布托啡诺抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨布托啡诺抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 实验分组1:(2.5、5.0、10、20、40、80、160、320)μg/mL布托啡诺处理人卵巢癌细胞A2780,计算细胞半数抑制浓度（IC50）。实验分组2：对照组（正常培养）、布托啡诺组（13.24μg/mL布托啡诺）、布托啡诺+LPS组（13.24μg/mL布托啡诺+1μg/mL LPS）,CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;蛋白质免疫印迹检测细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达情况。结果 细胞IC50为13.24μg/mL。与对照组相比,布托啡诺组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）;与布托啡诺组相比,布托啡诺+LPS组细胞OD450水平、迁移和侵袭数量、细胞中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平升高（P<0.05）,细胞凋...     

Notch1通过非经典的Notch信号通路调节胰腺星形细胞的活化

目的:探讨Notch1在胰腺星形细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)活化中的作用。方法:利用免疫组织化学法与免疫荧光双标法检测Notch1在人胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织的表达情况;原代分离培养小鼠PSCs,利用油红O染色、Western blot及RT-qPCR法对其进行鉴定,并利用Western blot及RT-qPCR检测Notch1及其下游关键分子HES1的表达情况;转染Notch1小干扰RNA(Notch1 siRNA)至小鼠PSCs后,利用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin)、I型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、Notch1及HES1的表达情况;利用划痕实验与CCK-8实验检测Notch1 siRNA对小鼠PSCs迁移与细胞活力的影响。结果:免疫组化与免疫荧光双标染色结果显示,Notch1表达在α-SMA阳性的PDAC间质细胞中;成功培养了小鼠PSCs细胞,且...     

布托啡诺调控PBX3基因抑制乳腺癌细胞系MCF7增殖、迁移和侵袭

目的探讨布托啡诺(butorphanol)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及相关的分子机制。方法用MTT法检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌细胞系MCF7的抑制作用;用Transwell迁移及侵袭实验检测不同浓度布托啡诺对人乳腺癌MCF7细胞迁移及侵袭的影响;RT-qCR与Western blot法分别检测乳腺癌细胞系、正常乳腺上皮细胞以及布托啡诺对MCF7细胞中PBX3 mRNA及蛋白表达的影响;观察转染si-PBX3或si-con后,MCF7细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;PBX3过表达验证布托啡诺对乳腺癌增殖、迁移及侵袭的作用机制。Western blot检测cyclin D1和MMP-2蛋白表达。结果PBX3在乳腺癌细胞系中的表达上调,沉默PBX3表达可明显抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭,同时抑制cyclin D1和MMP-2的表达;不同浓度的布托啡诺干预能显著抑制MCF7细胞增殖、迁移及侵袭且具有浓度依赖性,还可抑制PBX3、cyclin D1和MMP-2的表达;过表达PBX3可逆转布托啡诺对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论布托啡诺可通过抑制PBX3降低乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨飞燕草素调节Numb/Notch信号通路诱导卵巢癌细胞A2780凋亡的作用机制。方法 使用顺铂（500μmoL/mL）和低剂量（500μmoL/mL）、高剂量（1000μmoL/mL）飞燕草素处理卵巢癌细胞A2780,同时设立卵巢癌细胞A2780对照组,各组设6个平行样,培养72 h后。实验结束后,采用CCK-8试剂盒测定各组细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法测定细胞侵袭水平,划痕实验检测细胞迁移水平,实时荧光定量（RT-qPCR）及蛋白印记法（West-blot）检测细胞Numb、Notch1 m RNA和蛋白表达水平。结果 与A2780细胞组比较,顺铂组、飞燕草素低、高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达降低（P<0.05）;与顺铂组比较,飞燕草素低剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达升高（P<0.05）,高剂量组A值、存活率、穿膜数、迁移距离、Notch1 m RNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）;与飞燕草素低剂量组比较,飞燕草素高剂量组A值、存活率...     

HDAC1调控Wnt/β-catenin信号通路对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究组蛋白脱乙酰酶1(HDAC1)对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:RT-qPCR和Western blot法分别测定正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平。在MDA-MB-231细胞中转染HDAC1 si RNA,RT-qPCR和Western blot测定HDAC1的表达水平,MTT法测定细胞活力,流式细胞术测定凋亡,Western blot测定细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cleaved caspase-3的蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理下调HDAC1表达后的乳腺癌细胞,测定细胞活力和凋亡。结果:乳腺癌细胞系BT549、MCF-7和MDA-MB-231中HDAC1的m RNA和蛋白水平均明显高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P 0. 01),并且MDA-MB-231细胞中的HDAC1水平最高。HDAC1 si RNA可以降低乳腺癌细胞中HDAC1的m RNA和蛋白水平。敲减HDAC1表达后的MDA-MB-231细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞中cleaved caspase-3水平升高,β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白水平降低(P 0. 05)。Wnt/β-catenin信号通路激活剂可以逆转HDAC1下调诱导的MDA-MB-231细胞凋亡和细胞活力降低,减少cleaved caspase-3的水平(P 0. 05)。结论:敲减HDAC1的表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活诱导乳腺癌细胞凋亡。     

CircBIRC6调节miR-138-5p/RRM2轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨环状非编码RNA(Circ)BIRC6调节微小RNA(miR)-138-5p/核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)轴对乳腺癌（BC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 qRT-PCR检测BC组织及癌旁组织、人乳腺上皮细胞系（MCF-10A）以及BC细胞系（MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468和MDA-MB-453）中CircBIRC6、miR-138-5p、RRM2 mRNA表达水平;免疫组化法检测RRM2表达;以MCF-7细胞为研究对象,分别转染干扰CircBIRC6质粒（si CircBIRC6）、阴性对照（si NC）至细胞,记为si CircBIRC6组、si NC组;将si CircBIRC6分别与miR-138-5p抑制剂（miR-138-5pinhibitor）、阴性对照（inhibitorNC）共转染至细胞,标记为siCircBIRC6+miR-138-5pinhibitor组、si CircBIRC6+inhibitor NC组,同时以未转染的MCF-7细胞作为对照组,CCK-8、划痕实验及Transwell实验分别检测增殖、迁移率及侵袭变化...     

缺氧对滋养细胞Notch信号通路的影响

目的探讨缺氧条件下Notch信号通路在滋养细胞中的表达改变。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测二氯化钴(CoCl2)化学缺氧条件下人早孕绒毛滋养细胞株(the human first-trimester extravillous tropho-blast cell line,TEV-1)中Notch1及Jagged1 mRNA的表达情况。结果 (1)与正常对照组相比,缺氧条件下滋养细胞Notch1 mRNA表达量无明显变化(P>0.05)。(2)随着缺氧时间的延长,滋养细胞Jagged1 mRNA表达量逐渐降低,与正常对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下滋养细胞Notch1及Jagged1表达平衡失调,可能参与滋养细胞功能调控。     

Notch1和JAG1在乳腺癌和癌旁组织的表达比较

目的 检测Notch1和JAG1在乳腺癌中的表达,及其与乳腺癌相关临床指标的关系,分析Notch基因在人类乳腺癌中的作用和意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例乳腺癌组织和25例癌旁正常乳腺组织中Notch1和JAG1的表达, 对乳腺癌组织与癌旁组织进行表达率和表达强度标准化系数的统计学比较, 并在不同的腋窝淋巴结转移情况间、不同TNM分期和病理学分级间进行Notch1表达强度标准化系数的统计学比较.结果 乳腺癌组织Notch1的表达率和标准化系数分别为93.3%和0.83, 均明显高于癌旁正常乳腺组织, 乳腺癌组织中JAG1的表达率为10%,癌旁组织中无JAG1表达,伴腋窝淋巴结转移的病例Notch1标准化系数高于无腋窝淋巴结转移的病例;乳腺癌Ⅰ期病例Notch1标准化系数(0.57)低于Ⅱ期(1.05),Ⅱ期高于Ⅲ期(0.59),Ⅰ期与Ⅲ期差异无统计学意义;乳腺癌I级病例Notch1标准化系数(0.55)低于Ⅱ级(0.83)和Ⅱ级低于Ⅲ级(1.05),Notch1可能在分化较好的人乳腺癌中的表达是低的,在分化较差的人乳腺癌中的表达是增高的.结论 人类乳腺癌中存在Notch1和JAG1的异常高表达,而在癌旁正常乳腺组织存在Notch1和JAG1的低表达和不表达,该研究为进一步探明Notch基因的表达对乳腺癌的发生、发展的影响奠定了良好的基础.     

Notch信号通路与乳腺癌发生关系的研究进展

1983年Artavanis Tsakonas研究组首次克隆了Notch基因,并发现其编码一类大的跨膜受体,即Notch受体.随后相继在线虫、爪蟾、鼠和人等多个物种体内发现其家族不同成员~([1]).Notch信号不仅影响细胞的增殖、分化、凋亡、黏附和上皮细胞-间叶细胞转变(epithelial-mesenchy maltransition,EMT)等活动,在胚胎发育、造血、血细胞发育、血管生成、某些神经系统疾病及肿瘤形成等生理病理过程中起着重要的作用~([1]).     

蓝莓花青素调控Notch1/Hes-1通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的影响及机制研究

目的 探讨蓝莓花青素(BA)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的影响及可能的作用机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组(NC组,n=10)和造模组,造模组一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg,构建糖尿病模型,造模成功后再随机分为糖尿病模型组(DM组)、蓝莓花青素组(BA组)、DAPT组(Notch1通路抑制剂)和蓝莓花青素+DAPT组(BA+DAPT组),每组10只。BA组每天给予20 mg/kg的BA灌胃,DAPT组给予10μmol/L的DAPT干预,BA+DAPT组给予20 mg/kg的BA灌胃+10μmol/L的DAPT干预,NC组和DM组用等量0.9%氯化钠溶液(生理盐水)灌胃,连续8周。于末次给药24 h后,摘取大鼠眼球,用酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒检测各组大鼠视网膜组织中活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜组织病理变化,并进行RGC计数;用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测量HO-1和iNOS mRNA表达;Western blot法检...     

Notch信号通路调控调节性T细胞分化与功能的研究进展

Notch信号通路在进化上十分保守,通过介导细胞之间的相互作用贯穿于机体的各项生命活动,精细地调控生长、发育、凋亡等过程的进行。调节性T细胞是一类表型和功能特异的T细胞亚群,通过与靶细胞直接接触或分泌抑制性细胞因子的方式在维持机体免疫稳态中起重要作用。本文重点对Notch信号通路调控调节性T细胞分化与功能的研究进展进行综述。     

Notch1信号通路参与自身免疫性疾病发病机制的研究进展

自身免疫性疾病是一类免疫应答紊乱致使免疫系统对自身抗原产生攻击的疾病。一般分为器官特异性自身免疫性疾病和系统性自身免疫性疾病,前者主要引起机体某特定器官的自身免疫反应,而后者则常引起多系统、多器官损害,如RA、SLE、银屑病等自身免疫性疾病。近年来越来越多的研究证明,Notch1信号通路通过调节细胞发育、增殖、分化等在RA、SLE、银屑病、EAE、强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)等自身免疫性疾病中发挥重要作用。文章重点对Notch1信号通路与自身免疫性疾病的研究进展进行综述。     

Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响

目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的增殖与分化功能。方法:体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化。结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P0.05),促进AECⅡ从S期进入G_2/M期,增殖增加而分化减少(P0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),AECⅡ被阻滞于G_0/G_1期,增殖减少而分化增加(P0.05)。结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化。     

薯蓣皂苷通过下调Notch 1信号通路抑制甲状腺癌SW579细胞增殖与侵袭

目的 观察薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞的抑制作用并探讨其可能的作用机制.方法 体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组、不同浓度薯蓣皂苷组(10、20、30、40、50μM),CCK-8方法检测各组甲状腺癌SW579细胞存活率;随后将细胞分为对照组、薯蓣皂苷(30μM)组、Jagged 1组(5mg...     

Notch信号通路调控Th9的研究进展

Notch信号通路是一条高度保守的信号转导通路。该通路通过配体与受体之间的相互联系及与其他通路之间的相互影响,来调控Th9的分化、发育和IL-9的分泌。研究Notch信号通路对Th9的调控为恶性肿瘤、毛细支气管炎、哮喘等疾病的治疗及预防拓宽了思路,提供了新的方法。该文就近几年Notch信号通路对Th9的发育、分化及IL-9的产生等过程中的调控研究进展进行综述。     

SF3B1敲减通过RAS等信号通路影响MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡

目的:检测剪接因子3B亚基1(SF3B1)基因敲减对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡等生物学行为的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将SF3B1基因RNA干扰慢病毒载体(LV-SF3B1-RNAi)转染MDA-MB-231细胞,以敲减SF3B1基因。实验分为阴性对照组(转染空载体)和SF3B1敲减组(转染SF3B1-shRNA-1和SF3B1-shRNA-2)。采用qPCR和Western blot检测SF3B1的敲减效率;分别用MTT法和集落形成实验检测SF3B1敲减对细胞生长及集落形成能力的影响;Transwell小室法测定SF3B1敲减对细胞侵袭和迁移能力的影响;annexin V-APC单染法结合流式细胞术检测SF3B1敲减对细胞凋亡的影响;采用转录组测序检测SF3B1敲减后的差异表达基因及富集的信号通路。结果:MTT结果显示,SF3B1敲减组MDA-MB-231细胞的A值在96和120 h均显著低于阴性对照组(P<0.01);SF3B1敲减组的集落形成数显著低于阴性对照组(P<0.01),凋亡率显著高于阴性对照组(P<0.01),...     

丙泊酚对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的:研究丙泊酚对结直肠癌细胞活力、侵袭和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:10、25、50和100μmol/L的丙泊酚处理Lo Vo细胞72 h,或以100μmol/L的丙泊酚处理细胞12、24、48和72 h,CCK-8实验检测细胞活力;Transwell小室检测经100μmol/L丙泊酚处理72 h的细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes1)的蛋白表达。结果:丙泊酚可抑制结直肠癌细胞活力;丙泊酚组细胞侵袭能力、S期细胞及MMP-2、MMP-9、Notch1和Hes1蛋白表达均显著低于对照组,而细胞凋亡率、G0/G1期细胞及cleaved caspase-3的蛋白水平均显著高于对照组(P0.01)。结论:丙泊酚可抑制结直肠癌Lo Vo细胞生长及侵袭能力,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调Notch1信号通路有关。