外泌体lncRNA在肝细胞癌中的作用

<正>肝细胞癌(HCC)是最常见的原发性肝癌,在中国,HCC发病率、病死率分别位于恶性肿瘤的第6位和第3位^[1]。HCC发生的具体病因尚未明确,其主要危险因素包括乙型/丙型肝炎病毒感染、酗酒、非酒精性脂肪性肝炎等^[2]。恶性肿瘤严重影响人类的健康,由于恶性肿瘤的发病机制复杂、进展迅速且不易早期诊断,因此,当前恶性肿瘤的早期诊断、精准诊疗成为研究热点。肿瘤的发生、发展依赖于肿瘤细胞和肿瘤微环境之间的相互作用,     

血浆外泌体非编码RNA H19在乳腺癌中的诊断价值

目的探讨血浆外泌体长链非编码RNA(lncRNA)H19在乳腺癌患者的诊断价值。方法用RT-PCR分别检测50例乳腺癌患者、25例乳腺良性病变者及25例体检健康者血浆外泌体及全血浆H19的表达水平,分析血浆外泌体H19表达水平与乳腺癌患者临床病理参数的相关性,绘制ROC曲线分析血浆外泌体与全血浆中H19对乳腺癌的诊断价值。结果 H19在乳腺癌患者血浆外泌体中的表达水平高于乳腺癌、乳腺良性病变者及体检健康者全血浆(P均<0.01);相关性分析结果显示,H19与雌激素受体、孕激素受体、c-erbB-2、Ki-67、P120(膜)及淋巴结转移相关(P均<0.05);血浆外泌体H19单独诊断乳腺癌的曲线下面积(AUCROC)为0.779,敏感性和特异性均为70%,均明显高于全血浆组。结论血浆外泌体高表达的H19可能成为乳腺癌诊断的一个潜在的生物学标志物。     

LncRNA NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 轴调控结直肠癌细胞的生物学功能研究

目的 探究长链非编码核糖核酸（long non-coding RNAs,LncRNAs）NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 调控轴对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库分析结直肠癌组织和癌旁组织NEAT1,miR-23b-3p 和KLF3 表达水平,并计算三者之间的相关性。以结直肠癌细胞系（HT29 细胞）作为实验对象,实验被分为Control 组（空白对照组）、NC 组（空载体组）和si-NEAT1 组（NEAT1 干扰组）。CCK8 检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡、周期情况,Transwell 检测各组细胞的侵袭情况,划痕实验检测各组细胞的迁移情况。在线工具starbase 等预测能与miR-23b-3p 靶向结合的基因,采用人胚胎肾细胞293（humanembryonic kidney cells 293,HEK293）进行双荧光素酶报告基因实验验证。qRT-PCR 检测NC 组、si-NEAT1 组、si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组（共转染si-NEAT1 和miR-23b-3p inhibitor）的miR-23b-3p 和KLF3 转录水平,免疫印记法检测以上三组KLF3 蛋白质表达水平。结果 结直肠癌组织NEAT1[5.29（4.55,5.95）], KLF3[4.94（4.62,5.24）] 表达高于癌旁组织[4.79（4.26,5.19）, 4.49（4.24,4.80）],差异有统计学意义（U=6 677, P=0.001;U=28 257.5, P ＜ 0.001),miR-23b-3p 表达低于癌旁组织[9.99（9.49,10.6） vs 10.80（10.62,10.88）],差异有统计学意义（U=2 906, P=0.004）。结直肠癌组织中,NEAT1 和KLF3 表达呈正相关（r =0.26, P ＜ 0.01）,miR-23b-3p 和NEAT1, KLF3 表达量均呈负相关（r=-0.14, P=0.008; r =-0.17, P=0.001）。与对照组相比,si-NEAT1 组使结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力降低,凋亡增加,细胞被阻滞在S 期,结果差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。starbase 预测miR-23b-3p 靶基因为NEAT1 和KLF3。双荧光素酶报告基因实验也证实miR-23b-3p 分子能互补结合NEAT1 和KLF3 3’UTR。与NC 组相比,si-NEAT1组miR-23b-3p 表达上调,KLF3 转录和蛋白水平下调;与si-NEAT1 组相比,si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组miR-23b-3p 表达下调,KLF3 转录和蛋白水平上调。结论 NEAT1 可通过直接靶向HT29 细胞中的miR-23b-3p 上调KLF3 表达,增强结直肠癌细胞的增值、侵袭和迁移等。     

血清lncRNA H19在非小细胞肺癌筛查及预后评估中的价值

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清lnc RNA H19表达水平及其筛查和预后价值。方法实时荧光定量PCR检测70例NSCLC患者和60例体检健康者血清lnc RNA H19表达水平,并分析血清H19水平与NSCLC患者临床病理参数的关系;利用ROC曲线分析H19对NSCLC的筛查效能;Kaplan-Meier法绘制不同H19水平的NSCLC患者生存曲线,Cox多因素回归模型分析NSCLC预后的独立危险因素。结果NSCLC组血清H19表达水平(1.72±0.27)明显高于健康人对照组(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=19.911,P0.01)。ROC曲线结果表明,血清H19筛查NSCLC的AUC~(ROC)为0.864,特异性为81.7%,敏感性为74.3%。血清H19表达与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移有关(P均0.05),但与年龄、性别、吸烟史、分化程度、病理分型等无关(P0.05)。H19高表达组中位生存时间为35个月,而H19低表达组中位生存时间为49个月,差异有统计学意义(Log-rankχ~2=4.874,P=0.027)。TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移、血清H19表达水平是影响NSCLC患者预后的独立风险因素(P均0.05)。结论NSCLC患者血清Lnc RNA H19明显升高,并且与NSCLC不良预后密切相关,有望成为NSCLC筛查和预后评估的分子标志物。     

血清外泌体源性长链非编码RNA H19在骨肉瘤中的表达及其临床意义

摘要:目的?检测骨肉瘤患者血清外泌体长链非编码RNA(LncRNA) H19的表达水平，分析其与患者临床病理参数的关系，探讨其在骨肉瘤诊断中的价值。方法?采用实时荧光定量RT-PCR分别检测46例骨肉瘤患者及50例体检健康者血清外泌体LncRNA H19的表达水平；采用ELISA法检测各组血清中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)的表达水平；分析血清外泌体LncRNA H19表达水平与骨肉瘤患者临床病理参数的相关性；绘制ROC曲线，并分析血清外泌体LncRNA H19对骨肉瘤的诊断价值。结果?血清外泌体LncRNA H19的表达水平与骨肉瘤患者的病程及是否发生远处转移相关，差异有统计学意义(P均<0.01)，而与患者的性别、年龄、居住地及发病部位均无显著相关性(P均>0.05)；骨肉瘤患者血清外泌体中LncRNA H19的表达水平显著高于健康人对照组(P<0.01)；血清外泌体LncRNA H19诊断骨肉瘤的ROC曲线下面积(AUCROC) 为 0.881，敏感性为87.2%，特异性为75.6%，均高于其余各单项指标组。结论?外泌体高表达的LncRNA H19可能成为骨肉瘤诊断、靶点的个体化治疗及疗效监测的生物学标志物。     

长链非编码RNA H19在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)与肿瘤的发生、发展密切相关。H19是位于人类染色体11p15.5上,长度为2 300 bp,并可与胰岛素样生在因子2(IGF-2)相互作用,表现出父系印记的lncRNA分子。近年来的研究发现,H19在多种肿瘤中的表达异常,且与患者的不良预后紧密相关,H19可与多种癌基因或抑癌基因(如c-Myc、p53)以及microRNA(miRNA)相互作用,从而在肿瘤的生长、增殖、分化凋亡及侵袭转移等过程中发挥重要功能。进一步研究H19的生物学功能及具体作用机制,有助于深入了解肿瘤的特性,为肿瘤的早期诊断、预后判断及基因治疗提供依据。     

长链非编码RNA H19在肿瘤中作用机制的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸、不具有编码蛋白质功能的RNA转录本。近年来研究发现LncRNA通过转录、转录后及表观遗传学等调控基因表达,尤其是对肿瘤的发生、发展、增殖、转移和预后等病理过程有密切的联系。该文主要针对H19在肿瘤中作用机制研究作一综述。     

lncRNA H19、VEGF、TSGF在卵巢癌中的表达及与卵巢超声血流参数的相关性

目的 探讨长链非编码RNA H19(lncRNA H19)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)在卵巢癌中的表达,并分析其与卵巢超声血流参数的相关性。方法 选取2019年1月至2020年12月西安高新医院收治的卵巢癌患者116例作为卵巢癌组,另选取同期100例卵巢良性肿瘤患者作为良性组,100例健康体检女性作为对照组。检测3组研究对象的lncRNA H19、VEGF、TSGF水平,并测定其卵巢超声血流参数[收缩期峰值血流速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)、血管搏动指数(PI)、阻力指数(RI)]。采用受试者工作特征曲线分析lncRNA H19、VEGF、TSGF对卵巢癌的诊断价值,采用Pearson相关分析卵巢癌患者lncRNA H19、VEGF、TSGF水平与卵巢超声血流参数的相关性。结果 卵巢癌组lncRNA H19、VEGF、TSGF水平明显高于良性组、对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA H19、VEGF、TSGF联合检测诊断卵巢癌的灵敏度和特异度分别为88.3%和85.9%,曲线下面积为0.902,高于各项指标单独检测。...     

lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织,qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞,转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后,CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织,miR-769-5p表达低于癌旁组织（P <0.05）。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后,HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高（P <0.05）。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3...     

癌组织lncRNA H19和血清前列腺特异抗原水平与前列腺癌病理特征及预后的相关性

目的分析癌组织长链非编码RNA(lncRNA)H19和血清前列腺特异抗原(PSA)水平与前列腺癌(PCa)病理特征及预后的相关性。方法选取89例PCa患者作为病例组,选取同期100例良性前列腺增生患者作为对照组,对两组患者术中切除前列腺组织lncRNA H19相对表达量和血清PSA水平进行检测。结果病例组患者病灶组织中lncRNA H19相对表达量和血清PSA水平均高于对照组。高lncRNA H19表达组患者的总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)均低于低lncRNA H19表达组(P<0.05)。Cox风险回归模型分析结果显示,前列腺患者术后OS与病灶组织lncRNA H19相对表达量、临床分期、淋巴结转移情况、Gleason评分、分化程度具有相关性;术后PFS与病灶组织lncRNA H19相对表达量、淋巴结转移情况、Gleason评分具有相关性(P<0.05)。结论PCa癌组织中存在lncRNA H19相对表达量上调,其表达水平与肿瘤的病理特征和患者的预后具有相关性,可作为预测患者预后的辅助指标和潜在治疗靶点,患者术前血清PSA水平虽与病理特征具有相关性,但与患者的预后缺乏相关性。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达.将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 in...     

类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA HOTAIR、XIST和H19表达研究

目的探讨3种长链非编码RNA(lncRNA) HOTAIR、XIST和H19在类风湿关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)和健康人对照组血清中的差异表达。方法收取50例RA疾病组、50例SLE疾病对照组和60例健康人对照组血清,共160例血清标本,提取血清总RNA,利用RT-qPCR方法分析HOTAIR、XIST和H19 3种lncRNA表达情况。用Spearman相关性分析探讨RA患者疾病活动指数(DAS28)与HOTAIR表达量的相关性。结果 RA组与健康人对照组和SLE疾病对照组相比,血清HOTAIR表达量显著增加(P0.01),XIST在RA和对照组之间表达量差异无统计学意义; RA患者血清中HOTAIR表达值与DAS28评分呈正相关(R~2=0.27,P=0.002),且DAS28评分≥5.1的疾病高度活动组的HOTAIR表达值显著高于3.2DAS28评分5.1的疾病活动组(P0.01);血清HOTAIR表达量与血清C反应蛋白(CRP)存在正相关关系(R~2=0.192,P=0.002)。结论LncRNA HOTAIR在RA患者血清中的表达量显著性升高且与DAS28评分呈显著正相关关系,血清中HOTAIR有可能成为诊断RA的潜在生物标志物。     

circVAPA promotes the proliferation,migration and invasion of oral cancer cells through the miR-132/HOXA7 axis

ObjectiveTo study the relationship between the circular RNA vesicle-associated membrane protein-associated protein A (circVAPA) and the pathogenesis of oral squamous cell carcinoma.MethodsThe expression of circVAPA was detected by RT-qPCR. In vitro loss-of-function experiments were performed in Cal-27 cells. The malignant phenotype of cells was evaluated by cell counting kit-8, clone formation and transwell assays. Luciferase reporter assays were used to assess the circVAPA/miR-132/homeobox A (HOXA) regulatory axis.ResultscircVAPA expression was significantly increased in oral cancer tissues and cells. The overall survival and progression-free survival of patients with oral cancer who exhibited high circVAPA expression were significantly shorter compared with those with low expression. circVAPA expression was closely related to tumor size, TNM stage and distant metastasis. circVAPA knockdown reduced the proliferation, invasion and migration of Cal-27 cells. MiR-132 was identified as a target of circVAPA in Cal-27 cells. Cotransfection with si-circVAPA and miR-132 inhibitor reversed the inhibitory effect of circVAPA knockdown on cell malignant phenotypes. HOXA7 was further identified as a downstream target of miR-132.ConclusioncircVAPA is highly expressed in oral cancer, and its abnormal expression might affect the proliferation, invasion and migration of oral cancer cells by modulating the miR-132/HOXA7 signaling axis.     

长链非编码RNA LINC00473对人胃癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨LINC00473在人胃癌细胞系中的表达水平及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测胃癌细胞中LINC00473的表达水平;转染靶向LINC00473的siRNA片段或LINC00473过表达载体以构建敲减或过表达的胃癌细胞系;通过CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、western blot实验检测细胞的增殖和迁移能力以及EMT相关蛋白标志物表达水平的变化。结果与GES-1细胞相比,LINC00473在胃癌细胞中的表达水平明显降低(P0.05)。与siNC转染对照组相比,敲减LINC00473表达后,靶细胞的增殖能力(F=163.10,P0.01)、克隆形成(t=3.29,P0.05)和迁移能力(t=4.68,P0.05)明显增加;E-cadherin表达减弱(t=4.08,P0.05),N-cadherin(t=5.06,P0.01)、Snail(t=7.69,P0.01)和Vimentin(t=3.82,P0.05)蛋白的表达水平升高。与Vector转染对照组相比,上调LINC00473表达后靶细胞的增殖能力(F=186.00,P0.01)、克隆形成(t=3.22,P0.05)和迁移能力(t=5.52,P0.01)明显下降;E-cadherin表达升高(t=2.90,P0.05),N-cadherin(t=7.44,P0.01)、Snail(t=2.78,P0.05)和Vimentin(t=4.64,P0.01)蛋白的表达水平降低。结论敲减LINC00473的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移的能力,可能通过调控EMT参与胃癌细胞的迁移。     

siRNA阻断B7H1在人胎盘间充质干细胞上表达对其黏附和迁移的影响

背景:人胎盘间充质干细胞表达的共刺激分子B7H1在其负性免疫调节作用中发挥着重要作用,但B7H1对人胎盘间充质干细胞生物学行为的影响尚未见报道。目的:观察阻断B7H1对人胎盘间充质干细胞黏附和迁移的影响。方法:采用消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞,体外扩增培养3代后用于实验。用流式细胞仪及RT-PCR检测人胎盘间充质干细胞对B7H1的表达。用阳离子脂质体法将针对B7H1的siRNA转染入细胞,应用RT-PCR法检测B7H1基因在mRNA水平的变化。然后应用细胞计数法检测人胎盘间充质干细胞的黏附能力,Transwell法检测迁移能力。结果与结论:人胎盘间充质干细胞高表达B7H1,siRNA转染能有效阻断B7H1的表达;接种后0.5h阻断组人胎盘间充质干细胞的黏附率与对照组相比差异无显著性意义,但在接种后1,3h阻断组细胞黏附率均明显高于对照组(P<0.05);Transwell检测结果显示,在SDF-1α单独存在条件下、DMEM-LG完全培养基或者人胎盘间充质干细胞培养上清条件下,阻断组细胞的迁移数量均比对照组显著减少(P<0.01)。结果表明阻断B7H1的表达后,人胎盘间充质干细胞的黏附能力增强,而迁移能力受到抑制。提示B7H1在人胎盘间充质干细胞的黏附和迁移中发挥重要作用。     

LncRNA AFAP1-AS1 promotes osteoblast differentiation of human aortic valve interstitial cells through regulating miR-155/SMAD5 axis

AimDegenerative calcific aortic valve disease (DCAVD) is a common valve disease characterized by massive calcium deposits in the aortic valve. Osteoblast differentiation of valve interstitial cells (VICs) is responsible for the formation of calcific nodules. This study aims to explore the function and underlying mechanism of long non-coding RNA (lncRNA) AFAP1-AS1 (actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1) in the pathogenesis of DCAVD.MethodsAFAP1-AS1, miR-155 and mRNA levels were detected by qRT-PCR. Protein levels were measured by Western blot. Calcification deposition was examined by Alizarin Red staining. The interaction between AFAP1-AS1 and miR-155, as well as miR-155 and SMAD5 was evaluated using luciferase reporter assay.ResultsAFAP1-AS1 expression was increased both in calcified aortic valves from DCAVD patients and after osteogenic induction in human VICs. Furthermore, AFAP1-AS1 overexpression promoted osteogenic differentiation of VICs, whereas AFAP1-AS1 knockdown inhibited osteogenic differentiation. Mechanistically, AFAP1-AS1 acted as a sponge for miR-155 to elevate SMAD5 expression. Further functional assays revealed that miR-155 mimic and SMAD5 silencing effectively reversed AFAP1-AS1-promoted osteogenic differentiation of VICs.ConclusionCollectively, AFAP1-AS1 promotes osteogenic differentiation of VICs, at least in part, by sponging miR-155 to upregulate SMAD5. This study sheds new light on lncRNA-directed therapeutics in DCAVD.     

Vimentin silencing effect on invasive and migration characteristics of doxorubicin resistant MCF-7 cells

Chemotherapy is one of the well-known treatments in cancer therapy. The effectiveness of chemotherapy is limited by several factors one of which is the emergence of multidrug resistance (MDR). One of the major mechanisms of MDR is the activity of several ATP binding cassette (ABC) transporters that pump drugs out of the cells. Doxorubicin intercalates and inhibits DNA replication; it is a powerful chemotherapeutic agent. However, it causes development of MDR in tumor cells. Vimentin is a type III intermediate filament protein that is expressed frequently in epithelial carcinomas correlating with invasiveness and also poor prognosis of cancer. There are several studies that have shown the connection between expression level of vimentin and invasiveness of tumor cells. In this study, MCF-7 cell line which is a model for human mammary carcinoma, and a doxorubicin resistant subline (MCF-7/Dox) were used. The resistant subline was previously obtained by stepwise selection in our laboratory. In the resistant cells, high levels of vimentin expression were observed. The main purpose of this study was to investigate changes in invasive and migration characteristics of MCF-7/Dox cell line, after transient silencing of vimentin gene by specific siRNA.