单克隆抗体在骨髓体外净化中应用

急性白血病是一种血液恶性肿瘤疾病,虽然近代联合化疗的进展能够使急淋和急非淋的完全缓解率分别达到80～90％和60～80％以上,但五年无病生存率只有10～20％左右,而骨髓移植可以通过预处理摧毁白血病组织并重建造血,是治疗急性白血病的一种有效措施,其中异基因型骨髓移植(Allo-BMT)可使50～70％的急性白血病患者获得长期无白血病生存,而自身骨髓移植(ABMT)也可达到30～45％的良好效果,且没有Allo-BMT的供髓困难问题以及移植物抗宿主病(GVHD)的发生。但是ABMT中存在着一个最主要的问题——回输自身骨髓中残存白血病细胞,这是导致ABMT后白血病复发率显著增高的重要因素,因为ABMT时至少需要10~(10)个有核细胞,其中白血病细胞约占0.1％,因此含有10~7个白血病细胞足以导致移植后白血病复发,这是近年来开展体外净化工作的理论根据。所谓体外净化(Purging invitro)就是指通过某种技术和方法在体外清除白血病患者缓解期的自体骨髓或外周血中残存的白血病干/祖细胞(L-CFU)而保留正常造血细胞,使病人接受大剂量放化疗的预处理后能重建造血及免疫功能。近年来有人将Allo-BMT中去除T细胞的体外过程也称为体外净化,本文不包括这一过程。体外净化方法很多,其中包括(1)物理学方法如速度或密度梯度离心法、温热法、冷融法以及近年开展的逆流淘洗离心法等;(2)化学制剂法,主要是环磷酰胺衍生物(4-HC,ASTA-Z-7557等)应用;(3)免疫学方法,主要是单克隆抗体(McAb)及免疫毒素的应用;(4)生物学方法如LAK细胞、干扰素、肿瘤坏死因子以及胎肝低分子肿瘤抑制物的应用。本文就单克隆抗体在体外净化骨髓残存白血病细胞的近期有关文献综合报道如下:     

应用单克隆抗体净化白血病细胞后自体骨髓移植四例报告(摘要)

骨髓移植治疗白血病是一种有效的治疗措施,异基因骨髓移植(ALLO—BMT)存在供髓来源困难,又受年龄限制。自体骨髓移植(ABMT)不存在髓源困难,基本上不受年龄限制,但复发率较高。为减少ABMT后白血病复发,目前有许多学者正在探索企图净化残留在骨髓中的白血病细胞后进行ABMT。此种骨髓净化后的ABMT,在我国独生子女日益增多的情况下,应成为我们研究的一个重要课题。体外净化骨髓中残留的白血病细胞,免疫学方法特异性最强,是一种较理想的方法。1988年5月～1989年7月,我们对4例普通型急性淋巴细胞白血病(CALL)患者缓解后,采用单克隆抗体55(McAb55)在体外净化骨髓中残     

补体C1q及抗C1q抗体在狼疮肾炎发病机制中的作用

目的探讨狼疮肾炎患者血清补体C1q及抗C1q自身抗体(C1qAb)水平与狼疮肾炎患者肾脏病理的相关性,以及补体C1q及C1qAb在狼疮肾炎发病机制中的可能作用。方法应用单向免疫扩散法检测狼疮肾炎患者40例及非狼疮肾炎患者40例血清C1q,应用酶联免疫吸附法检测血清C1qAb。应用肾活体组织检查和原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记法检测肾脏中凋亡细胞及凋亡小体的沉积。结果血清补体C1q水平,狼疮肾炎患者为(130±50)mg/L,非狼疮肾炎患者为(170±70)mg/L;血清C1qAb水平(P/N值),狼疮肾炎患者为7±4,非狼疮肾炎患者为4±3。狼疮肾炎患者血清C1qAb与补体C1q之间呈显著负相关(PearsonR=-0.567,P<0.01)。血清C1q水平的降低及C1qAb水平的升高与肾脏中补体C1q、IgG及C3的沉积显著正相关,与肾脏组织中有明显凋亡细胞及凋亡小体沉积显著正相关。结论血清C1qAb及C1q的异常可能参与了狼疮肾炎的发病,其可能机制为,促进补体C1q介导的免疫复合物在肾脏组织中沉积;促进凋亡细胞及凋亡小体在肾脏组织中沉积。     

IL-2与IFN-α联合激活的白血病缓解期骨髓对白血病细胞的净化作用

目的：体外研究白细胞介素Ⅱ(IL-2)和α-干扰素(IFN-α)联合激活对白血病缓解期骨髓自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性的影响，以及对白血病细胞(K562细胞)的净化作用，并观察其对正常造血的影响。方法：标准4h^51Cr释放实验测定激活的白血病缓解期骨髓的细胞毒作用；集落培养法和逆转录多聚酶链反应检测激活的白血病缓解期骨髓对K562细胞的净化作用。结果：IL-2和INF-α单用虽均能增强白血病缓解期骨髓的NK活性和诱导LAK细胞的产生，但两者联合激活的白血病缓解期骨髓的NK和LAK活性，明显优于IL-2和IFN-α的单用(P＜0．05)。在体外净化实验中两种细胞因子均能激活白血病缓解期骨髓细胞对K562细胞的净化作用，但两种联合作用最强，且bcr／abl融合基因检测为两者联合组33．33％(4／12)，Rt-pcR法，而IL-2作用次之为66．67％(8／12)，最后是IFN-α为91．67％(11／12)。两种细胞因子中以IFN-α单用对CFU-GM的抑制有一定影响(P＜0．01)，而IL-2和两者联合对激活骨髓的CFU-GM无明显影响。结论：IL-2能激活白血病缓解期骨髓的NK细胞的活性和诱导LAK细胞的产生，IFN-α能增强IL-2激活白血病缓解期骨髓对白血病细胞的净化作用。     

自体骨髓移植治疗小儿急性淋巴细胞白血病

我院小儿科于1988年7月年3月为两例小儿急性淋巴细胞性白血病（ALL）进行骨髓移植（ABMT）治疗，其中1例应用抗CALLA型McAB加兔补体体外净化骨髓现报告如下 ：1诊断，临床及预处理方案，见附表 2.骨髓体外净化及输注使用抗CALLA型McAb_(55)加兔补体两次处理法净化骨髓。例1采集骨髓830ml,有核细胞总数为31.05×10~8,相当于病儿体重0.86×10~8/kg。净化处理后细胞回收率18.6％,置22℃～25℃室温保存52h后回输,因输注时悬液中细胞结成大块团絮状及输注反应严重,故细胞悬液再用生理盐水洗涤两次,通过四号针头形成单细胞悬液再静脉回输,未再反应,输入有核细胞数降到0.037×10~8/kg体重。因输有核细胞数量太少,     

人补体杀伤小鼠N9小胶质细胞及亚溶破模型的建立

目的: 探讨正常人血清(normal human serum,NHS)补体杀伤小鼠N9小胶质细胞的机制,建立人补体攻膜复合物(sublytic membrane attack complex,sMAC)N9细胞亚溶破刺激模型.方法: 用阻断补体活化途径的方法探讨 N9细胞活化人补体系统的机制;采用微量补体反应性溶破法,以酵母多糖 (Zymosan,Z)活化急性期病人血清制备补体优球蛋白C56,EDTA-NHS作为C7-C9的来源,组装N9细胞sMAC亚溶破模型;CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积;脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力.结果: 未致敏N9细胞可通过旁路途径直接活化人血清补体系统;当C56稀释度在1∶ 500 以上,NHS(含1 mmol/L EDTA)稀释度为 1∶ 20时,膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)活性逐渐降低,细胞溶破减少,确定 C56 1∶ 500,NHS 1∶ 20为N9细胞亚溶破补体量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积于N9细胞表面;亚溶破剂量MAC刺激N9细胞后与对照组相比细胞脱落增加(P<0.05),而细胞活力正常.结论: 探讨了小鼠N9细胞活化人补体的机制;通过建立N9细胞人补体sMAC亚溶破模型,证实sMAC刺激N9细胞后可降低细胞黏附力但不影响细胞活力;为sMAC对中枢神经系统小胶质细胞亚溶破刺激效应的深入研究提供了理论与实验基础.     

应用人类低分子天然抑瘤物净化白血病细胞后自体骨髓移植二例报告

异基因骨髓移植(ALLO—BMT)已广泛用于急性白血病的治疗。由于供髓者缺乏,使部分病人不能进行ALLO—BMT。利用患者自身缓解期的骨髓作自体骨髓移植(ABMT)是另一可行的治疗途径,但其复发率较高。近年来,许多学者为减少白血病的复发,正在探索净化残留在骨髓中的白血病细胞,然后行自体骨髓移植,但目前净化方法尚不成熟。吴祖泽等人研究结果表明,在人胎儿肝脏中存在着一类天然的,低分子量的,对白血病细胞有一定程度选择性抑制作用的抑瘤物,利用这种低分子抑瘸物可在体内净化白血病细胞。我们以Dexter等的骨髓细胞体外液体培养体系为基础,以低分子天然抑瘤物为净化剂,对2例急性非淋巴细胞白血病(M_(2a)、M_(4c)),首次完全缓解期(CR_1)病人的     

胸腺肽与抗肿瘤中药组合疗法对肿瘤患者外周血免疫学指标的影响

目的 观察胸腺肽与抗肿瘤中药组合方案治疗对肿瘤患者免疫功能影响.方法 分析54例接受胸腺肽(80 ～ 120 mg/d静脉点滴,连用5d/月)与抗肿瘤中药(苦参、华蟾素等)组合方案治疗肿瘤患者,检测治疗前后患者外周血淋巴细胞计数(总T细胞、T细胞/诱导细胞、CD4/CD8、B细胞、NK细胞),免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM)和补体(总补体活性、C3、C4)水平,并用统计学方法进行分析治疗前后变化.结果 统计学分析显示经不同时间治疗后,患者外周血淋巴细胞(总T细胞、T细胞/诱导细胞、CD4/CD8、B细胞、NK细胞),免疫球蛋白( IgG、IgA)和补体(C3、C4)显著高于治疗前(P＜0.05),IgM和总补体活性水平前后差别无显著性差异(P＞0.05).结论 胸腺肽与抗肿瘤中药(苦参针、华蟾素针等)组合方案治疗能维持或提高肿瘤患者外周血淋巴细胞(总T细胞、T细胞/诱导细胞、CD4/CD8、B细胞、NK细胞),免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM)和补体(总补体活性、C3、C4)水平,联合用药在提高和维持患者免疫功能上起着积极作用.     

白血病细胞相关抑制活性的测定及其影响因素的探讨

本文用体外软琼脂培养法检测白血病细胞条件培养液(LCCM)对正常骨髓粒单系祖细胞(CFU-GM)生长的作用,发现白血病患者LCCM中有白血病细胞相关抑制活性(LCIA)。并发现LCIA与细胞数量、孵育时间及加入浓度等因素有关,低温保存,加热56°C30min和90°C15min均不影响其抑制作用。     

TNFα诱导人肾小管细胞C3产物上调及雷公藤内酯醇对其作用的影响

近年来，随着分子生物学技术的发展研究发现，除肝脏和巨噬细胞是补体合成的主要来源外，肾脏固有细胞也能表达各种补体成分。并且，随着肾脏病变程度的加重，肾局部补体(特别是C3、C4)mRNA表达和蛋白合成也显著增加，其中以肾小管细胞表现的最为明显，提示肾小管细胞具有免疫炎性活性。肾脏移植免疫技术的应用也发现，移植肾肾功能的下降和排异反应的发生与供肾局部，尤其是肾小管细胞C3的过度产生密切相关。因此，肾局部特别是肾小管细胞在致病因素(如致炎细胞因子)诱导下过度生成并激活的补体在肾损伤中的重要作用已受到了重视，由此补体抑制剂的产生和应用也越来越引起关注。     

microRNA-1271靶向调控白血病细胞CYLD蛋白的表达

目的探讨人白血病细胞中微小RNA(microRNA)-1271对CYLD蛋白表达的调控作用。方法 qRT-PCR检测microRNA-1271在不同的人白血病细胞系、临床初诊未治的几种类型原代白血病细胞、正常人外周血单个核细胞中的表达差异,利用 Targetscan 信息学预测软件预测 microRNA-1271靶向CYLD基因,构建携带靶基因野生型及突变型3’非翻译区(3’UTR)(缺失了整段预测的microRNA-1271结合序列)的双荧光素酶报告基因质粒,采用脂质体 Lipo-fectamine 3000包裹双荧光素酶重组质粒及 microRNA-1271模拟物(mimic)或阴性对照,共转染HEK293A细胞,应用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定荧光素酶活性。 FAM标记的microRNA-1271抑制物和阴性对照分别核转染至人白血病细胞系K562细胞,Western blot法检测CYLD蛋白水平的表达变化。结果 microRNA-1271在不同人白血病细胞系以及临床初诊未治的原代白血病细胞中的表达均明显高于正常人外周血单个核细胞,双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是 microRNA-1271的潜在靶基因;K562细胞中转染microRNA-1271抑制物下调 microRNA-1271后, Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平明显上调。结论人白血病细胞中microRNA-1271的表达上调,下调microRNA-1271后可以促进靶基因CYLD蛋白的表达, microRNA-1271有可能成为白血病治疗的新靶点。     

补体攻膜复合物与肾小球疾病

MAC是补体活化后产生的效应单位 ,补体激活可通过抑制免疫复合物网络形成 ,产生过敏毒素 ,协助免疫复合物从肾小球毛细血管内皮下转移至上皮下 ,它可直接或间接作用肾小球细胞而致损伤 ,MAC在肾小球疾病中的作用一直引起众学者的关注。本文就MAC形成、作用机制与肾小球细胞损伤的关系进行综述。1　MAC的形成抗原与抗体形成免疫复合物可激活补体经典途径 ,内毒素、G-菌、IgA可激活旁路途径 ,两条补体激活途径形成C5转化酶 C4b2a3b ,C3bBb3b ,然后裂解C5 ,并与C6、C7、C8、C9形成末端补体复合物 (terminalcomplementcomplex ,TCC)…     

用抗小鼠T细胞单克隆抗体和补体处理供体淋巴细胞预防移植物抗宿主反应

用抗小鼠T细胞单克隆抗体C⑩(McAb C⑩)和补体在体外预先处理供鼠淋巴细胞后再转输给异品系新生小鼠或相应F_1成年小鼠,能明显抑制或预防受鼠发生移植物抗宿主反应(GVHR),表现为脾指数和自发性~3H-dT掺入量接近阴性对照组。用McAb C⑩和补体预先处理亲代小鼠淋巴结细胞后与F_1小鼠细胞作混合淋巴细胞反应(MLR)时也出现明显抑制。体内外实验结果提示,移植前用抗全T细胞McAb和补体清除移植物中的T细胞能有效地预防GVHR。     

Ly49C基因SiRNA对小鼠NK细胞抗白血病活性的影响

目的:观察SiRNA转染小鼠KIR(Ly49C)基因对NK细胞抗白血病活性的影响。方法:应用免疫磁珠分选法纯化C57BL/6小鼠脾细胞中的NK细胞,体外化学合成以Ly49C基因为靶标的SiRNA,联合用脂质体转染小鼠NK细胞,以未处理组为对照,流式细胞仪检测在SiRNA转染后淋巴细胞表面Ly49C分子的表达率。以空转染和未转染的NK细胞作对照,LDH法检测转染后NK细胞对红白血病细胞FBL-3的的杀伤活性。结果:免疫磁珠分选后NK细胞纯度可达90%以上。Ly49C基因SiRNA转染小鼠NK细胞48 h后Ly49C分子表达率为(30.28±1.41)%,未转染对照组为(58.45±3.32)%。相同效靶比时,转染组NK细胞杀伤活性较未转染组显著提高,二者之间差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:转染Ly49C SiRNA的C57 BL/6小鼠NK细胞对FBL-3细胞的杀伤活性明显增强,为提高异基因骨髓移植后移植物抗白血病作用提供了实验依据。     

实验性脑出血大鼠血肿周围补体C3表达的动态观察

目的 探讨补体激活在脑出血后脑水肿形成中的作用。方法 雄性SD大鼠48只，随机分为假手术组和脑出血组。立体定向注血制作脑出血动物模型，在手术后6h、12h、24h、48h、72h、7d分别处死动物，干湿重法测量脑含水量，免疫组化法测量血肿周围补体C3阳性细胞数，观察血肿周围炎细胞浸润情况。结果 血肿周围补体C3表达于6h开始增多，72h达到高峰，7d仍高于假手术组，血肿周围炎细胞浸润和脑水肿也于出血后48—72h达到高峰，提示补体C3表达与炎细胞浸润及脑水肿有关。结论 补体C3参与了脑出血后脑水肿的形成。     

试析血浆净化治疗在风湿免疫性疾病中的应用

目的研究分析将血浆净化应用于风湿免疫性疾病的治疗中的效果。方法随机选取焦作市第二人民医院收治的风湿免疫性疾病患者62例,给予所有患者药物治疗,在此基础上,根据患者不同的病情选择使用双重过滤血浆净化技术(DEPP)或血浆吸附技术(PA)的血浆净化方法,观察患者治疗前后血清免疫球蛋白、红细胞沉降率(ESR)、自身抗体、C反应蛋白(CRP)、补体(C3、C4)等指标的变化情况与临床反应。结果治疗后患者各项指标均较治疗前显著改善,差异有统计学意义(P<0.05),患者发生的不良反应较少。结论血浆净化治疗风湿免疫性疾病疗效显著,安全性高,应在临床治疗中推广应用。     

癌光啉体外净化骨髓中残留白血病变后行自体骨髓移植治疗白血病

目的 :为减少白血病患者自体骨髓移植后白血病复发率和提高长期无病存活率。方法 :采用缓解期急性非淋巴细胞白血病患者的骨髓细胞在体外经处理后用癌光啉 (浓度为 10 μg/ ml)加光照净化 ,待患者完成预处理后回输给自身。结果 :10例急性髓细胞白血病患者接受了本净化方法后移植治疗。净化后输入有核细胞中位数1.3 0 ( 0 .7～ 2 .4 5 )× 10 8/ kg,CD3 4 细胞中位数 2 .3 9( 0 .74～ 4 .0 6)× 10 6/ kg,CFU- GM中位数 1.4 4( 0 .3 2～4 .65 )× 10 4/ kg。 10例中 9例造血功能重建 ,WBC升到 >1.0× 10 9/ L中位数时间 2 0 ( 15～ 4 3 ) d,>2 .0×10 9/ L 中位数时间 3 0 ( 2 1～ 5 5 ) d,BPC>5 0× 10 9/ L 中位数时间 4 6( 2 5～ 62 ) d。经中位 2 6个 ( 2 0～ 64 )月随访 ,有 6例仍无病存活 ;3例复发 ,其中 2例复发后失去随访 ;1例嗜碱细胞性白血病经化疗再次取得缓解 ,至今 CR2后又无复发存活 14个月 ;1例死于与移植相关并发症。结论 :初步结果表明 ,用癌光啉加光照净化自体骨髓中残留白血病细胞后行自体骨髓移植治疗白血病是一种安全而有潜力的方法     

补体对红细胞C3b受体花环形成的影响

目的:探讨补体不同来源、不同浓度,是否溶血以及补体活化指示细胞时间等因素对红细胞C3b受体花环形成的影响.方法:采用改良的红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)实验.结果:最佳补体条件为不溶血,浓度为1:2的豚鼠(3只以上)混合血清,补体活化指示细胞时间为15 min.结论:规范红细胞C3b受体花环形成的补体条件,有利于减小实验误差,提高实验的重复性及可比性.     

主题索引

〔按汉语拼音字母顺序排列,卷(期):页年〕AAPUD细胞初生大白鼠肺的内分泌样细胞超微结构的观 察(吴坷等)12(3):200,1981阿米巴病肠阿米巴病立肠活检的组织病理研究(杨光华) 13(4):390,1982 应用细胞光度法分析棉酚对人精子DNA含公的影响 (吴坷等)11(2):127,1980 酷酸棉酚对人体周田血液琳巴细胞染色体彤响的观察 (吴良芳等)11(3):190,1980变形链球菌变形链球菌粘附现象的显微镜观察(李光窗 等)14(1):57,1983补体成分3正常人血清补体c3分离提纯与兔抗人C。血清 的制备(张廷华等)11(3):211,1980白血病慢性粒细胞性白血病(慢粒)染色体的研…     

利用复合PCR扩增荧光自动STR分型方法认定犯罪嫌疑人1例报告

目的 探讨高温联用鬼臼噻吩甙(Vm-26)诱导白血病细胞的凋亡及净化。方法 13例急性白血病骨髓、15例正常骨髓和10例次HL-60细胞株用形态学、DNA凝胶电泳、流式细胞仪及半固体集落培养技术,观察42 ℃ 60 min高温或联用鬼臼噻吩甙(Vm-26)诱导HL-60细胞的凋亡其及体外净化白血病细胞的效果。结果 ①HL-60细胞经42 ℃ 60 min、42 ℃ 60 min+8.5 μmin/L Vm-26处理后48 h流式细胞检测的凋亡细胞(sub-G