长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌EGFR⁃TKI耐药的相关性研究

目的：探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体?酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor?tyrosine kinase inhibitor,EGFR?TKI）耐药之间的相关性。方法：选择EGFR 19外显子缺失突变的细胞株PC9以及EGFR?TKI吉非替尼诱导的耐药细胞株PC9/GR进行研究。应用实时荧光定量PCR法（qRT?PCR）检测PC9/GR及PC9细胞中BANCR的表达差异。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,应用CCK?8法检测细胞对吉非替尼药物敏感性,克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白的表达。结果：①BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达（P < 0.05）。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR后,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度（half inhibition concentration,IC50）降低（P < 0.05）。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多（P < 0.05）。③Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E?钙黏蛋白（E?cadherin）表达水平明显升高,N?钙黏蛋白（N?cadherin）表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,其机制可能与调控上皮间质转化有关。     

长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的相关研究

目的：探讨长链非编码RNA BANCR与非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药之间的相关性。方法：选择EGFR19外显子区缺失突变的细胞株以及野生型细胞株进行研究,应用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测耐吉非替尼细胞株PC9/GR及亲本细胞株PC9中BANCR的表达差异,发现BANCR在PC9/GR细胞中显著低表达。在PC9/GR细胞中过表达BANCR,分别应用CCK8法、克隆形成实验、流式细胞术检测过表达后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性,细胞增殖能力,联合吉非替尼处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后对PC9/GR细胞上皮间质转化（EMT）的影响。结果：①吉非替尼的敏感细胞株的RNA BANCR表达水平较高,耐药细胞株的RNA BANCR表达水平较低（P<0.05）。②在PC9/GR细胞中过表达BANCR,相对于对照组,吉非替尼对PC9/GR细胞的半数抑制浓度（IC50）减低,前后差异具有统计学意义（P<0.05）。过表达BANCR后PC9/GR细胞增殖能力减弱,经吉非替尼处理后细胞凋亡增多（P<0.05）。③与空白对照组比较,Western blot结果显示过表达BANCR的PC9/GR细胞E-钙粘蛋白表达水平明显升高,N-钙粘蛋白水平明显降低。结论：长链非编码RNA BANCR可诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖;过表达BANCR可以增加PC9/GR细胞对吉非替尼的敏感性,逆转其耐药性,这一作用机制可能是通过调控EMT过程来发挥作用的。     

胰岛素样生长因子结合蛋白7过表达对人乳腺癌细胞系-7增殖的影响及其机制研究

目的  探究过表达胰岛素样生长因子结合蛋白7（IGFBP7）对人乳腺癌细胞系-7（MCF-7）增殖的影响及其机制。方法  采用LipofectamineTM 2000将pIRES2-ZsGreen1-IGFBP7质粒或pIRES2-ZsGreen1空白质粒转染进MCF-7乳腺癌细胞,并用荧光显微镜鉴定细胞转染;实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）对转染48 h后IGFBP7蛋白进行定量;细胞凋亡实验检测转染24、48和72 h后各组细胞增殖情况;Western bolt检测转染48 h后各组细胞（蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白）（AKT/mTOR）信号通路相关蛋白的表达。结果  Real-time PCR的检测结果提示经过IGFBP7转染的细胞IGFBP7 mRNA表达水平明显升高;细胞凋亡实验结果发现,与空白处理组和空白质粒转染组比较,IGFBP7过表达组细胞增殖能力明显降低;Western bolt检测结果发现,AKT蛋白的磷酸化水平明显下降,且其下游的mTOR表达明显下降（P <0.05）。结论  IGFBP7过表达对MCF-7乳腺癌细胞的增殖具有抑制效果,可能是通过对AKT/mTOR信号通路的抑制达到对MCF-7的抑制。

     

苦参碱调控Wnt/β⁃catenin途径抑制宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移

目的：基于Wnt/β?catenin途径探索苦参碱抑制人宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移的分子机制。方法：Caski细胞用不同浓度苦参碱处理后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭迁移情况;ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP?9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌变化;实时荧光定量PCR检测细胞糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK?3β）、Wnt2B蛋白的表达情况;免疫蛋白印迹检测细胞β连环蛋白（β?catenin）、磷酸化β连环蛋白（p?β?catenin）含量。结果：苦参碱对Caski细胞的增殖具有抑制作用（P＜0.05）,且呈现时间、浓度依赖性;苦参碱抑制Caski细胞的侵袭迁移率（P＜0.05）,对Caski细胞分泌MMP?9、VEGF的能力具有显著抑制作用（P＜0.05）;苦参碱可显著降低Caski细胞Wnt2B mRNA的表达及β?catenin的蛋白含量,增加Caski细胞中GSK?3β mRNA的表达和p?β?catenin的蛋白含量。结论：苦参碱通过促进Caski细胞Wnt/β?catenin通路中GSK?3β mRNA表达,提高p?β?catenin蛋白含量,降低Wnt2B mRNA表达、β?catenin蛋白含量以及Caski细胞内MMP?9、VEGF的分泌,进而抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

五味子乙素B对人胃癌细胞MGC－803增殖和迁移能力的影响

目的：观察五味子乙素B（ Schisandrin B , Sch B）对人胃癌细胞MGC－803增殖、迁移能力及基质金属蛋白酶－9（matrix metalloproteinase 9, MMP－9）mRNA表达的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：采用CCK－8法检测50、100、200、400和800μmol／L Sch B对胃癌细胞增殖的抑制作用;光镜观察细胞生长状态变化,并计数细胞分裂指数;细胞划痕实验检测200μmol／L Sch B对细胞迁移能力的影响;定量PCR检测细胞MMP－9 mRNA的表达。结果：CCK－8结果显示,Sch B对胃癌细胞的增殖具有显著抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;胃癌细胞经不同浓度Sch B处理24、48、72 h,光镜下可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核质浓缩及凋亡小体形成,细胞分裂指数随Sch B剂量增加和作用时间延长而降低;200μmol／L Sch B作用24、48、72 h,细胞迁移率分别为（39．57±9．14）％,（56．57±10．04）％和（68．21±11．43）％,明显低于对照组（P＜0．05）;PCR结果显示,胃癌细胞中MMP－9 mRNA表达显著低于对照组。结论：Sch B对胃癌细胞的增殖抑制呈剂量和浓度依赖性,并降低胃癌细胞迁移能力,可能与下调MMP－9基因的表达有关。     

自噬对PC9/GR细胞吉非替尼敏感性及PD-L1影响的体外研究

目的 探讨在体外影响自噬对吉非替尼耐药肺腺癌细胞PC9/GR药物敏感性及程序性死亡配体-1(PD-L1)的影响.方法 实时荧光定量PCR及Western blot法检测吉非替尼敏感细胞株PC9及吉非替尼耐药细胞株PC9/GR自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1及PD-L1表达水平;CCK-8实验检测PC9和PC9/GR细胞对吉非替尼敏感性以及抑制PC9/GR自噬后各组细胞增殖情况;Western blot法检测调控PC9/GR自噬后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62及PD-L1的表达.结果 PC9/GR细胞中自噬及PD-L1表达高于PC9细胞,CCK-8实验显示PC9/GR细胞对吉非替尼IC50.高于PC9细胞,抑制自噬后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性部分恢复(P＜0.05).Western blot显示在PC9/GR细胞中诱导自噬PD-L1表达增加,抑制自噬PD-L1表达减少,且随自噬抑制剂处理的时间及浓度的改变而变化(P＜0.05).结论 体外实验结果提示,抑制自噬可能增强肺腺癌耐药细胞对吉非替尼的敏感性,提示PD-L1可能被自噬调控,PD-L1可能参与体外抑制自噬逆转吉非替尼耐药的过程.     

SPAG5通过影响JAK2/STAT3信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的：探究人类精子相关抗原5（sperm?associated antigen 5,SPAG5）对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法：采用qRT?PCR和Western blot筛选相应SPAG5高表达细胞株和低表达细胞株;分别设计并构建重组SPAG5敲减/过表达质粒（siRNA?SPAG5/OE?SPAG5）,通过慢病毒表达质粒系统,制备敲减/过表达SPAG5的稳定细胞株;采用CCK?8增殖实验和裸鼠成瘤实验,检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化;采用qRT?PCR和Western blot检测JAK2/STAT3通路和下游蛋白的变化;采用WP1066抑制JAK2/STAT3通路,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：相较于各自对照组,SPAG5敲减的 si1?MDA?MB?231组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著降低,SPAG5过表达的OE?MCF?12A组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著升高（P＜0.05）;同时,si1?MDA?MB?231组细胞的增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,OE?MCF?12A组细胞得到增强（P＜0.05）;si1?MDA?MB?231组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达受抑制（P＜0.05）,OE?MCF?12A组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达水平提高（P＜0.05）;抑制JAK2/STAT3通路后SPAG5对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用消失（P＜0.05）。结论：SPAG5通过JAK2/STAT3信号通路增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

C5a激活Akt1⁃ERK1/2通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移

目的：探讨C5a对非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及其潜在的分子机制。方法：RT?PCR和Western blot检测人正常支气管上皮细胞系BEAS?2B和3种NSCLC细胞系（H1703、PC9、H1299）中C5a受体（C5aR）的表达;CCK?8和划痕实验检测C5a对PC9细胞增殖和迁移的影响;Western blot检查C5a刺激PC9细胞后蛋白激酶Akt1、细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal?regulated kinase,ERK1/2）和蛋白激酶C?α（protein kinase C?α,PKC?α）表达及磷酸化水平;用Akt1抑制剂Perifosine和ERK1/2抑制剂U0126分别处理PC9细胞后再给予C5a刺激,Western blot检测Akt1和ERK1/2的表达和磷酸化及其上下游调控关系,CCK?8和划痕实验检测Perifosine和U0126对细胞增殖和迁移的影响。结果：PC9细胞C5aR的表达水平显著高于其他细胞;C5a可明显促进PC9细胞的增殖和迁移能力;C5a刺激PC9细胞后,可显著增强Akt1和ERK1/2的磷酸化;Akt1和ERK1/2抑制剂均能明显降低C5a刺激PC9细胞后引起的细胞增殖和迁移,且Akt1抑制剂不仅能减弱Akt1的磷酸化,还能减弱ERK1/2的磷酸化,而ERK1/2抑制剂则仅能阻断其自身的磷酸化。结论：C5a刺激NSCLC细胞后可能通过激活Akt1?ERK1/2通路促进细胞的增殖和迁移。     

ARHI基因抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制研究

目的 观察ARHI基因对胰腺癌细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的机制。方法 2009年3-9月人胰腺癌细胞株PANC-1选自北京协和医院,根据转入质粒将培养细胞分为Control组（无转染质粒的PANC-1细胞）、Vector组（稳定表达pIRES2-EGFP质粒的PANC-1细胞）、ARHI组（稳定表达pIRES2-EGFP-ARHI质粒的PANC-1细胞）。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析3组胰腺癌细胞在培养第0、1、2、3、4、5天增殖情况;应用流式细胞仪检测3组胰腺癌细胞周期;通过Western blotting法检测3组ARHI、磷酸化丝氨酸蛋白激酶（p-AKT）、MDM2、p53、p21WAF1、丝氨酸蛋白激酶（AKT）表达;应用碘化丙啶（PI）-3K/AKT抑制剂LY294002干预ARHI组,检测ARHI、p-AKT、MDM2、p53、p21WAF1、AKT表达。结果 3组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Vector组培养第4、5天细胞增殖情况与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况与Control组和Vector组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。3组细胞周期比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Vector组G0-G1期、S期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组G0-G1期、S期细胞所占比例与Control组和Vector组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组G2-M期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Control组和Vector组相比,ARHI组p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21WAF1表达增多,而AKT表达没有变化;ARHI组加入LY294002与未加入LY294002相比,p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21WAF1表达增加,而ARHI、AKT表达没有变化。结论 ARHI基因通过抑制PI-3K/AKT/MDM2,导致p53、p21WAF1表达上调,在胰腺癌发生中起着重要的作用。     

白藜芦醇与吉非替尼的协同抗肺癌作用及机制研究

目的探讨白藜芦醇是否能提高吉非替尼对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制。方法MTT法检测人非小细胞肺癌细胞系PC9细胞在低浓度吉非替尼和白藜芦醇处理下的细胞活力。Western blot实验检测低浓度吉非替尼和白藜芦醇对PC9细胞c-met表达水平,表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)磷酸化水平及caspases活化水平。流式细胞术检测PC9细胞在低浓度吉非替尼和白藜芦醇处理下的凋亡率。结果低浓度吉非替尼联合白藜芦醇对PC9的细胞活力抑制率显著高于低浓度吉非替尼组和白藜芦醇组[(57.7±3.3)%比(12.4±1.1)%、(8.6±0.8)%,P0.05]。白藜芦醇处理可诱导PC9细胞c-met蛋白的下调并显著增强低浓度吉非替尼对PC9细胞PI3K和AKT磷酸化水平的抑制作用。低浓度吉非替尼联合白藜芦醇组对PC9细胞活力的抑制率和凋亡诱导率显著高于低浓度吉非替尼组和低浓度吉非替尼+白藜芦醇+c-met质粒组[抑制率:(57.7±3.3)%比(12.4±1.1)%、(16.3±1.3)%,P0.05;凋亡率:(30.9±1.8)%比(7.2±0.5)%、(10.6±0.8)%,P0.05]。低浓度吉非替尼联合白藜芦醇组对PC9细胞caspase-9及caspase-3的活化显著强于低浓度吉非替尼组和低浓度吉非替尼+白藜芦醇+c-met质粒组。结论白藜芦醇可能通过下调c-met的表达提高肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

EGFR信号通路调控人胶质瘤U87细胞侵袭转移的分子机制

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)信号通路与人胶质瘤细胞(U87细胞)增殖和侵袭转移的关系及调控分子机制。方法表皮生长因子(EGF,100ng/mL)、EGFR抑制剂———AG1478(10μmol/L)单独和联合处理U87细胞,采用MTT法和Transwell小室体外侵袭实验检测U87细胞增殖和体外侵袭能力;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9的表达水平;Western blot法检测磷酸化EGFR(P-EGFR)、磷酸化AKT(P-AKT)蛋白表达。结果 EGF(100ng/mL)增加P-EGFR和P-AKT蛋白表达,使加药后24h和48h的细胞生长率分别提高了19.25%、22.32%(P<0.05),使12h过膜细胞数由(27±4)个上升到(126±3)个(P<0.05),促进U87细胞的MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05);AG1478(10μmol/L)可以阻断EGF增加P-EGFR和P-AKT蛋白表达的作用(P<0.05),并具有时间依赖性(P<0.05),减弱U87细胞体外侵袭能力(P<0.05),抑制MMP-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。结论 EGFR-PI3K/AKT信号通路参与调节U87细胞增殖和侵袭转移过程,其机制可能是EGFR-PI3K/AKT信号通路活化后,导致MMP-2和MMP-9蛋白的表达增加,对细胞外基质的破坏增强。     

粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其机制

目的: 探究粉防己碱对人结直肠癌HCT116细胞株生物功能的影响及其可能机制。方法: 采用CCK-8检测粉防己碱对HCT116细胞活力的影响及其半数抑制浓度;用不同浓度粉防己碱(0、2.5、5和10 μmol/L)处理细胞,细胞集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术、线粒体膜电位检测技术和Hoechst 33342细胞核染色技术检测细胞凋亡;细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹技术检测细胞上皮间质转化标志蛋白表达水平及PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子活化程度。结果： HCT116细胞活力随粉防己碱处理浓度增加而降低,粉防己碱半数抑制浓度为9.441 μmol/L;与0 μmol/L组相比,2.5、5和10 μmol/L粉防己碱组细胞形成集落数明显减少(P均<0.05);5、10 μmol/L粉防己碱组G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例下降,凋亡细胞比例增加(P均<0.05);2.5、5、10 μmol/L粉防己碱组细胞线粒体膜电位降低,细胞核荧光增强,迁移能力降低(P均<0.05);与0 μmol/L组相比,10 μmol/L粉防己碱组细胞多呈圆形,有更多上皮细胞形态;2.5、5和10 μmol/L粉防己碱组细胞上皮标志蛋白E-钙黏蛋白表达增加,而间充质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白表达减少,且PI3K/AKT/NF-κB信号通路中关键分子AKT和NF κB 的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论： 粉防己碱可能通过抑制PI3K/AKT/NF-κB 信号途径逆转HCT116细胞上皮间质转化,进而降低细胞增殖迁移能力,诱导其凋亡。     

蛇床子素通过c-met/PI3K/AKT途径提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性

目的探讨蛇床子素是否能提高顺铂对肺癌细胞的杀伤活性并研究其机制。方法 A549非小细胞肺癌细胞按对照组、蛇床子素组、顺铂组、蛇床子素+顺铂组及蛇床子素+顺铂+c-met质粒组进行分组后,MTT法检测A549细胞活力,Western blot实验检测A549细胞蛋白酪氨酸激酶(cmet)表达水平,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)磷酸化水平及半胱天冬酶(caspases)活化水平的影响,流式细胞术检测A549细胞的凋亡。结果顺铂+蛇床子素组A549的细胞活力抑制率[(59.8±3.5)%]显著高于顺铂单治疗组[(16.9±1.2)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(21.6±1.5)%,P0.05]。蛇床子素处理可诱导A549细胞c-met蛋白的下调并抑制A549细胞PI3K和AKT的磷酸化。顺铂+蛇床子素组对A549细胞的凋亡诱导率[(29.7±2.1)%]显著高于顺铂组[(7.8±0.9)%,P0.05]和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组[(10.1±1.5)%,P0.05]。顺铂+蛇床子素组A549细胞的Caspase-9、Caspase-3活化水平显著高于顺铂组和蛇床子素+顺铂+c-met质粒组。结论蛇床子素通过下调c-met表达提高肺癌细胞对顺铂的敏感性。     

中药活性成分青蒿琥酯增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性及机制研究

目的 探讨体外联用青蒿琥酯对顺铂抗前列腺癌活性的影响并研究其机制。方法: 前列腺癌细胞系LNCaP的细胞活力抑制率用噻唑蓝(MTT)法进行检测。LNCaP细胞的凋亡用流式细胞术进行检测。LNCaP细胞中Met的表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平,caspase-9和caspase-3的活化水平用western blot实验进行检测。Bad与Bcl-xl及Bcl-2的相互作用用免疫共沉淀法进行检测。结果: 青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%和凋亡率(34.8±2.9)%均显著高于顺铂单处理组的细胞活力抑制率(14.7±1.1)%(P<0.05)和凋亡率(12.5±1.0)%(P<0.05)。青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Met表达水平,AKT和Bad的磷酸化水平均低于顺铂组,而青蒿琥酯联合顺铂组LNCaP细胞的Bad与Bcl-xl及Bcl-2的结合水平,caspase-9和caspase-3的活化水平均均高于顺铂组。青蒿琥酯发挥对顺铂的辅助治疗作用依赖于Met的抑制,青蒿琥酯+顺铂+Met质粒组LNCaP的细胞活力抑制率(20.3±1.4)%和凋亡率(15.5±1.2)%均显著低于顺铂+顺铂组的细胞活力抑制率(61.4±4.9)%(P<0.05)和凋亡率(34.8±2.9)%(P<0.05)。结论: 青蒿琥酯通过Met/AKT/Bad途径增强顺铂对前列腺癌细胞的杀伤活性。     

miR-155在血管紧张素II诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用及其机制

目的：阐明miR-155在血管紧张素II（Ang II）诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）中的作用并探究其调控机制。方法：将体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组、Ang II组、NC miRNA处理组、miR-155 inhibitor处理组、溶剂对照组和蛋白激酶B（AKT）激动剂处理组,予相应处理。CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测EMT相关蛋白、TGF-β蛋白表达水平以及AKT磷酸化水平,qPCR检测miR-155表达水平,免疫荧光染色检测Collagen I蛋白荧光强度。结果：随着Ang II浓度增加,细胞增殖能力、TGF-β以及EMT相关蛋白表达水平显著增加,miR-155表达水平显著上调（均P＜0.05）。与Ang II组相比,miR-155 inhibitor处理组miR-155表达水平、EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著降低（均P＜0.05）;与miR-155 inhibitor处理组和溶剂对照组相比,AKT激动剂处理组EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著上调（均P＜0.05）。结论：miR-155可通过调控AKT信号通路促进Ang II诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。     

HADHA通过调节PI3K/AKT信号通路抑制人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移与侵袭

目的 探讨羟酰基辅酶A脱氢酶α亚基（hydroxyacyl-CoA dehydrogenase alpha subunit, HADHA）对人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法 通过组织免疫荧光染色检测HADHA在6～8周正常早孕绒毛及复发性自然流产绒毛样本中表达水平的差异;慢病毒系统构建HADHA过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系,并采用qRT-PCR、Western blot、Transwell、细胞划痕实验评价HADHA对HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭能力和相关基因表达的影响;转录组测序及生物信息学分析筛选HADHA可能调控的靶基因及信号通路;加入蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)抑制剂明确HADHA调节HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭的具体分子机制。结果 HADHA在复发性自然流产样本的绒毛外滋养层（extravillous trophoblast, EVT）中较正常对照组中高表达。过表达HADHA的HTR-8/SVneo细胞中迁移侵袭相关基因HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平降低...