UBE2T基因通过调控ROS抑制结直肠癌细胞凋亡

目的:通过结肠癌细胞实验检测UBE2T对结肠癌细胞凋亡的影响。方法:细胞计数盒（CCK-8）法检测UBE2T基因转染对结肠癌细胞活力的影响;流式细胞仪检测UBE2T转染后对结肠癌细胞凋亡的影响;DCFDA染色流式细胞仪检测UBE2T转染对结肠癌细胞中ROS水平的影响;CCK-8法检测H2O2（增加ROS）对UBE2T基因转染降低结肠癌细胞活力的影响;流式细胞仪检测H2O2对UBE2T基因转染增加结肠癌细胞凋亡率的影响。结果:UBE2T转染能够明显增加结肠癌细胞活力（P＜0.05）;UBE2T基因转染抑制结肠癌细胞凋亡率（P＜0.05）;UBE2T转染减少结肠癌细胞ROS水平;预处理H2O2减弱UBE2T基因转染对结肠癌细胞活力的增加作用（P＜0.05）;预处理H2O2逆转UBE2T基因转染对结肠癌细胞凋亡率的抑制作用（P＜0.05）。结论:UBE2T基因转染能够抑制结肠癌凋亡,其机制是通过调节结直肠癌细胞中ROS水平。     

降低Pin1对大肠癌SW620细胞的增殖和凋亡能力的影响

Objective  

The aim of our study was to investigate the effects of Pin1 reduction on SW620 cell proliferation and apoptosis in human colorectal carcinoma.     

细胞凋亡与增殖失衡在小鼠大肠癌诱发过程中的作用

目的:观察小鼠大肠癌不同阶段中细胞增殖与凋亡的变化规律,探讨细胞增殖-凋亡失衡在大肠不同阶段中的作用.方法:利用二甲肼(DMH)皮下注射诱发昆明种小鼠实验性大肠癌动物模型,分别于诱癌12、18、24、32周分批处死动物,以DNA末端标记(TUNEL)和免疫组化PCNA染色分别标记凋亡细胞和增殖细胞,多阶段动态观察增殖细胞和凋亡细胞的分布和密度变化.结果:小鼠正常粘膜中凋亡细胞全部位于表层,增殖细胞位于基底,数量均很少.诱癌早期增殖细胞和凋亡细胞轻度增多,二者比值变化不大;诱癌中期二者密度均显著升高,比值变化不显;诱癌晚期非癌粘膜增殖和凋亡细胞密度高于其它时段,不典型增生粘膜中增殖细胞增多,且随其程度递增,而凋亡细胞虽有升高,但不随其程度变化,二者比值则随其程度呈下降趋势.结论:1)在动物模型上证实了小鼠大肠癌发生过程中存在细胞增殖-凋亡失衡;2)诱癌早期低增殖、低凋亡,中期高增殖、高凋亡,晚期(癌)极高增殖、低凋亡;3)增殖细胞随不典型增生程度递增,凋亡细胞变化不显,二者比值呈递增趋势;4)癌变阶段最本质的变化为凋亡/增殖比值极度降低.以上结果支持我们以前在人类大肠癌研究中提出的"细胞选择性增殖"假说.     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

不同性质大肠粘膜细胞凋亡与增殖的研究

目的 研究不同性质大肠粘膜细胞中细胞凋亡与增殖状态及其意义。方法 取正常大肠粘膜１０例，大肠腺瘤２０例，大肠癌远旁、近旁和癌粘膜各３０例。应用ＴＵＮＥＬ、ＰＣＮＡ免疫组化染色，在连续切片上同步检测细胞凋亡和增殖状态。结果 ＴＵＮＥＬ染色阳性物质定位于细胞核，固缩成团、聚成环状或形成凋亡小体。ＰＣＮＡ染色阳性物质也主要定位于细胞核，呈弥漫或颗粒状着色。正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌细胞调亡率，各组间     

脂联素抑制大肠癌LoVo细胞增殖与侵袭能力

目的 研究重组人脂联素对高转移潜能的大肠癌细胞株LoVo细胞增殖和侵袭的影响,并探索其潜在的作用靶点和分子机制.方法 将不同浓度重组人脂联素作用于LoVo细胞,用MTT法和transwell小室实验检测脂联素对LoVo细胞增殖和侵袭迁移的影响;用Western blot法检测脂联素对基质金属蛋白酶-9(matrix m...     

CAAP1抑制肝癌HepG2细胞凋亡而促进其增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CAAP1对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:构建CAAP1过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.l-U6 neo/shR-CAAPl,转染肝癌HepG2细胞后,qPCR和WB实验分别检测CAAP1mRNA和蛋白的表达水平.实验分为过表达对照组(p...     

大肠癌发生发展中自噬基因Beclin1的表达及其与增殖和凋亡相关基因的关系探讨

探讨在大肠癌发生发展过程中自噬基因Beclin1的表达及其与增殖、凋亡相关基因之间的关系。方法:采用免疫组化检测29例正常大肠黏膜、60例大肠腺瘤、19例腺瘤恶变及50例大肠癌组织中Beclin1、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3及Ki-67蛋白的表达。结果:1）Beclin1在大肠癌中的阳性表达率高于正常大肠黏膜,但与大肠癌的组织学分化无关,与淋巴结转移有关;2）Bcl-2在大肠腺瘤、腺瘤恶变及大肠癌组织中的表达高于正常大肠黏膜,且与大肠癌的组织学分化及转移有关;Caspase-9与大肠癌的癌变有关,但与组织学分化和淋巴结转移无关;Caspase-3在正常大肠黏膜中的阳性表达高于其他组,无淋巴结转移组高于淋巴结转移组,但与大肠癌的组织学分化无关;3）Ki-67在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、腺瘤恶变及大肠癌中的表达逐渐增高,差异有统计学意义,且与大肠癌的组织学分化和淋巴结转移有关。结论:1）自噬可能与大肠癌的发生有关,但随着肿瘤的进展,自噬能力降低可能会促进其侵袭转移。2）大肠癌发生发展过程中,在癌细胞无限增殖的同时,自噬、凋亡通过内在的分子机制相互协调转化,使癌细胞逃脱了机体正常的清除机制,向恶性方向发展。      

大黄酸通过抑制STAT3基因的表达调控骨肉瘤细胞的增殖和凋亡

目的:探讨大黄酸对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法:以人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,利用CCK-8实验检测大黄酸对MG-63细胞增殖的影响,并计算大黄酸作用48 h的半数抑制浓度（IC50）,采用该浓度进行后续的实验。转染STAT3 siRNA至MG-63细胞,qRT-PCR和Western blot检测分别在mRNA和蛋白水平上检测转染效果,采用CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术验证大黄酸和STAT3 siRNA及其联合作用对MG-63细胞存活率、克隆形成、凋亡能力的影响,Western blot检测各组MG-63细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3的表达情况。结果:大黄酸能够呈浓度依赖性的抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖,干预48 h的IC50为46.05 μmol/L。大黄酸或STAT3 siRNA均能降低MG-63细胞中STAT3的表达,抑制MG-63细胞存活率,阻碍细胞克隆形成能力,促进细胞凋亡,上调细胞中Bax和Cleaved Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达;且二者联合效果更显著。结论:大黄酸通过抑制STAT3基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖并促进细胞凋亡。     

NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及可能的作用机制。方法 人食管癌EC9706细胞分别转染NKX6.3（NKX6.3组）和空白质粒（miR-NC组）,设空白对照组（Control组）。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞内活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡情况,Transwell 法检测细胞侵袭能力,Western blot检测增殖相关蛋白Ki67、侵袭相关蛋白（Vimentin、E-cadherin及N-cadherin）,凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表达。结果 Control组、miR-NC组和NKX6.3组食管癌EC9706细胞中NKX6.3表达、细胞增殖能力、细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞凋亡及侵袭能力,以及Ki67、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。其中,NKX6.3组NKX6.3表达量、细胞内活性氧,细胞凋亡率,Vimentin、E-cadherin、Bax及Caspase-3蛋白表达水平较miR-NC组升高;而线粒体膜电位、细胞增殖率、细胞侵袭数目、N-cadherin及Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 NKX6.3可抑制食管癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,该作用可能通过调控食管癌细胞中的增殖凋亡相关蛋白表达及活性氧水平实现。     

S-allylmercaptocysteine effectively inhibits the proliferation of colorectal cancer cells under in vitro and in vivo conditions

S-allylmercaptocysteine (SAMC), one of the water-soluble organosulfur garlic derivatives, has been demonstrated as a suppressive agent against some tumors. The effects of SAMC on the proliferation and metastasis of colorectal cancer (CRC) under in vitro and in vivo conditions were evaluated here. The viabilities and migrations of CRC cells SW480, SW620, Caco-2 treated with SAMC were measured by MTT, scratch-wound, and transwell assays. The in vivo anticancer effect of SAMC against luciferase-expressing SW620 xenografts in mice was determined by bioluminescence imaging and histopathology observation. The apoptosis of SAMC-treated CRC cells was examined by Western blotting. The results demonstrate that SAMC could effectively suppress the growth and metastasis of colorectal cancer cells both in vivo and in vitro. The anticancer effect of SAMC was related to the decreased proliferation and increased apoptosis as well as necrosis of cancer cells. Oral administration of SAMC in the quantity/concentration used had no apparent toxic side effect on the vital organs of the experimental mice. Taken together, the proliferation and metastasis of CRC cells can be significantly suppressed by SAMC treatment under both in vitro and in vivo conditions. SAMC may thus be a promising candidate for CRC chemotherapy.     

Stellettin B对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Stellettin B 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（01、1、10、100μmol／L）Stellettin B处理A549细胞和NCI-H1299细胞24、48、72和92h的增殖抑制率;采用Hoechst染色检测处理A549细胞24、48h后的凋亡指数;流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法和PI染色法分别检测处理A549细胞48h后的凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blotting检测处理48h后A549细胞周期相关蛋白（Cyclin A、CDK2及p21CIP1）的表达水平。结果 不同浓度Stellettin B可显著增强对A549细胞的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。不同浓度Stellettin B处理24、48h后,A549细胞的凋亡指数、凋亡率均升高且呈剂量依赖性（P＜0.05）。随着Stellettin B浓度的增加,G0／G1期细胞比例及p21CIP1蛋白的表达水平逐渐升高,S和G2／M期细胞比例及Cyclin A和CDK2蛋白的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Stellettin B 可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,可能与其对细胞周期相关蛋白表达的调控有关。     

丹酚酸B对非小细胞肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 探讨丹酚酸B对人非小细胞肺癌放射敏感性的影响及其可能机制。方法 MTT检测丹酚酸B对非小细胞肺癌A549、H1299细胞系的毒性作用。克隆形成实验检测丹酚酸B对放射敏感性的影响。Transwell实验检测丹酚酸B对肿瘤细胞迁移能力影响。蛋白印迹法检测丹酚酸B调控射线诱导的去泛素化酶OTUD7B及迁移标志蛋白MMP-2、MMP-9、E-cadherin、AKT及p-AKT的表达。结果 丹酚酸B能抑制A549、H1299细胞增殖。克隆形成实验显示丹酚酸B可增加A549、H1299细胞放射敏感性,放射增敏比分别为1.45、1.38。Transwell实验结果显示丹酚酸B可抑制细胞迁移能力(P<0.05)。蛋白印迹法结果示射线诱导A549、H1299细胞OTUD7B表达并有时间依赖性,而丹酚酸B能通过阻抑OTUD7B表达进而抑制MMP-2、MMP-9、p-AKT表达、促进E-cadherin表达。结论 丹酚酸B具有增强A549、H1299细胞放射敏感性的作用,其可能机制是丹酚酸B通过下调射线诱导的OTUD7B表达,抑制上皮-间质转化的进程而实现的。     

A new jasmonic acid stereoisomeric derivative induces apoptosis via reactive oxygen species in human prostate cancer cells

With the aim of identifying novel agents with antigrowth and pro-apoptotic activity on prostate cancer cells, in the present study, we evaluated the effect of a (−)-jasmonic acid derivative, the 3-hydroxy-2(S)-(2Z-butenyl)-cyclopentane-1(S)-acetic acid, obtained by biotransformation, on cell growth in androgen-sensitive (LNCaP) and androgen-insensitive (DU-145) human prostate cancer cells. The results obtained show that the new compound was able to inhibit the growth of both prostate cancer cells. In addition, our data seem to indicate that the apoptosis evocated by this new molecule, at least in part, appears to be associated with an increase of reactive oxygen species (ROS) production.     

Guggulsterone induces apoptosis in colon cancer cells and inhibits tumor growth in murine colorectal cancer xenografts

The plant sterol guggulsterone has recently been shown to have anti-tumorigenic potential. This study was designed to investigate the anti-tumor efficacy of guggulsterone and to elucidate its molecular mechanisms in colon cancer. Guggulsterone significantly increased apoptosis in HT-29 cells by activating caspases-3 and -8. Furthermore, guggulsterone decreased cIAP-1, cIAP-2, and Bcl-2 levels and increased the levels of truncated Bid, Fas, p-JNK, and p-c-Jun. The size of HT-29 xenograft tumors in guggulsterone-treated mice was significantly smaller than of the size of tumors in control mice. The present study suggests a potential therapeutic use for this compound in the treatment of colorectal cancer.     

粉防己碱诱导人视网膜母细胞瘤细胞凋亡及其机制研究

背景与目的：粉防己碱(tetrandrine,Tet)是一种天然化合物,其抗视网膜母细胞瘤作用尚不清楚。该研究拟检测Tet对人视网膜母细胞瘤细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其作用机制。方法：采用CCK-8法检测Tet对视网膜母细胞瘤细胞活力的抑制作用;应用Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况;在2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’, 7’-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)染色后,采用流式细胞术检测细胞内反应性活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测细胞Akt、p-Akt蛋白表达量。结果：Tet显著抑制视网膜母细胞瘤细胞活力,Tet浓度为4、8、10和20 μmol/L处理细胞24 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为5.7%、25.0%、55.1%和84.9%,Y79细胞抑制率分别为2.4%、2.9%、23.8%和54.2% (P<0.01);10 μmol/L Tet处理细胞12、24和48 h时,WERI-Rb-1细胞抑制率分别为6.0%、45.5%和74.7%,Y79细胞抑制率分别为2.9%、19.4%和43.3%(P<0.01)。Tet诱导细胞凋亡,以10 μmol/L Tet处理细胞24和48 h时,WERI-Rb-1细胞凋亡率分别为(23.70±1.75)%和(34.83±3.15)%,Y79细胞凋亡率分别为(9.62±2.69)%和(14.97±1.50)%(P<0.01),凋亡抑制剂Z-VAD-FMK能够显著抑制Tet对视网膜母细胞瘤细胞的凋亡诱导作用(P<0.05)。10 μmol/L Tet作用细胞6及12 h后,细胞的ROS产生量较对照组明显上升(P<0.01),N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)能够抑制Tet诱导产生的ROS(P<0.01),NAC抑制ROS后,细胞的凋亡率较单独Tet作用组明显下降(P<0.01)。Tet能够抑制视网膜母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号通路。结论：Tet诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡,该作用机制与细胞内ROS升高、PI3K/Akt信号通路抑制有关。