迷迭香酸对MPP~+导致MES 23.5细胞损伤保护作用

目的观察迷迭香酸对1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP+)所致MES 23.5细胞损伤的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测方法,观察不同浓度的迷迭香酸对MPP+处理的MES 23.5细胞的保护作用。结果 10-9~10-6mol/L的迷迭香酸对MES 23.5细胞无毒性作用(F=0.581,P>0.05)。200μmol/L的MPP+可使细胞存活率降低(F=44.863,P<0.01),而应用10-9~10-6mol/L的迷迭香酸预孵育细胞后,能明显提高细胞的存活率(P<0.01)。结论迷迭香酸能拮抗MPP+对MES 23.5细胞的毒性作用,具有一定的神经保护作用。     

芒果甙对柔红霉素致大鼠心肌毒性细胞中铁调节蛋白表达的影响

目的:探讨铁调节蛋白1(IRP1)及铁调节蛋白2(IRP2)在芒果甙保护柔红霉素致大鼠心肌细胞毒性作用中的表达及其意义。方法:以4μmol/L柔红霉素单用或联合应用25～200μmol/L芒果甙为处理因素作用于大鼠心肌细胞24,48h及72h,应用qRT-PCR法检测各组心肌细胞IRP1、IRP2mRNA表达。结果:25～200μmol/L芒果甙模型组在干预24h后IRP1、IRP2表达水平较柔红霉素组(4μmol/L)降低,干预48,72h后,二者表达较柔红霉素组升高。结论:芒果甙能改变柔红霉素致大鼠心肌毒细胞中铁调节蛋白的表达水平,对细胞内铁代谢产生影响。     

白藜芦醇抑制HeLa细胞增殖及其作用机制

目的研究白藜芦醇(Res)对宫颈癌HeLa细胞体外生长抑制作用及其机制。方法以17.5、35.0、70.0、140.0μmol/L Res分别处理HeLa细胞24、48与72 h,采用MTT法检测HeLa细胞存活率;应用70μmol/L的Res处理HeLa细胞24 h,采用Western Blot检测HeLa细胞中磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(p-eIF4E)、磷酸化4E结合蛋白1(p-4E-BP1)和半胱氨酸蛋白酶蛋白3(caspase-3)的表达。结果不同浓度的Res作用不同时间后HeLa细胞增殖受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性,在相同时间内,随着Res浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高(F=93.76~637.22,P<0.01);在同一浓度时,随着Res作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高(F=8.79~29.99,P<0.01)。70μmol/L的Res作用HeLa细胞24 h后,HeLa细胞中p-eIF4E、p-4E-BP1蛋白表达较对照组减少(t=14.93、4.78,P<0.01),caspase-3蛋白表达较对照组增加(t=10.68,P<0.01)。结论 Res对宫颈癌HeLa细胞体外生长有明显抑制作用,其机制可能与抑制p-eIF4E、p-4E-BP1表达,并诱导caspase-3活化,从而增加HeLa细胞凋亡有关。     

淫羊藿总黄酮对MPP~+诱导MES23.5细胞损伤保护作用

目的探讨淫羊藿总黄酮对1-甲基-4-苯吡啶离子(MPP+)诱导的MES23.5细胞损伤的保护作用。方法 MES23.5细胞常规培养,淫羊藿总黄酮预处理24 h,再用MPP+和淫羊藿总黄酮共同处理细胞24 h,MTT法检测细胞的存活率,实时反转录聚合酶链反应(real ti me RT-PCR)观察bcl-2和bax基因的表达情况。结果 MPP+可剂量依赖性地损伤MES23.5细胞(F=18.38,P<0.001);淫羊藿总黄酮预处理可明显对抗MPP+的毒性作用(F=44.36,P<0.001);MPP+对bcl-2基因表达没有明显影响,但可明显增加bax基因的表达(F=10.92,P<0.05);淫羊藿总黄酮预处理可明显增加bcl-2基因的表达(F=15.76,P<0.01),并可逆转bax基因表达的增高(F=10.92,P<0.05)。结论淫羊藿总黄酮可明显对抗MPP+对MES23.5神经细胞的损伤,其作用机制可能与抗凋亡有关。     

EFFECTS OF MANGIFERIN ON IRON REGULATORY PROTEIN EXPRESSION OF DAUNORUBICIN-INDUCED RAT MYOCARDIAL TOXICITY CELLS

目的:探讨铁调节蛋白1(IRP1)及铁调节蛋白2(IRP2)在芒果甙保护柔红霉素致大鼠心肌细胞毒性作用中的表达及其意义.方法:以4 μmol/L柔红霉素单用或联合应用25~200 μmol/L芒果甙为处理因素作用于大鼠心肌细胞24,48 h及72 h,应用qRT-PCR法检测各组心肌细胞IRP1、IRP2 mRNA表达.结果:25~200 μmol/L 芒果甙模型组在干预24 h后IRP1、IRP2表达水平较柔红霉素组(4 μmol/L)降低,干预48,72 h后,二者表达较柔红霉素组升高.结论:芒果甙能改变柔红霉素致大鼠心肌毒细胞中铁调节蛋白的表达水平,对细胞内铁代谢产生影响.     

人参皂苷Rg1激活PI3K/Akt信号通路对6-OHDA毒性作用的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对抗6-羟基多巴胺(6-OHDA)毒性作用的信号通路.方法 MES23.5细胞常规培养,免疫印迹法观察人参皂苷Rg1预处理对6-OHDA诱导的磷酸化蛋白激酶B (Akt) 表达的影响,MTT法观察细胞的存活率.结果 6-OHDA可时间依赖性地降低MES23.5细胞磷酸化Akt的表达(F=24.51,P<0.01),人参皂苷Rg1预处理可明显增强磷酸化Akt的表达(t=471.60,P<0.01);人参皂苷Rg1预处理可明显降低6-OHDA对MES23.5细胞的损伤作用,此作用可以被磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002所阻断(F=25.12,P<0.01).结论 人参皂苷Rg1通过激活PI3K/Akt信号通路对抗6-OHDA对MES23.5神经细胞的毒性作用.     

迷迭香酸的铁离子螯合作用

目的观察迷迭香酸的铁离子螯合作用。方法采用邻二氮菲分光光度法和Western blot检测方法 ,分别观察不同浓度的迷迭香酸的铁离子螯合作用及对MES23.5细胞铁转出蛋白ferroportin1（FP1）的调节作用。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测方法 ,观察不同浓度的迷迭香酸对MES23.5细胞存活率的影响。结果 10-4~10-2mol/L的迷迭香酸具有铁离子螯合作用（F=7.851,q=3.88~6.14,P〈0.05）,10-5mol/L的迷迭香酸没有表现出铁离子螯合作用（P〉0.05）。10-5、10-4mol/L的迷迭香酸对细胞无毒性作用（P〉0.05）,10-3mol/L的迷迭香酸使细胞存活率下降（F=4.948,q=4.04,P〈0.05）。10-4mol/L迷迭香酸不能调节MES23.5细胞内FP1的表达（F=0.333,P〉0.05）。结论迷迭香酸有明显的铁离子螯合作用,在治疗铁代谢相关疾病方面有着潜在的应用前景。     

MEHP对正常肝细胞脂肪酸分解代谢相关基因的影响

目的 探讨邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯(mono-(2-ethylhexyl) phthalate, MEHP)对正常肝细胞HL-7702脂肪酸分解代谢相关基因的影响。方法 将HL-7702细胞分别暴露于不同浓度MEHP(0,0.01,1,10,100μmol/L)和油酸(1 mmol/L OA)24 h以及48 h,未暴露MEHP的细胞作为阴性对照组，用MTT实验检测细胞活性，qRT-PCR法检测染毒后细胞内miRNA-34a的转录水平和细胞内脂肪酸分解代谢相关基因(SIRT1、PPARα和CPT1A)表达的转录水平。结果 与阴性对照组相比，油酸组染毒24 h细胞存活率降低(P<0.05),不同浓度MEHP组染毒24 h和48 h细胞存活率没有明显改变(P>0.05)。与阴性对照组相比，染毒24 h, 10,100μmol/LMEHP组和油酸组miRNA-34a表达水平明显降低(P<0.05);染毒48 h, 0.01μmol/L MEHP组miRNA-34a表达水平明显升高(P<0.05)。与阴性对照组相比，0.01,1,10,100μmol/L MEHP组...     

蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡以及半胱氨酸蛋白水解酶3活化的实验研究

目的探讨蛋白酶体功能缺陷是否能诱导多巴胺能细胞发生凋亡及其可能的作用机理。方法应用高选择性的蛋白酶体抑制剂lactacystin(0、1μmol/L、5μmol/l或10μmol/L)处理大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞株24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力的改变。10μmol/Llactacystin作用24h后,Hoechst荧光染色观察凋亡细胞的核形态学改变,流式细胞仪测定细胞凋亡百分率。用Western印迹法检测10μmol/Llactacystin作用0、24或48h时PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的动态变化。结果5μmol/L或10μmol/Llactacystin作用24h后,PC12细胞的活力(87%±6%和26%±6%)显著低于对照组(P<0.05)。Hoechst荧光染色显示10μmol/Llactacystin作用24h后部分细胞呈现凋亡细胞核形态学改变;流式细胞仪证实31.4%±4.0%的PC12细胞发生了凋亡,与对照组(7.5%±0.8%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western印迹法显示对照组细胞内仅有极少量的半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段表达;10μmol/Llactacystin作用48h的PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的表达明显较多。结论蛋白酶体抑制剂lactacystin能诱导多巴胺能细胞PC12发生凋亡,半胱氨酸蛋白水解酶3蛋白酶的激活可能参与lactacystin诱导的PC12细胞凋亡过程;蛋白酶体的功能缺陷在帕金森病发病机制中可能发挥重要作用。     

高糖培养对LO2肝细胞株铁代谢相关蛋白的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对LO2肝细胞株铁调节蛋白1(iron regulatory protein 1,IRP1)、转铁蛋白受体1(transferring receptor 1,TfR1)、转铁蛋白受体2(transferring receptor 2,TfR2)、铁调素(hepcidin)表达的影响. 方法 LO2肝细胞株分为高糖组(25 mmol/L葡萄糖)和对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)培养0-48 h,分别在0 h,12 h,24 h,48 h检测细胞活性氧(ROS)水平及IRP1、TfR1、TfR2、hepcidin的表达量. 结果 高糖组细胞内ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量随培养时间延长逐步升高(P<0.01),hepcidin从24 h时表达量显著升高(P<0.01);12 h,24 h,48 h时高糖组与同时刻对照组相比细胞内ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量均显著升高(P<0.01);24 h与48 h时高糖组与同时刻对照组相比hepcidin表达量升高(P<0.01);对照组细胞内ROS水平从24 h时升高(P<0.05),以上蛋白在各时间表达均无显著变化(P>0.05). 结论 高浓度葡萄糖使正常人肝细胞铁代谢相关蛋白的表达增加,可能与高糖培养诱发活性氧的大量增加有关.     

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

白藜芦醇对鼻咽癌相关实验模型的整体与离体药理作用研究

目的:了解白藜芦醇诱导大鼠鼻咽癌细胞CNE-2 Z凋亡过程中半胱天冬酶-6(caspase-6)的活化情况。方法:采用实时PCR检测caspase-6 mRNA表达的改变,比色法测定caspase-6活性的变化。结果:采用不同浓度的白藜芦醇(0μmol/L、30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L)处理小鼠鼻咽癌细胞24h,caspase-6 mRNA的表达呈浓度依赖性的增加(P<0.01);caspase-6活性呈浓度和时间依赖性的升高(P<0.01)。结论:白藜芦醇诱导小鼠鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中存在caspaso-6的活化。     

α-突触核蛋白促进多巴胺能神经细胞表面NMDA受体的内在化

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)对多巴胺能神经细胞表面N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的影响及其机制。方法免疫荧光标记法和Western blotting分析法测定NMDA受体(NMDAR)和Rab5b含量。低钾休克抑制内吞,Rab5b反义寡核苷酸抑制Rab5b基因表达。以MES23.5多巴胺能神经细胞为模型,观察细胞外添加α-Syn蛋白对细胞膜NMDAR含量的影响以及内吞和Rab5b的作用。结果α-Syn(10μmol/L)明显上调Rab5b表达,下调细胞表面NMDAR;低钾休克及抑制Rab5b表达可消除α-Syn的这一作用。结论α-Syn通过上调Rab5b的表达促进NMDAR的内在化。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞nm23基因表达的影响

目的:通过观察槲皮素对宫颈癌HeLa细胞nm23 mRNA的表达水平,分析槲皮素体外诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法:按槲皮素浓度分为10,20,40μmol/L和空白对照组、溶剂对照组,分别培养24,48,72 h后,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内nm23 mRNA的表达水平。结果:20,40μmol/L槲皮素组在24,48 h时HeLa细胞nm23 mRNA的表达分别较空白对照组、溶剂对照组明显上升(均为P<0.01)。结论:槲皮素可能通过促进转移抑制基因nm23的表达而发挥抗肿瘤作用。     

氯化钴对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响及其机制

目的研究氯化钴(CoCl2)诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响,初步探讨HIF-1α在其中的机制。方法 MTT检测CoCl2(50、100、150、200、250μmol/L)对细胞活力的影响,倒置显微镜观察低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、12、24、48 h)对细胞形态的影响,Western blot检测低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、3、6、12、24 h)对HIF-1α、E-cadherin和Vimentin表达的影响,Transwell法检测低氧(150μmol/L的CoCl2分别作用0、6 h)对细胞侵袭、转移的影响,用免疫荧光对HIF-1α蛋白进行亚细胞定位。结果低氧模拟剂CoCl2可抑制NPA细胞活力。随着CoCl2低氧处理时间的延长,NPA细胞逐渐获得间质细胞的形态特征,HIF-1α、Vimentin表达在0～6 h逐渐增加,随后开始下降,E-cadherin表达持续降低,低氧0 h与6 h相比各蛋白表达均具有统计学差异(P<0.01)。低氧组侵袭、转移细胞数目较对照组明显增加(P<0.01),同时低氧组细胞HIF-1α发生核转位。结论 CoCl2模拟化学性低氧可促进NPA细胞上皮间质转化及侵袭、转移,其分子机制可能涉及HIF-1α介导的信号通路对E-cadherin、Vimentin基因表达的调控。     

厄贝沙坦对单核-巨噬细胞核因子-κB活性和表达的影响研究

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1)拮抗剂厄贝沙坦对单核-巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活性和表达的影响,探讨厄贝沙坦抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法用不同浓度的厄贝沙坦预作用已诱导分化的单核-巨噬细胞2 h,再加入1×10-6mol/L的AngⅡ24 h后,用细胞免疫荧光染色检测单核-巨噬细胞表达NF-κB P65的阳性细胞率,采用电泳迁移率改变分析检测NF-κB的活性。结果单核-巨噬细胞NF-κBP65阳性表达率,AngⅡ组(65.2±7.2)%>0.01μmol/L厄贝沙坦组(47.2±5.8)%>0.1μmol/L厄贝沙坦组(32.7±3.6)%>1μmol/L厄贝沙坦组(15.2±4.1)%>空白对照组(8.1±3.0)%,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB的活性,AngⅡ组>各浓度厄贝沙坦组>空白对照组(P<0.05),0.01μmol/L厄贝沙坦组、0.1μmol/L厄贝沙坦组均>1μmol/L厄贝沙坦组(P<0.05),0.01μmol/L厄贝沙坦组与0.1μmol/L厄贝沙坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄贝沙坦可浓度依赖性地抑制AngⅡ诱导的单核-巨噬细胞NF-κB的活性和表达,其可能通过此作用抑制AS的启动环节,从而发挥抗AS作用。     

苯乙基异硫氰酸酯对良性前列腺上皮细胞增殖凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨苯乙基异硫氰酸酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)对人类良性前列腺上皮细胞(benign prostatic hyperplasia cell line,BPH-1)增殖与凋亡的影响及其相关机制。方法 体外培养人永生化前列腺上皮细胞,给予6、12、24 μmol/L PEITC或等量溶剂二甲基亚砜,分别作用6、12、24 h。采用CCK-8检测前列腺上皮细胞活性; Annexin V及PI标记,流式细胞技术检测PEITC处理24 h后 BPH-1细胞凋亡及坏死比例;Western blotting测定PEITC处理24 h后BPH-1细胞中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis,XIAP)及自噬相关蛋白5-12 (Atg5-12)表达变化;RT-PCR检测PEITC处理24 h后BPH-1细胞中XIAP mRNA表达情况。结果 1) BPH-1细胞经过6、12、24 μmol/L PEITC处理6 h后,细胞相对活性分别为71.22%、48.90%、13.57%;处理12 h后分别为52.57%、42.37%、10.11%;处理24 h后分别为36.73%、25.88%、8.39%;处理36 h后分别为33.57%、25.83%、13.06%,呈现浓度依赖性和时间依赖性。2) BPH-1细胞在 6、12、24 μmol/L PEITC 处理24 h后,细胞凋亡率分别为19.5%、30.4%、40.1%;与对照组相比,12、24 μmol/L处理组差异均具有统计学意义(P<0.05)。 3) BPH-1 细胞在6、12、24 μmol/L PEITC处理24 h后,XIAP 蛋白表达量及 mRNA 表达量均下调,Atg5-12蛋白表达量下调,并呈现剂量依赖性。结论 PEITC可抑制前列腺上皮细胞增殖,通过下调BPH-1中XIAP mRNA而降低XIAP蛋白表达,促进前列腺上皮细胞的凋亡并呈现出剂量依赖性;同时PEITC下调了自噬相关蛋白Atg5-12;PEITC对凋亡与自噬的调节可能存在相关性。