聚合酶链反应检测铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡的实验研究及临床应用

目的：探索聚合酶链反应（PCR）技术对铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡快速诊断的可行性。优越性及其在临床应用中的价值。方法：建立PCR检测标准铜绿假单胞菌方法，对兔铜绿假单胞菌感染性角膜溃疡模型研究并应用于临床，并与细菌培养做比较。结果：铜绿假单胞菌扩增出一条长504bp的阳性条带，其他常见细菌，人和兔正常角膜组织均为阴性，动物模型PCR敏感性为93.8%。特异性为100.0%；细菌培养敏感性为68.7%。特异性为93.7%。临床标本PCR阳性率为66.7%；细菌培养阳性率为38.1%。结论：PCR技术对快速检测实验室和临床标本中的铜绿假单胞菌具有重要的应用价值。     

PCR法与培养法检测儿童肺炎易感细菌结果比较

目的探讨PCR法和培养法对儿童肺炎易感细菌检测的应用价值。方法采用PCR法及细菌培养法对113例呼吸道感染患儿的临床标本进行检测,对两种检测方法的结果进行比较。结果 113例临床标本中,培养法检测阳性率46.9%(53/113),其中流感嗜血杆菌2例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌15例,肺炎链球菌3例,金黄色葡萄球菌12例,表皮葡萄球菌6例,铜绿假单胞菌7例。PCR法检测阳性率69.9%(79/113),在79例阳性标本中检出病原菌85株,其中73例标本检测出单一病原,6例标本为混合感染。流感嗜血杆菌18例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌17例,肺炎链球菌16例,金黄色葡萄球菌10例,表皮葡萄球菌10例,铜绿假单胞菌6例。结论与培养法相比,PCR法可以提高肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等较难培养细菌的检出率,应将PCR法与培养法结合作为肺炎易感细菌的检测方法,为临床医师合理选择抗生素奠定基础。     

Comparison of culture and PCR assay for detection of susceptibility bacteria of pneumonia in children

目的 探讨PCR法和培养法对儿童肺炎易感细菌检测的应用价值.方法 采用PCR法及细菌培养法对113例呼吸道感染患儿的临床标本进行检测,对两种检测方法的结果进行比较.结果 113例临床标本中,培养法检测阳性率46.9％(53/113),其中流感嗜血杆菌2例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌15例,肺炎链球茵3例,金黄色葡萄球菌12例,表皮葡萄球菌6例,铜绿假单胞菌7例.PCR法检测阳性率69.9％(79/113),在79例阳性标本中检出病原菌85株,其中73例标本检测出单一病原.6例标本为混合感染.流感嗜血杆菌18例,大肠埃希菌8例,肺炎克雷伯菌17例.肺炎链球菌16例,金黄色葡萄球菌10例.表皮葡萄球菌10例,铜绿假单胞菌6例.结论 与培养法相比,PCR法可以提高肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等较难培养细菌的检出率,应将PCR法与培养法结合作为肺炎易感细菌的检测方法.为临床医师合理选择抗生素奠定基础.     

铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解烟台地区多重耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2006年1-6月间烟台地区住院病人标本中分离出30株多重耐药的铜绿假单胞菌,(K-B)法测定16种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果30株多重耐药铜绿假单胞菌中16SrRNA甲基化酶(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rpmA)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅱ基因阳性株6株、aac(6′)-Ⅱ基因阳性株14株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株11株、ant(2″)-Ⅰ基因阳性株1株;aac(3)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰb基因均为阴性。结论烟台地区多重耐药铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因与aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ和ant(2")-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因存在有关。尚未检出16SrRNA甲基化酶。     

1274株临床标本检出细菌的构成及药敏分析

目的：通过对临床常见标本细菌构成和药物敏感实验，为临床医生提供用药参考。方法：进行常规细菌学培养、鉴定、药敏实验，将结果进行统计分析。结果：痰液标本的主要构成细菌为：链球菌、金黄色葡萄球菌、奈色氏菌、铜绿假单孢菌、克雷伯氏杆菌；尿尿标本多见金黄色葡萄球菌和大肠杆菌；脓液标本主要感染菌为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。结论：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌和铜绿假单孢菌是临床感染最多的细菌；头孢类抗生素、丁胺卡那霉素、环丙沙星对临床常见菌敏感性较强，青霉素、红霉素、氨苄青霉素敏感性较差。     

106株铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的 了解铜绿假单胞菌在医院内的感染及耐药性情况，为临床合理使用抗生素提供参考依据。方法 用法国生物梅里埃半自动细菌分析系统检测铜绿假单胞菌对16种抗生素的敏感性。结果 2001年1月—2002年12月住院病人标本中分离到铜绿假单胞菌106株，其标本来源以痰为主，其次是尿液及伤口分泌物．按病区以内科病房感染率最高，其次为ICU病区。结论 铜绿假单胞菌具有较高的耐药性，治疗时宜参考实验室的细菌药敏结果选用抗生素。     

用三对引物检测血液中细菌DNA的方法学

目的建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌 DNA的方法。方法取 23例腹部手术后体温 >38.5℃患者的肘静脉血进行血培养,并以酚抽提法提取全血 DNA进行 PCR,靶基因分别为大肠杆菌特异性的β-半糖苷酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因,以及大多数细菌所共有的 16SrRNA基因。以标准菌株提取的 DNA为阳性对照,空白对照为阴性对照, 20例健康志愿者全血 DNA为正常对照。对 20例标本重复检测 2次以确定其复现性。结果 PCR复现率为 95％。血培养阳性率为 13.0％（ 3/23）, PCR检测阳性率为 43.5％（ 10/23）,较血培养阳性率高（ P=0.016）。结论按照规范进行的 PCR检测血液中肠源性细菌方法稳定,比血培养敏感。     

16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎早期诊断中的应用

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎(BM)早期诊断中的应用价值.方法 收集40例2019年1月至2020年6月间,在昆明市儿童医院确诊为BM患者的CSF标本进行16SrRNA基因PCR检测,16SrRNA基因PCR检测阳性标本进行基因测序,测序结果通过NCBI BLAST进行序列比对和同源性分析,同时进行CSF细菌培养,将CSF 16SrRNA基因PCR检测结果与CSF培养结果进行比较.结果 40例患儿CSF中16例16SrRNA基因PCR检测阳性,阳性率40％;7例细菌培养阳性,阳性率17.5％,PCR检测法阳性率高于细菌培养法(χ2=4.93,P<0.05),以CSF培养为"金标准",PCR检测法的灵敏度为71.4％(5/7),特异度为66.7％(22/33);16SrRNA基因测序结果与CSF培养结果一致,且检测出CSF培养未检出的5种细菌;CSF培养时间为(61.21±12.62)h,PCR检测法所需时间为(7.09±0.45)h,两者之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 CSF中16SrRNA基因PCR检测法能提高BM患者CSF中病原菌的检出率,且能降低漏检率,具有特异、快速特点能及时为临床BM早期诊断提供可靠的病原学依据.     

16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎早期诊断中的应用

目的 探讨脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中16SrRNA基因检测在儿童细菌性脑膜炎(BM)早期诊断中的应用价值.方法 收集40例2019年1月至2020年6月间,在昆明市儿童医院确诊为BM患者的CSF标本进行16SrRNA基因PCR检测,16SrRNA基因PCR检测阳性标本进行基因测序,测序结果通过NCBI BLAST进行序列比对和同源性分析,同时进行CSF细菌培养,将CSF 16SrRNA基因PCR检测结果与CSF培养结果进行比较.结果 40例患儿CSF中16例16SrRNA基因PCR检测阳性,阳性率40％;7例细菌培养阳性,阳性率17.5％,PCR检测法阳性率高于细菌培养法(χ2=4.93,P<0.05),以CSF培养为"金标准",PCR检测法的灵敏度为71.4％(5/7),特异度为66.7％(22/33);16SrRNA基因测序结果与CSF培养结果一致,且检测出CSF培养未检出的5种细菌;CSF培养时间为(61.21±12.62)h,PCR检测法所需时间为(7.09±0.45)h,两者之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 CSF中16SrRNA基因PCR检测法能提高BM患者CSF中病原菌的检出率,且能降低漏检率,具有特异、快速特点能及时为临床BM早期诊断提供可靠的病原学依据.     

细菌16SrDNA基因PCR检测在败血症诊断的临床研究

目的建立细菌16SrDNA基因半巢式PCR检测方法,并与血培养方法比较,评估其在临床败血症的诊断价值。方法针对16SrDNA高度保守区设计半巢式PCR引物,并对92例临床疑为败血症的患者血标本同时进行血培养和16SrDNA基因检测。结果 92例疑为败血症患者16SrDNA基因检测阳性45例,阳性率为48.9%;血培养检测阳性标本24例,阳性率为26.1%。经χ2检验,PCR检测的灵敏性明显高于血培养（P〈0.05）。结论半巢式PCR方法检测细菌16SrDNA基因具有高敏感、高特异及快速的优点,是一种易于推广的早期败血病诊断方法。     

烧伤创面绿脓假单胞菌的分离及对哌拉西林/他唑巴坦耐药情况分析

目的：探讨烧伤创面绿脓假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦（PIP／TAZ)的耐药性并与其他几种治疗绿脓假单胞菌感染的抗生素比较，寻找最佳的治疗用药。方法：对烧伤创面分离出的189株绿脓假单胞菌，用MI-CROSCAN AS4细菌鉴定及药敏分析系统进行鉴定，用K—B法进行药物敏感试验。结果：几种常用于治疗绿脓假单胞菌的药物中，敏感性较高的依次为PIP／TAZ、哌拉西林、头孢他啶、氨曲南和泰能，其耐药率分别为27．5％、42．9％、52．3％、57．1％、74．6％。结论：PIP／TAZ为治疗烧伤创面绿脓假单胞菌较理想的抗生素之一。     

重度烧伤早后期创面细菌菌种变化及临床治疗的经验探讨

目的总结重度烧伤早后期创面细菌菌种变化及治疗的经验教训.方法对1997～2003年收治的37例重度以上烧伤,住院时间均超过60d患者,通过调查住院期间,进行创面细菌培养和药物敏感试验资料.结果共检出细菌58株,其中革兰阳性菌19株,革兰阴性菌39株,主要以阴沟肠杆菌,铜绿假单胞菌为主,其次为金黄色葡萄球菌和肠球菌.铜绿假单胞菌对哌拉西林、阿米卡星、头孢他啶的药物敏感率在60%～75%之间,对亚胺培南药物敏感率为100%,阴沟肠杆菌对头孢三代耐药明显,对阿米卡星、亚胺培南药物敏感率分别为58%、100%,而金黄色葡萄球菌对苯唑西林、红霉素、万古霉素药物敏感率分别为42.8%、57%、100%,肠球菌耐药率较高,大部分肠球菌仅对万古霉素或去甲万古霉素敏感.结论烧伤早期创面细菌以革兰阴性菌为主,烧伤后期创面细菌革兰阳性菌较多.这些细菌的耐药菌株明显增多.耐药菌株的感染是造成重度烧伤患者创面延迟愈合的主要原因.正确合理使用抗生素,及时正确处理创面是防治烧伤感染的有效方法.     

重度烧伤患者创面病原菌分布及耐药分析

目的:了解烧伤患者感染的致病菌种类、分布及药敏结果,指导对烧伤患者合理使用抗生素。方法:收集2005年1月至2007年11月烧伤面积超过50%的27例重症患者的创面分泌物、血液,共送检标本47份。结果:47份标本中有43份检出致病菌,检出率为91.2%。检出致病菌52株,共10种,其中革兰阴性菌30株,革兰阳性菌22株。在革兰阴性菌中占第一位的是铜绿假单胞菌,在革兰阳性菌中占第一位的是金黄色葡萄球菌。10种致病菌对常用的12种抗生素均有不同程度的耐药,其中金黄色葡萄球菌对9种抗生素100%耐药,但对万古霉素100%敏感。铜绿假单胞菌对三、四代头孢菌素及美洛培南也有较高的耐药率。结论:烧伤患者感染的致病菌以铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌为主。监测烧伤感染菌种及耐药的变化,可为烧伤感染提供有意义的参考。     

烧伤患者感染病原菌及耐药性分析

目的 :了解烧伤患者感染病原菌和细菌耐药性变迁。方法 :分别对 1991年 7月～ 1996年 6月和1996年 7月～ 2 0 0 1年 6月两个时期烧伤病人的血及创面培养的细菌检出情况及药物敏感性进行调查。结果 :革兰阴性菌是主要的烧伤感染菌 ,铜绿假单胞菌居第一位 ,但近五年所占百分比有所下降 ;革兰阳性菌中金黄色葡萄球菌居第一位 ,后五年较前五年有所上升 ,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率有较大程度上升 ;阴沟肠杆菌 (10 .4%)、大肠埃希菌 (8.3%)、肺炎克雷伯菌 (7.3%)、真菌 (4.2 %)检出率有一定程度的上升 ;金黄色葡萄球菌 ,铜绿假单胞菌等的耐药菌株有明显上升趋势。结论 :烧伤感染病原菌和细菌耐药性变迁与头孢他啶、亚胺培南等广谱抗生素广泛应用可能有一定关系 ;不间断地监测烧伤感染菌种及耐药性变化 ,可为本病区防治感染提供有意义的参考资料。     

烧伤患者感染病原菌及耐药性分析

目的：了解烧伤患者感染病原菌和细菌耐药性变迁。方法：分别时：1991年7月～1996年6月和1996年7月～2001年6月两个时期烧伤病人的血及创面培养的细菌检出情况及药物敏感性进行调查。结果：革兰阴性菌是主要的烧伤感染菌，铜绿假单胞菌居第一位，但近五年所占百分比有所下降；革兰阳性菌中金黄色葡萄球菌居第一位，后五年较前五年有所上升，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出率有较大程度上升；阴沟肠杆菌(10．4％)、大肠埃希菌(8．3％)、肺炎克雷伯菌(7．3％)、真菌(4．2％)检出率有一定程度的上升；金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌等的耐药菌株有明显上升趋势。结论：烧伤感染病原菌和细菌耐药性变迁与头孢他啶、亚胺培南等广谱抗生素广泛应用可能有一定关系；不间断地监测烧伤感染菌种及耐药性变化，可为本病区防治感染提供有意义的参考资料。     

老年下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌耐药性分析

目的分析老年下呼吸道感染住院患者的铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性,为指导临床合理用药提供可靠依据。方法对2008年5月～至2010年5月入院治疗的老年下呼吸道感染患者173例,进行细菌鉴定及药敏试验,分析抗生素的使用情况及耐药性。结果全部患者在铜绿假单胞菌检出前2周内均使用过多种抗生素,其中青霉素类68例,头孢类86例,喹诺酮类34例,氨基糖苷类20例;铜绿假单胞菌耐药现象较为严重,其中以氨苄西林最高,占88.44%,依次为头孢唑啉（82.65%）、头孢曲松（67.63%）。结论铜绿假单胞菌对多种常用抗生素素耐药严重,存在多重耐药性,临床用药时应根据药敏试验合理选择抗生素。     

非发酵菌致下呼吸道感染225例临床特点及药敏分析

目的探讨非发酵菌所致下呼吸道感染的临床特点及对细菌耐药性进行分析。方法搜集、分析2004年1月～2008年5月本院收治的225例非发酵菌所致下呼吸道感染患者的临床和药敏资料。结果 225例患者中,医院获得性感染占绝对多数。高龄、基础疾病、免疫抑制、长期反复应用广谱抗生素以及机械通气的应用是非发酵菌所致下呼吸道感染的高危因素。其临床表现无明显特异性。非发酵菌检出率依高低排序依次为铜绿假单胞菌(45.77%)、不动杆菌属(35.11%)、嗜麦芽窄食单胞菌(7.56%)、其他假单胞菌属(4.89%)、黄杆菌属(4.00%)、伯克霍德尔菌属(1.78%)和其他(0.89%)。药敏显示非发酵菌高度耐药,碳青酶烯类抗生素相对敏感度最高。三代头孢敏感性差,含酶抑制剂的复方制剂耐药率明显下降。结论非发酵菌所致下呼吸道感染存在高危人群,临床表现无特异性,抗生素选择应依据药敏试验。     

2009－2012年我院泌尿外科住院病人血培养细菌分布及药敏分析

目的分析我院泌尿外科住院病人血培养细菌分布及对抗生素的敏感情况,为临床更加合理应用抗生素提供参考。方法回顾性分析2009年1月－2012年12月我院泌尿外科住院病人血培养的阳性率,常见菌株种类、分布及对临床常用抗生素敏感变化情况。结果送检标本共596例,培养总阳性数87例,总阳性率为14．60％。其中革兰阴性菌55例,革兰阳性菌29例,真菌3例,革兰阴性菌中大肠埃希菌为主要菌种,革兰阳性菌中溶血葡萄球菌和粪肠球菌为主要菌种。大肠埃希菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛、头孢西丁、哌拉西林-他唑巴坦的耐药性有逐年递增的趋势。铜绿假单胞菌的多重耐药性严重,对临床常用的多种抗生素都有较高的耐药性。几种革兰阳性菌对青霉素G、左氧氟沙星、红霉素、环丙沙星、磺胺甲啄唑-甲氧苄啶耐药性较高,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的革兰阳性菌。结论泌尿外科血培养的细菌分布以革兰阴性菌为主,大肠埃希菌仍为最常见菌种,耐药性逐年增高,铜绿假单胞菌的阳性检出率有升高趋势。     

ICU病区医院感染病原菌流行菌株及耐药性分析

目的调查分析重症监护病房（ICU）医院感染的病原菌流行菌株分布、耐药情况及其耐药性变化趋势,为临床医生正确使用抗生素提供依据。方法对ICU2004年1月～2009年1月所分离出的病原菌株及其耐药性进行回顾性调查分析。结果共检出病原菌1008株,其中革兰阴性菌766株（75.9%）,以铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌为主,主要见于呼吸道感染;革兰阳性球菌242株（24.1%）,以葡萄球菌属和肠球菌属为主,主要见于呼吸道和泌尿道感染;病原菌对常用抗菌药物耐药严重,且呈多药耐药,革兰阳性菌分离率逐年增多,革兰阴性菌对主要抗菌药物的耐药率呈逐年上升之势。结论ICU医院感染的部位主要是呼吸道,以革兰阴性菌为主,对常用抗菌药物耐药严重,且呈多重耐药,需严格掌握抗菌药物使用原则,根据药敏选用抗菌药物。     

烧伤创面菌株调查及耐药性研究

目的：了解我院烧伤患者创面病原菌的分布及耐药性，指导临床医生合理、有效地使用抗生素。方法：对我院1997至2002年223例烧伤患者进行创面分泌物微生物培养及常规药敏试验。结果：共检出细菌153株，革兰氏阴性杆菌92株，占60.1％；革兰氏阳性菌44株，占28.8％。其中，阴沟杆菌占首位为20.3％(31株)，铜绿假单胞菌居第二位19.0％(29株)，金黄色葡萄球菌为第三位17.0％(26株)，其次分别为弗氏枸橼酸杆菌及血浆凝固酶阴性葡萄球菌。有5例发生真菌感染。感染菌多重耐药现象严重。结论：广谱抗生素的广泛使用造成烧伤感染病原菌的分布及耐药性发生变化。