产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

下呼吸道产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌的耐药性基因型分析

目的:观察下呼吸道产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamases,ESBLs)肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌耐药菌株耐药基因分型,并探讨耐药菌株的流行状况及发生耐药的机制。方法:按常规方法进行细菌分离、培养和菌种鉴定。采用微量液体稀释与K-B法,分别对常用抗生素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药性进行检测。采用纸片法确证产超广谱β-内酰胺酶菌株,并应用PCR技术进一步扩增TEM型、SHV型β-内酰胺酶的基因型。结果:产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对AMP、AMP/SB、PIP、CF、CFZ、CRM、CPD、CAX、CAZ、CTX、CPE和AZT的耐药率高达90%以上。产ESBLs肺炎克雷伯菌中产TEM型、SHV型、TEM和SHV型β-内酰胺酶基因的百分率分别为26.92%、30.76%、7.69%,大肠埃希菌百分率分别为46.15%、5.12%、10.25%。结论:产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对多种不同种类抗生素耐药,且具有多重耐药的特点。产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌携带TEM或SHV型β-内酰胺酶基因,其中肺炎克雷伯菌以产SHV型β-内酰胺酶为主,大肠埃希菌则以产TEM型β-内酰胺酶为主。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的:了解某医院分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型,为临床合理用药提供依据。方法:收集大肠埃希菌544株,其中161株为产ESBLs菌株。采用VITEK 2 Compact分析仪进行药敏检测,双纸片协同试验确证产ESBLs菌株,PCR法扩增耐药基因。结果:产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率高于不产ESBLs菌株（P<0.05~P<0.01）。161株产EBSLs菌株携带CTX-M-9型基因98株、TEM型84株、CTX-M-1型62株、OXA-2型15株、OXA-10型7株、SHV型5株。CTX-M-1型和TEM+CTX-M-1型菌株对头孢他啶的耐药率分别为43.5%、59.1%明显高于CTX-M-9型和TEM+CTX-M-9型菌株15%、11.8%的耐药率（P<0.05和P<0.01）。结论:该院产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M与TEM型,产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性高于不产ESBLs菌株。     

广州市番禺区基层医院产ESBLs大肠埃希菌耐药性以及常见基因型检测

目的了解本地区基层医院大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药性和基因型特点,为临床治疗提供依据。方法收集2014年3月至2015年3月广州市番禺区基层医院临床各类标本中分离得到的大肠埃希菌,采用纸片扩散法检测产ESBLs菌株,通过全自动细菌药敏仪检测实验菌株的药敏结果,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-9)和bla_(SHV)基因。结果各类临床标本共分离到产ESBLs大肠埃希菌株50株,阳性率为43.9%(50/114)。50株产ESBLs大肠埃希菌对阿莫西林、哌拉西林、头孢噻吩、头孢呋辛100%耐药;对头孢噻肟耐药率为82%、对复方新诺明耐药率为66%、对庆大霉素耐药率为70%、对氨曲南耐药率为50%、对左氧氟沙星和环丙沙耐药率分别为70%和80%。其中33株(66%)携带bla_(CTX-M-9)亚群基因,19株(38%)携带bla_(CTX-M-1)亚群基因,6株同时含上述2种基因。未检测出bla_(CTX-M-2)、bla_(SHV)型基因。结论基层医院大肠埃希菌产ESBLs率较高,其基因型以携带bla_(CTX-M-9)亚群基因为主。     

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。     

儿童患者中检出产ESBLs大肠埃希菌的耐药性和基因分型

目的了解本地区儿童患者临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药基因型别和耐药性的变化情况。方法收集自儿童患者分离鉴定的大肠埃希菌株1327株，通过K-B法作药敏试验，采用美国NCCLS1999年推荐的抑制剂增强纸片法确认产ESBLs株，并对ESBLs进行初步基因分型。结果检出产ESBLs菌株702株，检出率为52．9％，产ESBLs大肠埃希菌对青霉素类、氨曲南及头孢菌素类抗生素耐药率为55．5％。95．0％；PCR初步分型结果，单独携带TEM型基因的占56．7％，单独携带SHV型基因的占15．0％，携带两种基因的占25．8％。结论产ESBLs大肠埃希菌检出率逐年上升，具有多重耐药的特点；产ESBLs大肠埃希菌主要携带TEM型和SHV型β-内酰胺酶基因，其中绝大部分产TEM型β-内酰胺酶。     

深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的分析深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法对50株产ESBLs大肠埃希菌分别用TEM、SHV、CTX-M和OXA-1群基因引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果 92%菌株检出CTX-M型ESBLs,测序结果显示,以CTX-M-14型ESBLs为主,其次为CTX-M-55型。结论 CTX-M-14型和CTX-M-55型是深圳地区大肠埃希菌ESBLs的主要基因型。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药表型和基因型分析

目的:分析临床分离大肠埃希菌耐药性、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率及耐药基因之间的关系。方法:用K-B法检测117株大肠埃希菌耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,用PCR法检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果:117株大肠埃希菌产ESBLs 49株,阳性率41.9%。产ESBLs菌株对青霉素类和第一、第二代头孢菌素耐药率100%,对第三代头孢菌素中头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松耐药率>95%,对酶抑制剂哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦耐药率<20%,未检测到亚胺培南耐药株。非产ESBLs菌株耐药率明显低于产ESBLs菌株。49株产ESBLs菌株PCR均扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,未扩增到其他基因型。DNA序列分析证实为CTX-M-14亚型、CTX-M-3亚型和广谱酶TEM-1亚型基因。结论:大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著;耐药基因以CTX-M-14亚型为主,其次为CTX-M-3亚型,尚未检出其他ESBLs基因。TEM-1亚型广谱内酰胺酶基因在大肠埃希菌中普遍存在。     

血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因型研究

目的 了解本地区血液标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分离率、耐药性和基因型.方法 收集临床血液标本分离的产ESBLs的大肠埃希菌26株,应用PCR基因扩增技术分别检测SHV、TEM、CTX-M、PER、CTX-M-2、Ampc、GES基因,DNA测序确定CTX-M、TEM基因型.结果 在26株菌株中15株为CTX-M型,占57.69%,11株为TEM型,占42.31%.结论 本地区临床血液标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型.     

产ESBLs分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和克雷伯菌的主要基因型分布特点。方法用表型确证试验筛选出临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌114株。应用PCR方法扩增产酶株的TEM、SHV和CTX-M基因。结果PCR结果显示TEM、SHV和CTX-M基因的总阳性率分别为40.4%、20.7%和83.3%,其中大肠埃希菌分别为48.1%、1.3%和93.5%,肺炎克雷伯菌分别为24.3%、81.1%和62.2%。46.8%的大肠埃希菌和51.4%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因。结论产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV。大多数菌株同时携带多个基因。     

烧伤病房鲍曼不动杆菌分离株耐药性及β-内酰胺酶基因型检测

目的 :分析烧伤病房鲍曼不动杆菌分离株的耐药情况及其 β 内酰胺酶 (BLA)耐药基因类型。 方法 :采用微量稀释法测定临床分离的 14 1株鲍曼不动杆菌对 2 4种抗菌药物的敏感性 ,并对其中 11株采用聚合酶链反应 (PCR)及序列分析的方法分析BLA基因型TEM、SHV、CTX -M - 1、CTX -M - 2、CTX -M - 9、OXA、PER及VEB。结果 :所有菌株均对头孢哌酮 /舒巴坦敏感 ,亚胺培南、美洛培南、多粘菌素E和哌拉西林 /他唑巴坦的耐药率分别为 3.5 %、3.8%、5 .4 %和 4 1.1% ,头孢吡肟、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟和头孢哌酮的耐药率在 5 5 .2 %～ 73.2 %之间 ,其余抗生素的耐药率在 5 1.4 %～ 10 0 .0 %之间。 11株TEM型基因扩增全部阳性 ,任选 6株测序结果均为TEM - 1型。有 2株菌株扩增到SHV型基因 ,经测序均为SHV - 12型ESBLs。结论 :烧伤病房鲍曼不动杆菌分离株多重耐药状况极其严重 ,至少存在 2种不同类型的BLA基因 ,基因型分别为TEM - 1、SHV - 12。对其感染的治疗 ,应以抗生素敏感性试验资料为依据 ,可选用碳青霉烯类、头孢哌酮 /舒巴坦、多粘菌素E及其它敏感的抗生素。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药表型及基因型研究

目的研究大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酸ESBLs耐药表型及基因型特性。方法2006年1月至2006年12月我院临床分离的大肠埃希菌125株。先后用标准纸片法筛选试验和确认试验、Etest条分别检测ES-BLs。聚合酶链反应(PCR)以及基因测序分析测定ESBLs基因的类型。结果125株大肠埃希菌中检出71株产ESBLs(56.8%)菌株。PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M-14型为主;TEM基因型均为TEM-1型,SHV基因型均为SHV-1型。产ESBLs肺炎克雷伯菌对头孢曲松、头孢噻肟、左氧氟沙星耐药率在70%以上,对美罗培南,亚胺培南敏感性好。结论本地区大肠埃希菌ESBLs携带率较高,其基因以CTX-M-14型为主,其次CTX-M-3型ESBL,产酶株对多种抗菌药物耐药,对美罗培南、亚胺培南敏感性好。     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因研究

目的了解大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因存在状况。方法采用PCR检测浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株21种β-内酰胺酶基因。结果检出TEM、SHV、LEN、CTX-M-1 cluster、CTX-M-9 cluster、OXA-1 cluster、OXA-10 cluster、LAP、DHA、ACT-1等β-内酰胺酶基因,并在国内外首次从大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中发现LAPβ-内酰胺酶基因。结论浙江地区二家医院大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌连续分离株β-内酰胺酶基因携带率高。存在新的β-内酰胺酶基因（LAP）。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因研究

目的:了解十堰地区铜绿假单胞菌β-内酰胺类药物的耐药表型和基因分布情况,并探讨基因型与表型的相关性。方法:用VITEK 2 Compact高级专家系统判定2011年1～9月分离的896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺类药物的耐药表型,用PCR检测25株铜绿假单胞菌的13种β-内酰胺酶基因。结果:896株铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类药物的耐药表型有9种,连续分离的25株铜绿假单胞菌中耐药表型有4种,主要表型均为高水平耐药+碳青霉烯酶(不渗透性),分别占47%和48%。检出阳性的8种耐药基因包括bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、blaCARB、bla GIM、bla GES、bla TEM,阳性率分别为4%、4%、20%、12%、8%、8%、16%,另bla oprD2基因缺失率为60%,未检出bla IMP、bla VIM、bla PER、bla VEB和bla SPM。结论:本院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药与携带bla OXA-10、bla DHA、bla SHV、bla CARB、bla GIM、bla GES、bla TEM基因以及膜孔蛋白基因oprD2基因缺失有关,这也是本地区β-内酰胺类药物耐药的主要原因。     

产ESBLs大肠埃希菌耐药基因分型研究

目的对本院分离的31株产ESBLs大肠埃希菌进行耐药基因分型研究。方法用PCR对根据CLSI标准进行产ESBLs大肠埃希菌的初筛确证实验得到的产ESBLs大肠埃希菌31株,进行耐药基因的分型研究。结果31株产ESBLs大肠埃希菌中,TEM型为15株,SHV型为3株,CTX-M型为6株,TEM型对氨苄西林100%耐药,而SHV和CTX-M型主要对三代头孢类抗生素耐药,其治疗的首选药物为亚胺培能。结论本院检出的产ESBLs大肠埃希菌主要型别为TEM型,耐药基因分型研究将为临床用药和医院感染监控提供较有价值的参考。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析

目的研究沈阳地区产超广谱β-内酰胺酶（extended—spectrumβ-lactamases,ESBLs）肺炎克雷伯菌的基因型分布。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增分离31株产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株的TEM型、SHV型及CTX—M-1型ESBLS基因,1％琼脂糖凝胶电泳,回收DNA片段,测序分析各基因型在耐药的产超光谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌株中的分布。结果TEM-1、SHV-1、CTX—M-1基因扩增阳性率分别为58．0％、90．3％、16．1％。结论分离的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌存在多个耐药基因。