苦杏仁苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的研究苦杏仁苷对子宫内膜癌细胞RL95-2及HEC-1B增殖、侵袭及凋亡的影响。方法使用8、16、32、64和128mg/L浓度苦杏仁苷处理RL95-2、HEC-1B细胞24、48和72h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力并计算苦杏仁苷的半数抑制浓度(IC50);Transwell试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭能力的影响;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western blot试验检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白以及PI3K/Akt/m TOR信号通路相关蛋白表达情况。结果苦杏仁苷呈浓度及时间依赖性抑制子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞生长活性,48h时半数抑制浓度(IC50)约为40mg/L;苦杏仁苷能抑制RL95-2、HEC-1B细胞穿膜细胞数[(227.67±11.06)个比(459.33±24.75)个,(188.67±11.14)个比(412.33±14)个,P均0.01];经苦杏仁苷处理后RL95-2、HEC-1B细胞凋亡率升高[(7.85±0.71)%比(1.49±0.08)%、(8.55±0.69)%比(1.61±0.13)%,P均0.01],凋亡蛋白Bcl-2表达下降[(0.19±0.03)比(0.36±0.04)、(0.25±0.04)比(0.39±0.05),P均0.01],Bax表达升高[(0.37±0.06)比(0.18±0.04)、(0.41±0.06)比(0.21±0.03),P均0.01];苦杏仁苷能显著下调RL95-2、HEC-1B细胞的PI3K[(0.42±0.04)比(0.78±0.05)、(0.36±0.05)比(0.63±0.03),P均0.01]、Akt[(0.73±0.05)比(0.92±0.05)、(0.65±0.03)比(0.86±0.04),P均0.01]及m TOR[(0.25±0.04)比(0.93±0.06)、(0.34±0.05)比(0.88±0.04),P均0.01]磷酸化水平,抑制PI3K/Akt/m TOR通路活化。结论苦杏仁苷通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化,促进子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞凋亡,降低其增殖活性,抑制细胞侵袭功能,从而发挥抗肿瘤作用。     

PI3K/Akt信号通路介导的细胞凋亡机制研究进展

PI3K/Akt信号通路是参与细胞增殖调控的重要 通路之一[1],既有抗凋亡作用又有促凋亡作用 ,以抗 细胞凋亡为主。研究证实AKT的活化与许多人类疾 病如癌症、白血病、糖尿病、精神分裂等密切相关[2]。 现在就PI3K/Akt信号通路对凋亡作用综述如下。     

ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性影响

目的 探讨ErbB2基因沉默介导PI3K/Akt/eNOS信号通路对卵巢癌细胞生物学特性的影响及机制.方法 选取对数生长期人卵巢癌细胞株HO8910细胞分为5组:空白对照组(不转染任何序列)、阴性对照组(转染空载体质粒)、siErbB2组(转染siRNA序列)、wortmannin组(转染PI3K/Akt/eNOS信号...     

PI3 K／Akt信号转导通路与肿瘤细胞增殖

恶性肿瘤最突出的特征是细胞的异常增殖,细胞增殖的调控与肿瘤发生的密切关系已经为人们所认识。肿瘤的增殖与多条信号通路相关。近几年研究发现,一些因素引起的肿瘤细胞的增殖与磷脂酰肌醇-3-羟基激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3 K）／丝氨酸蛋白激酶（serine-threonine kinase, Akt）信号通路密切相关［1－2］。现就 PI3 K、Akt的结构、信号通路的组成及其与肿瘤细胞增殖关系的机制进行综述。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在骨关节炎中的作用

骨关节炎（OA）是常见的骨关节疾病,是导致疼痛和致残的主要病因,主要影响膝、髋、腕、脊柱等关节。OA发病机制尚不清楚。PI3K/Akt/mTOR信号通路调控细胞的生长、分化、迁移、血管生成和代谢,是体内调节细胞凋亡、自噬的重要通路。最近有研究发现PI3K/Akt/mTOR信号通路参与了OA的发生、发展。笔者查阅相关文献后拟从PI3K/Akt/mTOR信号通路对OA作用机制研究的新进展进行综述,以期为OA的防治提供新思路。     

妊娠高血压综合征胎盘细胞凋亡的研究

目的 :通过观察妊娠高血压综合征 (PIH)患者胎盘细胞凋亡的情况 ,了解细胞凋亡在PIH发病中的作用。 方法 :采用DNA缺口原位标记Tunel’s技术 ,测定 2 4例PIH患者胎盘不同部位细胞凋亡指数 ,以 2 4例正常妊娠妇女胎盘作为对照 ,并用电镜的超微结构改变来证实。 结果 :PIH组胎盘滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞凋亡指数分别为 (5 .36± 2 .5 0 ) %、(6 .4 8± 3.70 ) %、(5 .6 3± 2 .80 ) % ,对照组分别为 (3.91± 1.6 5 ) %、(5 .39±1.76 ) %、(4.0 8± 1.97) % ,与PIH组相比差异均有统计学意义 (P <0 .0 1) ;电镜显示PIH患者胎盘滋养细胞与合体滋养细胞均有不同程度的异常形态变化。 结论 :细胞凋亡是PIH不良妊娠结局的重要因素之一 ,是影响胎盘功能的直接原因     

鱼藤素对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的：观察鱼藤素对MCF-7细胞株细胞增殖和凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）信号通路的影响,旨在研究其抗肿瘤机制。方法：细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8,CCK8）检测0、1、5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞增殖的影响,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/Akt通路相关分子的蛋白表达。结果：5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后能明显抑制MCF-7细胞增殖（P〈0.01）,抑制率随着浓度升高和时间延长而增加,各组间两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）;而1μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞的增殖无明显影响（P〉0.05）。5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6h后能诱导MCF-7细胞凋亡,透射电子显微镜下可观察到典型的凋亡细胞形态,而相同条件下1μmol/L鱼藤素对MCF-7细胞的凋亡诱导作用不明显。5μmol/L鱼藤素作用6h后,MCF-7细胞内磷酸化Akt（p-Akt）（Thr308）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（phosphorylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β）（Ser9）、磷酸化磷酸肌醇依赖性激酶1（phosphorylated 3-phosphoinositide-dependent protein kinase1,p-PDK1）（Ser241）和磷酸化人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因编码的蛋白（phosphorylated phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,p-PTEN）（Ser380）的表达量明显减少,而总Akt蛋白的表达量则无明显变化;1μmol/L鱼藤素作用6h后,细胞内上述所有蛋白的表达量均无明显变化。结论：鱼藤素可能通过抑制PTEN（Ser380）和PDK1（Ser241）蛋白的磷酸化,进而抑制Akt（Thr308）的磷酸化,间接抑制其下游GSK-3β（Ser9）的磷酸化,最终诱导MCF-7细胞凋亡和抑制其增殖。     

萝卜硫素对人结肠癌HT-9细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

[目的]研究萝卜硫素对人结肠癌HT-9细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。[方法]采用CCK8试剂检测萝卜硫素对HT-9细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色检测萝卜硫素对HT-9细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达。[结果]萝卜硫素可以明显抑制HT-9细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;PI染色结果提示萝卜硫素可明显诱导HT-9细胞的凋亡,10、20、40 μg/mL萝卜硫素作用24 h后,HT-9细胞的凋亡率分别为（14.67±1.95）%、（27.95±2.53）%及（35.6±3.75）%,并且让细胞停留在G0/G1期;Western Blot结果提示萝卜硫素呈剂量依赖性的抑制PI3K、p-Akt及Bcl-2蛋白的表达,并诱导Bax蛋白的表达。[结论]萝卜硫素可明显抑制HT-9细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

探讨microRNA-20b（miR-20b）在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-20b 在卵巢癌细胞系A431、SKOV3 及正常卵巢上皮细胞系Hose 中的相对表达量,将SKOV3 细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b 模拟物组,用Lipofectamine2000 分别不转染、转染miR-20b scramble 和miR-20b mimics,CCK8 实验测定3 组细胞增殖能力,流式细胞术测定3 组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10 号染色体有缺失的磷酸酶（PTEN）、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的相对表达量。结果qRT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b 相对表达量较Hose 细胞系低;miR-20b 模拟物组在0、24、48、72 及96 h的OD45 nm 值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b 模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b 模拟物组PTEN 相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论miR-20b 抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN 和上调PARP 蛋白表达有关。     

妊娠高血压综合征患者外周血TH1/TH2模式

目的　研究妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )患者外周血TH1、TH2百分比及TH1 TH2比值 ,探讨其TH1 TH2模式。方法　用CD3 TC、CD8 FITC、IFN γ PE、IL4 PE抗体三重染色 ,流式细胞术测定 2 0例妊高征患者 (中度 12例 ,重度 8例 )、15例正常妊娠妇女外周血TH1、TH2百分比。结果　①妊高征组患者外周血TH1百分比为 ( 2 0 5 0± 4 0 2 ) % ,明显高于正常晚期妊娠组 ( 12 5 7± 2 18) % ,而TH2百分比 ( 2 3 1± 1 0 2 ) %明显低于正常晚期妊娠组 ( 3 63± 0 70 ) % ,差异显著 (P均 <0 0 5 ) ;②妊高征组TH1 TH2比值 ( 11 80± 7 72 )。显著高于正常晚期妊娠组 ( 3 66± 1 15 ) ,P <0 0 1。结论　中、重度妊高征患者与正常晚期妊娠妇女比较 ,其外周血TH1免疫增强 ,而TH2免疫减弱 ,属于TH1模式。     

妊高征患者血清睾酮的测定及其临床意义

目的探讨雄激素与妊高征的关系。方法用放免法测定102例29～36周单胎初孕妇的血清总睾酮(T),其中妊高征(PIH)患者72例(28例轻度、25例中度、19例重度),正常孕妇30例。结果中、重度PIH患者的血清总T显著高于正常孕妇(P＜0.05,P＜0.01),其胎儿性别分布与正常对照无统计学差异(P＜0.05)。结论妊高征患者血清T升高可能与妊高征的发病有关;检测血清T可帮助了解PIH患者的病情。     

妊娠期高血压疾病胰岛素抵抗与凝血功能异常的相关性研究

目的探讨妊娠期高血压疾病胰岛素抵抗与凝血功能异常的相关性。方法选择我院近年来收治的妊娠期高血压疾病（简称妊高病）患者、同期正常妊娠孕妇及正常非孕妇体检者,对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（Fbg）、HOMA指数进行检测分析。结果正常妊娠组和妊高病组产妇与正常非妊娠组比较,各项凝血指标和胰岛素抵抗指标均有显著性差异;妊高病组的各项凝血指标和胰岛素抵抗指标,与正常妊娠组比较,差异有统计学意义,P〈0.01。妊高病糖耐量正常组与妊高病糖耐量异常组患者的胰岛素抵抗与凝血功能具有明显的相关性,P〈0.05。结论妊娠期高血压疾病胰岛素抵抗与凝血功能异常存在明显的相关性,特别是合并糖耐量异常的妊高病患者,胰岛素抵抗和血液促凝血状态更为严重。     

干扰RNA沉默tpd52基因对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究沉默tpd52基因表达后对胶质瘤U87细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法 将携带着shRNA-tpd52(抑制tpd52的核苷酸序列)、shRNA-NC(阴性对照的核苷酸序列)的慢病毒体外转染胶质瘤细胞系U87.在转染48 h后荧光显微镜下观察表达GFP细胞数量,采用荧光定量PCR、Western blot分别检测TPD52 mRNA及蛋白表达量,MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,Annexin V和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果 U87细胞转染率>90%,与shRNA-NC组及空白对照组相比较,shRNA-tpd52组细胞TPD52 mRNA及蛋白表达量明显减少(P<0.01),而且细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期被阻滞在G0/G1期、细胞凋亡比例明显增加(P<0.05).结论 沉默胶质瘤细胞中tpd52基因表达后,可以有效抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡.     

川楝素对K562细胞增殖和凋亡作用的影响

目的：探讨川楝素对人白血病K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法：MTT法检测川楝素对K562细胞和健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制率.瑞氏染色观察川楝素对K562细胞、PBMC形态的影响.透射电镜观察K562细胞超微结构改变.流式细胞术检测细胞凋亡率.琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA片段化现象.比色法检测Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性变化.免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-xl,Bax和Fas的表达.结果：川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性（P〈0.01）,作用72h后IC50值为（52.13±0.82）nmol/L,而对PBMC几乎无影响.普通光镜下分别观察K562细胞和PBMC,K562细胞可见典型的凋亡形态学改变,PBMC形态无明显变化.超微结构显示K562细胞核染色质聚集,固缩,可见凋亡小体;以10,30,50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率分别为9.66%,26.06%,52.70%（P〈0.01）;琼脂糖凝胶电泳可见典型“梯状”条带;川楝素激活K562细胞Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性;凋亡相关蛋白Bcl-xl表达降低,Bax,Fas表达增强（P〈0.05）.结论：川楝素对K562细胞与PBMC之间具有选择抑制作用和诱导K562细胞凋亡的作用,可能通过线粒体途径和死亡受体途径双重机制介导.     

妊娠高血压综合征患者红细胞免疫功能的观察

对４０例妊娠高血压综合征患者和３０例正常孕妇进行了红细胞Ｃ＿３ｂ受体（Ｃ＿３ｂＲ）花环试验、免疫复合物（ＩＬ）花环试验及红细胞免疫粘附（ＲＣＩＡ）调节因子（ＲＣＩＡ促进因子和ＲＣＩＡ抑制因子）活性的测定。结果：妊高征患者Ｃ３＿ｂＲ花环率及ＩＣ花环率均低于正常孕妇（Ｐ＜０．０１），ＲＣＩＡ抑制因子活性明显高于正常孕妇（Ｐ＜０．００１）。提示：妊高征患者红细胞免疫功能原发低下。其原因可能与ＲＣＩＡ抑制因子活性增强有关。     

PI3K/Akt信号与吴茱萸碱抑制人结肠癌细胞增殖的关系研究

目的 研究吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用及可能的分子机制.方法 采用结晶紫染色分析Evo(0、0.5、1、2、4μmol/L)对LoVo细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞凋亡的促进作用;Western blot法分析Evo(0、0.5、1 μmol/L)对LoVo细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Caspase-3蛋白表达水平的影响;利用缺氧诱导因子-1 α(hypoxia inducible factor 1-alpha,HIF-1 α)荧光素酶报告质粒检测Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对HIF-1 α转录活性的影响.采用Western blot法分析Evo(0、0.5、1、2μmol/L)对LoVo细胞中HIF-1 α、Akt1/2和磷酸化Akt1/2蛋白水平的影响.结果 与对照组相比,Evo明显抑制LoVo细胞增殖,下调PCNA蛋白水平,促进LoVo细胞凋亡;报告质粒统计结果显示,Evo呈浓度依赖性降低HIF-1α荧光素酶报告质粒活性(Evo为0.5μmol/L时,P＜0.05;Evo为1μmol/L或2μmol/L时,P＜0.01);Western blot检测结果显示,Evo能够明显降低HIF-1 α蛋白水平,下调Akt1/2磷酸化水平.结论 Evo能够抑制LoVo细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与Evo下调HIF-1α蛋白表达,抑制PI3 K/Akt信号转导相关.     

妊高征血浆环核苷酸含量的变化

目的 :探讨血浆环核苷酸在妊高征中的变化以及作用。方法 :采用竞争性蛋白结合分析的方法及其放射免疫方法测定 2 5例重度妊高征和 2 7例正常妊娠晚期妇女 (对照组 )血浆中环磷酸腺苷 (c AMP)和环磷酸鸟苷 (c GMP)的含量。结果 :妊高征患者血浆 c AMP和 c GMP的浓度远远高于正常对照组 ,并且妊高征产后组明显低于产前组。产前 c AMP与产后平均动脉压 (MAP)之间呈明显的负相关。结论 :c AMP和 c GMP在妊高征中表现出相互协同的作用 ,共同拮抗细胞内 Ca2 +升高引发的血管收缩