Wnt/β-catenin信号通路相关环状RNA在肺癌中的研究进展

环状RNA（circRNA）是转录组中普遍存在的一种封闭成环RNA分子,参与癌症在内的多种疾病进展。Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路控制着许多驱动癌症发展的细胞过程,circRNA的异常表达可通过包括Wnt/β-catenin信号通路在内的多种特定信号通路促进癌症的发生和发展。近年来多项研究表明Wnt/β-catenin信号通路相关circRNA在肺癌中作为新的生物标志物和治疗靶点的潜能。该文就Wnt/β-catenin信号通路相关circRNA对肺癌的影响做一综述,以期为肺癌诊治研究提供新的思路。     

PPAR-γ对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖的影响

目的 通过促进人胰腺癌BxPc-3细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）的表达,分析其对BxPc-3细胞增殖的影响。方法 培养BxPc-3细胞,分别给予终浓度为5、10、20、40 μmol/L的PPAR-γ 激动剂罗格列酮处理细胞,蛋白免疫印迹法检测PPAR-γ蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察细胞增殖活性。结果 BxPc-3细胞经5、10 μmol/L罗格列酮处理后其PPAR-γ表达与对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）,经20、40 μmol/L罗格列酮处理后PPAR-γ表达升高,与对照组比较差异有统计学意义（P均< 0.05）,且40 μmol/L罗格列酮组PPAR-γ表达较20 μmol/L罗格列酮组升高（P < 0.05）;BxPc-3细胞给予浓度为5、10 μmol/L罗格列酮处理后BxPc-3细胞增殖活性分别为0.60±0.07、0.57±0.06,与对照组的0.62±0.09比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）;经40 μmol/L罗格列酮处理后BxPc-3细胞增殖活性为0.30±0.02,低于20 μmol/L罗格列酮的0.45±0.03,且2组BxPc-3细胞增殖活性均低于对照组、5 μmol/L罗格列酮组和10 μmol/L罗格列酮组（P均< 0.05）。结论 促进PPAR-γ表达可以有效抑制人胰腺癌BxPc-3细胞增殖。     

β-arrestin2通过调控自噬水平在结肠炎中的作用

目的 研究β-抑制蛋白2 （β-arrestin2）是否通过调控自噬水平在结肠炎中发挥作用。方法 β-arrestin2野生型（WT）小鼠和β-arrestin2基因敲除（KO）小鼠各20只,随机分为4组,每组各10只,分别为β-arrestin2 WT对照组和实验组,β-arrestin2 KO对照组和实验组。实验组小鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠7 d诱导急性溃疡性结肠炎,对照组给予无菌ddH₂O。观察并记录各组小鼠的疾病活动指数。收集小鼠结肠组织,免疫组织化学和蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）、Beclin1的表达水平。在HCoEpiC细胞中,通过siRNA沉默β-arrestin2的表达,Earle's平衡盐溶液（EBSS）处理细胞以诱导细胞自噬的发生,检测LC3B表达水平。结果 β-arrestin2 WT实验组小鼠的结肠黏膜自噬相关蛋白表达水平上调,而β-arrestin2 KO实验组小鼠的结肠炎症程度明显改善,自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达水平下降（P < 0.05）,但Beclin1表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。在HCoEpiC细胞中沉默β-arrestin2的表达,EBSS处理后,LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达水平下调。结论 在结肠炎中,β-arrestin2调控自噬水平,当β-arrestin2缺失时,可以通过抑制自噬改善结肠炎。     

miR-21在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞中表达变化及作用机制

目的 探讨微RNA-21（miR-21）在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞（HNEpC）中表达变化及可能的作用机制。方法 应用脂多糖诱导建立HNEpC炎症反应细胞模型,分别应用荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测炎症细胞模型建立前后miR-21和磷酸酶及张力蛋白同源物 （PTEN）蛋白的表达水平变化。取脂多糖诱导的HNEpC细胞,分为miR-21抑制物组和阴性对照组,应用脂质体转染法分别将miR-21抑制物和阴性对照物转染入2组HNEpC细胞,比较转染后2组细胞中miR-21和PTEN蛋白的表达、细胞增殖活性和凋亡率以及细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平。结果 脂多糖诱导的HNEpC细胞中miR-21表达水平增高（P < 0.05）,PTEN蛋白的表达水平降低（P < 0.05）。miR-21抑制物组细胞中miR-21表达水平低于阴性对照组（P < 0.05）,转染后24、48、72 h后的吸光度值均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,凋亡率高于阴性对照组（P < 0.05）,并且细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,IL-10水平高于阴性对照组（P < 0.05）,细胞中PTEN蛋白的表达水平高于阴性对照组（P < 0.05）。结论 miR-21在脂多糖诱导的HNEpC炎症反应细胞模型中表达升高,抑制miR-21可显著抑制脂多糖诱导的HNEpC细胞的增殖活性和炎症反应,同时促进其凋亡,其机制可能与其对PTEN基因的调控有关。     

miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白通路对结直肠癌细胞增殖的影响

目的探究miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白(β-catenin)通路对结直肠癌(CRC)细胞增殖的影响。方法选取2018年1月—2020年10月收治的66例CRC的肿瘤组织及其相邻正常组织。同时培养正常人结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(HT29、LoVo、HCT116、Caco2、SW480细胞)。通过qRT-PCR检测CRC肿瘤组织、正常组织、正常人结肠上皮细胞与CRC细胞系中miR-142-3p表达水平;经免疫蛋白印迹法检测CRC细胞系中β-catenin表达水平;采用CCK-8法和流式细胞术检测miR-142-3p过表达后对CRC细胞增殖的影响;经免疫蛋白印迹检测过表达miR-142-3p对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用双荧光素酶报告基因检验miR-142-3p与β-catenin编码基因CTNNB1的靶向关系。结果miR-142-3p在CRC肿瘤组织和CRC细胞系中的表达显著下降(P<0.05);β-catenin在CRC细胞系中的表达显著升高(P<0.05);过表达miR-142-3p可靶向结合CTNNB1,显著抑制Caco2、LoVo和HT29细胞的增殖和Ki67+细胞比例,抑制β-catenin、c-myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。结论miR-142-3p可通过靶向调节β-catenin的表达,干扰Wnt/β-catenin通路,抑制CRC细胞的增殖。     

电针对APP/PS1小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α通路相关蛋白表达和老年斑沉积的影响

目的 观察电针对APP/PS1双转基因小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α (PI3K/GSK3α)信号通路上相关蛋白的分布表达,以及老年斑沉积的影响。 方法 基因鉴定后,3月龄雄性转基因小鼠随机分为模型组和电针组,野生型C57小鼠为对照组,每组6只。电针组电针百会(GV20)和双侧肾俞(BL23)14 d。治疗后,Western blotting和免疫组化法检测各组小鼠皮质区老年斑数量,PI3K亚单位P85α和P110α,以及GSK3α和pS^21-GSK3α等蛋白的分布和表达。 结果 模型组皮质区老年斑数较对照组显著升高(P < 0.001);电针组老年斑数较模型组显著降低( P < 0.001)。各相关蛋白主要表达于皮质神经元胞质。与对照组相比,模型组pS ^21-GSK3α、P110α和P85α蛋白表达明显降低(P < 0.01),GSK3α蛋白表达升高( P < 0.05);与模型组相比,电针组pS ^21-GSK3α、P110α和P85α的蛋白表达明显升高(P < 0.01),GSK3α蛋白表达降低( P < 0.05)。 结论 电针能调节APP/PS1双转基因小鼠皮质区PI3K/GSK3α通路相关蛋白表达,减少老年斑沉积。     

Elabela通过α7nAChR/JAK2/STAT3信号通路改善心肌缺血/再灌注损伤的机制研究

目的 探讨Elabela在心肌缺血/再灌注损伤中的作用机制。方法 检测急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者体内Elabela的浓度, 通过获取临床血样和体外建立氧化应激模型来模拟缺血再灌注损伤, 评估Elabela在大鼠心肌细胞（H9C2）中的表达和作用。结果 STEMI患者血浆中Elabela的浓度和经过氧化氢（H₂O₂）处理的H9C2细胞中Elabela表达均升高（P均< 0.001）。Elabela可降低H9C2细胞凋亡相关蛋白Bax水平、心肌细胞凋亡率、活性氧阳性细胞数、乳酸脱氢酶水平和丙二醛水平;增加经H₂O₂处理的H9C2细胞的超氧化物歧化酶活性和Bcl-2表达（P均< 0.05）。特异性抑制剂α-银环蛇毒素对α7nAChR/JAK2/STAT3信号通路的抑制抵消了部分Elablela的保护作用。结论 Elabela通过激活α7nAChR/JAK2/STAT3信号通路改善H₂O₂诱导的H9C2细胞损伤。     

Wnt2 b和β-catenin在胃癌组织中的表达及临床意义？

目的探讨 Wnt2 b和β-catenin在胃癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色检测48例胃癌组织和48例癌旁正常组织中 Wnt2b和β-catenin的表达,并分析其临床意义。结果 Wnt2b 和β-cate-nin在胃癌组织中的表达率分别为81.3%、66.7%;显著高于癌旁正常组织（12.5%和0%）,差异具有统计学意义（χ^2=45.553,P＜ 0.05）;Wnt2b的表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移相关（P ＜ 0.05）;β-catenin的表达与TNM分期、分化程度、组织学类型、淋巴结转移和癌侵犯神经相关（P ＜ 0.05）;且 Wnt2 b 与β-catenin蛋白的表达呈显著正相关性（r=0.340,P＜ 0.05）。结论 Wnt2b和β-catenin在胃癌的进展、分化、浸润和转移中起重要作用,是判断胃癌生物学行为的良好指标。     

A型肉毒毒素对面部三叉神经痛大鼠疼痛的改善作用及对炎性介质IL-6、TNF-α表达的影响

目的 探讨A型肉毒毒素（BTA）对面部三叉神经痛（TN）大鼠疼痛的改善作用及对炎性介质IL-6、TNF-α表达的影响。方法 从50只大鼠中随机取10只为对照组,剩余大鼠用结扎眶下神经的方法建立TN模型,分为模型组、BTA低剂量组（BTA-L组）、BTA高剂量组（BTA-H组）和卡马西平组,每组各10只。BTA-L组、BTA-H组分别以9、18 μL/kg BTA溶液于手术同侧面部须垫处注射,对照组及模型组给予等量生理盐水,卡马西平组以5 mg/kg卡马西平灌胃。检测大鼠疼痛阈值,ELISA法检测血清中IL-6、TNF-α水平,HE染色观察眶下神经组织病理变化;蛋白免疫印迹法检测三叉神经节中核因子κB（NF-κB）p65、磷酸化型NF-κB p65（p-NF-κB p65）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化型p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,模型组注射1、2、3周时疼痛阈值降低（P均 < 0.05）;与模型组比较,BTA-L组、BTA-H组、卡马西平组注射1、2、3周时疼痛阈值升高,且BTA-L组 < BTA-H组 < 卡马西平组（P均 < 0.05）;与对照组比较,模型组血清中IL-6、TNF-α水平及p-NF-κB p65、p-p38MAPK蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）;与模型组比较,BTA-L组、BTA-H组、卡马西平组血清中IL-6、TNF-α水平及三叉神经节中p-NF-κB p65、p-p38MAPK蛋白相对表达量降低,且卡马西平组 < BTA-H组 < BTA-L组（P均< 0.05）;HE染色显示,与模型组比较,BTA-L组、BTA-H组、卡马西平组神经纤维肿胀、排列、炎性细胞浸润等异常改变减轻,其中卡马西平组减轻更显著。结论 BTA可降低炎性介质IL-6、TNF-α水平,减轻炎症反应,改善面部疼痛,可能通过抑制NF-κB、p38MAPK信号通路发挥作用。     

长链非编码RNA SERTAD1-1在结直肠癌中的表达及意义

目的 探讨长链非编码RNA-癌基因SEI1-1（lnc-SERTAD1-1）对结直肠癌增殖、迁移及预后的影响。方法 选取125例结直肠癌患者的标本,检测癌组织和癌旁正常组织中lnc-SERTAD1-1的表达水平,分析lnc-SERTAD1-1与临床病理特征的相关性,分析lnc-SERTAD1-1对结直肠癌预后的影响。检测正常人结肠组织细胞CCD-18Co与人结直肠癌细胞HCT15中lnc-SERTAD1-1的表达。慢病毒转染构建含有目的基因lnc-SERTAD1-1过表达的HCT15（HO）及含有空白载体质粒的HCT15（HOC）,检测其lnc-SERTAD1-1以及SERTAD1蛋白的表达,并检测lnc-SERTAD1-1对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果 与癌旁正常组织比较,lnc-SERTAD1-1在结直肠癌组织（0.002 198±0.000 499 vs. 0.002 998±0.000 392,P < 0.001）和癌细胞（0.000 123±0.000 010 vs. 0.000 182±0.000 012,P = 0.004）中呈低表达水平 ;其表达高低与结直肠癌患者的肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤的大体分型相关（P均< 0.05）。在125例结直肠癌患者中,lnc-SERTAD1-1高表达（≥0.000 970）是其术后总生存及无病生存的独立保护因素（总生存HR = 0.228,95% CI：0.107 ~ 0.485,P < 0.001;无病生存HR = 0.228,95% CI：0.103 ~ 0.506,P < 0.001）。体外实验显示lnc-SERTAD1-1表达上调能抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移（P均< 0.05）。结论 lnc-SERTAD1-1通过抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移发挥抑癌基因的作用,是结直肠癌重要的预后影响因素。     

MicroRNA-374a activates Wnt/β-catenin signaling to promote breast cancer metastasis

Tumor metastasis involves a series of biological steps during which the tumor cells acquire the ability to invade surrounding tissues and survive outside the original tumor site. During the early stages, the cancer cells undergo an epithelial-mesenchymal transition (EMT). Wnt/β-catenin signaling is known to drive EMT and metastasis. Here we report that Wnt/β-catenin signaling is hyperactivated in metastatic breast cancer cells that express microRNA 374a (miR-374a). In breast cancer cell lines, ectopic overexpression of miR-374a promoted EMT and metastasis both in vitro and in vivo. Furthermore, miR-374a directly targeted and suppressed multiple negative regulators of the Wnt/β-catenin signaling cascade, including WIF1, PTEN, and WNT5A. Notably, miR-374a was markedly upregulated in primary tumor samples from patients with distant metastases and was associated with poor metastasis-free survival. These results demonstrate that miR-374a maintains constitutively activated Wnt/β-catenin signaling and may represent a therapeutic target for early metastatic breast cancer.     

沉默IL-37表达对骨肉瘤细胞的影响及其作用机制研究

目的 探讨IL-37对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 定量逆转录PCR（RT-qPCR）检测人正常成骨细胞（hFOB1.19）和骨肉瘤细胞（U2OS、MG63、Saos-2）中IL-37 mRNA的表达情况;设计沉默IL-37的小干扰RNA（siRNA）序列转染骨肉瘤细胞系,将转染干扰序列si...     

microRNA-138通过靶向作用于CCND1抑制结肠癌细胞增殖

目的探讨人结肠癌细胞SW620中细胞周期蛋白1(CCND1)的表达情况及其异常表达对细胞增殖的影响,阐述microRNA-138(miR-138)在SW620增殖中的可能机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)以及Western blot确定结肠癌组织和癌旁组织中CCND1的表达情况;随后采用qT-PCR检测结肠癌组织内miR-138的表达,并通过统计学分析miR-138与CCND1表达的相关性,培养SW620细胞并转染miR-138模拟物(mimics)后验证miR-138与CCND1的相关性,在SW620细胞内进一步转染miR-138模拟物后,Transwell和MTT检测不同处理组中细胞增殖和迁移能力的改变情况;继续转染CCND1 siRNA后,探索miR-138影响细胞生物学过程的可能机制。结果结肠癌组织中,与相应癌旁组织相比,CCND1表达显著升高,miR-138表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-138mimics后,与空白对照组(未转染组)相比,细胞迁徙能力下降,同时增殖降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染CCND1 siRNA后,与未转染组相比,miR-138表达变化无显著差异(P>0.05),而细胞侵袭能力和增殖能力较未转染组相比显著改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌组织中CCND1异常升高可能与miR-138的表达降低有关,且miR-138影响SW620细胞的迁移和增殖能力可能是通过影响CCND1的表达实现的。     

Puerarin induces platinum-resistant epithelial ovarian cancer cell apoptosis by targeting SIRT1

ObjectivePrevious investigations indicated the anticancer activity of puerarin. The current study aimed to evaluate the effect and molecular mechanisms of puerarin in chemotherapy-resistant ovarian cancer cells.MethodsWe examined the effects of puerarin in platinum-resistant epithelial ovarian cancer cells in vitro and in vivo. We also analyzed the molecular mechanism underlying Wnt/β-catenin inhibition and sirtuin 1 (SIRT1) regulation following puerarin treatment.ResultsOur study demonstrated that puerarin effectively inhibited cell growth in vitro and in vivo by increasing apoptosis in ovarian cancer cells. More importantly, puerarin sensitized cisplatin-resistant ovarian cancer cells to chemotherapy. Puerarin treatment decreased SIRT1 expression, which attenuated the nuclear accumulation of β-catenin to inhibit Wnt/β-catenin signaling. In addition, SIRT1 overexpression diminished the effects of puerarin treatment on cisplatin-resistant ovarian cancer cells. Further analysis supported SIRT1/β-catenin expression as a candidate biomarker for the disease progression of epithelial ovarian cancer.ConclusionsPuerarin increased the apoptosis of platinum-resistant ovarian cancer cells. The mechanism is partly related to the downregulation of SIRT1 and subsequent inhibition of Wnt/β-catenin signaling.     

三氧化二砷抑制大肠癌SW620细胞增殖和转移的实验研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制大肠癌SW620细胞增殖和转移的机制。方法将不同浓度的As2O3（0,1,2,4,8μmol/L）作用于人的大肠癌SW620细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组大肠癌细胞NOTCH1mRNA表达,免疫细胞化学（SP法）检测各组CD133,KI67,血管内皮生长因子-C（VEGF-C）蛋白的表达。结果随着As2O3浓度的增加,NOTCH1mRNA、KI67、VEGF-C、CD133的表达逐渐减少,CD133与Notch1呈正相关,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 As2O3具有抑制大肠癌SW620细胞株细胞增殖和转移的作用,其机制可能与下调Notch1,以及对CD133、KI67、VEGF-C的抑制有关。     

Wnt inhibitory factor 1 is epigenetically silenced in human osteosarcoma, and targeted disruption accelerates osteosarcomagenesis in mice

Wnt signaling increases bone mass by stimulating osteoblast lineage commitment and expansion and forms the basis for novel anabolic therapeutic strategies being developed for osteoporosis. These strategies include derepression of Wnt signaling by targeting secreted Wnt pathway antagonists, such as sclerostin. However, such therapies are associated with safety concerns regarding an increased risk of osteosarcoma, the most common primary malignancy of bone. Here, we analyzed 5 human osteosarcoma cell lines in a high-throughput screen for epigenetically silenced tumor suppressor genes and identified Wnt inhibitory factor 1 (WIF1), which encodes an endogenous secreted Wnt pathway antagonist, as a candidate tumor suppressor gene. In vitro, WIF1 suppressed β-catenin levels in human osteosarcoma cell lines, induced differentiation of human and mouse primary osteoblasts, and suppressed the growth of mouse and human osteosarcoma cell lines. Wif1 was highly expressed in the developing and mature mouse skeleton, and, although it was dispensable for normal development, targeted deletion of mouse Wif1 accelerated development of radiation-induced osteosarcomas in vivo. In primary human osteosarcomas, silencing of WIF1 by promoter hypermethylation was associated with loss of differentiation, increased β-catenin levels, and increased proliferation. These data lead us to suggest that derepression of Wnt signaling by targeting secreted Wnt antagonists in osteoblasts may increase susceptibility to osteosarcoma.     

长链非编码RNA-PVT1介导JAK/STAT3信号通路对肺纤维化的研究

目的 探讨长链非编码RNA-浆细胞瘤变异易位基因1/蛋白质酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3（lnc-PVT1/JAK/STAT3）信号通路参与肺纤维化的作用机制。方法 采用不同浓度脂多糖（LPS）作用于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用CCK-8法检测细胞活性、蛋白免疫印迹法检测α-SMA的蛋白相对表达量,对LPS...