同型半胱氨酸经PERK磷酸化激活CHOP-ERO1α通路介导心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对心肌的损伤作用及其可能机制.方法 选用H9C2心肌细胞,分别用不同浓度Hcy、4-苯基丁酸(4-PBA)干预细胞.将H9C2细胞分为对照组、H400组、H400P2组,对照组使用普通培养基,H400组加入400μmol/L的Hcy,H400P2组在H400组基础上加入2 mmol/L的4-PBA.CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色评估细胞凋亡,免疫细胞化学检测内质网氧化还原酶1α(ERO1α)表达,Western blot检测蛋白表达差异.结果 Hcy对H9C2心肌细胞损伤呈浓度依赖性(F=2 039.958,P＜0.01).与对照组比较,H400组细胞凋亡分数及胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PEPK(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、ERO1α表达均增加(P＜0.01);H400P2组细胞凋亡分数及PERK、p-PERK、CHOP、ERO1α表达均有所下降,与H400组比较均差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Hcy通过内质网应激机制介导心肌细胞凋亡.     

Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

红景天苷抑制内质网应激和细胞凋亡减轻心脏缺血再灌注损伤

目的 观察红景天苷(Sal)在大鼠离体心脏缺血再灌注(IR)中的作用并探讨其对内质网应激(ERS)和细胞凋亡的调控机制。方法 制备大鼠离体心脏缺血再灌注模型，缺血45 min,再灌注2 h,随机分为4组(n=10):对照(Control)组、Sal处理(Sal)组、缺血再灌注(IR)组及Sal处理缺血再灌注(IR+Sal)组。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积，ELISA法检测灌注液中乳酸脱氢酶(LDH)活性，测量左室内收缩峰压(LVSP)和舒张末压(LVEDP),Western blot检测B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)和转录活化因子6(ATF6)的表达，TUNEL染色观察细胞凋亡。结果 Sal组和Control组各指标之间比较差异均无统计学意义；与Control组比较，IR组心肌梗死面积和灌注液中LDH活性增加，LVSP降低，LVEDP增加，Bax表达增加，Bcl-2表达减少，TUNEL阳性细胞数增加，ERS相关蛋白PERK、CHOP和ATF6的表达增加；与IR...     

强骨抗萎膏通过调控MFN2及抑制内质网应激改善失重状态下大鼠骨丢失

目的 观察强骨抗萎膏对尾吊大鼠骨细胞凋亡和内质网应激的影响,探讨强骨抗萎膏防治模拟失重状态下骨丢失的机制。方法 60只SD大鼠分为对照组、模拟失重组、强骨抗萎膏组、阿仑膦酸钠组,骨疏康颗粒组,每组12只。采用尾部悬吊模拟失重状态,尾吊28 d;对照组和模拟失重组给予每日等体积生理盐水灌胃,其它3组复制模型,分别每日给予中药强骨抗萎膏2.4 g/kg,阿仑膦酸钠0.007 g/kg,骨疏康颗粒0.26 g/kg灌胃。持续给药4周后处死大鼠,TUNEL法检测骨细胞凋亡情况;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和线粒体融合蛋白2(MFN2)表达,RT-PCR和Western blot检测骨组织中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)及C/EBP同源蛋白(CHOP)的基因和蛋白表达。结果 TUNEL结果显示模拟失重组骨细胞凋亡较对照组增加,强骨抗萎膏可抑制骨细胞凋亡。与对照组大鼠比较,模拟失重组PERK基因表达量明显增高(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组PERK基因表达量下降(P<0.05);与对照组比较,模拟失重组的GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量明显增高(P<0.05),MFN2蛋白表达降低(P<0.05),强骨抗萎膏组较模拟失重组GRP78、PERK、CHOP和ATF6蛋白含量均明显降低(P<0.05),MFN2表达量升高。结论 强骨抗萎膏可以改善模拟失重大鼠骨细胞凋亡,通过抑制骨组织内质网应激相关因子GRP78、PERK、ATF6 和CHOP,上调MFN2表达,从而改善失重条件下的骨丢失。     

冬凌草甲素对小鼠溃疡性结肠炎内质网应激的作用研究

目的 探讨冬凌草甲素对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的结肠上皮组织内质网应激(ERS)的影响.方法 利用葡聚糖硫酸钠(DSS)建立小鼠UC模型组,设置冬凌草甲素及柳氮磺胺吡啶干预组;测定疾病活动指数(DAI),对结肠组织速行病理形态学评分(HPS),RT-qPCR检测结肠上皮组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子EBP同源蛋白(CHOP)、激活性转录因子6(ATF6)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)及肌醇酶1α (IRE1α)mRNA表达变化.结果 与健康小鼠相比,模型组结肠上皮组织中TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、ATF6、CHOP、PERK及IRE1α mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,冬凌草甲素干预组DAI与HPS均明显下降(P＜0.05,P＜0.01),疗效与柳氮磺胺吡啶干预组相当(P＞0.05,P＜0.01),除IER1α mRNA外,TNF-α、IL-6、COX-2、GRP78、CHOP、ATF6及PERK mRNA表达水平均明显下调(P＜0.05,P＜0.01).结论 冬凌草甲素能减轻DSS诱导小鼠结肠炎症,其机制可能与其调节结肠上皮组织ERS有关.     

敲低MANF对利福平诱导HepG2细胞损伤的影响及机制

目的 探讨敲低中脑星型胶质细胞源性神经生长因子(MANF)对利福平(RFP)诱导HepG2细胞损伤的影响及机制.方法 慢病毒转染技术构建MANF敲低稳转细胞株(MANF Y25)及其对照细胞株(MANF Y07).实验分为4组:MANF Y07+ DMSO组、MANF Y07+ RFP组、MANF Y25+ DMSO组、MANF Y25+RFP组.给予HepG2细胞100μmol/L RFP 24 h后,Western blot和qRT-PCR检测各组细胞MANF及未折叠蛋白反应(UPR)相关基因葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、蛋白酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译启动因子2α(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、CCAAT/增强子结合蛋白(CHOP)、Tribbles同源蛋白3(TRIB3)、肌醇需求激酶1(IRE1)、剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1-S)、非剪接型X-盒结合蛋白1(XBP1-U)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及基因表达水平;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测各组细胞凋亡率;CCK-8法检测各组细胞增殖变化;试剂盒检测各组细胞培养上清液中细胞损伤标志物谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)相对含量变化.结果 在蛋白水平,RFP激活MANF、GRP78、p-eIF2α、ATF4、ATF6的蛋白表达;在基因水平,RFP诱导HepG2细胞MANF、GRP78、PERK、eIF2α、ATF4、CHOP、TRIB3的基因表达,并且MANF敲低后GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、ATF6蛋白表达水平及上述UPR相关基因的基因表达水平进一步上调(P＜0.05),MANF敲低后细胞凋亡率升高(P＜0.01),细胞增殖能力降低(P＜0.01),细胞培养上清液中ALT、AST、AKP、TBIL、IBIL水平升高(P＜0.05),说明细胞损伤加重.结论 RFP可激活UPR,敲低MANF后这种效应进一步加强,同时细胞损伤加重,表明MANF可能通过调节URP而在RFP诱导HepG2细胞损伤中发挥保护作用.     

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的 研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法 构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白的表达。结果 选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降（P<0.01）,凋亡率明显上升（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调（P<0.01）。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升（P<0.01）,凋亡率明显下降（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调（P<0.01）。结论 滋阴明目方含药血清可以...     

内质网应激PERK-eIF2α-ATF4信号通路在延缓APP/PS1小鼠移植瘤生长中的作用

探讨内质网应激（ERS）及内质网自噬对移植黑色素瘤模型淀粉样蛋白前体蛋白（APP）/早老素1（PS1）小鼠移植瘤生长的抑制作用,并阐明蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）-真核翻译起始因子2α（eIF2α）-活化转录因子4（ATF4）通路在其抑制作用中的可能机制。     

ERS信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用研究

目的 探讨内质网应激(ERS)信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用.方法 选择无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠24只,实验分为对照组、模型组、ERS抑制剂组,每组8只.除对照组外,其余两组卵清清蛋白(OVA)+氢氧化铝制备哮喘模型,从第21天起ERS抑制剂组每次激发前30 min灌胃0.35 mg/g 4-苯基丁酸(4-PBA),对照组和模型组灌胃等体积生理盐水.对肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织形态情况;马松染色检测肺组织胶原沉积情况;过碘酸雪夫(PAS)染色检测肺组织杯状上皮细胞增生情况;Western blot检测肺组织中肌醇需求酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、ERS相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况.结果 相较于对照组,模型组肺血管周围聚集大量炎症细胞、肺泡间隔增厚、结构破坏、平滑肌增厚,胶原纤维沉积明显增加,杯状细胞数量明显增多;ERS抑制剂组相较于模型组炎症细胞数量减少、肺泡间隔有所增加,但结构破坏仍严重,胶原纤维沉积、杯状细胞数量均降低.与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均升高(P<0.05);与模型组比较,ERS抑制剂组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均降低(P<0.05).结论 抑制ERS信号通路可以抑制炎性反应和气道重塑,缓解气道黏液高分泌情况,实现对哮喘小鼠的保护.     

ERS信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用研究

目的 探讨内质网应激(ERS)信号通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌及气道重塑中的作用.方法 选择无特定病原体(SPF)级雌性C57BL/6小鼠24只,实验分为对照组、模型组、ERS抑制剂组,每组8只.除对照组外,其余两组卵清清蛋白(OVA)+氢氧化铝制备哮喘模型,从第21天起ERS抑制剂组每次激发前30 min灌胃0.35 mg/g 4-苯基丁酸(4-PBA),对照组和模型组灌胃等体积生理盐水.对肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织形态情况;马松染色检测肺组织胶原沉积情况;过碘酸雪夫(PAS)染色检测肺组织杯状上皮细胞增生情况;Western blot检测肺组织中肌醇需求酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、ERS相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达情况.结果 相较于对照组,模型组肺血管周围聚集大量炎症细胞、肺泡间隔增厚、结构破坏、平滑肌增厚,胶原纤维沉积明显增加,杯状细胞数量明显增多;ERS抑制剂组相较于模型组炎症细胞数量减少、肺泡间隔有所增加,但结构破坏仍严重,胶原纤维沉积、杯状细胞数量均降低.与对照组比较,模型组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均升高(P<0.05);与模型组比较,ERS抑制剂组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量,IL-6、TNF-α水平,肺组织中IRE1α、ATF6、CHOP、GRP78水平均降低(P<0.05).结论 抑制ERS信号通路可以抑制炎性反应和气道重塑,缓解气道黏液高分泌情况,实现对哮喘小鼠的保护.     

槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激和细胞凋亡

目的 探讨槲皮素改善ADMA引起脐静脉内皮细胞凋亡的可能机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,应用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,应用Western blot法检测内质网应激蛋白PERK磷酸化水平及IRE1的蛋白表达量,用RT-PCR检测ATF4及CHOP mRNA表达量。结果 ADMA诱导脐静脉内皮细胞凋亡,槲皮素可以抑制ADMA引起的PERK磷酸化及IRE1蛋白表达,并可以减少ATF4及CHOP mRNA量,继而改善ADMA引起的细胞凋亡。结论 槲皮素抑制ADMA引起的脐静脉内皮细胞内质网应激继而抑制细胞凋亡。     

重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡

目的: 观察新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法: 将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78 (glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate, 4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4 PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： 感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4 PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rL-RVG组明显降低(P<0.05)。结论： rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。     

丙泊酚通过减轻炎症反应和内质网应激缓解烧伤后急性肾损伤

摘要:目的 探讨丙泊酚(propofol)是否通过减轻炎症反应和内质网应激缓解大鼠烧伤后急性肾损伤(acutekidney injury,AKI)。方法 采用热损伤法构建大鼠烧伤后 AKI模型,实验分为5组:假烧伤组、AKI组、丙泊酚组、4-PBA(内 质网应激抑制剂)组和4-PBA+丙泊酚组。苏木精-伊红(HE)染色观察造模后48h肾脏组织形态;生化检测仪检测血清 中BUN 和Cr含量;ELISA 法检测血清中炎症因子 TNF-α、IL-1β和IL-6水平;Westernblot法检测肾脏组织中内质网应 激相关蛋白 PERK、GRP78、CHOP和 Caspase-12的表达。结果 与假烧伤组相比,AKI组大鼠肾脏组织呈现明显的组 织病理学损伤,血清中 BUN、Cr、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(均 P<0.05),肾脏组织中 PERK、GRP78、CHOP 和 Caspase-12蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与 AKI组相比,丙泊酚组和4-PBA 组大鼠肾脏组织病理学损伤明显 减轻,血清中BUN、Cr、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低(均P<0.05),肾脏组织中PERK、GRP78、CHOP和Caspase12蛋白表达量显著降低(均P<0.05)。结论 丙泊酚可通过降低炎症因子水平和内质网应激相关蛋白的表达来缓解烧 伤后急性肾损伤。     

左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响

目的?探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响及其作用机制。方法?将巨噬细胞J774A.1随机分为正常组、模型组、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组5个复孔。除正常组外其余各组以ox-LDL（100?mg/L）处理构建巨噬细胞泡沫化模型。正常组和模型组正常培养,其余各组分别用10%相应含药血浆培养24?h。CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞抑制率;油红O染色检测细胞内脂质蓄积水平;Western blot检测双链RNA样内质网激酶（PEPK）、活化转录因子4（ATF4）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）及半胱氨酸蛋白酶蛋白-12（Caspase-12）的表达水平。结果?与正常组比较,模型组细胞抑制率增高,在ox-LDL浓度为100?mg/L时细胞抑制率为（50.06±0.09）%,有明显的脂质颗粒蓄积（P<0.01）。与模型组比较,各药物干预组细胞抑制率降低,可有效阻断ox-LDL的摄入及脂质堆积,其中左归降糖舒心方含药血浆组优于西药联合含药血浆组,与TUDCA组作用效应相当。ox-LDL可诱导细胞内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP与Caspase-12表达上调。左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制100?mg/L ox-LDL所致的p-PERK、p-eIF2α、ATF4的上调,降低内质网相关凋亡蛋白CHOP与Caspase-12的表达（P<0.01）,和TUDCA组作用相当(P＞0.05),其效果较西药联合含药血浆组明显（P<0.01）。结论?左归降糖舒心方含药血浆能有效改善ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化、细胞凋亡及内质网应激状态,其作用机制可能与调控内质网应激信号通路PERK/eIF2α/ATF4通路,降低细胞内CHOP与Caspase-12表达有关。      

脑泰方含药血清对缺氧缺糖/复氧PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨脑泰方含药血清通过内质网应激相关通路调控缺氧缺糖/复氧PC12细胞凋亡,从而阐明脑泰方对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 将PC12细胞分为正常组（常规培养）、模型组（OGD/R）、抑制剂（4-PBA）组及脑泰方低浓度（10%）、中浓度（15%）、高浓度（20%）组。CCK8法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）试剂盒检测LDH活性;Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化;Tunel染色检测细胞凋亡率;免疫荧光法和Western blot检测细胞Beclin-1、LC3、GRP78、CHOP、PERK蛋白表达情况。结果 模型组LDH活性增加,细胞凋亡率增加,细胞存活率下降（P<0.01）,GRP78、PERK、CHOP、LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白表达明显增加,LC3Ⅰ蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,抑制剂（4-PBA）组、脑泰方中浓度组、脑泰方高浓度组LDH活性降低,细胞凋亡率减少,细胞存活率明显增加（P<0.05,P<0.01）,GRP78、PERK、C...     

蟾毒灵通过激活内质网应激通路诱导HCT116细胞凋亡

目的 研究蟾毒灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖及凋亡的影响,并探讨内质网应激(ERS)在此过程中的作用。方法 采用CCK-8法测定蟾毒灵对HCT116细胞增殖活性的影响;不同浓度蟾毒灵作用HCT116细胞48 h后,采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况,用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况,同时用Western blot法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况;将HCT116细胞分为对照组、蟾毒灵组和联合组(蟾毒灵+4-苯基丁酸),Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果 CCK-8法检测结果显示蟾毒灵对HCT116细胞的增殖活性有抑制作用;细胞凋亡实验表明蟾毒灵能引起HCT116细胞的凋亡;Western blot实验结果显示,蟾毒灵能够上调促凋亡蛋白Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,同时也能诱导ERS并激活P...     

槲皮素通过内质网应激诱导宫颈癌细胞凋亡的机制

目的：分析槲皮素通过内质网应激对宫颈癌细胞凋亡的诱导情况,探讨其可能的作用机制。方法：将宫颈癌C33A细胞分为对照组和实验组,对照组（DMEM培养基+0.1%DMSO）、实验组（DMEM培养基+12.5、25.0、50.0、100μmol/L槲皮素）分别处理24h和48h。利用CCK8实验检测C33A细胞活力的变化,利用流式细胞技术检测细胞周期的变化,以实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测内质网应激通路关键因子蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、真核翻译起始因子2α(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）以及线粒体凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（BAX）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(CASPASE3)、细胞色素C(CYT-C)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)在转录水平的变化情况。结果：CCK8结果表明,经12.5、25.0、50.0、100μmol/L槲皮素处理24和48h后,C33A细胞活力均显著低于对照组,并且随着槲皮素浓度和时间的增加,细胞活力均呈下降趋势。流式细胞检测结果表明,槲皮素可增加C33A细胞周期G0/G...     

内质网应激参与高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的作用机制

目的 探讨内质网应激是否参与高磷诱导血管平滑肌细胞钙化及其作用机制。方法 体外培养人胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,分为对照组、正常磷组（1.3 mmol/L磷,NP组）、高磷组（2.6 mmol/L磷,HP组）,培养10 d。茜素红染色后观察细胞钙盐沉积情况;实时定量PCR和Western blotting检测肌醇需求因子1 (IRE1)、RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、内质网应激标志蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、骨形态发生蛋白2 (BMP-2)及Runt相关转录因子2 (Runx-2)的表达;应用CHOP siRNA转染高磷培养VSMC敲低CHOP表达后,检测BMP-2及Runx-2表达;应用JNK抑制剂SP600125 (DMSO溶解),终浓度10μmol/L预处理30 min后加入高磷培养基培养10 min,茜素红染色观察钙沉积情况。结果 与对照组及NP组比较,HP组内质网应激蛋白（IRE1、PERK、JNK、CHOP）及钙化蛋白（BMP-2、Runx-2）均明显增高（均P <0.01）。敲低CHOP表达后钙化蛋白...