鱼藤酮对星形胶质细胞谷氨酸摄取功能的影响

目的研究鱼藤酮对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运功能的影响。方法应用HPLC荧光法检测鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力,采用RT-PCR与Western blot技术观察谷氨酸转运体基因及蛋白表达。结果鱼藤酮染毒星形胶质细胞胞外Glu浓度明显升高,Glu摄取能力显著降低,谷氨酸/天冬氨酸转运体(glutamate/aspartate transporter,GLAST)基因和蛋白表达均明显降低,而谷氨酸转运体-1(glutamatetransporter-1,GLT-1)蛋白表达升高。结论鱼藤酮可显著降低星形胶质细胞谷氨酸摄取功能,引起胞外Glu浓度升高;GLAST表达下调可能是鱼藤酮诱导胞外谷氨酸含量增加的主要原因之一,而GLT-1上调可能为神经细胞自我保护机制,以限制谷氨酸的神经毒作用。 更多还原     

鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用

目的观察鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞毒性作用的特点。方法体外培养大鼠中脑星型胶质细胞,采用胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光法鉴定。观察染毒星型胶质细胞形态,检测细胞活力,通过生长曲线分析鱼藤酮对星型胶质细胞增殖的影响以及RT-PCR检测缝隙连接蛋白（connexin43,CX43）mRNA表达。结果0.5μmol/L鱼藤酮染毒24 h即可引起明显的细胞形态改变;0.75,1.0,2.0μmol/L鱼藤酮染毒时星型胶质细胞活力明显降低,乳酸脱氢酶释放量显著增加;0.5μmol/L以上鱼藤酮可明显抑制胶质细胞增殖,CX43 mRNA表达降低。结论鱼藤酮对体外培养星型胶质细胞可以产生明显的毒性损伤作用,但与神经元比较,星型胶质细胞对相同剂量的鱼藤酮染毒具有更强的耐受能力。     

鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用

目的 研究鱼藤酮对PC12细胞的毒性作用及其机制.方法 分别用0.1、0.5、1.0μmol/L的鱼藤酮染毒PC12细胞72 h,对照组加入相同剂量的DMS0,采用四甲基偶氮唑盐（MT T）比色法检测细胞活力,借助流式细胞仪检测各浓度下细胞的凋亡率和线粒体膜电位的变化.结果 0.1、0.5、1.0μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞72 h时,细胞活力随染毒浓度的增加而降低.细胞虽未发生明显的凋亡,但处于G1期细胞随染毒浓度增加而增多,G2/S期细胞相对减少,说明鱼藤酮抑制细胞增殖明显,线粒体膜电位降低显著.结论 鱼藤酮在小剂量长时间的持续作用时,启动了细胞凋亡,表现为对PC12细胞的线粒体膜电位的降低.     

谷氨酸转运体在鱼藤酮神经毒性中的作用

目的观察谷氨酸转运体在鱼藤酮神经毒性中的作用。方法建立星形胶质细胞与大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞共培养鱼藤酮染毒模型,并用谷氨酸转运体-1(GLT-1)和谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)特异性抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)、L-反式吡咯烷-2,4-二羧酸(PDC)预处理。高效液相色谱(HPLC)荧光法检测星形胶质细胞胞外谷氨酸(Glu)浓度,同位素标记法检测Glu摄取能力。结果 DHK预处理组星形胶质细胞Glu摄取能力与单纯鱼藤酮中毒组比较差异无统计学意义,而PDC预处理组星形胶质细胞Glu摄取能力明显下降,胞外Glu浓度升高,与单纯鱼藤酮中毒组比较具有显著的统计学意义。结论谷氨酸转运体GLAST可能在鱼藤酮诱导的兴奋性损伤机制中起主要作用。     

增强缝隙连接耦联对鱼藤酮染毒星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响

目的观察增强缝隙连接耦联对鱼藤酮染毒星形胶质细胞谷氨酸代谢的影响。方法体外培养大鼠中脑星形胶质细胞,随机分为对照组、鱼藤酮组(1.0μmol/L)、缝隙链接激动剂(AAP-10)干预组(50 nmol/L)和AAP-10干预组(250 nmol/L)。MTT法观察染毒星形胶质细胞活力,应用HPLC荧光法和同位素标记法检测星形胶质细胞外谷氨酸浓度和谷氨酸转运能力的变化,RT-PCR检测星形胶质细胞谷氨酸转运体(GLAST)mRNA的表达。结果鱼藤酮染毒组星形胶质细胞活力和谷氨酸转运能力明显降低,细胞外谷氨酸浓度明显增加;AAP-10干预组(250 nmol/L)星形胶质细胞活力有所升高,细胞外谷氨酸浓度明显降低,谷氨酸转运功能活性则明显增强,且GLAST mRNA表达明显上调。结论增强缝隙连接耦联能明显改善鱼藤酮所致星形胶质细胞外谷氨酸代谢紊乱,可能与其调控GLAST基因表达和功能活性有关。     

鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响

目的观察鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的影响。方法建立星形胶质细胞与常用的神经细胞株PC12细胞共培养鱼藤酮染毒模型,应用划痕染料标记示踪技术观察染毒星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的变化,采用RT-PCR法检测CX43 mRNA的表达,Western Blot技术观察CX43蛋白活性变化。结果随着染毒剂量的增加,鱼藤酮对星形胶质细胞缝隙连接耦联功能的抑制作用愈发明显;与正常对照组比较,0.5、1.0μmol/L鱼藤酮染毒组CX43 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论鱼藤酮可引起星形胶质细胞CX43表达水平降低,显著抑制细胞缝隙连接耦联功能,这可能是其诱导神经细胞损伤的原因之一。     

铅对原代培养星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

目的探讨铅暴露对星形胶质细胞(AS)中GLAST和GLT-1蛋白表达及转运体功能的影响。方法取出生1~3 d Wistar大鼠的仔鼠星形胶质细胞进行原代培养,以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色鉴定细胞纯度后,进行0(对照组)、50、100、200及400μmol/L乙酸铅染毒,染毒时间为72 h。倒置显微镜下观察细胞形态并采集图像;以AlamarBlue法检测细胞活力;以Western blot法检测GLAST和GLT-1蛋白的表达;以同位素标记法测定谷氨酸转运体功能。结果 50和100μmol/L铅暴露组的细胞形态与对照组相比,未见明显改变;200μmol/L铅暴露72 h后,少量细胞开始脱壁,细胞间隙增大;400μmol/L铅暴露组细胞变大,突起变短或消失,脱壁细胞数量明显增多。与对照组相比,各浓度铅暴露组的AS活力均降低(P0.05),100、200和400μmol/L铅暴露组的GLT-1蛋白含量下降(P0.05),但各浓度铅暴露组的GLAST蛋白含量无显著改变。100、200和400μmol/L铅暴露组的3H-Glu放射性低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论铅暴露可明显抑制AS中GLT-1蛋白的表达,并导致AS的Glu转运体功能下降。     

外源性一氧化碳释放分子对体外培养PC12细胞的谷氨酸兴奋性神经毒性

  目的  探讨一氧化碳释放分子2（CORM-2）对PC12细胞谷氨酸信号通路的影响及作用机理,揭示急性一氧化碳中毒迟发性脑病（delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP）发生的可能机制,为CO的中毒及其后遗症的防治提供实验依据。
  方法  以高分化的PC12细胞为研究对象,经不同浓度的CORM-2暴露后,用MTS法检测细胞活力,确定合适的染毒浓度及染毒时间,收集细胞后用蛋白免疫印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体主亚基（NR1）及NMDA受体2B亚基（NR2B）蛋白的表达,检测细胞内钙离子浓度及细胞释放的谷氨酸含量,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。
  结果  随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低（P < 0.05）;各剂量与对照组相比,NMDA受体的NR1亚基的表达未发生显著的变化（P > 0.05）,250 μmol/L和300 μmol/L剂量组NR2B蛋白的相对表达水平以及Ca2+浓度、谷氨酸水平均高于对照组和200 μmol/L剂量组（P < 0.05）;随着CORM-2浓度的增加,PC12细胞的凋亡率也呈剂量依赖性增加（P < 0.05）。
  结论  随着COMR-2浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低。CORM-2可使PC12细胞谷氨酸信号通路激活。CORM-2可能通过激活谷氨酸信号通路引起Ca2+内流,进而导致细胞凋亡。这些结果对认识CO中毒机制具有重要意义。
     

鱼藤酮对PC12细胞凋亡及ERK1／2蛋白表达的影响

目的 观察鱼藤酮对PC12细胞凋亡以及细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)蛋白表达的影响,以深入探讨ERK1/2蛋白表达与鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡之间的关系.方法 通过建立PC12细胞鱼藤酮染毒模型,光镜下观察鱼藤酮对PC12细胞形态的影响;流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率的改变;Western蛋白印迹法和免疫组化法检测PC12细胞ERK1/2蛋白表达及定位情况.结果 鱼藤酮处理24 h后PC12细胞形态明显改变且凋亡率增加,20 μmol/LMEK抑制剂PD98059预处理1 h与单纯鱼藤酮染毒比较凋亡率没有显著性改变;磷酸化ERK1/2蛋白表达量随着鱼藤酮剂量的加大而增高,且活化的ERK1/2蛋白主要集中在胞浆内表达.结论 鱼藤酮体外作用可以诱导PC12细胞凋亡以及ERK1/2蛋白磷酸化表达增强.     

鱼藤酮对大鼠神经细胞谷氨酸代谢关键酶表达的影响

[目的]观察鱼藤酮对神经细胞谷氨酸代谢关键酶表达的影响. [方法]在体外建立星形胶质细胞与PCI2细胞共培养鱼藤酮染毒模型,采用RT-PCR法检测谷氧酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)与各氨酰胺酶(phosphate activated glutaminase,PAG)mRNA的表达,细胞免疫化学观察GS和PAG蛋白表达. [结果]随着染毒剂量的增加,星形胶质细胞GS mRNA的表达逐渐降低,GS阳性颗粒着色减弱;与对照组比较,0.5和1.0μmol/L鱼藤酮染毒组PCI2细胞PAG mRNA表达明显增强(P<0.05),PAG阳性产物强表达. [结论]鱼藤酮可干扰神经细胞谷氨酸代谢关键酶GS和PAG基因和蛋白表达,造成各氨酸代谢失衡.     

氧化应激对鱼藤酮PC12细胞中的毒性作用

目的探讨氧化应激在鱼藤酮多巴胺能神经元PC12细胞中的毒性作用。方法用高分化的PC12细胞作为多巴胺能神经元的细胞模型,经不同浓度的鱼藤酮处理,观察细胞形态及其超微结构,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性和增殖抑制及细胞代谢状态,生化分析法检测SOD活力、MDA含量,特异性DCF-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。结果经鱼藤酮处理24 h后PC12细胞突起样结构消失,细胞体积变小、形态变圆,部分细胞呈悬浮状态;细胞线粒体代谢和超微结构发生改变;PC12细胞增殖抑制,细胞活性降低;细胞内的SOD活力下降,MDA含量增高;荧光探针标记显示PC12细胞荧光强度增加,细胞内ROS含量增加。结论鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,可抑制细胞增殖,影响线粒体代谢,氧化应激可能在鱼藤酮的多巴胺神经元毒性机制中起作用。     

叔丁基对苯二酚对百草枯神经细胞毒性和氧化应激的拮抗作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理对百草枯(PQ)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性和氧化应激的拮抗作用.方法 将PC12细胞分为溶剂对照组及100、300 μmol PQ处理组.用终浓度为40 μmol/LtBHQ预处理PC12细胞4 h再分别用终浓度0、100、300 μmol/L PQ处理细胞24或48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性,用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μ,mol/L PQ处理PC12细胞24 h细胞存活率分别较100、300 μmol/L PQ组增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100μmol/LPQ处理PC12细胞48 h细胞存活率较100μmol/LPQ处理组细胞存活率增高,差异有统计学意义(P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/PQ处理PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别较100、300 μmol/L PQ下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/LPQ处理PC12细胞24 h后,MDA含量分别较100、300 μmol/L PQ组下降,MDA含量分别为相应对照组的0.61、0.57倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ预处理可削弱PQ致PC12细胞的细胞毒性、细胞凋亡以及氧化应激作用.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of the tert-butylhydroquinone (tBHQ)pretreatment on neurotoxicity and oxidative stress induced by paraquat (PQ) in PC12 cells. Methods Cytoyoxicity of PC12 cells was measured by MTT assay, following the PC12 cells treatment with different concentrations of 100, 300 μmol/L PQ for 24 h and 48 h. PC12 cells were pretreated with or without 40 μmol/L tBHQ for 4 h, PC 12 cells were exposed to PQ at the doses of 0, 100, 300 μmol/L for 24 h and 48 h, respectively.The viability of PC 12 cells was measured by MTT assay, the apoptosis rates of PC 12 cells were detected by flow cytometry (FCM) and the malondialdehyde (MDA) levels of PC 12 cells were examine by thiobarbituric acid (TBA) method. Results When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the viability of PC 12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC 12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). When the exposure dose of PQ was 100μmol/L for 48 h, the viability of PC12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.01). When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the apoptosis rates and MDA levels of PC12 cells pretreated with tBHQ were significantly lower than those of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions tBHQ preteatment can reduce the cytotoxicity, apoptosis and oxidative stress induced by PQ in PC12 cells.     

Alleviating Effects of Black Soybean Peptide on Oxidative Stress Injury Induced by Lead in PC12 Cells via Keap1/Nrf2/TXNIP Signaling Pathway

Many researchers have found that Pb exposure can cause oxidative stress damage to the body’s tissue. Black soybean peptide (BSP) has a variety of physiological functions, especially in terms of oxidative stress. Nevertheless, the mitigation function of BSPs on Pb-induced oxidative stress damage in PC12 cells has not been clearly defined. In this study, cell viability was detected by CCK8. Oxidative stress indicators, such as ROS, GSH/GSSG, MDA, SOD, CAT, GPx, and GR, were tested with biochemical kit. Protein expression of Keap1, Nrf2, and TXNIP was measured by Western blot. Compared with the control group, Pb reduced the cell viability of PC12 cells. However, BSP treatment significantly increased the viability of PC12 cells induced by lead exposure (p < 0.05). Lead can enrich the contents of MDA and ROS, but decrease the amount of CAT, SOD, GR, GPx, and GSH/GSSG in PC12 cells, while BSP can alleviate it (p < 0.05). Lead can enhance the expression of Keap1 and TXNIP proteins, but reduce Nrf2 expression. In contrast, BSPs reversed this phenomenon (p < 0.05). BSPs can alleviate oxidative stress injury induced by lead in PC12 cells through the Keap1/Nrf2/TXNIP signaling pathway.     

单唾液酸神经节苷脂对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对2,5-己二酮(2,5-HD)诱导PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,2,5-HD、GM1及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002单独或联合处理细胞,MTT法检测细胞存活率,Giemsa染色法观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(P-Akt)蛋白的表达。结果GM1可以有效地改善凋亡引起的细胞形态学改变,提高细胞存活率(P<0.05),最高可提高36.35%;降低DNA断裂程度,减少凋亡率(P<0.001),最明显可降低69.36%。GM1能够促进Akt磷酸化,LY294002可以阻断这种作用。结论GM1对2,5-HD诱导的PC12细胞凋亡有保护作用。该保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。     

白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白所致细胞损伤的防护作用

目的探讨白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法白藜芦醇预处理细胞,再加入不同浓度oxLDL,通过噻唑蓝(MTT)实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL实验及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase3)活性测定,观察白藜芦醇对细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase3活性的影响。结果10mg/LoxLDL组细胞存活率、LDH释放率、TUNEL阳性细胞数、Caspase3活性分别为(62±3)%、(23±3)%、(26±5)%和(0811±0049)mol·min-1·μg-1;10mg/LoxLDL+50μmol/L白藜芦醇组分别为(84±7)%、(13±4)%、(12±4)%和(0553±0048)mol·min-1·μg-1,两组比较差异有统计学意义。结论白藜芦醇具有减轻oxLDL致PC12细胞的毒性作用;对PC12细胞具有神经保护作用。     

低剂量鱼藤酮诱导BV2细胞IL-6产物及montelukast的作用

目的：在体外帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型观察低剂量鱼藤酮诱导的BV2小胶质细胞白介素6（IL-6）生成及montelukast的作用。方法以PD诱导因子鱼藤酮处理小鼠小胶质细胞系BV2细胞。 Western blot方法检测BV2细胞前炎症细胞因子 IL-6蛋白表达, ELISA 方法检测 BV2细胞 IL-6释放。观察 CysLT1R 拮抗剂montelukast对鱼藤酮诱导的小胶质细胞IL-6的影响。结果低剂量鱼藤酮（0．3～3 nM）浓度依赖性地增加IL-6蛋白表达;以鱼藤酮（3 nM）处理细胞1～24h,时间依赖性的诱导IL-6释放增加。 CysLT1R拮抗剂montelukast降低鱼藤酮增高的BV2细胞IL-6水平。结论低剂量鱼藤酮诱导小胶质细胞前炎症细胞因子IL-6增加,montelukast抑制鱼藤酮诱导BV2细胞效应。     

维生素E抑制锰诱导的PC12细胞毒性的实验研究

目的观察维生素E对锰诱导的PC12细胞毒性的抑制效应,从而为锰神经毒性的防护提供可能的途径。方法 MTT、TUNEL、姬姆萨染色、流式细胞仪检测细胞毒性;试剂盒检测MDA含量以及T-SOD、MnSOD活性的变化。结果锰可以诱导PC12细胞氧化应激水平显著增高,显示为MDA含量的增高和T-SOD、MnSOD活性代偿性升高。维生素E可以抑制锰诱导的PC12细胞毒性,表现为其可抑制锰诱导的细胞活力的下降以及凋亡率的升高。结论维生素E作为抗氧化剂可以抑制由锰诱导的PC12细胞的一系列细胞毒性,补充维生素可作为一种防护锰毒性的有效手段。     

一氧化氮合酶抑制剂干预前后软骨藻酸对PC12细胞存活率及NO的影响

[目的]研究一氧化氮合酶（NOS）抑制剂干预前后软骨藻酸（DA）对PC12细胞存活率及其产生一氧化氮（NO）的影响。[方法]MTT法检测PC12细胞的存活率;Greiss法测定PC12细胞培养基上清中的NO含量。L-NAME干预前,MTT实验分为对照组及0．0001、0．001、0．01、0．1、1．0μmol／LDA处理组;NO含量测定时分为对照组及0．01、0．1、1．0μmol／LDA处理组。L-NAME干预时,MTT实验及NO含量测定均分为对照组,单纯1．0μmol／LDA处理组,250、1000、2500μmol／L L-NAME＋1μmol／LDA处理组。[结果]随着DA染毒剂量的升高,PC12细胞的存活率逐渐下降;0．01、0．1、1．0μmol／LDA作用PC12细胞24h后,细胞培养基上清NO水平均升高,差异有统计学意义,P〈0．05;L-NAME浓度为1000、2500μmol／L干预时,PC12细胞存活率增加,NO生成减少。[结论]DA对PC12细胞具有毒性作用,可以降低细胞的存活率,诱导细胞NO生成增加;NOS抑制剂具有一定保护作用,可明显抑制DA诱导PC12细胞NO生成增加。