隔日限食减轻脊髓损伤大鼠炎症反应的芳香烃受体/细胞因子信号传导抑制因子2/核转录因子-κB信号通路机制

目的 探讨芳香烃受体/细胞因子信号传导抑制因子2/核转录因子-κB (AHR/SOCS2/NF-κB)信号通路在隔日限食(EODF)疗法减轻脊髓损伤炎症反应中的作用。方法 36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组和EODF组,每组12只。后两组复制C₅脊髓半侧钳夹模型。术后EODF组予24 h禁食和摄食交替,不限水,共2周。术前和术后1 d、7 d、14 d行梳理试验。术后14 d取各组脊髓组织,每组4只行HE染色观察病理损伤,4只采用Western blotting检测AHR、SOCS2和NF-κB水平,4只采用逆转录实时定量聚合酶链反应检测AHR、SOCS2、核因子κB抑制因子α (IκBα)、NF-κB、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)的mRNA水平。结果 与假手术组相比,另两组各时间点梳理试验评分降低(P < 0.05),出现空腔、水肿、结构紊乱等病理改变;与模型组相比,EODF组术后14 d梳理试验评分增加(P < 0.05),损伤减轻。与模型组相比,EODF组AHR、SOCS2 mRNA和蛋白表达增高(P < 0.05),NF-κB mRNA和蛋白表达降低(P < 0.05),IκBα mRNA表达增高(P < 0.05),TNF-α、IL-6 mRNA表达降低(P < 0.05)。结论 EODF可促进脊髓损伤大鼠患侧前肢运动功能恢复,减轻损伤和炎症反应,可能与激活AHR/SOCS2/NF-κB信号通路有关。     

速激肽受体2对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的: 利用速激肽受体2（tachykinin receptor 2,Tacr2）基因敲除小鼠及诱导溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠模型,探讨Tacr2在小鼠UC发生、发展中的作用。方法: 小鼠按照基因型分成野生型组和基因敲除（纯合子）组,再按照给药与否进一步分成野生型造模组、纯合子造模组、野生型空白组、纯合子空白组。给造模组小鼠口服右旋葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate, DSS）构建UC小鼠模型,观察其UC活动指数及结肠组织中病理学改变、炎症因子及上游转录因子核因子NF-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的变化。结果: Tacr2基因敲除的纯合子小鼠经DSS诱导的UC症状比野生型造模组小鼠明显加重。进一步分析基础状态下结肠的免疫活性,发现在基础状态下,纯合子小鼠与野生型小鼠相比,结肠免疫活性明显降低,表现为结肠黏膜中 IL-1β、TNF-α、IL-6和NF-κB水平降低。结论: Tacr2对UC的发生、发展有抑制作用。     

与NF-κB相关的微RNA对多发性骨髓瘤的影响

多发性骨髓瘤（MM）发病率逐年上升, 是血液系统较为常见的肿瘤之一, 目前MM仍不可治愈, 其中复发及耐药是亟需攻克的两大难题。目前已经明确核因子-κB（NF-κB）在MM发病机制中发挥了重要作用, 对MM的发生发展及对MM治疗的耐药性有着重要的临床意义, 微RNA（miR）对肿瘤的增殖、凋亡等有重要作用, 是近年来的研究热点。随着研究的深入, 学者们发现MM中多种miR与NF-κB具有相互调节作用。该文主要阐述了与NF-κB相关的miR对MM发病机制及治疗的影响。     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

脉冲电磁场对椎间盘退行性病变大鼠A2A腺苷受体及p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察脉冲电磁场（PEMF）对椎间盘退行性病变（IDD）大鼠A2A腺苷受体（A2AR）及p38 MAPK信号通路的影响。 方法 采用随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组、IDD模型组（简称模型组）、PEMF组和PEMF联合CGS-21680治疗组（简称观察组）。将模型组、PEMF组及观察组大鼠制成IDD动物模型，PEMF组于制模后给予PEMF干预，观察组则给予PEMF干预并注射A2AR激动剂CGS-21680。于造模8周后采用番红O-快绿染色评估各组大鼠椎间盘病理改变，同时检测各组大鼠椎间盘A2AR、环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A(PKA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）、基质金属蛋白酶-3（MMP3）表达水平。 结果 模型组大鼠髓核组织皱缩，纤维成分及软骨细胞增多，观察组大鼠髓核形态基本趋于正常，纤维环完整无破裂。模型组椎间盘组织A2AR蛋白表达及mRNA水平均高于对照组，观察组A2AR蛋白表达及mRNA水平均显著高于其他各组（P<0.05）。PEMF组和观察组椎间盘cAMP含量及PKA mRNA表达均较模型组增高，且观察组与模型组间差异具有统计学意义（P<0.05）。模型组大鼠椎间盘p38 MAPK、p-p38 MAPK含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著高于对照组（P<0.05），PEMF组和观察组p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均有不同程度降低，且观察组上述指标数值均显著低于模型组（P<0.05），p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值亦显著低于PEMF组（P<0.05）。模型组大鼠Caspase-3蛋白含量及mRNA表达均显著高于对照组，PEMF组及观察组上述指标含量均较模型组明显降低（P<0.05）。模型组大鼠MMP3含量较对照组显著升高，Col-Ⅱ含量则明显下降；PEMF组、观察组MMP3含量均较模型组降低，Col-Ⅱ表达均较模型组增高，并且观察组上述指标含量与模型组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论 炎性因子刺激能活化p38 MAPK信号通路并诱导细胞凋亡，这也是促进IDD大鼠病变的重要原因之一。PEMF联合A2AR激动剂干预能激活A2AR/cAMP/PKA信号通路，进而抑制p38 MAPK磷酸化，减少髓核细胞凋亡，缓解IDD损伤。     

身痛逐瘀汤对腰椎退变模型大鼠纤维环细胞p38MAPK信号通路的影响

目的:观察身痛逐瘀汤对腰椎退变模型大鼠纤维环细胞p38MAPK信号通路的影响。方法:24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为身痛逐瘀汤组、模型组、假手术组,每组8只。身痛逐瘀汤组、模型组采用纤维环穿刺法建立大鼠腰椎退变模型,造模1个月后行中药灌胃治疗,身痛逐瘀汤组予身痛逐瘀汤灌胃,模型组及假手术组予等量生理盐水灌胃,每日1次,连续4周。治疗结束后处死大鼠取出椎间盘,采用免疫组化法观察纤维环细胞p-p38、p38和NF-κB蛋白表达,Western Blot法测定p-p38、p38和NF-κB蛋白含量。结果:身痛逐瘀汤组p-p38、NF-κB蛋白表达较模型组明显减少(P0.05),模型组较假手术组明显增加(P0.01),假手术组p-p38、NF-κB蛋白少或无表达;3组间p38蛋白表达差异无统计学差异(P0.05)。结论:身痛逐瘀汤可延缓椎间盘退变,其机制可能与下调p-p38和NF-κB蛋白表达,抑制p38MAPK信号通路激活有关。     

升降散对脓毒症大鼠心肌p38MAPK蛋白磷酸化水平的影响

目的:探讨升降散保护脓毒症心肌损伤的分子机制。方法:将雄性成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、升降散组和p38抑制组。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,造模后4、8、12、24h进行观察。升降散组和p38抑制组大鼠分别于造模前2h给予升降散灌胃和SB203580皮下注射。留取腹主动脉血标本和心脏组织作相关检测。观察和检测各时间点大鼠死亡率、血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、B型利钠肽(BNP)、白介素-6(IL-6)水平以及心肌p-p38~(MAPK)蛋白、p-p38~(MAPK) mRNA、IL-6mRNA的表达。结果:模型组大鼠24h死亡率25%,升降散组、p38抑制组大鼠死亡率均为15%,组间差异无统计学意义。模型组大鼠血清cTnI、BNP升高;升降散组cTnI造模后8、12、24h较模型组改善(P0.001),BNP造模后4、12、24h较模型组改善(P0.05)。升降散组和p38抑制组cTnI、BNP造模后各时间点差异无统计学意义。模型组大鼠血清IL-6升高,升降散组各时间点IL-6改善(P0.001)。模型组大鼠心肌各时间点p-p38~(MAPK)蛋白水平升高,升降散组各时间点p-p38~(MAPK)蛋白水平均改善(P0.05)。模型组大鼠心肌p-p38~(MAPK) mRNA表达升高,升降散组p-p38~(MAPK) mRNA在8、12、24h改善(P0.05)。模型组大鼠心肌IL-6mRNA升高,升降散组和p38抑制组造模后4、8、12h均改善(P0.05),升降散组IL-6mRNA造模后12h下降优于p38抑制组(P0.05)。结论:升降散可有效降低脓毒症早期大鼠血清cTnI和BNP。升降散改善脓毒症心肌损伤可能与其下调脓毒症早期大鼠心肌p-p38~(MAPK)蛋白水平,降低p-p38~(MAPK) mRNA、IL-6mRNA表达,从而抑制过度炎症反应有关。     

p38MAPK抑制剂对钛颗粒刺激巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的:探讨p38MAPK抑制剂(SB203580)对外培养的RAW246.7细胞分泌炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]的影响。方法:以体外正常培养RAW246.7细胞为A组,以0.1 mg/m L钛颗粒(Ti Ps)刺激RAW246.7细胞为B组,以10μmol/L SB203580干预的B组细胞为C组。Western blot检测p-p38MAPK蛋白表达,ELISA检测细胞分泌TNF-α,IL-6水平。结果:与A组比较,B组p-p38MAPK蛋白含量培养液上清中TNF-α、IL-6含量都明显升高(P<0.05);与B组比较,C组p-p38MAPK蛋白明显抑制(P<0.05),培养液上清中TNF-α、IL-6含量都明显下降(P<0.05);与A组比较,C组p-p38MAPK蛋白明显抑制(P<0.05),培养液上清中TNF-α、IL-6含量亦有所减少,但两组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:Ti Ps能通过刺激RAW246.7细胞,激活p38MAPK通路,上调TNF-α、IL-6等炎症因子的表达。p38MAPK信号通路可作为抑制炎性骨溶解的新靶点,对临床上防治人工关节置换术后无菌性松动具有重要意义。     

达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶抑制高糖诱导的人肾小球足细胞损伤

目的 探讨达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤的影响。方法 体外培养人肾小球足细胞（HGPCs），分为对照组（5 mmol/L D-葡萄糖）、D-葡萄糖组（30 mmol/L D-葡萄糖）、达格列净组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净）、抑制剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋10 μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB 203580）、达格列净＋抑制剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净＋10 μmol/L SB 203580）和达格列净＋激活剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净＋10 μmol/L p38 MAPK通路激活剂C16-PAF）。对照组与D-葡萄糖组用D-葡萄糖干预24 h；其他组D-葡萄糖干预24 h后相应药物继续干预 24 h。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力；采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率；采用ELISA检测白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、丙二醇（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达水平；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测酵母ATG6同源物（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ（LC3 Ⅱ）mRNA表达水平；采用Western印迹法检测Beclin-1、LC3 Ⅱ、p53、p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果 与对照组相比，D-葡萄糖组细胞活力降低（P＜0.05），达格列净组细胞活力升高（P＜0.05），细胞凋亡率，IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平升高（P＜0.05），SOD水平降低（P＜0.05）。与D-葡萄糖组相比，达格列净组和抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平降低（P＜0.05），SOD水平升高（P＜0.05）。与达格列净组相比，达格列净＋抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 Ⅱ mRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平进一步降低（P＜0.05），SOD水平进一步升高（P＜0.05）；达格列净＋激活剂组与达格列净＋抑制剂组变化趋势相反，与达格列净组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 达格列净可抑制高糖诱导的人HGPCs的凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤，其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路信号转导相关。     

长链非编码RNA THRIL与疾病关系研究进展

长链非编码RNA（lncRNA）TNF-α和异质性胞核核糖核蛋白L（hnRNPL）相关的免疫调节lncRNA（THRIL）与hnRNPL结合形成功能性THRIL-hnRNPL复合物,结合在TNF-α的启动子上进而调节TNF-α的表达。研究表明THRIL可能通过调节TNF-α的表达参与多种炎症性疾病、肿瘤和其他疾病的发生与进展,THRIL可能成为疾病药物治疗的新靶点。该文主要综述THRIL在多种疾病中的表达水平和可能的调节机制。     

Tumor necrosis factor receptor 1 induces interleukin-6 upregulation through NF-kappaB in a rat neuropathic pain model

Peripheral nerve injury resulting in neuropathic pain induces the upregulation of interleukin (IL)-6 and tumor necrosis factor-α, which binds to tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1) and induces NF-κB and p38 MAPK activation in the spinal cord and dorsal root ganglia (DRG). We here investigated whether TNFR1 regulates IL-6 expression through NF-κB or p38 MAPK activations in the spinal cord and DRG in rats with chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve. Intrathecal treatment with a TNFR1 antisense oligonucleotide (ASO) significantly inhibited CCI-elevated IKKs phosphorylation, IkB-α degradation, the nuclear translocation, phosphorylation, and DNA-binding activity of NF-κB, p38 MAPK activation, and IL-6 mRNA and protein expression in the spinal cord and DRG. Interestingly, CCI remarkably elevated IKKα and p65 phosphorylations in the spinal cord rather than in the DRG. In addition, NF-κB decoy, but not p38 MAPK inhibitor, SB203580 reduced CCI-elevated IL-6 expression in the spinal cord and DRG. Therefore, these data suggest that TNFR1 induces IL-6 upregulation and neuropathic pain through NF-κB, but not p38 MAPK activation in the spinal cord and DRG and that the NF-κB/IL-6 pathways in the DRG may be less dependent on TNFR1 than the spinal cord pathway.     

长链非编码RNA-PVT1介导JAK/STAT3信号通路对肺纤维化的研究

目的 探讨长链非编码RNA-浆细胞瘤变异易位基因1/蛋白质酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3（lnc-PVT1/JAK/STAT3）信号通路参与肺纤维化的作用机制。方法 采用不同浓度脂多糖（LPS）作用于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用CCK-8法检测细胞活性、蛋白免疫印迹法检测α-SMA的蛋白相对表达量,对LPS...     

原钙黏附蛋白7在脂多糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡中的作用

目的 探讨原钙黏附蛋白7（PCDH7）是否参与脂多糖（LPS）刺激引起的肾小管上皮细胞（HK-2）焦亡过程。方法 构建LPS刺激HK-2损伤模型,使用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测细胞中PCDH7、NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）、caspase-1、和IL-1β蛋白的表达变化。MTT法测定细胞活力,TUNEL法确定细胞焦亡率,ELISA法检测细胞分泌TNF-α、IL-6水平,全自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果 与Control组比较,LPS组细胞生存率下降,细胞凋亡率升高,炎症因子TNF-α和IL-6水平升高,细胞损伤指标LDH含量明显升高,PCDH7的蛋白和mRNA表达明显下调,细胞焦亡指标NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白和mRNA表达明显上调（P均< 0.05）。结论 LPS通过下调PCDH7的表达,促进肾小管上皮细胞发生明显细胞焦亡损伤。