着丝粒蛋白F在肝癌中的表达和对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨肝癌中着丝粒蛋白F(CENPF)的表达量与细胞增殖、迁移等生物学行为的关系及其作用机制。方法比较肝癌细胞与正常肝细胞、肝癌组织与癌旁正常组织中CENPF的表达量。利用慢病毒包被的质粒转染肝癌细胞干扰CENPF的表达,分别使用MTS试剂、台盼兰染色法、transwell迁移小室方法研究CENPF的表达对细胞增殖、存活、迁移的影响,并利用Western blotting法探究其对细胞周期调控蛋白c-Myc、Cyclin D1表达的影响,明确CENPF作用机制。结果与正常肝细胞和癌旁正常组织相比,肝癌细胞和肝癌组织中CENPF蛋白表达量显著增加。使用病毒包被的质粒抑制CENPF的表达可显著降低肝癌细胞的增殖能力、存活率和迁移能力,同时调控细胞增殖和细胞周期的蛋白(c-Myc、Cyclin D1)的表达降低。结论肝癌中过表达的CENPF可通过激活细胞周期调控蛋白c-Myc和Cyclin D1,提高肝癌细胞的增殖、存活、迁移能力,诱导肝癌的发生和发展。     

Shh、Ptch、Gli1与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变

目的观察大鼠诱发肝癌过程中Shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用。方法利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDK1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化。结果根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期。Shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势;CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生-硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组。结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展。     

microRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨microRNA-218在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及功能。方法选取该院肝胆外科收治的46例HCC手术患者,并将其分为转染组和未转染组,比较两组HepG2细胞的microRNA-218表达、增殖、凋亡情况,以及B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(Bmi-1)和周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达水平。结果肝癌组织中microRNA-218表达水平明显低于癌旁组织(P0.05);microRNA218的表达水平与HCC的肿瘤大小、肿瘤TNM分期等临床病理特征密切相关(P0.05);转染组HepG2细胞增殖率在转染后24、48、72h均明显低于未转染组(P0.05);转染组HepG2细胞凋亡率明显高于未转染组(P0.05);HepG2细胞转染后的Bim-1、CDK6表达水平均明显低于未转染组(P0.05)。结论 microRNA-218可通过下调潜在靶点的Bim-1、CDK6表达水平来抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡。     

Shh、Ptch、Glil与CyclinB1-CDK1在肝癌发生发展过程中的改变

目的 观察大鼠诱发肝癌过程中shh信号通路相关蛋白及细胞周期蛋白的表达变化,探讨其在肝癌发生发展过程中的作用.方法 利用二乙基亚硝胺(DEN)制备诱发性大鼠肝癌模型,通过HE染色观察肝组织的形态学变化,应用免疫组织化学方法检测Shh、Ptch、Gli1、CyclinB1、CDk1蛋白在诱发性肝癌发生过程中的表达变化.结果 根据HE染色结果将实验动物分为正常对照组、肝细胞损伤期、肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期.shh、Ptch、Gli1蛋白阳性表达细胞主要分布在增生结节、癌结节、小叶间胆管上皮细胞和癌周组织中,其阳性表达率均随肝癌发生发展过程逐渐增高的趋势:CyclinB1和CDK1阳性表达的细胞主要分布于门管区、肝小叶的周边及癌结节内,在肝细胞增生一硬化期和肝细胞癌变期大鼠肝组织中表达均高于正常对照组.结论 Shh信号通路被激活后,可通过影响CyclinB1和CDK1蛋白的表达促进细胞G2/M期转变,完成有丝分裂,导致细胞失控性增殖,促进肝癌的发生发展.     

细胞周期蛋白A1对SKM-1细胞增殖的影响及其在骨髓异常增生综合征中的作用

目的:通过小干扰RNA(siRNA)下调Cyclin A1的表达,观察其对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法:采用阳离子脂质体转染方法,在SKM-1细胞中转染Cyclin A1的siRNA;转染48 h后收集细胞,应用Western blot及RT-PCR测定转染效率;应用CCK-8方法检测细胞增殖,Western blot及RT-PCR检测Cyclin A1基因沉默前后CDK2、RUNX1、SRSF2基因表达的水平。结果:转染Cyclin A1特异性siRNA 48 h后,Cyclin A1蛋白及mRNA表达水平显著下降(P0.01)。下调Cyclin A1后,SKM-1细胞的增殖受抑,CDK2、RUNX1及SRSF2基因的蛋白及mRNA表达量均下调(P0.05)。结论:Cyclin A1表达下调后,SKM-1细胞的增殖受到抑制,表明Cyclin A1可能是MDS治疗的潜在靶点之一。     

肝癌细胞HepG2外泌体对其自身生长行为的影响及其机制研究

目的探讨肝癌细胞HepG2外泌体对细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及其机制。方法培养肝癌细胞HepG2并用差速离心法提取其外泌体,采用粒径分析、透射电镜、蛋白质印迹法(Western blot)等方法对其进行鉴定。将外泌体与肝癌细胞HepG2共培养,采用细胞划痕实验比较其对细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验比较其对细胞迁移能力的影响;采用流式细胞仪分析其细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR检测实验组和对照组的细胞周期蛋白(Cyclin D)、细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)的相对表达水平。结果提取后的外泌体经过Western blot实验,CD63和CD9均有条带出现,颗粒大小在30～100nm,电镜形态正常。与对照组比较,实验组的细胞增殖率较高,肿瘤迁移能力提升;细胞G1期缩短,G2期延长;Cyclin D、CKS1和Bax相对表达水平均上升,Bcl-2相对表达水平降低。结论肝癌细胞HepG2外泌体通过调控Cyclin D、CKS1基因缩短其细胞周期,调控Bax、Bcl-2基因抑制细胞凋亡,从而对其增殖和迁移能力起促进作用。     

siRNA靶向抑制CXCR4基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

目的探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织。RT-PCR和Western bloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列)。转染48 h后Western bloting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P0.01)。结论抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Fascin shRNA通过Notch1信号通路调控结直肠癌细胞的生长

目的:研究聚束蛋白(Fascin)shRNA对结直肠癌细胞生长的影响。方法:结直肠癌细胞HT29感染FascinshRNA和shRNAcontrol慢病毒,real-timePCR和Western印迹法分别测定细胞中FascinmRNA和蛋白的表达水平,同时用Western印迹法检测细胞中的Notch1蛋白水平。用Notch1信号通路抑制剂DAPT处理下调Fascin后的HT29细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测周期蛋白p27、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果:Fascin shRNA慢病毒感染后的细胞中Fascin转录和表达水平均降低,而shRNA control慢病毒感染对细胞中的Fascin表达水平没有影响。沉默Fascin的细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞中Cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高。沉默Fascin能够降低细胞中Notch1蛋白水平,并且Notch1信号通路抑制剂DAPT可以协同沉默Fascin,进一步抑制结直肠癌细胞增殖,阻滞结直肠癌细胞周期,减少CyclinD1蛋白表达,促进p27蛋白表达。结论:FascinshRNA通过抑制Notch1信号通路阻碍结直肠癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期。     

精氨酸酶Ⅰ在HCV转染肝癌细胞增殖中的作用

目的:研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因组转染的肝癌细胞中精氨酸酶Ⅰ的表达及其意义,探究其在HCV-肝细胞肝癌(HCC)发病中的作用.方法:以转染HCV基因组的人肝癌细胞系(Huh7)为研究对象,采用蛋白印迹技术研究HCV基因组转染对细胞内精氨酸酶Ⅰ表达的影响;运用小干扰RNA(siRNA)技术抑制细胞精氨酸酶Ⅰ表达,并探讨其对细胞生长的影响及作用机制.结果:精氨酸酶Ⅰ在HCV阳性肝癌细胞系(Huh7-HCV)中的表达上调,且与对照细胞相比,Huh7-HCV细胞的精氨酸酶Ⅰ含量升高4.3倍.运用siRNA抑制细胞精氨酸酶Ⅰ表达,可明显抑制细胞生长并导致其死亡,且可使细胞周期发生明显改变.结论:精氨酸酶Ⅰ在HCV阳性肝细胞Huh7中表达上调,可能对促进Huh7-HCV细胞生长具重要意义.     

精氨酸酶I在HCV转染肝癌细胞增殖中的作用

目的:研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因组转染的肝癌细胞中精氨酸酶Ⅰ的表达及其意义,探究其在HCV-肝细胞肝癌(HCC)发病中的作用。方法:以转染HCV基因组的人肝癌细胞系(Huh7)为研究对象,采用蛋白印迹技术研究HCV基因组转染对细胞内精氨酸酶Ⅰ表达的影响;运用小干扰RNA(siRNA)技术抑制细胞精氨酸酶Ⅰ表达,并探讨其对细胞生长的影响及作用机制。结果:精氨酸酶Ⅰ在HCV阳性肝癌细胞系(Huh7-HCV)中的表达上调,且与对照细胞相比,Huh7-HCV细胞的精氨酸酶Ⅰ含量升高4.3倍。运用siRNA抑制细胞精氨酸酶Ⅰ表达,可明显抑制细胞生长并导致其死亡,且可使细胞周期发生明显改变。结论:精氨酸酶Ⅰ在HCV阳性肝细胞Huh7中表达上调,可能对促进Huh7-HCV细胞生长具重要意义。     

The tumor-suppressor gene LZTS1 suppresses hepatocellular carcinoma proliferation by impairing PI3K/Akt pathway

BackgroundTo study the role of LZTS1 in hepatocellular carcinoma (HCC) proliferation and the molecular mechanism involved.MethodsLZTS1 expression was studied in 10 HCC cell lines and 1 normal hepatocyte cell line by western blot analysis and qRT-PCR. One HCC cell line was selected and transfected with LZTS1 lentivirus. Cell proliferation and cell cycle were then determined by CCK-8 assay and flow cytometry, respectively. LZTS1, cyclin D1, CDK1, Cdc25C, pS473 Akt, and pT308 Akt mRNA and protein expressions were measured. PS473 Akt and pT308 Akt expression level was also compared with the HCC cells treated with LY294002.ResultsCompared with the normal hepatocyte cells, LZTS1 expression in HCC cells was significantly lower. After the transfection with LZTS1 lentivirus, HCC cell proliferation ability decreased markedly and HCC cells were blocked at G2/M phase. Cyclin D1 and CDK1 expression were both decreased but not significantly. Cdc25C expression was increased significantly. PS473 Akt and pT308 Akt expression level was increased significantly as well, which were almost the same with those transfected with LY294002.ConclusionLZTS1 could inhibit HCC cell proliferation by impairing PI3K/Akt pathway.     

miR-200a和YAP1在肺癌的不同表达及病理学意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中miR-200a与Yes相关蛋白1(YAP1)表达量在癌组织和癌旁组织的相关性及其临床病理意义.方法 回顾性选取259例非小细胞肺癌患者术后切除的肿瘤组织及癌旁组织为本次研究对象,采用RT-PCR方法检测并比较患者的miR-200a与YAP1表达量在癌组织和癌旁组织的相关性及其临床...     

miR-198 通过靶向ZEB2 调控EMT 过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-198（miR-198）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法 采用qRT-PCR 检测miR-198 在HCC 组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7) 中的表达情况;采用脂质体2000 向Huh7 细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics 和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198 的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot 检测E 盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2, ZEB2）及上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransformation, EMT）相关蛋白表达;CCK-8 法和细胞划痕实验检测Huh7 细胞增殖和迁移能力。结果 20 例HCC 组织中miR-198相对表达量（0.354±0.022）明显低于邻近正常组织（4.762±1.135）,差异有统计学意义（t=17.365,P＜ 0.001）。HCC细胞系HepG2（0.589±0.103）,Hep3G（0.495±0.086）,MHCC97H（0.558±0.056）和Huh7（0.362±0.045）中miR-198 相对表达量较正常肝细胞LO2（1.823±0.125）显著降低（t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P ＜ 0.05）。miR-198 mimics 组细胞增殖（0.398±0.146 vs 0.691±0.213）和迁移能力（20.012±2.103 vs 84.032±6.512）较对照组明显降低（t=1.965,52.459,均P ＜ 0.001）。miR-198 mimics 组细胞中E-cadherin 表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin 表达较对照组明显降低（t=18.478,17.550,19.706,均P ＜ 0.01）。ZEB2 是miR-198 的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20 例HCC 组织中ZEB2 相对表达量（3.621±1.143）明显高于邻近正常组织（ 0.736±0.030）,差异有统计学意义（t=11.284,P ＜ 0.001）,与miR-198 表达呈负相关（r=-0.702,P ＜ 0.05）。共转染过表达ZEB2 逆转了miR-198 mimics 对HCC 细胞增殖、迁移和EMT 的抑制作用。结论 miR-198 在HCC 组织和细胞中表达下调,miR-198 通过靶向负调控ZEB2 的表达抑制Huh7 细胞的增殖和迁移。     

沉默GPC3对肝癌Huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌Huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌Huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平,并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将肝癌Huh-7细胞株分为实验组、未转染组及对照组,实验组导入GPC3-siRNA-1633转染Huh-7,其余两组不作处理。EdU实验检查三组细胞增殖率,划痕实验测定各组细胞迁移率,Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果实验组GPC3 mRNA表达量及GPC3蛋白水平显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组Hippo通路中YAP mRNA表达量显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,实验组细胞增生率、迁移率及侵袭率显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPC3可促进肝癌Huh-7细胞增殖、侵袭及转移,从而促进肝癌细胞生长。CPG3可通过上调Hippo通路中YAP表达水平从而促进肝癌细胞增生。通过沉默GPC3 mRNA后可有效抑制肝癌Huh-7细胞生长。     

siRNA沉默VDAC1对MCF-7细胞增殖、周期的影响及其作用机制

[目的]观察siRNA沉默VDAC1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响.[方法]针对人VDAC1基因设计并合成siRNA,并将VDAC1-siRNA转染MCF-7细胞后,应用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞中VDAC1的表达水平,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况,流式细胞术检测MCF-7细胞的周期分布,同时Western印迹法检测周期蛋白D1的表达.[结果]MCF-7细胞转染VDAC1-siRNA后能够有效抑制VDAC1的表达,显著抑制其增殖水平,促使MCF-7细胞发生G1期阻滞,同时下调Cyclin D1蛋白表达.[结论]VDAC1沉默能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促使细胞发生G1期阻滞.VDAC1可作为乳腺癌治疗的新靶点.     

miR-184 functions as an oncogenic regulator in hepatocellular carcinoma (HCC)

Dysregulation of miRNAs has been proved to play a key role in carcinogenesis or tumor progression. In hepatocellular carcinoma (HCC), a number of miRNAs was reported to be related to the occurrence and development of HCC. Especially, miRNA-122, a liver-specific miRNA, has been elaborated its role in HCC. However, these studies was not involved in the effect of miRNA-184 on HCC. In the present study, we aimed to detect the miRNA-184 expression in HCC tissues and further evaluate the in vitro effect of miR-184 inhibition in HCC cells HepG2. We found that miR-184 expression was significantly high in HCC tissues, but INPPL1 expression was obviously low. Subsequently, INPPL1 was identified as a target of miRNA-184 by bioinformatics and dual luciferase assay. Moreover, after transfected with anti-miR-184 in HepG2 cells, INPPL1 expression was significantly decreased both at mRNA and protein levels. Additionally, we also proved that miR-184 silencing inhibited cellular proliferation by over expressing INPPL1 and induced HepG2 apoptosis by caspase 3/7. Together, our result was shown that miR-184 might play a part in proliferation of HCC cells by INPPL1 loss and act as antiapoptotic factor in the development of HCC by inhibiting the activities of caspases 3/7. Therefore, further elucidation of miRNA-184 silencing is helpful for understanding the pathogenesis of HCC and devising new strategies for its prevention and therapy.     

Sorafenib inhibits the hepatocyte growth factor-mediated epithelial mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma

The epithelial mesenchymal transition (EMT) has emerged as a pivotal event in the development of the invasive and metastatic potentials of cancer progression. Sorafenib, a VEGFR inhibitor with activity against RAF kinase, is active against hepatocellular carcinoma (HCC); however, the possible involvement of sorafenib in the EMT remains unclear. Here, we examined the effect of sorafenib on the EMT. Hepatocyte growth factor (HGF) induced EMT-like morphologic changes and the upregulation of SNAI1 and N-cadherin expression. The downregulation of E-cadherin expression in HepG2 and Huh7 HCC cell lines shows that HGF mediates the EMT in HCC. The knockdown of SNAI1 using siRNA canceled the HGF-mediated morphologic changes and cadherin switching, indicating that SNAI1 is required for the HGF-mediated EMT in HCC. Interestingly, sorafenib and the MEK inhibitor U0126 markedly inhibited the HGF-induced morphologic changes, SNAI1 upregulation, and cadherin switching, whereas the PI3 kinase inhibitor wortmannin did not. Collectively, these findings indicate that sorafenib downregulates SNAI1 expression by inhibiting mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling, thereby inhibiting the EMT in HCC cells. In fact, a wound healing and migration assay revealed that sorafenib completely canceled the HGF-mediated cellular migration in HCC cells. In conclusion, we found that sorafenib exerts a potent inhibitory activity against the EMT by inhibiting MAPK signaling and SNAI1 expression in HCC. Our findings may provide a novel insight into the anti-EMT effect of tyrosine kinase inhibitors in cancer cells.     

宫颈癌组织YAP1和SRSF3蛋白表达与临床病理参数及预后的关系

目的 检测宫颈癌组织Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)、丝氨酸/精氨酸富集剪接因子3(serine and arginine rich splicing factor 3,SRSF3)蛋白表达情况,探讨YAP1、SRSF3蛋白表达与临床病理参数及预后的关系.方法 81例宫颈癌...