基于Toll样受体4通路研究黄芪甲苷促进成骨细胞增殖分化的作用

目的研究黄芪甲苷促进成骨细胞增殖分化的作用,并初步探讨作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为对照组和实验组,对照组正常培养成骨细胞,实验组采用不同浓度黄芪甲苷干预成骨细胞,并孵育不同时间,MTT法观察对细胞增殖的影响,检测碱性磷酸酶(ALP)活性观察对细胞分化的作用,Western blot检测成骨细胞Toll样受体-4(TLR-4)蛋白表达。结果与对照组比较,随着黄芪甲苷浓度的增加,成骨细胞活性或ALP活性逐渐上升,并趋于稳定。延长黄芪甲苷作用时间,低浓度组细胞活性显著升高,而各组细胞ALP活性均显著上升。与对照组比较,实验组细胞中TLR-4表达显著下降。结论黄芪甲苷能够促进成骨细胞增殖和分化,其作用机制可能与TLR-4通路有关。     

黄芪甲苷对氧糖剥夺复氧后星形胶质细胞上TNF-α与AQP-4表达的影响

目的:探索黄芪甲苷(astragaloside IV,ASIV)对氧糖剥夺复氧(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后星形胶质细胞上肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis facror-alpha,TNF-α)与水通道蛋-4(aquaporin-4,AQP-4)表达的影响。方法:选用第二代第1 d的星形胶质细胞。将星形胶质细胞放入缺氧培养箱(1%O_2、94%N2、5%CO_2),分别干预1、2、3、4 h,复氧24 h后用RT-PCR和Western Blot检测AQP-4和TNF-α的表达情况。将星形胶质细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+0.001μmol/ml ASIV组、OGD/R+0.01μmol/ml ASIV组,用RT-PCR和免疫荧光检测AQP-4和TNF-α的表达情况。结果:RT-PCR和Western Blot结果显示:氧糖剥夺复氧后AQP-4和TNF-α的表达均增加,且AQP-4在OGD3 h时表达达到高峰,TNF-α在OGD1 h时表达达到高峰(P0.05);OGD3h+0.001μmol/ml ASIV组和OGD3 h+0.01μmol/ml ASIV组的AQP-4基因表达水平较OGD3 h组相比均明显降低(P0.05);与OGD3 h组相比,OGD3 h+0.001μmol/ml ASIV组的AQP-4蛋白表达水平明显降低(P0.05);OGD1 h+0.001μmol/ml ASIV组和OGD1 h+0.01μmol/ml ASIV组的TNF-α基因表达水平与OGD1 h组相比均明显降低(P0.05);与OGD1 h组相比,OGD1 h+0.001μmol/ml ASIV组的TNF-α蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论:氧糖剥夺复氧模型可以诱导星形胶质细胞上TNF-α和AQP-4的表达,且TNF-α的表达先于AQP-4;黄芪甲苷可能是通过下调TNF-α的表达来影响AQP-4的表达,进而影响细胞水肿。     

黄芪甲苷可减轻白细胞介素1β诱导软骨细胞的炎症反应

背景：骨性关节炎是一种最常见的退行性疾病,但目前仍无延缓或逆转病情的药物,只能消炎镇痛以短期内缓解症状、改善病情。黄芪甲苷是黄芪中一种具有调节免疫、缺血保护、心脏保护、抗炎、抗病毒和抗肿瘤等作用的活性成分。目的：探讨黄芪甲苷对白细胞介素1β诱导的小鼠骨关节软骨细胞ATDC5损伤的作用及相关机制。方法：将ATDC5细胞随机分为空白对照组、模型组、单体组、实验组。空白对照组细胞不加任何干预;模型组细胞用100μg/L白细胞介素1β处理;单体组细胞用5μg/L黄芪甲苷处理,实验组细胞用100μg/L白细胞介素1β和5μg/L黄芪甲苷处理。干预18 h后,采用CCK-8检测细胞增殖活性,Western blot和qRT-PCR检测基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原、SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达变化,甲苯胺蓝染色检测细胞形态改变和细胞数量,锥虫蓝染色检测细胞存活率。结果与结论：(1)与空白对照组比较,白细胞介素1β(100μg/L)明显抑制ATDC5细胞的增殖活性,相关炎症标志物基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13的表达升高,Ⅱ型胶原...     

Hsa-miR-218靶向调控LASP1对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检测细胞活力,构建萤光素酶报告基因载体验证miR-218与LIM和SH3蛋白1(LASP1)的相互结合作用,real-time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平,Western blot检测LASP1蛋白的表达水平。结果:经DNA测序证实与设计完全一致,测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR-218。pmiR-218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9,对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系,较空白对照组比较,差异显著(P0.05);萤光素酶活性结果显示,克隆LASP1-3’UTR的质粒与miR-218 mimics共转染293T细胞,引起萤光素酶活性的减低;real-time PCR结果显示转染pmiR-218后,miR-218表达水平增加;过表达miR-128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P0.01)。结论:pmiR-218有效抑制HeLa细胞的生长,并具有时间-效应关系,其机制可能是miR-218通过靶向结合LASP1的3’UTR,从而下调其在HeLa细胞的表达有关。     

转化生长因子-β1的Smad4非依赖性途径对胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1过表达对Smad4纯合性缺失的胰腺癌细胞生长的影响。方法将含TGF-β1的真核表达载体转染到人胰腺癌细胞BxPC3中,通过流式细胞仪、生长曲线以及细胞迁移试验观察其对BxPC3生物学行为的影响。用Western印迹法检测TGF-β1对BxPC3细胞中p21WAF/CLIP1表达的影响。结果转染TGF-β1基因的BxPC3细胞的形态发生明显改变,其生长速度自第4天开始较转染空载体pcDNA3的阴性对照组减慢。发现BxPC3细胞组S期细胞(27.53±0.02)%与pcDNA3组(26.32±0.01)%的比例均高于TGF-β1组(17.01±0.03)%,P<0.01,表明TGF-β1阻止细胞进入S期。细胞迁移试验表明转染的细胞运动能力明显增加。Western印迹法检测表明p21WAF/CLIP1的表达也相应增高。结论TGF-β1的Smad4非依赖性途径通过增强p21WAF/CLIP1的表达使细胞阻滞于G-G期,从而抑制细胞生长,并且该通路能诱导上皮细胞向间叶细胞转变。     

黄芪甲苷对变应性鼻炎小鼠线粒体动态平衡及NK 细胞分化影响的研究

目的：探讨黄芪甲苷对变应性鼻炎（AR）小鼠NK细胞分化的影响及机制。方法：C57/BL6小鼠随机分为空白组、AR模型组、黄芪甲苷组。观察各组小鼠行为学表现、鼻黏膜炎症反应;ELISA法测定血清IL-4、IL-5、IFN-γ水平;免疫荧光法检测各组NK细胞IL-4、IFN-γ表达;透射电镜等技术观察小鼠线粒体形态。结果：与AR模型组比较,黄芪甲苷组小鼠鼻过敏症状、鼻黏膜炎症明显改善,血清IL-4、IL-5水平降低。黄芪甲苷干预后,OVA致敏小鼠NKp46细胞IL-4、p-Drp1(Ser616)阳性比率降低。同时,黄芪甲苷组小鼠鼻黏膜NK细胞线粒体管状形态较AR模型组有所恢复,线粒体长度明显增加。结论：黄芪甲苷可能通过调节Drp1活性,恢复线粒体动态平衡,抑制NK细胞的NK2分化偏移,发挥改善AR的效应。     

人纤溶酶原K1-3基因的表达及抗肿瘤作用研究

目的：研究人纤溶酶原K1-3基因的原核表达及其产物K1-3蛋白的抗肿瘤活性.方法：构建含K1-3基因的表达载体pBV-K13;转化E.coli DH5α;热诱导表达菌株E.coli DH5α（pBV-K13）的K1-3基因表达;表达产物经溶解、复性和纯化后进行鸡胚绒毛尿囊膜（Chorioallantoic membrane,CAM）活性分析和小鼠B16黑色素瘤抑制实验.结果：SDS-PAGE和Western blot分析结果证实K1-3基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物对人纤溶酶原抗血清具有特异免疫活性,并抑制CAM毛细血管生成及小鼠B16黑色素瘤生长.结论：原核表达的K1-3蛋白具有抑制血管生成和抗肿瘤作用.     

miR-369-3p靶向CTHRC1对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨微小RNA-369-3p(miR-369-3p)是否通过靶向胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)影响宫颈癌细胞顺铂(DDP)耐药性.方法:体外培养人宫颈癌细胞HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株HeLa/DDP;实验分组:DDP+miR-NC组、DDP+miR-369-3p组、DDP+si-...     

黄芪甲苷对过敏性鼻炎小鼠HMGB1/TLR4/NF-KB信号通路的影响

为探讨黄芪甲苷对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠的作用及对高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)/TLR4/NF-κB信号通路的影响,采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱发C57BL/6小鼠AR,并采用低(12.5 mg/k...     

黄芪甲苷Ⅳ通过激活Nrf-2/HO-1信号通路抑制氧化应激介导的人SY5Y细胞凋亡

目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(AST4)对H₂O₂诱导的人SY5Y细胞氧化应激损伤以及细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养SY5Y细胞,用H₂O₂诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、 H₂O₂模型组和ASTⅣ组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡。取各组细胞的上清液,比色法测定丙二醛(MAD)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量。免疫荧光细胞化学染色法检测裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)和核因子E2相关因子(Nrf-2)的表达和分布。Western blot法检测细胞凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)和c-caspase,以及氧化应激信号通路Nrf-2在胞质内和细胞核内的表达及下游蛋白血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平。结果 AST4对处于氧化应激损伤状态下的SY5Y细胞具有保护作用,能够减少MAD含量,增加GSH和SOD的含量。AST4增...     

探讨黄芪甲苷对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺细胞凋亡及RhoA/ROCK2通路的影响

目的：探讨黄芪甲苷对桥本甲状腺炎（HT）大鼠甲状腺细胞凋亡及Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2)通路的影响。方法：以皮下注射甲状腺球蛋白联合高碘饮水的方法诱导HT大鼠模型,随机分为模型组、黄芪甲苷（80 mg/kg）组、Rhosin(RhoA抑制剂,40 mg/kg)组、黄芪甲苷（80 mg/kg）+Rhosin(40 mg/kg)组（每组12只）,另选出12只SD大鼠,正常饮水并皮下注射等剂量生理盐水作为对照组,经药物分组处理后,ELISA试剂盒测量血清抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）水平及炎症因子IL-6、IL-17、IL-1β含量;通过苏木精-伊红（HE）染色检测各组大鼠甲状腺组织病理形态变化;通过原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠甲状腺细胞凋亡率;通过Western blot实验检测各组大鼠甲状腺组织RhoA/ROCK2通路蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组大鼠甲状腺滤泡结构异常,部分萎缩或消失,排列紊乱,周围存在炎症细胞浸润,甲状腺组织有明显病理损伤,血清TGAb、TPOAb、IL...     

黄芪甲苷对过敏性鼻炎小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

为探讨黄芪甲苷对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠的作用及对高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)/TLR4/NF-κB信号通路的影响,采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱发C57BL/6小鼠AR,并采用低(12.5 mg/kg)、中(25.0 mg/kg)、高(50.0 mg/kg)剂量的黄芪甲苷进行治疗。研究观察小鼠的行为学变化;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠鼻黏膜组织的病理变化;ELISA检测小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β、IgE、TNF-α、细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)的浓度;Western blotting检测鼻黏膜组织HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB蛋白表达。结果显示,AR模型小鼠出现剧烈抓鼻、打喷嚏等症状,鼻黏膜组织中炎症细胞严重浸润。黄芪甲苷治疗后,小鼠症状缓解,鼻黏膜组织中炎症细胞减少,HMGB1、TLR4和p-NF-κB蛋白表达水平及血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1浓度均显著降低(P0.05),IL-10浓度显著升高(P0.05)。由此黄芪甲苷对AR小鼠具有较好的治疗效果,通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减少促炎因子的产生可能是黄芪甲苷治疗AR的重要分子机制之一。     

C225单用及与DDP联用对HeLa细胞的抑制作用与机制研究

探讨C225单用及与DDP联用对人子宫颈癌HeLa细胞的体外抑制作用及其机制。分别用C225(100、300μg/ml)与DDP(0.1、0.5、1μg/ml)以单用和联用处理HeLa细胞72 h后,MTT法检测对HeLa细胞生长的抑制作用及协同效应;FCM技术检测C225(300μg/ml)与不同工作浓度DDP单用及联用72 h后对细胞周期及凋亡的影响;并用HOE-CHEST33258染色技术进行细胞凋亡的形态学检测。结果C225能明显抑制HeLa细胞增殖,与DDP联合具有协同作用或相加作用;C225能使细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡;与DDP联用后凋亡率更高,使细胞周期进一步阻滞于G2期,同时降低S期细胞比例。荧光显微镜下可见实验对照组所发荧光较弱,无凋亡小体出现,而各药物干预组均出现一定数量的凋亡细胞,并随药物浓度的增加而增多,其中尤以联合用药组最为明显。两药单用及联用均对HeLa细胞的体外生长具有显著抑制作用,C225可通过将细胞周期阻滞于G0-G1期及诱导细胞凋亡发挥其抑瘤效应;两药间存在协同作用,机制可能与C225增加HeLa细胞对DDP的敏感性有关。     

黄芪甲苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞免疫调节的影响

背景：多发性硬化初始阶段,中枢免疫细胞激活并释放大量炎症因子,引起白质脱髓鞘甚至累及灰质神经元。CD4⁺T细胞不同亚群之间的分化平衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的病程进展中发挥着重要作用。课题组前期研究结果表明黄芪内有效成分黄芪甲苷能够调节EAE小鼠体内免疫反应,其是否对T细胞亚群分化具有调节作用尚未明确。目的：探究黄芪甲苷对EAE小鼠治疗效果及其对T细胞的免疫调控机制。方法：将C57BL/6雌性小鼠分为正常对照组、EAE疾病模型组和黄芪甲苷治疗组,每组8只,后2组使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)制备EAE模型,免疫后第10-28天,黄芪甲苷治疗组以40 mg/(kg·d)灌胃给药。免疫当天至第28天,记录各组小鼠的体质量及临床评分;免疫后第28天取小鼠脊髓制成冰冻切片行苏木精-伊红染色、固蓝染色观察脊髓病理改变,流式细胞术检测脾脏T细胞亚群百分比,Western blot法检测脊髓组织中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6的蛋白表达,ELISA检...     

黄芪甲苷联合葛根素对高糖诱导的H9c2细胞内质网应激及相关凋亡因子的影响

目的：探讨黄芪甲苷联合葛根素对高糖诱导的H9c2细胞内质网应激及其凋亡相关因子的影响。方法：将对数生长期的H9c2细胞随机分为对照组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）组、毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）组、高糖+黄芪甲苷+葛根素组;CCK-8法检测H9c2细胞活力;Western blot检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达。RT-qPCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、肌醇酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)、调控X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、转录因子C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）、p53上调凋亡调节因子（p53 up-regulate modulato...     

黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。 目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。 方法：实验分为4组。2.5 μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞 24 h,建立肾小管细胞损伤模型(顺铂损伤组);将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养(脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);利用Transwell小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养(黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);以正常肾小管上皮细胞做对照(正常对照组)。 结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高(P < 0.05);Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加(P < 0.05)。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

食管鳞状细胞癌中miR-4687-5P及STIM1的表达及调控机制

目的检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株及组织中miR-4687-5P及STIM1基因的表达及STIM1基因启动子区的甲基化状况,进一步探讨miR-4687-5P与STIM1基因表达的相关性以及两者是否具有共同的表达调控机制。方法应用qRT-PCR及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法检测ESCC细胞株(TE13、KYSE150、T.Tn)及89例ESCC及相应癌旁非肿瘤组织中miR-4687-5P及STIM1基因的表达及甲基化情况,并分析其相关性。结果 ESCC组织中miR-4687-5P与STIM1基因表达均明显下调,且表达具有一致性。miR-4687-5P与STIM1基因在3株ESCC细胞系中表达较弱,应用甲基化抑制剂5-aza-2’-deoxycytidine(5-Aza-Dc)处理细胞株后两基因表达均明显增强,而甲基化条带明显减弱或消失; ESCC组织中,STIM1基因启动子区呈高甲基化状态,且其甲基化频率与STIM1及miR-4687-5P的表达均相关(P 0. 01)。结论 ESCC中miR-4687-5P与STIM1基因表达均下调; miR-4687-5P表达可能受宿主基因STIM1启动子的调控,其启动子区的高甲基化状态可能是引起miR-4687-5P与STIM1基因在ESCC中表达下调的共同机制之一。     

抑制miR-218的表达对人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的 探讨抑制miR-218的表达对人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制。方法 培养人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞,分为空白组、阴性对照组(NC组)、miR-218组;空白组未予以任何处理,NC组转染阴性对照序列,miR-218组转染miR-218抑制剂。各组细胞处理后继续培养5 d,然后收集细胞,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测转染后各组细胞miR-218的表达情况,采用WST-1细胞增殖实验和细胞平板克隆形成实验检测转染后各组C4-2细胞增殖、活性情况,采用划痕实验检测各组C4-2细胞迁移距离,采用Transwell小室检测细胞侵袭数量和迁移数量,采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测TOB1基因mRNA表达情况,采用Western blot检测TOB1基因蛋白表达情况。结果 qPCR结果显示:转染后NC组、miR-218组人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞miR-218的相对表达量分别为1.02±0.06、0.38±0.04,miR-218组中miR-218的表达明显低于NC组,差异有统计学意义(t=15.372, P＜0.05)。WST-1细胞增殖实验结果显示:(1)转染后空白组、NC组随着时间的延长,光密度(OD)值呈上升趋势,而miR-218组OD值在24、48 h时呈上升趋势,72 h时OD 值开始明显下降;(2)空白组、NC组、miR-218组组间比较,OD 值在0、24 h时3组间差异均无统计学意义(P值均＞0.05),48、72 h时miR-218组OD 值均小于空白组、NC组,差异均有统计学意义(F=12.615、24.523,P值均＜0.05)。细胞平板克隆形成实验结果显示:转染后空白组、NC组和miR-218组克隆形成数分别为(42.2±1.2)个、(41.3±2.4)个、(20.6±1.2)个,miR-218组明显少于空白组、NC组,差异均有统计学意义(F=155.530,P＜0.05)。划痕实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验结果显示:转染后,miR-218组细胞迁移距离、侵袭细胞数和迁移细胞数均低于空白组和NC组,差异均有统计学意义(F=17.625、48.625、38.352,P值均＜0.05);而空白组和NC组间细胞迁移距离、侵袭细胞数和迁移细胞数比较,差异均无明显统计学意义(P值均＞0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果显示:转染后空白组、NC组、miR-218组TOB1基因mRNA的相对表达量分别为 0.20±0.02、0.19±0.03、0.35±0.02,TOB1基因蛋白的相对表达量分别为0.22±0.01、0.23±0.02、0.68±0.02,miR-218组细胞中TOB1 mRNA和蛋白水平均明显高于空白组和NC组,差异均有统计学意义(F=18.615、22.523,P值<0.05);而空白组细胞中TOB1 mRNA和蛋白水平与NC组比较,差异均无统计学意义(P值>0.05)。结论 抑制人去势抵抗型前列腺癌C4-2细胞miR-218的表达,可抑制该细胞的增殖和活性,并抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能与上调TOB1基因mRNA和蛋白表达有关。     

microRNA-424-5p对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及机制

目的研究microRNA-424-5p(miR-424-5p)对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及可能机制。方法培养人正常胃黏膜上皮细胞GES和人胃癌细胞SGC-7901,应用实时定量PCR方法检测miR-424-5p的表达水平;应用Lipofectamine LTX试剂将化学合成的miR-424-5p agomir和miR-424-5p antagomir转染人胃癌细胞SGC-7901,验证转染效率后应用MTT方法检测细胞活力;应用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)和自噬降解底物p62/SQSTM1在SGC-7901细胞的分布;应用Western blot方法检测LC3-Ⅱ、p62/SQSTM1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果 miR-424-5p在人胃癌细胞SGC-7901中呈低表达,miR-424-5p过表达显著抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。miR-424-5p过表达后自噬标记物LC3在SGC-7901细胞的胞浆内呈点状分布,荧光表达显著增强,并且LC3-II的蛋白表达水平显著上调,同时伴有自噬降解底物p62/SQSTM1在细胞浆内荧光表达显著减弱,蛋白表达下调,此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平显著上调;miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。结论 miR-424-5p过表达明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,诱导细胞发生自噬,其机制之一可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。     

miR-210-3p通过靶向调控SMAD4基因对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨miR-210-3p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制.方法 通过OncomiR和GEPIA网站分析TCGA数据库宫颈癌病例中miR-210-3p和SMAD4的表达.采用miR-210-3p抑制物转染宫颈癌Hela细胞,实验设置空白组、miR-210-3p阴性对照组和miR-210-3p抑制物组,采用CC...