广西HIV-1双阳家庭病毒基因亚型及细胞嗜性分析

目的了解广西地区HIV-1双阳家庭的病毒基因亚型分布特征,同时分析env基因V3环序列变异特征及其辅助受体使用情况。方法收集2014—2015年在广西南宁市、柳州市、桂林市、贺州市、钦州市和贵港市共6个市疾病预防控制中心确证为HIV-1感染者的血浆样本,研究对象共来自95个双阳家庭。采用巢式PCR扩增HIV-1 env区基因,利用Sequencher、Bio Edit、Mega软件对序列进行拼接、整理和分析。结果本研究共分析166例HIV-1双阳家庭感染者env基因V3环序列,共发现6种亚型毒株,其中CRF01-AE为146例,构成比最大(87.95%);发现2例非流行重组体(URF)0107亚型;对CRF01-AE、CRF07-BC和CRF08-BC三种亚型的基因距离进行分析,发现其基因离散率相差不大。在HIV-1不同亚型毒株的四种gp120 V3环顶端四肽中,主要以GPGQ为主(85.54%);共有110(66.27%)条序列的毒株被预测为使用CCR5作为辅助受体,56条(33.73%)被预测为使用CXCR4作为辅助受体,没有发现R5/X4双嗜性毒株。结论在广西HIV-1双阳家庭中,流行毒株以CRF01-AE为主;毒株的gp120 V3环顶端四肽以GPGQ为主。广西HIV-1双阳家庭病毒株主要表现为巨噬细胞嗜性的非合胞体诱导型。     

男男同性恋HIV-1感染者原发耐药性分析

目的研究辽宁省男男同性恋者中未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染人群中耐药突变的发生和流行情况。方法收集辽宁省1999～2007年门诊随访的46例HIV-1感染者外周血，提取血浆中HIV基因组RNA，逆转录PCR（RT—PCR）和巢式PCR方法扩增蛋白酶基因全序列和逆转录酶基因1～250氨基酸编码序列，产物纯化后直接进行基因序列测定。序列拼接后，上传至美国斯坦福大学HIV耐药数据库在线进行耐药性分析。结果1例B亚型HIV－1感染者携带针对蛋白酶抑制剂的L90M原发耐药变异，另1例CRF01_AE亚型毒株感染者携带M46I原发耐药变异，而其余病例在蛋白酶编码区只存在次要变异。由高到低依次为．L10I3例，A71T1例。逆转录酶编码区未发现任何耐药变异。结论在辽宁省男男同性恋人群中已经发现有针对蛋白酶抑制剂的耐药毒株的传播。     

HIV-1 gp41基因片段亚型多样性研究

〔目的〕应用HIV-1 env gp41基因分型技术进行出入境HIV感染者HIV-1亚型多样性研究。〔方法〕采用套式逆转录PCR方法对env gp41和gp120(C2-V3区)进行基因扩增、测序、亚型对比分析,以及应用威斯康星GCG公司软件进行系统树分析和用美国Los Alamos国家实验室的HIV-Blast软件进行序列的亚型鉴定。〔结果〕对22份样本的gp41和gp120(C2-V3区)的基因亚型进行对比分析,结果表明gp41和gp120(C2-V3区)在亚型上具有一致性。对65例来自中国、非洲、欧洲、美洲和东南亚的出入境HIV-1阳性者进行gp41扩增基因亚型分析,发现有A、B、C、D、F1、G亚型和重组亚型AC、01_AE、02_AG、07_BC、08_BC、06_cpx、18_cpx共计13种亚型,其中重组株占33.8%(22/65)。中国籍出入境感染者包括了A、B、C、D、F1、G亚型和重组亚型01_AE、02_AG、07_BC、08_BC在内的10种亚型,其中重组株占25%(7/28)。〔结论〕用gp41替代gp120(C2-V3区)进行HIV-1亚型分析较为理想。出入境人群中HIV感染者感染的HIV毒株几乎包括了全球流行的所有亚型,多种国内少见的亚型已经通过国际旅行者传入国内。     

2018年临沂市MSM人群新感染 HIV-1病毒基因亚型分析

目的了解临沂市MSM人群新感染HIV-1病毒基因的流行亚型。方法收集2018年1～4月临沂市新感染的经男男性行为传播的未经治疗的HIV-1阳性血浆样本,应用巢式-聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增病毒基因的pol区片段,进行基因测序和亚型分析。结果收集到符合条件的样本31例,成功扩增出29例感染者病毒的有效序列,共检出4种基因亚型:CRF07_BC、CRF01_AE、C、CRF55_01B,优势毒株为CRF01_AE(62.07%)和CRF07_BC(20.69%)亚型。结论本时段内临沂市新确证的MSM感染者毒株以CRF01_AE亚型为主,监测临沂市MSM人群HIV-1感染者毒株亚型分子流行病学特征,对临沂市艾滋病防治非常必要。     

郑州市男男性行为人群HIV-1毒株变异特征及其与既往有偿供血感染者的关系

目的 分析郑州市男男性行为者(MSM)中HIV感染者的毒株变异特点及其与当地有偿供血者中流行毒株的关系.方法 以郑州市2010年确证的31例MSM的HIV感染者和41例既往有偿供血HIV感染者为研究对象,采集血标本并收集流行病学信息.RT-PCR法扩增全部研究对象的HIV-1 gag、pol全长基因(分别为1584 bp和3147 bp)及env基因的C2V3片段(558 bp)并测序,使用LosAlamosHIV Database在线工具确定病毒基因亚型、绘制系统进化树并分析可能的传播关系.结果 在72例研究对象中,获得全长gag序列53条、pol序列38条、env(C2V3)序列48条;31例MSM的HIV感染者中,CRF01 AE亚型14例、CRF07_BC亚型5例、B亚型12例(B'亚型11例、B亚型1例),41例既往有偿供血的HIV感染者均为B'亚型.MSM人群的CRF01 AE亚型毒株与河北、辽宁省的毒株关系密切、CRF07 BC毒株与河北省石家庄和北京市的毒株关系密切.在MSM人群中的12条HIV-1 B亚型中,有8条聚集成簇并与1例有偿供血感染者的序列距离最近、2条形成可靠的进化簇且与02HNseq4的序列距离最近,提示MSM人群中的B'毒株可能来自有偿供血员,且在MSM人群中存在传播关系.结论 郑州市MSM人群中流行的HIV-1毒株遗传背景复杂、有多个来源.首次发现目前MSM人群中流行的HIV-1 B亚型毒株主要是B'亚型,可能来自当地的有偿供血人群.     

不同HIV-1亚型毒株混合感染的分子流行病学分析

应用巢式-PCR方法对3例HIV-1感染者外周血单个核细胞中的HIV-1膜蛋白基因进行扩增,并对C2-V3及其邻区360个核苷酸序列进行测定和分析,计算基因离散率和系统进化树.结果,3例感染者体内有B和C或B'和E两种不同HIV-1亚型毒株序列,各亚型毒株与相应的Bcon、Ccon、Econ国际亚型毒株序的基因离散率分别为5.07～7.26%、3.23%、5.38～5.99%;同一个体内不同亚型毒株序列间的基因离散率分别为23.52%、20.69%、28.44%;根据gp120 V3环顶端四肽序列特征,发现有卖淫和静脉吸毒史妓女体内的sz46-1具有典型的欧美B亚型GPGR序列,sz8-2为GPGH,其它毒株均为泰国B(B')和E亚型所特有的GPGQ序列;进一步系统树分析显示,sz1-2、sz8-1、sz46-1与Bcon丛集一起,sz1-1、sz8-2和sz46-1分别与Econ、Ccon丛集.结论同一个体可以同时感染不同亚型HIV-1毒株,多种高危行为可能是导致混合感染的主要原因.     

PEIA法检测吸毒人群HIV-1血清亚型分析

目的建立PEIA法检测HIV-1血清亚型,了解吸毒人群HIV-1感染毒株的血清亚型分布特征,为疫苗和诊断试剂的研制、使用提供科学依据。方法问卷调查了解一般情况和HIV-1感染行为;ELISA法检测HIV-1的抗体阳性率,,nested-PCR检测HIV-1 evn基因V3区;PEIA法检测HIV-1血清亚型。结果吸毒人群HIV-1感染率为57.14%,感染因素为静脉共用注射器吸毒和无保护性交。HIV-1毒株血清亚型为C、E、EC混合型,以C亚型为优势亚型,同一个体可能同时感染不同亚型的病毒株或出现重组毒株。除了上述亚型外,还存在其他未能检测出来的亚型。结论PEIA法检测HIV-1血清亚型具有快速、简便的特点。吸毒人群HIV-1毒株亚型表现为多样性,应加强其变异的监测和研究。     

宁波市男男同性恋人群中HIV-1感染者免疫状况和亚型分布研究

目的研究宁波市男男同性恋(MSM)人群中HIV-1感染者的免疫状况和HIV毒株的亚型分布特点。方法收集宁波市13名已经被确认为HIV-1型阳性的MSM的全血样品,对CD4+T淋巴细胞进行绝对数计数,运用套式PCR方法扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V3区并进行序列测定。应用DNASTAR软件对序列和参考序列进行比对分析,确定基因亚型。结果成功获得11条env基因序列,确定1株为B亚型,4株为01_AE流行重组型,6株为07_BC流行重组型。该11例HIV-1阳性全血的CD4+T淋巴细胞绝对数最低106个/μl,最高649个/μl,平均350个/μl。结论本研究表明,宁波市MSM人群中存在多种HIV-1亚型,近半数的感染者免疫状况低下需要抗病毒治疗,流行形势严峻,应加强对该人群免疫状况和HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。     

人源抗HIV-1V3环噬菌体抗体筛选与鉴定

目的 以人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp120 V3环的合成环肽为抗原,从人的噬菌体抗体组合文库中筛选出与抗HIV-1 V3肽有结合活性的人源噬菌体抗体(Fab段).方法 用噬菌体抗体库技术筛选人源抗HIV-1V3环噬菌体抗体,ELISA测定其活性,竞争抑制实验证实了该噬菌体抗体的特异性.结果 序列分析表明.重链基因为IgG1亚类,可变区属VHI亚群.与胚系基因DP-88同源性最高,D区为D3-3、J区为JH5;轻链为k亚型.可变区属VL IV亚群,D区为DPK22,J链为Jk4胚系.结论 成功筛选了人源抗HIV-1 V3环噬菌体抗体.其具有很好的生物学活性和特异性.     

河南省豫东南地区420例HIV感染者亚型分析

目的了解河南省豫东南地区HIV-1流行株的亚型及序列变异特征。方法在河南省豫东南地区的上蔡县及尉氏县采集420例有偿献血HIV-1感染者静脉血，分离单个核细胞（PBMC），用套式聚合酶链反应（nest—PCR）对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸（DNA）的膜蛋白（env）基因进行扩增，并对其C2-V3及邻区350～450个核苷酸序列进行了测定和分析。结果420份样品间的基因离散率为8．37％。与国际A—E亚型参考序列及部分地区B’亚型代表株序列相比较，河南省上蔡县及尉氏县的420个毒株及流行与我国云南德宏、四川等地的B＇亚型毒株序列接近，均属于泰国B’亚型，基因离散率为6．94％。系统树分析显示，420份样品仍和泰国B’亚型聚集，远离其他国际亚型。对V3环四肽序列的分析表明，具有泰国B’亚型基因型GPOQ的300例，具有欧美B’亚型的GPGR的70例。结论根据以上数据及其他资料提示，目前河南省上蔡县及尉氏县的既往献血人群中，泰国B＇亚型依然占主导地位，该流行区毒株的传入与流行在云南德宏州的相同亚型HIV-1毒株密切相关。但是根据其离散率及系统树的结果提示，既往献血人群中泰国B’亚型有向其他亚型进一步变异的趋势，应引起有关部门的注意。     

广西壮族自治区低档场所中老年嫖客与暗娼HIV-1感染者基因亚型研究

目的 了解广西壮族自治区低档场所中老年嫖客与暗娼的HIV-1感染者病毒基因亚型特征及传播规律。方法 采用方便抽样的方法,于2012年对广西壮族自治区4个城市和9个县（区）低档场所的嫖客（年龄≥50岁）与暗娼开展分子流行病学调查,进行HIV-1抗体筛查,对HIV-1抗体阳性者血浆进行pol区基因片段扩增和序列测定,对获得的基因序列进行系统进化树构建并鉴定毒株的基因亚型,分析毒株亚型分布特征及传播规律。结果 共招募4 048例中老年嫖客和784例低档暗娼,共发现116例HIV-1抗体阳性,中老年嫖客与暗娼的HIV-1抗体阳性检出率分别为2.5%（103/4 048）、1.7%（13/784）,对其中84例HIV-1抗体阳性者进行基因扩增和序列测定,53例获得基因序列（中老年嫖客48例、暗娼5例）。发现3种基因亚型,均为重组株,CRF01_AE占90.6%（48/53）,CRF08_BC占7.5%（4/53）,CRF07_BC占1.9%（1/53）。经系统进化树分析发现,48例CRF01_AE流行毒株聚集成2个传播簇Cluster 1和2;4例CRF08_BC聚集成1个传播簇。在CRF01_AE Cluster 1中又形成4个亚簇C1-SC1、2、3、4,各亚簇对象来源于同一处或相邻低档场所、或与同一省道毗邻乡镇的低档场所。结论 广西壮族自治区低档场所中老年嫖客与暗娼HIV-1感染者流行毒株仍以CRF01_AE为主,以同一处或相邻低档场所或毗邻乡镇呈小范围聚集,当地HIV-1阳性的中老年嫖客与暗娼可能是该人群易感者毒株快速传播的重要传染源。     

云南省142例HIV-1感染长期不进展者的病毒学和中和活性抗体分析

目的分析云南省HIV-1感染长期不进展者中HIV-1基因型的分布特征,探索中和活性抗体产生的相关因素。方法 2016年收集云南省报告8年以上、CD4+T淋巴细胞计数500个/μl的HIV-1感染者142例,进行病毒基因扩增和分型,通过假病毒中和实验对样品的中和活性进行分析。结果研究对象诊断为HIV-1感染的年限为8～24年,以静脉注射吸毒感染为主(71.1%,101/142)。研究对象中检测到9种HIV-1基因分型,其中主要的为CRF08_BC(74.6%,94/126)和CRF07_BC(11.1%, 14/126)。HIV-1基因型的分布在人口学特征方面无统计学差异。以中和抑制率大于50%为具有中和活性的判断标准,142份样品中,对BC重组假病毒(CNE15)有中和活性的样品的比例(59.2%,84/142)分别大于对CRF01_AE(CNE5)和B亚型(CNE11)假病毒有中和活性的样品的比例(28.9%,41/142,χ2=26.421,P0.001;45.8%,65/142,χ2=5.097,P=0.032)。按对3种假病毒中和抑制率均大于50%的标准筛选到具有交叉中和活性的样品22个,这22个样品在病毒载量从低到高的分组中的比例相应增加(trendχ2=4.455,P=0.041)。结论云南省HIV-1感染长期不进展者中HIV-1基因型复杂,存在不同活性的中和抗体,抗体中和活性具有HIV-1基因型的特异性,而高病毒载量与中和抗体的强度和中和谱具有相关性。     

维吾尔族HIV-1感染者gag基因序列分型研究

目的 通过扩增乌鲁木齐维吾尔族HIV-1感染者gag基因片段,确定该民族HIV-1感染者流行株的基因亚型. 方法 对68例新疆乌鲁木齐市HIV-1感染者的血浆标本的RNA,用巢式PCR扩增gag基因片段,将所得到的序列与国际标准株进行比较,确定被检标本的亚型. 结果 在68例HIV感染者的血浆标本中,共成功扩增35例gag基因片段,扩增率为51.47％.经BLAST初步判断和构建进化树并与国际标准株比对确认,35例感染者感染的HIV毒株序列中,发现均为CRF07_ BC亚型.35例毒株之间的平均基因距离为(0.043±0.003),与3例CRF07_ BC亚型国际参考株之间的平均基因距离在(0.034±0.004) ～(0.039±0.005)之间. 结论 新疆乌鲁木齐市HIV-1感染者以CRF07_ BC亚型为主要流行株.35例序列相互之间以及与3株不同来源的国际参考毒株之间表现出高度的同源性.     

九江市HIV-流行毒株基因序列测定和亚型分析

目的：了解九江市HIV-1流行毒株的亚型分布情况。方法：对采集的6份九江市HIV-1感染者的血浆样品进行RT—PCR扩增，获得GAG基因的核酸片断进行核苷酸序列分析。结果：在6份样品中发现B’亚型HIV-1毒株四株，B亚型和A／E重组亚型HIV-1毒株各一株。结论：HIV-1流行毒株亚型在九江市分布情况复杂，防控形势严峻。     

湖北省HIV-1分子流行病学研究

目的了解湖北省HIV-1基因型分布特征。方法对湖北省HIV-1主要流行区域进行流行病学调查，应用巢式聚合酶链反应对其中102例HIV-1感染者的env基因V3～V4区、gag基因P17/P24区和tat基因第一外显子区进行扩增，对各基因区阳性扩增样本进行序列测定，并对各基因区核苷酸进行序列分析。结果所有目标人群中共存在B^＋、C2种亚型以及CRF08-BC和CRF01-AE2种重组毒株，B^＋亚型在人群和地域上分布最广，涉及献血员、受血者以及二者的配偶和性乱人群，主要分布既往有偿献血员集中的地区。CRF08-BC、CRF01-AE重组主要涉及性乱人群，分布于经济发达的城市或地理位置偏南方的地区。C亚型为离散病例，主要涉及静脉毒品注射者。结论湖北省已由既往单一HIv-1 B^＋亚型转变为多种亚型、重组亚型流行的复杂局面，各亚型在省内高危人群和地域分布不平衡，各有特点，从总的亚型流行特征来看，HIV-1在湖北省有加快流行和进一步复杂化的趋势。     

应用实验室检测方法推测HIV-1发生率

推测HIV-1在各类人群中的发生率(新HIV-1发生率),对了解目前HIV的传播方式,确定高危人群,监控预防措施效果和减少HIV-1感染至关重要.近来通过实验室检测方法区分近期和长期感染,已经使监测HIV-1发生率成为现实.基于近期感染者和长期感染者抗体滴度的不同,大多数方法普遍根据早期HIV-1感染血清转化过程中,抗体滴度水平、抗体亲和力、抗体类型或亚型不同,以及抗原决定簇不同的特征来判断.这种敏感/减敏(S/LS)的实验室检测方法只需要简单的检测工具,就可横向的在调查人群中发现近期感染者.然而实践表明,这种方法受到包括亚型的稳定性、变异度和有检测价值的"窗口期"变量等各项指标的限制.最近我们研发了又一种检测方法,即捕捉IgG的BED-EIA方法,发现HIV-IgG抗体水平与机体内IgG的整体水平成比例升高,并证实可以用于发现近期感染者.它还可检测到不同的亚型具有比较一致和相似的窗口期.目前这一方法已在市场上应用,用来测算HIV-1发生率.由于目前HIV亚型的不同和HIV流行范围的迅速扩张,因此选择适用性强的方法,应用于检测不同亚型,并广泛应用于推测重大发生率,分析对比各类人群之间的发生趋势至关重要.     

1例输入性HIV-1 G亚型毒株的检出及基因组序列分析

目的　对1例输入性HIV-l G亚型感染者病毒基因组进行序列测定,并进行系统进化分析。方法　采集在本地区艾滋病监测中发现的1例HIV-1 G亚型感染者的血清,提取病毒RNA,利用反转录巢式-PCR技术扩增并测定病毒近似全长基因序列。结果　获得此毒株近似全长基因组序列,长度为8695 bp。重组分析结果显示,此毒株序列中无其他亚型的基因型片段插入,为HIV-1 G亚型毒株;系统进化树显示,此毒株与尼日利亚流行株G.NG.1995.NG1937.AF069937亲缘关系最近,基因离散率为8.95%。此G亚型毒株以趋化性细胞因子受体5作为辅助受体,V3区有1个氨基酸缺失,糖蛋白GP120中有8个位点因多糖空洞而导致糖基化位点缺失。结论　本研究从分子流行病学角度证实该毒株为境外输入性毒株,此毒株序列的测定和分析对于本地区HIV流行趋势和HIV毒株多样性研究均具有重要意义,提示我们需加强艾滋病监测,防止境外毒株与本地毒株发生重组和流行。     

江苏省艾滋病病毒感染的分子流行病学研究

目的 了解江苏省不同人群中艾滋病病毒(HIV)各亚型毒株的流行情况和传播规律。方法 收集HIV感染者及患者的流行病学资料；无菌采集HIV感染者或艾滋病(AIDS)患者抗凝全血标本5ml，提取前病毒DNA，用巢式聚合酶链反应(nested—PCR)扩增膜蛋白基因的C2～V3区，进行序列测定，鉴定病毒亚型。用威斯康星GCG软件进行共享序列、基因离散率的计算和毒株的聚类分析。结果 截止2001年底，江苏省已发现HIV-1中的A、B、C、D、E五种亚型和一个B亚型变种(B^ )流行，C(占40．48％)和B^ (38．10％)亚型为主要流行株；静脉吸毒感染人群中86．67％为C亚型，采供血和受血感染人群中91．67％为B^ 亚型，在性途径传播人群中所有六种亚型均有，且分布较为均一。结论有偿献血人群中B^ 亚型毒株由邻省传人，吸毒人群中C亚型毒株的传人主要与新疆籍流动人口的介入有关；多种亚型的并存说明江苏省存在着适宜AIDS流行的各种危险因素；提示今后在药物治疗、疫苗研制以及其他防制工作上将面临更大的困难。     

北京市2006年HIV一1流行毒株的gag和env基因序列测定及亚型分析

目的监测2006年北京市北京户籍HIV感染者中HIV-1型流行病毒株的亚型分布特点和变化规律。方法采集北京市2006年新确认北京户籍HIV-1感染者的抗凝全血样品32份,分离血浆,提取病毒RNA,用巢式聚合酶链反应方法扩增病毒gag和env基因,并进行序列测定和亚型分析。结果系统进化分析表明北京户籍HIV-1感染者样品分别属于5个亚型,分别为B亚型9份,泰国B亚型2份、C亚型2份,流行重组型CRF07 BC亚型5份,流行重组型CRF01．AE亚型4份。结论北京市居民中已存在多种HIV-1亚型和流行重组型,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。     

清洗油烟净化器导致急性砷化氢中毒事故分析

目的　了解哈尔滨市男男性行为（men who have sex with men, MSM）人群中新确诊HIV-1感染者体内CRF01-AE亚型毒株成簇性特征，为制定科学有效的防控措施提供依据。方法　收集哈尔滨市2017年新确诊MSM人群中HIV-1感染者流行病学及人口学信息，通过DNA测序和基因分型，对CRF01-AE亚型的序列进行成簇性分析。结果　本研究共获得108条CRF01-AE亚型序列，以簇内基因距离≤0.045和Bootstrap≥90%为界定簇标准，产生传播簇15个，其中由10条序列构成的传播簇1个；患者年龄、常住地、性伴数、性取向、婚姻状况、性病史在未成簇与成簇2组中差异均具有统计学意义（P均＜0.05）。结论　CRF01-AE亚型毒株是哈尔滨市MSM HIV-1感染者中的优势传播株，具有较强的成簇性，在艾滋病防控中对于未婚、性行为活跃的青壮年人群及与该人群关系密切的人群须高度关注。