应用全胚胎体体培养技术检测高热的胚胎毒性

研究高热对胚胎发育的影响。方法采用全胚胎体外培养技术。结果在一同作用时间,温度升至４０℃时,７０％胚胎出现畸形;４２０℃时,１００％胚胎出畸形。结论高热胚胎的生长发育,并与高温值和作用时间明显相关。     

热休克对高热致畸保护作用的实验研究

温度升高对胚胎发育能产生有害影响，然而亚致畸剂量的高热却能诱导胚胎对随后致畸程度的高热产生一定的耐受作用。本研究应用Ｗｉｓｔｅｒ种大鼠胚胎体外培养方法研究了这种热耐受作用，结果发现先给一次热休克处理（４２℃２０ｍｉｎ）可减少随后高热（４３℃１５ｍｉｎ）所致胚胎畸形的发生率。胚胎畸形率从５６．２５％减少到２３．５％，胚胎发育迟缓明显减轻。证实热休克具有保护胚胎对随后致畸程度高热的致畸作用的抵抗能力。     

高温联合辐射对孕鼠胚胎神经系统发育的影响

目的探讨高温与辐射(γrays)联合对大鼠胚胎神经系统发育的影响。方法用高温联合γrays处理孕8～10d的大鼠,于18d处死。按致畸实验方法观察胚胎神经系统的发育。结果41℃组和42℃组神经管未闭、体节异常和脑形态异常与高温温度及持续时间呈正相关(P<0.01)。41℃高温持续4min和42℃高温与辐射联合作用,其胚胎神经系统异常发生率明显高于单独高温作用(P<0.01)。结论孕8～10d的大鼠暴露于高温与辐射明显影响胚胎神经系统发育     

高温与香烟联合对大鼠胚胎的毒性和致畸作用

目的探讨高温与香烟联合的胚胎毒性和致畸作用。方法用高温（40℃、41℃、42℃、43℃）、香烟烟雾水溶物及其联合处理孕10d的大鼠,孕20d后按致畸实验方法观察其胚胎的死亡率、吸收率和畸胎率。结果持续3min的高温（42℃）与香烟联合,胚胎致畸率达70％以上,与单独高温组、单独给烟组有明显差异（P＜0．01）。结论高温与香烟联合可加强胚胎的致畸作用,并与温度、香烟浓度和高温持续时间明显相关,持续高温与香烟联合有明显的胚胎毒性和致畸作用。     

近交系小鼠胚胎玻璃化冷冻技术研究

目的 对近交系小鼠体内受精的胚胎在三种不同处理温度(20℃、25℃、28℃)进行玻璃化冷冻保存。方法 不同温度下,胚胎在10％EG溶液中预处理5min,再投入EFS40玻璃化溶液中1min,平衡后冷冻。结果 与20℃和28℃相比,三个品系小鼠的胚胎都在25℃冷冻时获得最佳效果,解冻后培养观察发育率分别是87．77％、90．00％、87．18％。结论 该结果对近交系小鼠胚胎保存具有重要意义。     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离、扩增和抑制

目的 建立有效的胚胎成纤维细胞饲养层体系，用于分离和克隆胚胎干细胞研究。方法 取胎鼠组织制备小鼠原代成纤维细胞，观察不同分离和培养条件对细胞增殖的影响，以及丝裂霉素C对细胞增殖的抑制作用；细胞增殖的数量用MTT法测定。结果 分离小鼠胚胎原代成纤维细胞的最适胎龄是12．5—14．5d；20℃-25℃时，用0．25％胰蛋白酶消化组织的最佳时间为3min；可在培养3—6d后进行传代。细胞冻存于-80℃3-4个月，复苏后能正常传代。丝裂霉素C抑制胚胎成纤维细胞增殖的合适浓度为每毫升20μg/10^5细胞，作用2-4h，可维持小鼠原代胚胎成纤维细胞9d内不增殖也不死亡。结论 在合适条件下，小鼠原代胚胎成纤维细胞能顺利分离和培养，并能多次传代和冻存；经丝裂霉素C处理后增殖受抑制，可作为饲养层细胞用于胚胎干细胞的研究。     

As_2O_3对体外培养胚胎致畸作用时效关系研究

本实验采用ＷＥＣ技术（ｗｈｏｌｅｅｍｂｒｙｏｃｕｌｔｕｒｅ，全胚胎培养）探讨了Ａｓ２Ｏ３不同时间对大鼠胚胎的致畸作用，染毒剂量为３．０μｇ／ｍｌ。结果表明：作用６ｈ、１６ｈ对胚胎的生长发育和器官形态分化无明显影响；作用２６ｈ，反映胚胎生长发育和器官形态分化各指标伍均明显降低（Ｐ＜０．０５），４１．７％的胚胎出现畸形；作用４８ｈ，改变更加明显，畸胎率达１００％；畸形主要表现为前肢芽小或无、前后神经管未闭、无耳泡等。电镜观察可见ＶＹＳ（脏层卵黄囊）上皮细胞顶端微绒毛变短、排列不规则和数量减少、线粒体肿胀、溶酶体数量减少等改变，提示ＶＹＳ超级结构的改变可能与砷的致畸机制有关。     

牛胚胎干细胞克隆实验中添加物及消化液对其效率的影响分析

目的：探讨添加物和消化液对牛胚胎干细胞克隆效率的影响。方法：将牛鲜胚内细胞团进行次代获得胚胎干细胞（ES）后进行继代克隆后在牛ES细胞中分别添加胰岛素生长因子和消化液,观察胰岛素生长因子和消化液对牛胚胎干细胞克隆效率的影响。结果：胰岛素生长因子对牛胚胎干细胞克隆有促进作用,在分离牛ICM和ES细胞时不同消化液浓度对克隆效率影响不同。结论：进行牛ES细胞培养时,可利用一定的添加物促进ES细胞克隆,促进其繁殖,而对于分离ICM和ES细胞的消化液,须严控其浓度和作用时间。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

维生素A,更生霉素对胚胎高热致畸影响的实验研究

目的：探讨维生素Ａ和更生霉素与胚胎高热致畸的协同作用。方法：动物实验研究。结果：致畸剂量的维生素Ａ和低于致畸剂量的更生霉素分别与高热共同作用所致的畸胎，死胎，吸收胎发生率及胚胎发育迟缓程度均显著高于其对应的单因素作用组。结论：多种小剂量致畸原同时存在，共同作用时，可抑制胚胎的修复能力，从而发生协同作用，导致先天畸型的发生。     

维生素A、更生霉素对胚胎高热致畸影响的实验研究

目的：探讨维生素Ａ和更生霉素与胚胎高热致畸的协同作用。方法：动物实验研究。结果：致畸剂量的维生素Ａ 和低于致畸剂量的更生霉素分别与高热共同作用所致的畸胎、死胎、吸收胎发生率及胚胎发育迟缓程度均显著高于其对应的单因素作用组。结论：多种小剂量致畸原同时存在、共同作用时，可抑制胚胎的修复能力，从而发生协同作用，导致先天畸型的发生     

鼠胚实验在新建IVF胚胎培养室中的质控研究

目的:利用昆明系小白鼠行体、内外受精技术,对新建IVF胚胎培养室及技术员操作水平进行评估。方法:①手术获得昆明小白鼠雌雄配子,行体外受精;②手术获得昆明小白鼠体内受精胚(原核胚);培养观察两组鼠胚的受精率、卵裂率、囊胚率。结果:共进行24个周期的体外受精实验,取卵938枚,受精率89.87%、卵裂率96.32%、囊胚率95.39%;共进行24个周期的体内受精实验,取卵916枚(包括原核胚),受精率96.29%、卵裂率97.21%、囊胚率93.57%。结论:两组鼠胚实验结果表明,体内受精胚在体外发育更稳定,其对新建IVF胚胎培养室能够进行很好的质量控制;体外受精胚随小鼠批次及饲养环境等不同,在体外培养时其受精率、2-细胞率等会发生波动,但其对技术人员的操作水平能进行更好的评估;两者结果均能对新建胚胎培养室进行各项质控的监测。     

鲜胚移植与冻胚移植单胎妊娠孕妇妊娠结局和妊娠并发症比较

目的:对鲜胚移植与冻胚移植后单胎妊娠孕妇的妊娠结局及妊娠并发症进行比较,探讨不同胚胎移植方式的安全性和有效性。方法:回顾性队列研究分析2015年10月至2021年5月在中山大学附属第三医院生殖医学中心首次接受体外受精-胚胎移植且单胎妊娠的3161名孕妇的资料,其中鲜胚移植1009名（鲜胚移植组）、冻胚移植2152名（冻胚移植组）。比较两组的基线特征,并采用logistic回归分析两种移植方案对妊娠结局及妊娠并发症的影响。结果:与鲜胚移植组比较,冻胚移植组分娩孕周增加（P<0.01）,新生儿出生体重增加（P<0.01）,剖宫产率（65.1%与50.7%,AOR=1.791,95%CI:1.421～2.256,P<0.01）、大于胎龄儿（12.7%与9.4%,AOR=1.487,95%CI:1.072～2.064,P<0.05）和巨大儿（5.4%与3.2%,AOR=2.126,95%CI:1.262～3.582,P<0.01）的风险也有所增加。在妊娠并发症方面,冻胚移植组早期流产率（18.5%与16.2%,AOR=1.377,95%CI:1.099～1.725...     

影响冻融胚胎复苏率和移植成功率因素分析

目的 探讨影响冻融胚胎复苏率和移植成功率的相关因素.方法 回顾性分析573个冷冻胚胎移植(FET)周期的临床资料,按冷冻前胚胎质量、胚胎发育时间、解冻后胚胎复苏程度和冷冻方法分别进行分组,分析不同分类各组间的胚胎复苏情况和(或)临床妊娠率差异.结果 冷冻当天胚胎中有优质胚胎者的临床妊娠率显著高于无优质胚胎者(31.8% vs 20.0%)(P<0.05).受精第2天冷冻者与受精第3天冷冻者的胚胎复苏率和临床妊娠率差异无统计学意义(79.1% vs 82.9%和25.5% vs31.2%)(P>0.05).解冻后完全移植100%卵裂球完整者和混合移植者的临床妊娠率显著高于完全移植部分卵裂球损伤者(36.7% vs 24.1%和29.2% vs 24.1%)(P<0.05).冷冻方法改进后的胚胎复苏率和全胚复苏率显著高于冷冻方法改进前(82.0% vs 66.3%和50.0% vs 27.5%)(P<0.05).结论 胚胎质量与胚胎复苏率和临床妊娠率密切相关,冷冻胚胎解冻后全胚复苏率与临床妊娠率正相关,冷冻过程中的操作细节是胚胎实验室保证冻融胚胎复苏、移植成功的重要因素.     

草珊瑚种子胚后熟的温度条件和储藏方式研究

目的:探究不同温度条件下草珊瑚种胚发育状态及种胚后熟时期适宜的储藏方式。方法:将种子分别在5、10、15、20、25℃恒温培养箱及室内自然温度下湿沙储藏,每10 d统计种子胚率;储藏方式分别为去果肉湿沙储藏种子和带果肉湿沙储藏种子,储藏100 d后,测定种子发芽率和健康率。结果:胚后熟速度随着温度上升而加快,在20℃～25℃下,30 d左右即可完成胚后熟,室温下需要90 d左右;带果肉沙藏种子和去果肉沙藏种子的发芽率分别为93.00%和38.50%,健康率分别为95.50%、54.50%。结论:温度是影响草珊瑚种胚后熟的主要因素,在20℃～25℃下去果肉沙藏种子,胚后熟最快,种子健康度最高。     

小鼠胚胎冷冻研究

目的 探讨小鼠胚胎冷冻保存方法。方法 用EG40、ES40、EFS403种冷冻液进行小鼠胚胎快速冷冻，比较解冻后胚胎的发育率、孵化率、着床率。结果 EFS40冷冻液冷冻效果最好，与对照组相比无明显差异；ES40其次，EG40效果最差。结论 EFS40冷冻液适合用于小鼠胚胎冷冻保存。     

EDS-40玻璃化液冻存小鼠4细胞胚胎的研究

目的研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠4细胞胚胎的效果。方法①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。②随机将4细胞小鼠胚胎,在25℃室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存3个月后,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别87.8%、93.47%、80.77%;EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别:79.83%、86.53%、69.23%。结论 EDS-40玻璃化液冻贮小鼠4细胞胚胎的效果明显优于EFS-40,是一种理想的玻璃化液。     

激光辅助孵化对冻融双胚胎移植后胚胎存活及双胎子代发育的影响

目的 通过分析来自激光辅助孵化(LAH)的冻融D3卵裂期双胚胎移植后胚胎存活情况、双胎新生儿发育及周岁婴幼儿发育情况,评估LAH技术对胚胎存活及新生儿与婴幼儿发育的影响。方法 选取2017年1月至2019年12月浙江省人民医院收治的843例双胚胎移植不孕症患者,根据移植前是否需激光辅助孵化(LAH)分为LAH组381例和非LAH组462例。LAH组移植前采用LAH处理,非LAH组移植前无LAH处理步骤。比较两组妊娠结局,并选择双胚胎存活的156例患者(其中LAH组65例,非LAH组91例)双胎出生后代的生长发育指标,包括出生孕龄、体重、畸形情况及周岁时身高、体重等,分析LAH对胚胎及婴幼儿发育的长期影响。结果LAH组与非LAH组胚胎存活率比较,差异无统计学意义(P0.05);LAH组与非LAH组A胎出生体重、B胎出生体重、先天性畸形的比例比较,差异均无统计学意义(P0.05);两组双胎婴幼儿1周岁时均无身高、体重、认知、出牙、运动能力的异常,差异无统计学意义(P0.05)。结论 LAH的应用对冻融双胚胎移植后的胚胎存活率、双胎子代新生儿发育及1周岁婴幼儿发育影响均无明显影响,对于双胎新生儿畸形率的影响尚需更多病例的研究。