热休克转录因子1对肿瘤坏死因子α的转录调控作用及机制

目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)的转录调控作用及机制。方法构建HSF1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1,TNF-α野生型启动子荧光素酶报告基因pGL3-TNFα-Y,TNF-α突变型启动子荧光素酶报告基因pGL3-TNFα-T。pcDNA3.1-HSF1转染巨噬细胞RAW264.7,半定量RT-PCR检测TNF-αmRNA的表达。pcDNA3.1-HSF1,TNF-α启动子荧光素酶报告基因转染RAW264.7,比较pGL3-TNFα-Y和pGL3-TNFα-T的相对萤光素酶活性。结果 HSF1下调RAW264.7 TNF-αmRNA的表达,pGL3-TNFα-T的相对荧光素酶值较pGL3-TNFα-Y明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论热休克转录因子1(HSF1)通过与肿瘤坏死因子α(TNF-α)启动子区HSE的结合下调RAW264.7 TNF-αmRNA的表达。     

苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌的影响

目的研究苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α的影响,探讨苜草素对巨噬细胞免疫功能的影响机制。方法以不同浓度的苜草素和10 g/ml的脂多糖(LPS)分别处理巨噬细胞RAW264.7,采用中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性,ELISA检测TNF-α分泌量。以不同浓度的苜草素处理LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7,采用Griess分析法测定NO含量,ELISA检测IL-6分泌量,半定量RT-PCR方法测定巨噬细胞中iNOS、IL-6、TNF-αmRNA水平。结果苜草素在0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时能显著提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性(P<0.05);在0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著增加TNF-α的分泌量(P<0.01),显著降低LPS诱导的巨噬细胞NO产生量(P<0.05);在0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著降低LPS诱导的巨噬细胞IL-6的产生量(P<0.01)。苜草素可抑制LPS诱导的iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达,增加TNF-αmRNA的表达。结论苜草素可以提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,在转录水平上影响小鼠巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α的基因表达,对巨噬细胞免疫功能起调节作用。     

LncRNA PCED1B-AS1调控NLRP3促进巨噬细胞清除结核分枝杆菌的机制研究

目的　研究长链非编码RNA PCED1B-AS1调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLR family pyrindomain containing 3, NLRP3）对巨噬细胞清除结核分枝杆菌和分泌炎症因子的影响。方法　在巨噬细胞RAW264.7中转染pcDNA-PCED1B-AS1,并用结核分枝杆菌感染,qRT-PCR方法检测PCED1B-AS1和TNF-α、IL-6 mRNA水平,用菌落形成实验检测巨噬细胞对结核分枝杆菌的清除作用,Western blot方法检测细胞中NLRP3蛋白表达水平。将NLRP3 小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）和pcDNA-PCED1B-AS1共转染到巨噬细胞中,用结核分枝杆菌感染,同样检测细胞中TNF-α、IL-6 mRNA水平和菌落量。结果　结核分枝杆菌感染后的巨噬细胞中PCED1B-AS1水平降低,TNF-α、IL-6 mRNA水平升高。转染pcDNA-PCED1B-AS1后的巨噬细胞经过结核分枝杆菌感染以后,细胞中PCED1B-AS1、TNF-α、IL-6 mRNA水平升高,形成的菌落量减少,细胞中NLRP3蛋白表达水平升高。NLRP3 siRNA可以逆转过表达PCED1B-AS1对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞中TNF-α、IL-6 mRNA表达和菌落量形成的影响。结论　上调PCED1B-AS1促进巨噬细胞清除结核分枝杆菌,诱导细胞表达TNF-α、IL-6 mRNA的机制与上调NLRP3表达有关。     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。     

辐射诱导的小鼠肺泡上皮细胞死亡通过干扰素基因刺激因子通路促进RAW细胞M1型极化研究

目的:探讨细胞中重要的DNA感受器干扰素基因刺激因子(STING)在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)细胞活化中的作用。方法:收集⁶⁰Co γ射线照射后小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12)的培养上清,对RAW264.7细胞进行刺激,使用蛋白免疫印迹(Western Blot)检测刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测处理后RAW264.7细胞经典激活的巨噬细胞(M1)型和非经典激活的巨噬细胞(M2)型相关细胞因子的表达水平。结果:Western Blot检测结果显示,刺激后RAW264.7细胞中STING蛋白的表达水平显著上调;ELISA检测结果表明,刺激后RAW264.7细胞上清中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)显著增加;脱氧核糖核酸酶I(DNase I)处理能够抑制RAW264.7细胞中STING通路的激活。ELISA检测结果表明,DNase I能够抑制RAW264.7细胞向M1型极化。结论:辐射诱导的MLE-12细胞死亡能够释放DNA,从而激活RAW264.7细胞中的环磷酸鸟苷-腺苷...     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

竹荪醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响

目的探讨竹荪醇提物对LPS诱导的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)的分泌,TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的m RNA水平以及核转录因子(NF-κB)p65蛋白表达的影响及可能的抗炎机制。方法以不同浓度(100、200、400μg/ml)的竹荪醇提物作用于LPS(1μg/ml)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用ELISA法和Griess法检测炎性介质TNF-α和NO的分泌量;RT-PCR法测定促炎介质TNF-α、iNOS、IL-6和抗炎介质IL-10的m RNA水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达水平。结果与LPS组相比,200、400μg/ml的竹荪醇提物能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放(P0.01);且不同程度抑制RAW264.7细胞中促炎介质iNOS、TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(P0.01),剂量依赖性的促进抗炎介质IL-10的m RNA表达水平(P0.01);不同浓度的竹荪醇提物均可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中NF-κB p65蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论竹荪醇提物可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放,其抗炎作用的发挥可能与抑制NF-κB p65蛋白的表达,从而调节炎性介质的基因水平有关。     

转录因子Foxo1对RAW264.7细胞迁移产生的影响

目的观察Foxo1基因过表达对鼠源性单核巨噬细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2表达的影响,探讨转录因子Foxo1在早期心血管疾病识别及预防中的作用。方法实验分为未转染的对照组、Foxo1基因转染组及空质粒转染组,Foxo1基因转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-Foxo1真核表达载体瞬时转染至RAW264.7细胞中。空质粒转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-3.1质粒瞬时转染至RAW264.7细胞中。通过Western blot检测细胞中Foxo1的过表达情况。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞中MCP-1及CCR2的表达情况。采用transwell小室法检测各组细胞的迁移能力。结果 pc DNA-Foxo1重组质粒转染48 h后,RAW264.7细胞中Foxo1蛋白的表达量为(1.812±0.067),明显高于空质粒转染组的(1.092±0.088)和未转染组的(1.107±0.095),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1 mRNA表达量为(3.331±0.587),明显高于空质粒转染组的(1.125±0.114)和未转染组的(1.121±0.065),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1蛋白的表达量为(2.670±0.117),明显高于空质粒转染组的(1.128±0.107)和未转染组的(1.037±0.096),差异均有统计学意义(均P0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中CCR2的mRNA的表达量为(2.099±0.331),明显高于空质粒转染组的(1.027±0.095)和未转染组的(1.018±0.177),差异均有统计学意义(均P0.05)。计数Transwell小室膜下表面细胞数,结果显示Foxo1基因转染组RAW264.7细胞穿过小室的数量为(39.670±2.333)个,明显高于未转染组的(22.000±2.309)个,差异有统计学意义(P0.05)。结论转录因子Foxo1过表达通过促进MCP-1及CCR2的表达从而增强RAW264.7细胞的迁移,参与巨噬细胞的炎症反应,推测Foxo1在心血管疾病早期识别及预防中具有重要作用。     

miR-9-3p对HepG2细胞脂蛋白调节因子ABCA1蛋白表达的影响

目的 评估miR-9-3p对ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1基因及蛋白表达的影响。方法 采用HepG2细胞，应用细胞培养、miR-9-3pmimics转染、实时定量PCR技术（qRT-PCR）以及Westernblotting免疫印迹等实验技术，分析miR-9-3p对细胞ABCA1mRAN及蛋白表达水平的影响。结果 (1) miR-9-3p转染组miR-9-3p水平较对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.001），证明转染成功；(2)两组ABCA1mRNA水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；(3) miR-9-3p转染组ABCA1蛋白水平较对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-9-3p能够抑制细胞内ABCA1蛋白表达，但对转录水平未见显著影响。     

TLR4抗体对姬松茸多糖作用巨噬细胞产生细胞因子的影响

目的研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子--α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法相同浓度ABPS及脂多糖(LPS,阳性对照)作用巨噬细胞RAW264.7 3 h、6 h、12 h、18 h和36 h;不同浓度ABPS及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h;TLR4抗体作用巨噬细胞RAW264.7 1 h后,更换含有ABPS和LPS的细胞培养液作用24h。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量。结果 ABPS作用巨噬细胞RWA264.7 24 h后,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β含量明显高于阴性对照,差异有统计学意义(P0.01),但显著低于LPS组。在一定浓度范围内,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量随ABPS浓度增大而增大,浓度为1000μg/ml时IL-1β、TNF-α、IFN-β含量达到最大。TLR4抗体处理的巨噬细胞RAW264.7经ABPS和LPS作用,IL-1β、TNF-α、IFN-β含量低于未处理组,差异有统计学意义(P0.01)。结论 TLR4抗体能够一定程度抑制ABPS作用巨噬细胞RAW264.7产生IL-1β、TNF-α、IFN-β,推测ABPS可能通过TLR4受体信号转导通路影响三种细胞因子的释放。     

miR-335-3p通过靶向FOXD1发挥对骨肉瘤细胞肿瘤生物学行为的抑制作用

目的 探讨miR-335-3p通过靶向调控FOXD1基因抑制骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞的增殖和迁移的作用及机制。方法 使用RT-PCR法评估miR-335-3p在OS组织和临近组织，正常人成骨细胞系(hFOB1.19f)和OS细胞系(SAOS2、U2OS、MG63)中的表达；使用细胞增殖实验测定研究miR-335-3p过表达对U2OS、MG63的活力的影响；EDU染色和DAPI染色评估miR-335-3p过表达对U2OS、MG63迁移和侵袭的影响；荧光素酶报告基因测定法确定miR-335-3p靶向调控FOXD1编码基因发挥作用；蛋白质免疫印迹法检测OS细胞中FOXD1蛋白表达；pcDNA-FOXD1转染OS细胞，并评估细胞增殖、迁移和侵袭的水平。结果 miR-335-3p在OS癌组织和细胞中低表达；利用miR-335-33p mimic转染细胞后，可在体外抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭；miR-335-3p通过直接结合FOXD1 mRNA的3′-UTR发挥抑制作用，从而负面调节FOXD1的表达；miR-335-3p通过靶向调节FOXD1的表达，进而抑制OS癌细胞的增殖...     

miR-485-5p靶向Toll样受体4调控巨噬细胞的炎症反应

目的 探究miR-485-5p对Toll样受体4(TLR-4)的靶向作用，研究其在巨噬细胞炎症反应中的调控作用。方法 合成miR-485-5p模拟物(mimics)及其抑制剂(inhibitors),分别转染HEK-293T细胞，RT-PCR检测miR-485-5p的表达水平。根据miRNA靶向作用预测数据分析选定TLR-4作为研究的靶基因，构建TLR-43’UTR及其突变体萤火虫-海肾双荧光素酶报告基因系统，通过检测在细胞模型中过表达/抑制表达miR-485-5p后对荧光素酶活力的影响，验证miR-485-5p与TLR-4之间的靶向关系，Western blot检测TLR-4蛋白质表达水平。构建巨噬细胞模型，将miR-485-5p mimics及inhibitors分别转染巨噬细胞，RT-PCR检测靶基因TLR-4 mRNA的表达水平，ELISA检测上清中下游致病因子IL-6、 IL-17、IL-18的表达。结果 与对照组比较，转染miR-485-5p mimics后miR-485-5p表达水平升高，转染miR-485-5p inhibitors后miR-485-5p表达水平降低(P...     

长春市冬季大气PM2.5对RAW264.7细胞毒性机制研究

目的研究长春市冬季大气PM_(2.5)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)的毒性作用。方法采用2016年11月16日至2017年3月18日期间基于空气质量指数的五级及以上雾霾天气采集的长春市大气PM_(2.5)对RAW264.7细胞进行体外染毒,终浓度分别为0、50、100、200、400μg/ml。以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力,用酶标仪测定胞内活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及Ca~(2+)浓度,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,用ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果 PM_(2.5)染毒浓度为100、200、400μg/ml时,RAW264.7细胞存活率明显低于对照组,LDH、ROS水平和Ca~(2+)浓度明显高于对照组,TNF-α和IL-6含量明显高于对照组,细胞凋亡率亦随染毒浓度的增加而升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论长春市冬季重污染大气PM_(2.5)可使RAW264.7细胞产生炎症损伤和氧化应激,进而引起细胞凋亡。     

mm9_circ_010490在PM2.5诱导小鼠单核巨噬细胞炎症反应中的功能

目的探究mm9_circ_010490在PM_(2.5)暴露小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中的表达改变及其在炎症反应中的作用。方法使用0、50、100、150、200μg/ml的PM_(2.5)悬液暴露RAW264.7细胞24、48 h,收集细胞提取总RNA,用qRT-PCR技术检测炎症因子IL-6、TNF-α和mm9_circ_010490表达水平的差异。设计并合成mm9_circ_010490的3条干扰序列(siRNAs)对细胞进行转染,以si-NC空载体作为对照组,联合PM_(2.5)暴露后检测上述指标。结果与对照组相比,PM_(2.5)暴露RAW264.7细胞后,IL-6和TNF-α炎症因子及mm9_circ_010490的水平升高,具有时间、剂量依赖性,且差异具有统计学意义(P0.05);使用mm9_circ_010490的siRNA转染RAW264.7细胞后,IL-6、TNF-α炎症因子和mm9_circ_010490表达水平下调,差异具有统计学意义(P0.05);联合PM_(2.5)暴露后,与si-NC+PM_(2.5)组相比,上述指标呈现低表达趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 mm9_circ_010490表达水平在PM_(2.5)暴露后的RAW264.7细胞中明显上升,且在PM_(2.5)诱导细胞炎症反应中发挥着促炎作用。     

微小RNA-124-3p靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)靶向胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响。方法 选取2015年1月—2021年1月磐石市医院保存的子宫内膜癌组织及癌旁组织20例，分析miR-124-3p在癌组织、癌旁组织中的表达及与患者临床病理特征的关系。用子宫内膜癌MFE-280细胞进行miR-124-3p沉默和过表达转染，分为空白组、miR-124-3p-inhibitor组、miR-124-3p-mimic组，分析调控miR-124-3p表达对子宫内膜癌MFE-280细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响。采用双荧光素酶报告实验预测miR-124-3p的靶基因，分析miR-124-3p对子宫内膜癌MFE-280细胞IGF2BP1表达量的影响。结果 子宫内膜癌组织miR-124-3p表达量(1.01±0.09)低于癌旁组织(1.89±0.25),差异有统计学意义(t=14.810,P<0.05)。miR-124-3p与FIGO分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度有关，miR-124-3p在Ⅳ期、G3分级...     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

逍遥丸含药血清影响巨噬细胞RAW264.7的功能

目的:采用中药血清药理学的方法,制备逍遥丸含药血清(XCS),体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察XCS对巨噬细胞功能的影响。方法:Wistar大鼠30只,以2.7g·kg-1·d-1剂量灌胃逍遥丸,连续3周,第22日取动物血离心,制备XCS;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将细胞分为空白组、空白血清组、XCS不同浓度组,取细胞培养上清测NO及TNF-α分泌量。结果:LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7 NO、TNF-α分泌量增加,与空白血清组相比有显著差异(p<0.05)。结论:XCS对NO和TNF-α有明显促进作用。     

miR-216a通过下调CAPN6抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡的研究

目的 探讨微小RNA-216a(miR-216a)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 收集2019年5月至2021年5月于河北北方学院附属第一医院行手术治疗的82例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)法检测组织中miR-216a和钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)表达。转染miR-216a模拟物(miR-216a mimic)、CAPN6小干扰RNA(si-CAPN6)或共转染miR-216a mimic与CAPN6过表达质粒(pcDNA-CAPN6)至宫颈癌HeLa细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CAPN6、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达情况,并进行统计分析。结果 宫颈癌组织中miR-216a mRNA相对表达量明显低于癌旁正常组织(t=52.968,P<0.05),而CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量均明显高于癌旁正常组织(t值分别为2...     

激活蛋白-1介导二氧化硅诱导的巨噬细胞细胞因子的表达

目的 探讨SiO2诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达改变是否与激活蛋白-1(AP-1)活化有关.方法 用AP-1的抑制剂姜黄素处理巨噬细胞后,用Western blotting检测核蛋白AP-1(c-jun/c-fos)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β1蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、TGFβ1 mRNA的表达.结果 10和20 μmol/L姜黄素处理组c-jun的核蛋白表达为1.150±0.020、1.010±0.108,c-fos的核蛋白表达为0.430±0.023、0.256±0.015,明显低于SiO2刺激组(1.550±0..029、0.860±0.036),差异有统计学意义(P《0.01),且呈剂量依赖关系.20μmo/L姜黄素处理组TNF-α、TGFo-β1蛋白表达分别为123.58±45.78、32.12±5.34,明显低于SiO2刺激组(1582.18±437.52、55.60±5.51);TNF-α、TGF-β1 mRNA表达水平分别为0.74±0.01、0.22±0.04,也明显低于SiO2刺激组(2.27±0.33、2.96±0.15),差异均有统计学意义(P《0.01).结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α、TGF-β1与AP-1的活化有关.     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。