ;5′ Nase单染可见呈深棕色、形状不规则的淋巴管 ;而在同一切片上 5′ Nase ALPase双重染色观察到呈深棕色的淋巴管和呈蓝色的血管。扫描电镜和透射电镜观察牙髓的组织切片 ,见到丰富的呈 5′ Nase染色强阳性的淋巴管 ,5′ Nase反应产物存在于淋巴上皮细胞表面 ,牙髓中央部淋巴管较外围的成牙本质细胞层丰富。结论 :5′ Nase ALPase双重染色对研究牙髓毛细淋巴管网分布具有特异性且能定位     

牙髓干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤给患者及社会带来严重的影响,并且传统的各种治疗方法收效甚微。干细胞移植治疗脊髓损伤是近年来研究的热点,并且取得了一定成效。牙髓干细胞具有强大的自我更新能力和多向分化能力,目前已经被科学家应用于治疗多种疾病的研究,牙髓干细胞在治疗脊髓损伤上比其他干细胞具有一定优势,给脊髓损伤患者带来了新希望。该文就牙髓干细胞的特性及其在治疗脊髓损伤中的研究进展进行综述。     

人牙髓细胞原代培养方法的研究

目的　确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间。方法　选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿 ,取出牙髓 ,分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织 30分钟及 1、2、3小时 ,胶原酶分步消化法 ,组织块法和组织块酶解法进行原代培养。倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况 ,免疫组化法鉴定细胞来源。结果　胰酶消化 2小时后 ,组织块基本未解离。用 0 .1%胶原酶一步法消化 1、2、3小时后组织块均彻底解离为单细胞 ,基本无残余。 0 .1%胶原酶消化 30分钟后组织块解离不完全。 0 .1%胶原酶分步法消化 1小时后组织解离彻底。台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降。分步法消化细胞着色率低于一步法。组织块酶解法的组织块解离、贴附和细胞游出状况均优于组织块法。结论　 型胶原酶在 37℃ ,持续振荡条件下消化 1小时是彻底酶解消化人牙髓的最短时间。分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量。而从效果、操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑 ,组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的最佳方法     

血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响

目的 观察血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响。方法 流式细胞术检测在含5％和2％胎牛血清的培养基中，PC12细胞死亡和细胞周期的改变。结果 随着血清浓度的下降。PC12细胞死亡或凋亡增加，同时，S期的细胞所占百分比降低，G2期细胞所占的比例增加，在含2％胎牛血清的培养基中培养的细胞更加明显。结论 ①PC12细胞经血清剥夺培养后产生的损伤可能引发了细胞周期阻滞，当损伤未得以及时修复时，导致细胞凋亡。②在细胞周期和细胞死亡之间可能存在密切的联系。