酸枣仁皂苷A对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响

【摘要】 目的 通过体外细胞实验探讨酸枣仁皂苷A对小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响,为临床治疗骨折与促进骨折愈合提供实验基础。方法将酸枣仁皂苷A分4个浓度（5、10、20、40 mg/L)分别干预细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Von kossa染色法检测细胞矿化结节生成情况,Elisa法检测细胞中ALP与BGP的含量,RT-qPCR法检测细胞中Runx-2与BGP的基因表达水平,Western Blot法检测细胞中TGF-β1、Col I与BMP 2的蛋白表达水平。结果酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞中ALP与BGP的含量,提高细胞中Runx-2与BGP基因的表达水平与TGF-β1、Col I与BMP-2的蛋白表达水平,增加细胞中矿化结节的形成数量（均P<0.05）。结论酸枣仁皂苷A能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,减少细胞凋亡,提高细胞分化程度与成骨效率,其机制可能是通过调控TGF/BMP通路而发挥的。     

含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究含枸杞多糖血清对MC3T3-E1成骨细胞细胞增殖、分化和矿化的影响。方法含枸杞多糖血清分别加入MC3T3-E1成骨细胞培养液中,使其终浓度为5%、10%、20%3种体积浓度,通过MTT法,碱性磷酸酶活性测定,骨钙素检测和Von kossa矿化染色法观察含枸杞多糖血清的促细胞增殖、分化、矿化作用。结果含枸杞多糖血清在5%、10%浓度促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);10%、20%浓度提高MC3T3-E1成骨细胞内碱性磷酸酶的活性,差异有统计学意义(P<0.01)。含枸杞多糖血清在20%浓度培养7及11 d时能明显促进MC3T3-E1成骨细胞骨钙素合成和分泌,20%浓度培养18 d时MC3T3-E1成骨细胞的矿化结节数目增多,差异有统计学意义(P<0.01)。结论含枸杞多糖血清可以促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化能力。     

N-乙酰半胱氨酸对尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的作用及其机制

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对尼古丁诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:体外培养MC3T3-E1细胞,采用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0和7.5 mmol·L-1)尼古丁诱导MC3T3-E1细胞损伤,采用MTT法检测各组MC3T3-E1细胞增殖活性,并确定尼古丁半...     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

杜仲叶提取物对MC3T3-E1细胞增殖作用的实验研究

目的研究杜仲叶提取物（Euec）对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1细胞生长、增殖的影响及其分子机制。方法采用Euec与MC3T3-E1细胞体外共同培养,MTT法检测不同浓度Euec处理MC3T3-E1细胞24、48、72h后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果4．0～125．0μg／ml的Euec能促进MC3T3-E1细胞增殖,其中7.8μg／ml的Euec对MC3T3-E1细胞增殖的促进作用最强。流式细胞仪检测显示,6.25μg／ml的Euec作用MC3T3-E1细胞48h后,G0/G1期成骨样细胞显著减少,S期成骨样细胞增多,G2/M期成骨样细胞显著增多。结论Euec可促进MC3T3-E1细胞向G2／M期转换,使G1期的成骨样细胞减少,G2期的成骨样细胞显著增加,从而促进细胞的有丝分裂和细胞的增殖。     

人参皂苷Rh1对MC3T3-E1细胞增殖和分化的促进作用及其机制

目的:筛选靶向上调雌激素受体β(ERβ)转录和表达的人参皂苷单体,研究其对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其机制.方法:采用PGL2-ERβ和内参Renilla荧光素酶质粒Prep7-Rluc共同转染HEK293T细胞,细胞分为对照组,雌二醇组(1×10-6 mmol·L-1),人参皂苷Rb1组、Rb2组、Rd组...     

伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响

目的观察伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响。方法取BALB/c小鼠30只,随机分为药物+细胞组:伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;细胞组:单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;阴性对照组:单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。每组10只。在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,药物+细胞组和细胞组用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液、阴性对照组用无菌明胶海绵吸附生理盐水后植入肌袋内。术后3天,药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/m L的混悬液,按2.0mg/(g·d)剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予2.0mg/(g·d)的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组各处死小鼠5只,取材后分别作大体、切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。结果术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,药物+细胞组形成的板层骨结构较细胞组更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。结论伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。     

静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 观察静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 通过静电纺丝法制备薄膜支架,扫描电镜观察薄膜网状结构,通过薄膜支架作为载体,观察其对成骨细胞的增殖、分化并观察细胞骨架的形态变化。结果 扫描电镜显示:静电纺丝薄膜网状结构有利于细胞的黏附;CCK-8细胞增殖检测与碱性磷酸酶活性检测结果显示,培养1 d、4 d、7 d对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05);细胞骨架染色显示静电纺丝组细胞铺展面积增大且数目增多。结论 静电纺丝薄膜支架对成骨细胞增殖、分化以及细胞黏附具有促进作用。     

脂多糖诱导成骨细胞MC3T3-E1中MMP-13表达的分子机制研究

目的 探讨脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响及其分子机制。方法 采用LPS处理传代培养的小鼠成骨细胞MC3T3-E1,Western blotting检测MC3T3-E1中MMP-13及转录因子C/EBPβ、核因子κB(NF-κB)及其抑制蛋白IκB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的表达;观察使用NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082干预及特异性siRNA沉默C/EBPβ、TNF-α和IL-6表达对MC3T3-E1中MMP-13表达的影响。结果 Western blotting检测结果显示:LPS能够诱导MC3T3-E1中MMP-13高表达,促进NF-κB、C/EBPβ、TNF-α和IL-6的表达和活化,抑制IκB表达;Bay11-7082干预及siRNA沉默TNF-α表达能有效抑制MC3T3-E1中TNF-α和MMP-13的表达,而siRNA沉默C/EBPβ和IL-6表达对MC3T3-E1中MMP-13的表达无明显影响。结论 LPS通过NF-κB/TNF-α诱导MMP-13在成骨细胞MC3T3-E1中高表达,这为阐明牙周炎的发病机制奠定了基础。     

持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序分析

目的：通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法 ：采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、GSVA分析,利用NCBI GEO数据库、Genecards数据库、molecular signatures database数据库,分析对比持续静压力环境下MC3T3-E1细胞差异表达基因,筛选Hub基因,对比分析其与骨质疏松症信号通路关联的分子学机制。结果：在持续静压力环境下,MC3T3-E1细胞增殖显著降低,在1.0 MPa处理8 h和0.5 MPa处理24 h细胞模型组的细胞骨架中,微管蛋白和肌动蛋白的抑制作用显著。通过空白组与模型组基因测序对比后发现29 164个差异基因,其中14 489个上调、14 675个下调。这些差异基因涉及1 658个GO功能,包括1 096 GO＿BP（生物过程）,255 GO＿CC（细胞组分）,307 GO＿MF（分子功能）,MC3T3-E1细胞在持续静压力作用下受到差异基因调控的信号转导通路有305...     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

雌激素对前成骨细胞胰岛素受体底物-1的影响

目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。     

胰岛素受体底物1在前成骨细胞分化过程中的表达

目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-1)在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中的表达.方法 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,分别在不同时点收集细胞及上清液.骨钙素含量用放射免疫法测定;碱性磷酸酶活性用α-磷酸奈酚法测定;Ⅰ型胶原、骨涎蛋白、骨桥素和IRS-1的mRNA表达应用半定量RT-PCR检测;免疫印迹法测定IRS-1蛋白水平.结果 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中,IRS-1的表达量逐渐增加,而且与Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎素和骨桥素呈正相关.结论 IRS-1参与MC3T3-E1细胞的增殖、成熟与矿化的全过程.     

Effects of salvia miltiorrhiza bung （SMB） onosteoblast－like cell lin （clonal MC3T3－E1 cells）

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｂｕｎｇ（ＳＭＢ）ｏｎｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅｃｅｌｌｌｉｎ（ｃｌｏｎａｌＭＣ３Ｔ３－Ｅ１ｃｅｌｌｓ）￥（丁寅）ＤｉｎｇＹｉｎ；ＳｕｉｃｈＳｏｍａ；Ｔ．ＴａｋａｎｏＹａｍａｍｏｔｏ；Ｓ．Ｍａ...     

伤科接骨片对MC3T3-E1在小鼠体内成骨能力的作用研究

目的：观察伤科接骨片对小鼠体内MC3T3-E1细胞成骨能力的作用。 方法：30只小鼠随机分为3组（每组10只）：(1)药物+细胞组：伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;(2)细胞组：单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;(3)阴性对照组：单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。手术在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液（药物+细胞组和细胞组）,或者生理盐水（阴性对照组）后植入肌袋内。术后常规饲料喂养,3天后开始按组分别灌胃给药,方法如下：药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/ml的混悬液,按每日2.0mg/g的剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予每日2.0mg/g的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组麻醉后处死5只小鼠,取材后分别从大体,切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。 结果：术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见有新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,但是药物+细胞组较细胞组形成的板层骨结构更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。 结论：伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。