卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

目的 探讨卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1(SIRT1)对卵巢颗粒细胞的调控。方法 本研究纳入行IVF/ICSI-ET助孕的女性共60例，其中卵巢低反应（POR）组和卵巢正常反应（NOR）组各30例。采用密度梯度离心法分离纯化卵泡液中的颗粒细胞。分别使用SIRT1激动剂白藜芦醇（RESV）或抑制剂EX527处理POR组颗粒细胞，对照组为不使用药物处理的颗粒细胞。采用qPCR检测颗粒细胞SIRT1和类固醇激素合成关键酶（StAR、CYP19、CYP17）的mRNA水平。采用Western blot检测颗粒细胞SIRT1、类固醇激素合成关键酶蛋白和凋亡相关蛋白（Bcl-2、Caspase-3）的水平。TUNEL法检测颗粒细胞的凋亡率。化学发光法检测颗粒细胞培养液中雌二醇水平。结果 POR组颗粒细胞SIRT1 mRNA和蛋白水平低于NOR组（P=0.003,P <0.001）。RESV上调SIRT1 mRNA和蛋白水平（P <0.001），上调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平（P <0.05）,EX527下调SIRT1 mRNA和蛋白水平（P=0.023、0.001...     

组蛋白乙酰化修饰调控NF-κB驱动的PNPLA3基因表达的机制初探

目的 探讨禁食/再喂食后小鼠肝脏Patatin样磷脂酶域蛋白3（PNPLA3）基因启动子核因子-κB（NF-κB）结合区域组蛋白H3K9乙酰化（H3K9ac）水平以及相关去乙酰化酶（HDAC）和乙酰化转移酶（HAT）的变化特点。方法 根据体质量将18只C57BL/6小鼠随机分为3组各6只,分别为自由饮食组、禁食组（夜间饥饿24 h）和再喂食组（饥饿24 h后再自由摄食高蔗糖含量饲料12 h）,分别予自由饮食、禁食和禁食后再喂食干预,检测并比较各组肝脏PNPLA3、NF-κB、HDAC（SIRT1、SIRT6）和HAT（GCN5、Elp3）基因表达情况,用染色质免疫共沉淀-定量PCR检测H3K9ac富集水平,并分析H3K9ac与PNPLA3表达的相关性。结果 3组比较,C57BL/6小鼠肝脏PNPLA3、NF-κB基因表达在禁食时下调,再喂食后又上调（P均< 0.001）。H3K9ac水平变化与PNPLA3变化趋势一致（P均< 0.05）,相关分析提示两者具有相关性（r_s = 0.958, P < 0.001）;禁食组SIRT1和SIRT6表达水平较自由饮食组高,再喂食组两者水平均下降（P均< 0.05）,与H3K9ac变化趋势相反;GCN5、Elp3表达变化与SIRT1及SIRT6类似（P均< 0.05）。结论 SIRT1和SIRT6相关H3K9去乙酰化涉及饮食调节NF-κB驱动的PNPLA3的表达。     

LncRNA JHDM1D-AS1 对MPP+ 诱导的帕金森细胞模型线粒体功能的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA, LncRNA) JHDM1D 反义RNA 1( JHDM1D antisense RNA1，JHDM1D-AS1) 对帕金森细胞模型线粒体功能的影响及分子机制。方法 采用1- 甲基-4- 苯基吡啶离子（MPP+）处理 SH-SY5Y 细胞构建帕金森细胞模型，记为MPP+ 组，正常细胞作为对照组（control 组）。将JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 分别转染至MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞中，利用RT-PCR 检测JHDM1D-AS1 表达。流式细胞技术分析JHDM1D-AS1 表达对SH-SY5Y 细胞凋亡、线粒体膜电位及活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量的影响。Western blot 实验分析JHDM1D-AS1 表达对沉默调节蛋白1（SIRT1）表达的影响，并利用双荧光素酶报告验证两者的靶向关系。使用SIRT1 激活剂 Resveratrol 对转染JHDM1D-AS1 mimic 的细胞进一步处理，证实JHDM1D-AS1 调控SIRT1 对帕金森细胞线粒体的影响。结果 control 组JHDM1D-AS1 相对表达为0.85±0.21，MPP+ 模型组JHDM1DAS1相对表达为1.25±0.33，较control 组增加，差异有统计学意义（t=62.017，P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 序列后，JHDM1D-AS1 相对表达分别为1.63±0.38 和0.72±0.17，与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=112.035，P ＜ 0.05）。MPP+ 组细胞凋亡率为17.64%，JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 组细胞凋亡率分别为25.92% 和10.74%，差异有统计学意义（F=49.052，P ＜ 0.05）。MPP+ 组绿色荧光强度为22.20%，JHDM1D-AS1-mimic 和JHDM1D-AS1siRNA 组绿色荧光强度分别为43.97% 和10.65%，差异有统计学意义（F=57.390，P ＜ 0.05）。流式结果显示，MPP+ 组相对荧光强度为27.58%±4.25%，JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA组相对荧光强度分别为45.10%±6.05% 和14.82%±3.70%，差异有统计学意义（F=25.794，P ＜ 0.05）。Control 组SIRTI 蛋白表达为1.00±0.23，MPP+ 模型组SIRT1 表达下调为0.70±0.27，差异有统计学意义（t=35.740，P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 后，SIRT1 表达分别为0.44±0.16 和1.34±0.22，与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=29.508，P ＜ 0.05）。Target Scan 软件预测，JHDM1D-AS1 与SIRT1 序列存在结合位点，双荧光素酶实验显示，JHDM1D-AS1 过表达可降低WT- SIRT1 荧光素酶活性。JHDM1D-AS1 过表达时线粒体膜电位降低，SIRT1 激活过表达时线粒体膜电位升高，转染 JHDM1D-AS1 mimic 并激活 SIRT1 后线粒体膜电位水平回升。结论 沉默JHDM1D-AS1 表达可抑制MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡，其作用机制可能与JHDM1D-AS1 靶向调控SIRT1，进而影响帕金森细胞模型线粒体功能有关。     

SIRT1介导间歇性禁食改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织线粒体功能和炎症状态

目的 探讨间歇性禁食对高脂饮食诱导的肥胖小鼠白色脂肪组织线粒体功能和炎症状态的影响以及沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)在其中的作用。方法 将5～6周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为普通自由饮食组（CD组）、高脂自由饮食组（HFD组）和高脂间歇性禁食组（HFD-IF组，隔日禁食24 h），每组各5只，喂养12周。用HE染色观察各组小鼠白色脂肪组织情况，并检测白色脂肪SIRT1、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、叉头转录因子1(FOXO1)、线粒体功能和炎症相关基因的表达情况。在小鼠尾静脉注射腺相关病毒（AAV）-shSIRT1敲减SIRT1表达，分别给予小鼠高脂自由饮食和高脂间歇性禁食，检测上述指标。结果 HE染色结果显示HFD-IF组脂肪细胞体积减小。蛋白免疫印迹结果显示高脂自由饮食时脂肪组织SIRT1、p-AMPK、 FOXO1蛋白表达均下调，间歇性禁食后均上调（P均<0.05）。定量PCR结果显示HFD组线粒体功能基因Tfam、Nrf1、Pgc-1a表达下调（P均<0.001），炎症基因TNF-α、单核细胞趋化蛋白1、生长因子样模体黏液样激素样受体表达均...     

喙尾琵琶甲乙醇提取物对环磷酰胺致小鼠卵巢早衰的保护作用

目的 研究喙尾琵琶甲乙醇提取物（BRFAE）对环磷酰胺诱导的卵巢早衰小鼠的保护作用,初步探索沉默信息调节因子1 /肿瘤相关蛋白53 （SIRT1/p53）信号通路在此过程中的作用。方法 将40只无特定病原体级雌性KM小鼠随机分为对照组、模型组和BRFAE低剂量和高剂量组。模型组和BRFAE低、高剂量组予腹腔注射环磷酰胺160 mg/kg,对照组则注射等体积的生理盐水,次日对照组和模型组予生理盐水灌胃,BRFAE低、高剂量组分别予BRFAE 100、200 mg/kg灌胃,连续14 d。干预结束后采集小鼠血液检测小鼠血浆丙二醛、一氧化氮和超氧化物歧化酶（SOD）水平,摘取卵巢称重并制作HE切片进行卵泡计数,同时检测卵巢组织中SIRT1和p53 mRNA及蛋白表达。结果 低、高剂量的BRFAE均能改善环磷酰胺导致的卵巢增重和卵巢指数降低（P均<0.01）,增加原始、初级卵泡和各级卵泡总数并减少闭锁卵泡的数量（P均< 0.05）,其卵巢体积增大、黄体纤维化和血管减少,一氧化氮和丙二醛的水平降低,SOD活力升高（P均< 0.01）,且高剂量BRFAE各项指标改善效果比低剂量BRFAE更为明显（P均<0.05）。免疫组织化学染色显示,与对照组相比,模型组SIRT1蛋白表达减弱（P < 0.01）,而p53蛋白表达增强（P < 0.01）,经BRFAE治疗后SIRT1蛋白表达增强（P < 0.01）,而p53蛋白表达减弱（P < 0.01）。SIRT1和p53的qPCR检测结果与免疫组织化学染色结果基本一致。 结论 BRFAE能够通过抗氧化作用抑制环磷酰胺所致的小鼠卵巢早衰,SIRT1/p53信号通路可能参与了其抗卵巢早衰作用。     

2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤转录因子E2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路的表达及白藜芦醇的干预研究

目的探讨白藜芦醇在糖尿病心肌缺血再灌注（I/R）损伤中对转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶1（HO-1）信号通路的影响。 方法将2型糖尿病模型制备成功的60只大鼠分成假手术组、I/R组、白藜芦醇（R）组、白藜芦醇+ EX527（RE）组,每组各15只。采用结扎左冠状动脉前降支30 min、恢复灌注120 min的方法制备心肌I/R损伤模型。R组及RE组大鼠于术前7 d连续腹腔注射白藜芦醇15 mg/kg,假手术组及I/R组大鼠腹腔注射等容量的等渗NaCl溶液,RE组大鼠于缺血前15 min尾静脉注射EX527 1 μg/kg。于再灌注120 min末,采用酶联免疫吸附测定法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）。随后处死大鼠取心肌组织,采用苏木素-伊红（HE）染色观察心肌病理学变化,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑法检测心肌梗死面积百分比,并检测心肌组织丙二醛含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用Western-blotting法检测各组大鼠心肌沉默信息调节因子1（SIRT1）、Nrf2及HO-1蛋白表达水平。 结果HE染色可见,假手术组大鼠心肌细胞轻度断裂、水肿,少量炎症细胞浸润;I/R组大鼠心肌纤维排列杂乱,心肌间质充血水肿伴大量炎症细胞浸润;R组大鼠心肌组织结构相对整齐,偶见核固缩;RE组大鼠心肌纤维排列杂乱,核固缩现象明显,炎症细胞浸润明显。假手术组大鼠无心肌梗死发生,I/R组大鼠心肌梗死面积占比为（51 ± 6）%,R组大鼠占比为（37 ± 4）%,RE组大鼠占比为（41 ± 3）%,各组间比较差异有统计学意义（F = 160.703,P < 0.001）,R组及RE组大鼠心肌梗死的占比面积均显著小于I/R组大鼠,且R组大鼠心肌梗死面积的占比更小（P均<0.05）。各组大鼠血清LDH、CK-MB、丙二醛、SOD、SIRT1、Nrf2及HO-1表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 144.101、158.545、53.682、99.273、50.121、59.153、143.702,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,I/R组、R组、RE组大鼠的LDH、CK-MB及丙二醛含量均显著升高,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均显著降低（P均<0.05）;与I/R组比较,R组及RE组大鼠的LDH、CK-MB及丙二醛含量均显著降低,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均显著升高,且LDH、CK-MB及丙二醛含量在R组大鼠更低,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平在R组大鼠更高（P均<0.05）。 结论白藜芦醇可通过促进SIRT1激活Nrf2/HO-1信号通路来减轻2型糖尿病大鼠心肌的氧化应激反应及心肌I/R损伤。     

MIF依赖性巨噬细胞在顺铂诱导的急性肾损伤中的作用

目的 探讨巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）依赖性巨噬细胞在顺铂诱导的急性肾损伤（AKI）中的作用和机制。方法 MIF基因敲除（MIF^-/-）小鼠被随机分为正常对照组（n = 6）和实验组（n = 18）。正常对照组小鼠尾静脉注射生理盐水,实验组小鼠腹腔注射顺铂建立AKI模型。建模6 h后小鼠被随机分为AKI模型组、巨噬细胞对照组和MIF^-/-巨噬细胞组（每组n = 6）,尾静脉分别注射生理盐水、野生型C57BL/6J小鼠的巨噬细胞、MIF^-/-小鼠的巨噬细胞。3 d后处死小鼠,收集血清和肾脏组织标本。评估肾功能、肾组织病理学改变以及肾组织中单核细胞趋化蛋白（MCP-1）和TNF-α的分布与表达,检测肾组织中Mincle、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、F4/80的蛋白表达。结果 与AKI模型组相比,巨噬细胞对照组小鼠血清肌酐升高（P < 0.001）、肾小管坏死加重（P < 0.001）,肾脏中MCP-1和TNF-α的蛋白表达增加（P均< 0.01）,M1型巨噬细胞增多（P < 0.001）。与巨噬细胞对照组相比,MIF^-/-巨噬细胞组小鼠血清肌酐降低（P < 0.001）,肾小管损伤减轻（P < 0.001）,肾脏中MCP-1和TNF-α的蛋白表达降低（P均< 0.01）,M1型巨噬细胞减少（P < 0.001）。结论 在顺铂诱导AKI的过程中,MIF通过激活Mincle促进巨噬细胞活化并增加炎性细胞因子的产生,导致肾脏炎症损伤加重。     

三种不同促排卵方案在卵巢低反应患者中的应用

【目的】比较三种不同的控制性超排卵方案（COH）对卵巢低反应患者的体外受精胚胎移植（IVF—ET）临床结局,旨在寻求更为适合的促排卵方案。[A-法】回顾性分析2010年1～12月在本院接受体外受精（IVF）或卵细胞浆单精子注射（ICSI）助孕的卵巢低反应患者133例,超短方案组（A组）36例,改良超长方案组（B组）34例,拮抗剂方案组（C组）63例,比较三组超排卵天数、血清激素水平、获卵数、成熟卵子数、正常受精胚胎数（2PN）、周期妊娠率和胚胎种植率等。【结果】三组治疗后超排卵天数、成熟卵子数、2PN胚胎数、移植胚胎数比较差异均无显著性（P〉0．05）;平均促性腺激素释放激素（GnRH）用量A、B组间差异无显著性（P〉0．05）,A、B显著高于C组（P〈0．05）;胚胎种植率A、C组比较无显著性差异（P〉0．05）,但均显著低于B组（P〈0．05）;临床妊娠率B组最高,c组次之,A组最低,三组比较有显著性差异（P〈0．05）。【结论】促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH拮抗剂）方案和改良超长方案治疗卵巢低反应是一种有效的超排卵方案,可有效的提高IVF-ET的临床妊娠率。     

分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制研究

目的 研究分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制,为治疗慢性肾脏病提供理论基础和新思路。方法 通过单侧输尿管梗阻（UUO）诱导C57BL/6小鼠肾纤维化,并分5组处理：假手术[Sham+磷酸盐缓冲液（PBS）]组、模型（UUO+PBS）组、UUO+Klotho组、UUO+Klotho+胰岛素组、UUO+Klotho+胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。检测小鼠左肾组织活性氧水平,并用HE及Masson染色评估肾脏病理改变及纤维化程度。实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法以及免疫荧光化学检测肾组织中超氧化物歧化酶2 （SOD2）、纤连蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平,此外用蛋白免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、AKT、磷酸化磷脂酰肌醇（-3）激酶（p-PI3K）、PI3K、胰岛素受体底物-1（IRS-1）蛋白表达水平。结果 成功建立了UUO小鼠模型。与UUO+PBS组比较,UUO+Klotho组小鼠肾组织的纤维化缓解（P <0.001）,且肾纤维化标志物纤连蛋白和α-SMA mRNA及蛋白的表达降低（P均 < 0.001）,保护因子SOD2 mRNA及蛋白表达升高（P均 < 0.001）。胰岛素及IGF-1可激活肾组织IRS-1/PI3K/AKT通路并破坏Klotho对肾脏的保护作用（P均 < 0.001）。结论 Klotho通过抑制胰岛素下游IRS-1/PI3K/AKT信号通路从而缓解肾脏的纤维化。     

小鼠超排卵胚胎的着床与白血病抑制因子表达水平的关系

目的：观察受体鼠妊娠和胚胎着床情况,并检测胚胎移植时小鼠子宫内膜中白血病抑制因子（Lif）表达水平,探讨超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响。方法：建立超排周期胚胎和自然周期胚胎移植小鼠模型,比较妊娠率、胚胎着床率的差异及其与Lif蛋白的表达水平之间的关系。结果：超排卵周期受体组的妊娠率（20.00%）和胚胎着床率（8.33%）显著低于自然周期组的妊娠率（55.00%）和胚胎着床率（35.00%）（P〈0.05）。自然周期胚胎和超排周期胚胎受体组内膜中Lif蛋白的表达水平相似（P〉0.05）,妊娠受体组Lif蛋白的表达水平显著高于未孕受体组（P〈0.05）,但单胎妊娠和多胎妊娠受体组内膜中Lif蛋白的表达水平相似（P〉0.05）。结论：超排卵可能降低胚胎的着床潜能,Lif蛋白的表达水平与胚胎着床有关,但与着床胚胎的数目无比例关系。     

恩格列净改善高糖诱导HK-2细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨恩格列净改善人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）凋亡的机制。方法 将HK-2细胞置于正常葡萄糖、高葡萄糖、高葡萄糖+不同浓度的恩格列净共干预环境下培养48 h。采用蛋白免疫印迹法检测肾脏沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）、硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）以及裂解的半胱天冬酶-3（cleaved Caspase-3）的表达水平。采用TUNEL染色评估HK-2细胞凋亡情况。结果 蛋白免疫印迹结果显示,高葡萄糖培养48 h后HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3表达水平均高于正常葡萄糖组,而SIRT1表达水平低于正常葡萄糖组（P均< 0.05）。1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预48 h后,HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平降低,SIRT1表达水平升高（P均< 0.001）。TUNEL染色结果显示恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组较30 mmol/L葡萄糖组TUNEL阳性细胞数少,且1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组凋亡改善更明显。结论 恩格列净可能通过上调SIRT1的表达、抑制TXNIP表达,改善高糖诱导HK-2细胞凋亡。     

白藜芦醇抑制系膜细胞增殖治疗糖尿病大鼠早期肾损害的研究

目的：探讨白藜芦醇对糖尿病大鼠早期肾脏损害的保护作用及对系膜细胞增殖的影响,为白藜芦醇治疗糖尿病肾病（DN）提供实验依据。方法建立糖尿病雄性Wistar大鼠模型,成模后随机分为糖尿病组（8只）和白藜芦醇组（8只,予白藜芦醇干预）,另设对照组（8只）。观察8周,比较各组空腹血糖、肌酐、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量及肾脏病理学改变。体外培养大鼠系膜细胞并将其分为5组,包括对照组、晚期糖基化终末产物（AGE ）组、白藜芦醇2.5、5、10组（在AGE组的基础上加予白藜芦醇干预,终浓度分别为2.5、5、10μmol/L）,比较5组细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡率。结果实验第8周末,糖尿病组空腹血糖、肌酐、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量高于对照组（P＜0.01）;白藜芦醇组空腹血糖、肌酐、肾质量/体质量、24 h尿蛋白定量低于糖尿病组（P＜0.05）;白藜芦醇组肾脏病理改变较糖尿病组轻。AGE组细胞增殖率较对照组高（P＜0.01）;白藜芦醇各组增殖率均较AGE组低（P＜0.01）。AGE组G1期细胞比例较对照组高（P＜0.05）;白藜芦醇组G1期细胞比例较AGE组少,其中白藜芦醇5、10组与AGE组比较差异有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）。AGE组S期细胞比例较对照组少（P＜0.05）;白藜芦醇组S期细胞比例较AGE组高,其中白藜芦醇5、10组与AGE组比较差异有统计学意义（P＜0.05、P＜0.01）。白藜芦醇5、10组细胞凋亡率较AGE组高（P＜0.05、P＜0.01）。结论白藜芦醇能改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其机制可能与影响细胞周期、抑制系膜细胞增殖有关。     

结直肠癌中沉默信息调节因子1与耐药基因的表达及临床意义

目的 研究沉默信息调节因子1(SIRT1)在结直肠癌中的表达,分析SIRT1与结直肠癌患者相关临床病理指标及多药耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽转移酶π(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPO-Ⅱ)之间的关系.方法 应用免疫组化方法检测60例结直肠癌组织和24例正常结直肠黏膜中SIRT1的表达情况.结果 60例结直肠癌中,SIRT1在结直肠癌中的阳性表达率高于正常结直肠黏膜(P＜0.05),60例结直肠癌中,浸润深度T3～T4者比T1～T2者SIRT1阳性表达率高,86.8％ vs 42.9％(P ＜0.05);有淋巴结转移的比无转移的SIRT1阳性表达率高,93.3％ vs70.0％(P＜0.05);pTNM分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ期SIRT1阳性表达率高85.7％、83.3％、90.9％ vs20.0％(P＜0.05);SIRT1表达与结直肠癌浸润深度(r=0.365,P＜0.05)、淋巴结转移(r=0.302,P＜0.05)、pTNM分期(r=0.292,P＜0.01)、p53蛋白的表达(r=0.335,P＜0.05)、P-gp的表达(r=0.271,P＜0.05)均呈正相关.结论 SIRT1在结直肠癌组织中高表达,且与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期、多药耐药有关,可能参与了结直肠癌的发生发展及耐药,有可能成为结直肠癌恶性程度及预后评估的生物学指标之一.     

SIRT1对大鼠急性脊髓损伤炎症反应的影响

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后SIRT1对局部组织炎症反应的影响.方法 采用改良Allen′s法,建立大鼠脊髓钝挫伤模型(T10),100只SD大鼠被随机分成4组:假手术组(n=4,SHAM),模型组(n=32,SCI),白藜芦醇组(n=32,RES),对照剂组(n=32,SOL).脊髓损伤术后立即给予腹腔注射白藜芦醇(RES)100 mg/kg和聚乙二醇硬脂酸酯15(SOL)100 mg/kg,在脊髓损伤后4 h,8 h,24 h,36 h取材,用QT-PCR的方法检测4组中SIRT1的动态表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA试剂盒)测定脊髓损伤后4 h,8 h,12 h,24 h,36 h各组组织中炎症因子(IL-1β,IL-6,IL-10,TNF-α)水平.结果 RES组SIRT1表达在4 h明显增加,在8 h达到高峰,与其他两组(SCI组,SOL组)比较差异有统计学意义(P<0.01).SCI组大鼠损伤脊髓组织在损伤后4 h各炎症性细胞因子表达即明显升高,其中TNF-α和IL-6于损伤后8 h达峰值,IL-10在观察时间内呈持续性增高,IL-1β在24 h达峰值.SOL组各炎症因子的变化规律与SCI组基本一致,RES组与前两组相比,浓度差异均有统计学意义(P<0.01).结论 SIRT1对大鼠急性脊髓损伤后炎症反应有明显抑制作用.     

Sirtuin 1 inhibition delays cyst formation in autosomal-dominant polycystic kidney disease

Autosomal-dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is caused by mutations in either PKD1 or PKD2 and is characterized by the development of multiple bilateral renal cysts that replace normal kidney tissue. Here, we used Pkd1 mutant mouse models to demonstrate that the nicotinamide adenine dinucleotide–dependent (NAD-dependent) protein deacetylase sirtuin 1 (SIRT1) is involved in the pathophysiology of ADPKD. SIRT1 was upregulated through c-MYC in embryonic and postnatal Pkd1-mutant mouse renal epithelial cells and tissues and could be induced by TNF-α, which is present in cyst fluid during cyst development. Double conditional knockouts of Pkd1 and Sirt1 demonstrated delayed renal cyst formation in postnatal mouse kidneys compared with mice with single conditional knockout of Pkd1. Furthermore, treatment with a pan-sirtuin inhibitor (nicotinamide) or a SIRT1-specific inhibitor (EX-527) delayed cyst growth in Pkd1 knockout mouse embryonic kidneys, Pkd1 conditional knockout postnatal kidneys, and Pkd1 hypomorphic kidneys. Increased SIRT1 expression in Pkd1 mutant renal epithelial cells regulated cystic epithelial cell proliferation through deacetylation and phosphorylation of Rb and regulated cystic epithelial cell death through deacetylation of p53. This newly identified role of SIRT1 signaling in cystic renal epithelial cells provides the opportunity to develop unique therapeutic strategies for ADPKD.     

miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移及SIRT1表达的调控

目的观察前列腺癌PC-3细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222对细胞增殖和迁移的作用,以及对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法设立无处理细胞组(简称control组)、转染空载质粒pEX-5组(简称pEX-5组)、转染miRNA-221反义抑制质粒组(简称miRNA-221抑制组)、转染miRNA-222反义抑制质粒组(简称miRNA-222抑制组),应用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞增殖的影响;采用细胞划痕修复实验检测miRNA-221和miRNA-222对细胞迁移能力的影响;采用免疫印迹法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测SIRT1在蛋白水平和mRNA水平的变化;采用miRNAanda靶标进行预测分析。结果在成功抑制了PC-3细胞中miRNA-221或miRNA-222的表达后,连续7 d检测细胞活性,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的细胞活性(A450 nm值)较pEX-5组降低1.5~2.0倍,自第3天起两组之间即有明显差异(t=6.7,P0.01;t=5.3,P0.01);划痕实验显示,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的迁移能力明显低于pEX-5组。miRNA-221抑制组、miRNA-222抑制组中SIRT1蛋白的相对表达量分别为(0.26±0.021)、(0.21±0.005 8),与pEX-5组(0.14±0.017)比较差异均有统计学意义(t值分别为6.3、6.4,P均0.05);而SIRT1 mRNA的表达水平3组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-221和miRNA-222能促进前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力,影响SIRT1蛋白的表达。     

SIRT1 activator ameliorates the renal tubular injury induced by hyperglycemia in vivo and in vitro via inhibiting apoptosis

We aimed to explore the role of SIRT1 in apoptosis in human kidney proximal tubule epithelial (HK-2) cells, and to determine whether resveratrol (RSV, a SIRT1 activator) could ameliorate apoptosis in rats with streptozotocin-induced diabetes mellitus (DM) and/or in high glucose (HG, 30 mM) – stimulated HK-2 cells. Rats were distributed randomly into three groups: 1) control group, 2) DM group, and 3) DM with RSV group (DM + RSV; rats treated with 30 mg/kg/d of RSV for 16 weeks). The physical, biochemical, and morphological parameters were then examined. Additionally, the deacetylase activity of SIRT1, and the expression levels of SIRT1 and of representative apoptosis markers, such as p53, acetylated p53, cleaved caspase-3, caspase-9, and cleaved PARP, were measured. HK-2 cells were stimulated by HG for different lengths of time to study the effect of HG on apoptosis. HK-2 cells were treated with or without RSV (25 μM) to investigate if RSV has a protective effect on HG-induced apoptosis. A gene-specific small interfering RNA against SIRT1 was used to study the role of SIRT1 in apoptosis. More apoptosis was found in the DM rats than in the control rats. Similarly, the expression levels of cleaved caspase-3, cleaved PARP, and acetylated p53 were significantly higher, and the level of SIRT1 was significantly lower, in the HK-2 cells that were cultured under HG conditions than those in the HK-2 cells that were cultured under low glucose (5.5 mM) conditions. Notably, treatment with RSV lessened the HG-induced changes in the levels of apoptosis indicators, and this inhibition of HG-induced apoptosis in HK-2 cells by RSV treatment was abolished by SIRT1 silencing. Our study showed that hyperglycemia contributes to apoptosis in rat kidney and HK-2 cells. SIRT1 activation by RSV can reduce urinary albumin excretion and proximal tubule epithelial apoptosis both in vitro and in vivo. Based on our study, SIRT1/p53 axis played an important role in the hyperglycemia induced apoptosis. These findings indicated that the increased expression of SIRT1, mediated by RSV, is a possible mechanism by which RSV prevents renal tubular injury in diabetic nephropathy (DN). So RSV has great clinical significance and could provide the basis for the new way to effective treatment to contain the morbidity and mortality associated with DN.     

蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1表达的影响

目的探讨蝉花对糖尿病大鼠肾小球沉默信息调节因子1（silent information regulation 2homolog 1,SIRT1）表达的影响及其对肾脏的保护作用。方法 40只SD大鼠,随机分为对照组10只、蝉花组10只、DM模型组10只、DM＋蝉花组10只,DM模型组与DM＋蝉花组以单次腹腔注射含链脲佐菌素柠檬酸盐缓冲液60mg/kg建立糖尿病大鼠模型,对照组与蝉花组单次腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液。蝉花组和DM＋蝉花组给予蝉花菌丝提取液1.8g/（kg·d）灌胃治疗,对照组和DM模型组给予饮用水灌胃。治疗期间观察各组大鼠一般情况,于24周后检测各组大鼠肾功能,取肾皮质行组织病理学检查,采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠肾小球SIRT1基因及蛋白表达情况。结果 DM模型组和DM＋蝉花组大鼠体质量、血浆胰岛素水平较对照组和蝉花组明显降低（P〈0.01）,食物摄取量、空腹血糖、糖化血红蛋白较对照组和蝉花组明显增高（P〈0.01）;DM＋蝉花组尿素氮、24h尿白蛋白、24h尿蛋白、尿白蛋白肌酐比和肾脏指数（（17.80±2.46）mmol/L、（789.00±103.20）μg/d、（18.20±3.05）mg/d、（64.50±8.34）μg/mg、8.00±1.36）较DM模型组（（22.90±3.29）mmol/L、（1 495.00±251.30）μg/d、（25.00±3.88）mg/d、（82.20±13.32）μg/mg、8.53±1.57）明显降低,大鼠肾组织系膜面积比、肾小球硬化指数及肾小球基底膜厚度（（17.80±4.87）%、56.20±17.10、（229.40±40.87）nm）较DM模型组（（26.20±6.11）%、81.00±19.48、（320.70±54.09）nm）明显减少（P〈0.05）,肾小球SIRT1mRNA和蛋白表达水平（（77.80±13.84）%、（70.60±15.17）%）较DM模型组（（36.80±12.03）%、（27.00±15.38）%）明显增高（P〈0.05）。结论蝉花可上调糖尿病大鼠肾小球SIRT1表达,可能是其延缓糖尿病肾病进展的主要机制之一。