人白细胞弹性蛋白酶抑制剂体外筛选模型的建立及优化

目的探讨人白细胞弹性蛋白酶(HLE)与其底物反应的最适条件,建立一种高通量的HLE抑制剂体外筛选模型。方法通过测定反应产物———对硝基苯胺(p-NA)的光密度值,研究电解质浓度、反应温度、反应体系pH值、酶和底物作用浓度、反应时间及检测波长等对酶促反应的影响程度,确定酶与底物反应的最佳条件。结果确定的最优反应条件为:HLE(0.2 U/ml)30μl,底物(50 mmol/L)100μl,含1.0 mol/L NaCl的Tris缓冲液(pH 7.5),反应温度37℃,反应时间24 h,检测波长为545 nm。结论建立了一种稳定的HLE抑制剂体外筛选模型,该模型灵敏度高、准确性和重复性强,可用作筛选HLE抑制剂的平台。     

血清及高密度脂蛋白中对氧磷酶活性的分光光度测定法

目的　在现有的实验条件下 ,获得稳定可靠的血清及高密度脂蛋白 (high density lipoprotein,HDL)中对氧磷酶 (paraoxonase,PON)活性的测定方法。方法　以乙酸苯酯为底物 ,在对氧磷酶的作用下水解 ,生成产物苯酚 ,测定 5分钟内反应体系中在 2 70 nm处苯酚特征性的紫外吸收 ,换算为酶促反应速度。结果　通过观测底物浓度、p H、激活剂 Ca2 + 、抑制剂 EDTA等对酶促反应的影响 ,得出最适的测定条件 :底物浓度为 5 m mol/ L ,最适 p H为 8.0 ,必需激活剂 Ca2 +浓度为 2 mmol/ L。结论　在该反应条件下 ,测定不同浓度 HDL 或血清中该酶的活性 ,重复性和稳定性均符合要求     

血清及高密度蛋白对氧磷酶活性的分光光度测定法

目的 在现有的实验条件下,获得稳定可靠的血清及高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL) 中对氧磷酶J（paraoxonase,PON）活性的测定方法。方法 以乙酸苯酯为底物,在对氧磷酶的作用下水解,生成产物苯酚,测定5分钟内反应体系中在270nm处苯酚特征性的紫外吸收,换算为酶促反应速度。结果 通过观测底物浓度、pH、激活剂Ca^2 、抑制剂EDTA等对酶促反应的影响,得出最适的测定条件;底物浓度为5mmol/L,最适pH为8．0,必需激活剂Ca^2 浓度为2mmol/L。结论 在该反应条件下,测定不同浓度HDL或血清中该酶的活性,重复性和稳定性均符合要求。     

高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用

目的 对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法 改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用.方法 TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析.以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm.根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性.结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10 μmol/L 至 400 μmol/L.精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善.经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L.结论 以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE 酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法 .     

探针药物法评价柚皮苷对人肝微粒体CYP2E1酶代谢活性的影响

目的：考察柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性的影响,以探讨与其它以CYP2E1为主要代谢酶的药物联用时,是否可能产生潜在的相互作用.方法：在人肝微粒体代谢体系中,以氯唑沙宗作为底物探针,建立表征CYP2E1酶代谢活性的HPLC检测方法,分别考察体外代谢体系的最适宜底物浓度、代谢时间、pH值以及孵育温度.在确定的条件下,将柚皮苷稀释成不同浓度,分别与氯唑沙宗共同孵育于人肝微粒体代谢体系中,测定在有或无柚皮苷存在下氯唑沙宗的剩余量,以评估柚皮苷对CYP2E1酶代谢的影响.结果：在人肝微粒体孵育体系中,氯唑沙宗代谢最适宜的体外代谢条件为底物浓度2.4 g/L,代谢时间3.5h,pH7.5,孵育温度37℃.柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性有一定的抑制作用,IC50为10.07 μmol/L.结论：柚皮苷对经CYP2E1酶代谢的药物可能会产生微弱的药物相互作用.     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用.方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响.结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min.异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50＞1 000 μmol/L.结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药.     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响。结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min。异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50>1 000μmol/L。结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药。     

血浆弹性蛋白酶的微量测定和临床应用

目的　拟建立一种血浆弹性蛋白酶的快捷、微量测定方法。方法　以琥珀酰甘氨酰对硝基苯胺 (succinyl-L -trianalinyl-p -nitroanilide ,SLAPN)作为弹性蛋白酶的作用底物 ,根据单位时间内 4-硝基苯胺释放量 (A450nm)的变化 ,反应弹性蛋白酶的活性。结果　线性范围为 0～ 5 0 0 μg/L,批内和批间误差分别为 5 .0 2 %和 8.3 2 % ,血浆用量仅为 2 0～ 40 μl。正常健康人 (n =12 )血浆弹性蛋白酶含量 (3 7.5 0± 15 .5 6)μg/L。肠瘘合并感染患者 (n =6)为 (4 8.40± 2 7.82 )μg/L,明显高于正常人 (P <0 .0 1)。猪急性出血坏死性胰腺炎 (5 %牛磺胆酸钠 + 80 0 0～ 10 0 0 0u/ml胰蛋白酶 )诱导12h后为 (2 3 9.0 6± 180 .2 4) μg/L明显高于诱导前水平〔(3 6.15± 9.40 ) μg/L,P <0 .0 1〕。结论　该方法操作简便、快捷、灵敏度高、特异性好 ,易推广普及     

临床酶测定标准化的几个问题

迄今，血清（血浆）中酶测定是通过它们催化的反应速度测量的，以酶催化（活性）浓度表示。这与以免疫实验将酶作为蛋白质测定比较，其优点是快速、敏感、特异和低消耗。但是，酶催化浓度测定结果是相对的，它依从于测定原理、单位定义和相应的测定条件。这些条件中，主要是：（1）底物、辅因子、活化剂、变构剂的种类和浓度。（2）在偶联酶促反应中，指示酶和辅助酶的种类和浓度。     

用线性动力学方法考察黄嘌呤对尿酸酶的抑制作用

目的:以米氏常数相差较大的两种尿酸酶为模型,考察用两个底物浓度下标定比活性确定酶动力学参数和筛选抑制剂的可靠性.方法:用293 nm吸收监测尿酸酶反应.通过两个底物浓度下标定比活性确定表观米氏常数(apparent michaelis-menten constant,Kmapp)和表观最大反应速度(apparent maximal reaction rate,Vmapp).据表观动力学参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inhibition constant,Ki).结果:只要所用尿酸浓度中较小者(the lower concentration of uric acid,SL)大于待测Km的0.8倍且较大者(the higher concentration of uric acid,SH)在SL的1.4倍以上,此线性动力学法能可靠测定Bacillusfastidiosus和Candida species尿酸酶的米氏常数,且与双倒数法结果一致.如SL大于Km的3.8倍而SH为SL的3倍,此线性动力学法所得Candida species尿酸酶Kmapp与抑制剂浓度成正比,Ki为(4.8±0.5)μmol/L,与双倒数法结果一致.Bacillus fastidiosus尿酸酶Km太高,底物浓度有限时不能用此方法筛选其抑制剂.结论:此线性动力学方法仅用高于Km的底物浓度也能可靠确定酶动力学参数,有利于用常规定量方法筛选对底物具有高亲合力特殊靶酶的抑制剂.     

加温对小白鼠染色体影响的研究

加温是一种对放疗中射线抵抗性细胞增敏的有效方法。加温是否对机体有损伤目前很少有人探讨。本文利用微波辐射、恒温水浴为热源对小白鼠加温,观察细胞染色体的改变,判定热疗过程对机体的损伤。     

100例子宫肌瘤与子宫腺肌病的B超图像分析

目的 探讨子宫肌瘤与子宫腺肌病Ｂ超图像特征及其鉴别诊断。方法 常规Ｂ超检查,并将子宫肌瘤子宫腺肌病两组Ｂ超图像进行比较分析。结果 ４７例肌瘤（９４．０％）有假包膜或界限清楚,。２８例腺肌病（９３．３％）界限欠清;４１例肌瘤（８２．０％）探及栅栏样图像和后方回声衰减仅各有２例（６．６７％）、１８例（６０．０％）呈高回声,两者比较差异有显著性（Ｐ〈０．０１,〈０．０５）。结论：Ｂ超对子宫肌瘤和腺肌病的     

伤立效总提取物对小白鼠骨骼肌微循环障碍的影响

实验表明,伤立效对肾上腺素所致的小白鼠骨骼肌微循环障碍具有扩张微血管口径、加快微血管的血流速度、增加血流量的作用,实验组与对照组比较,各项指标差异均非常显著(P<0.01)。     

外阴部血管瘤21例治疗分析

目的：探讨女性外阴血管瘤的治疗方法及时机。方法：对1994-1999年收治的14例女性外阴部血管瘤和7例海绵状血管瘤，分别采用平阳霉素局部注射和手术切除治疗。结果：毛细血管瘤全部治愈，海绵状血管瘤复发率为28.6%(2/7)，1例出现部分皮拉坏死并发症。结论：女性外阴部毛细血管瘤不宜在观察中等其自然消退，应积极采用平阳霉素瘤内注射治疗，海绵状血管瘤单纯用平阳霉素注射治疗效果不佳，宜采用手术切除。     

鼻咽癌放疗后复发因素分析（附30例报告）

本文总结了1988－1993年30例鼻咽癌放疗后复发因素，包括剂量因素，边缘因素，病情估计不足及设野不合理等，其中病情估计不足造成的复发，占33．3％（10／30），克服病情估计不足，改进放疗设野布局，有进一步提高鼻咽癌的治愈率和降低复发率的可能，CT检查应列为鼻咽癌的常规检查。     

不同冷冻时间对兔角膜膨胀率的影响

对不同冷冻时间（２０ｓ和３ｍｉｎ）及不同方法保存的兔角膜膨胀率进行了测定。结果冷冻２０ｓ及３ｍｉｎ，新鲜角膜组膨胀率（％）分别为２９．４５±１．９，４９．７４±１．６（Ｐ＜０．０５）；冷冻保存组为３１．６５±０．８及５４．６７±２．７（Ｐ＜０．０５）；干燥保存组为７３．８２±７．７及８６．０９±１．３（Ｐ＜０．０５）。干燥保存组角膜膨胀率与新鲜组及冷冻保存组差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。提示在角膜组织镜片加工时，应考虑不同保存方法和不同冷冻时间所造成的不同膨胀率对其厚度的影响，从而减少镜片加工时的屈光度误差。     

手术治疗支气管类癌30例临床观察

目的分析支气管类癌的临床特征,探讨手术治疗的方法和影响预后的因素。方法进行回顾性分析经手术切除的30例支气管类癌病的影像学特征、临床表现及影响预后的因素。结果术后病理证实,21例为典型支气管类癌,9例为非典型支气管类癌;手术治疗后21例病人存活超过5年,其中10例超过10年;4例3年内死于肝脑转移,5例术后不足5年,仍健在。结论相对于其他类型的肺癌,支气管类癌具有良好的生物学特性及预后。手术是治疗支气管类癌的主要方法,远处转移是影响预后的主要因素。     

ANALYSIS OF 81 CASES OF NONUNION OF FOREARM FRACTURE

From 1957 t0 1979, 81 cases of nonunion of forearm fracture were treated. Among them 36 had ulnar, 24 radial and 21 radioulnar fractures. The average duration o.f injury was 17.1 months. The main factors causing nonunio.n were severe original fracture therapeutic faults and bone infections.. Treatment coinsisted of rigid internal fixation and grafting with sufficient cancellous bones. 96To of the cases were cured by one operation and 3 failed owing to infection. 50 cases weret fo.llo,wed up for an average of 12.7 monthSj, 78'70 0f them obtained excellent and good functional results. The recovery of supina- tion was better than that of pronation.     

手术治疗甲状腺机能亢进93例临床分析

目的：探讨我院所作甲状腺机能亢进的甲状腺次全切除术病例的经验教训。方法：将本院28年来外科施行的93例甲亢的甲状腺次全切除术病例资料进行回顾性分析。结果：男8例,女85例,发病年龄男15～56岁,平均36岁;女16～70岁,平均34岁。肿块大小为3～20厘米,16厘米以上占77.42%,病理诊断：弥漫性毒性甲状腺肿92例,双侧结节性毒性甲状腺肿1例。基础代谢率27%～73%,平均46.3%。心电图异常50例占53.76%。术后1例并发甲亢危象,1例并发甲低,房室传导阻滞,均痊愈出院。结论：甲亢的甲状腺次全切除术效果可靠,优于药物治疗,并发症少,术前准备要仔细充分,术中操作要细致,严防并发症的发生,特别是甲低、甲亢危象,旁腺和神经损伤的发生。     

胃去门静脉循环断流术犬模型的建立

目的设计胃去门静脉循环断流术的方法 ,并建立胃去门静脉循环断流术犬模型。方法应用缩窄门静脉主干1/2加丝线慢性栓塞术制作犬肝前型门静脉高压食管静脉曲张模型。然后,实施胃去门静脉循环断流术,即行脾切除后,保留贲门周围血管、食管曲张静脉及迷走神经,从根部离断胃冠状静脉等汇入门静脉系统的胃静脉血管,使胃的静脉血流经门奇间的交通支血管进入体循环。将已形成肝前型门静脉高压食管静脉曲张犬12只随机分为脾切除组、贲门周围血管离断术组、胃去门静脉循环断流术组。于开腹后、手术后即刻及术后3周末测量门静脉及食管曲张静脉压力。术前及术后3周末测定肝功能指标。结果犬模型均存活。手术后即刻及术后3周末与开腹后相比,胃去门静脉循环断流术组门静脉压力显著下降(F=7.386,q=3.503、3.121,P<0.05);食管曲张静脉压力亦显著下降(F=8.026,q=3.661、3.240,P<0.05)。手术前后肝功能指标变化不明显(t=0.268～1.325,P>0.05)。结论胃去门静脉循环断流术犬模型存活率高,制作方法简单易行,模型质量可靠,有助于研究胃去门静脉循环断流术对门静脉血流动力学参数的影响。