pre-hsa-miR-98对卵巢癌细胞增殖活性抑制的影响

目的卵巢癌的死亡率占各类妇科恶性肿瘤的首位,对女性患者的生命造成严重威胁。miR-98可抑制多种癌细胞增殖,但未见关于其应用于卵巢癌治疗的报道。文中为探讨卵巢癌治疗的新方法,用pre-hsa-miR-98转染卵巢癌SKOV3、HO8910和A2780细胞,观察转染率并研究转染后对卵巢癌细胞的增殖抑制作用。方法利用构建的pre-hsa-miR-98质粒HmiR和连接随机序列的质粒CmiR转染人卵巢癌细胞SKOV3、HO8910和A2780细胞,荧光显微镜与流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测细胞增殖抑制率与细胞计数绘制生长曲线研究转染对卵巢癌细胞的增殖抑制作用。结果转染HmiR后,荧光显微镜观察和流式细胞术计数结果显示SKOV3、HO8910、A2780细胞的转染率均在60%左右。转染HmiR后,MTT法检测SKOV3、HO8910、A2780细胞的增殖抑制率随转染时间延长而增加,72 h分别达到49.54%、53.25%、46.09%。生长曲线显示在72 h及96 h抑制率达到高峰,随后随时间延长抑制率不再显著升高。结论 3种卵巢癌细胞的转染率达到实验要求,HmiR转染后可抑制卵巢癌细胞增殖,其抑制作用随转...     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

PCBP1对神经毒素6-OHDA诱导的小胶质细胞凋亡的影响

目的 观察PCBP1对于神经毒素6-OHDA所介导小胶质细胞BV-2的细胞凋亡的影响。方法 将空载质粒pEGFP-N1与PCBP1构建重组质粒,经酶切、纯化、测序鉴定,采用脂质体转染法将PCBP1基因转入小胶质细胞BV-2细胞系24h时,用不同浓度6-OHDA于不同时间分别刺激BV-2细胞,采用流式细胞仪对细胞周期进行检测。结果 经测序鉴定显示成功构建PCBP1的真核表达载体。流式细胞仪检测:同等剂量6-OHDA对转染pEGFP-N1-PCBP1(实验组)和pEGFP-N1(对照组)的BV-2细胞作用不同时间后,实验组细胞的早期凋亡率较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同剂量的6-OHDA对两组细胞作用24h后,实验组较对照组的细胞早期凋亡率明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCBP1对6-OHDA所介导的细胞早期凋亡率有一定的影响,有利于PCBP1在帕金森病中进一步研究。     

miR-98前体转染卵巢癌细胞的效率检测及增殖抑制检测

目的 pre-hsa-miR-98转染卵巢癌SKOV3、HO8910和A2780细胞,观察转染率并研究转染后对卵巢癌细胞的增殖抑制作用,为卵巢癌新治疗方法研究提供实验依据。方法利用构建的pre-hsa-miR-98质粒HmiR和连接随机序列的质粒CmiR转染人卵巢癌细胞SKOV3、HO8910和A2780细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪计数计算转染率,MTT法检测转染对卵巢癌细胞的增殖抑制作用。结果 HmiR转染后24 h,荧光显微镜下观察,SKOV3、HO8910、A2780细胞的转染率分别为61.50%、68.59%、63.40%;流式细胞术计数,转染HmiR后SKOV3、HO8910、A2780细胞的转染率分别为57.93%、66.73%、58.59%。转染HmiR后,MTT法检测SKOV3、HO8910、A2780细胞的增殖抑制率随转染时间延长而增加,72 h达到49.54%、53.25%、46.09%。结论三种卵巢癌细胞的转染率均接近或超过60%,HmiR转染后可抑制卵巢癌细胞增殖,其抑制作用随转染时间延长而增强。     

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞NF-κB表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的影响,进一步探索雷公藤内酯抑制海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的分子机制。方法:倒置显微镜观察BV-2小胶质细胞的活化增殖,免疫组化方法检测BV-2小胶质细胞的NF-κB蛋白表达水平,RT-PCR检测BV-2小胶质细胞的NF-κB mRNA表达水平。结果:倒置显微镜结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞胞体变大变圆,突起变短或消失。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞胞体变小变瘦,突起变细长,与对照组相似。免疫组化结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著增加(P0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著降低(P0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著增加(P0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论:雷公藤内酯提取物可抑制小胶质细胞活化增殖,其分子机制可能与下调小胶质细胞NF-κB蛋白和mRNA表达有关。     

miR-98-3p对食管癌KYSE-30细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的 探讨miR-98-3p在食管癌组织和细胞中的表达,并研究其对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 qRT-PCR法检测miR-98-3p在食管癌组织及细胞系中的表达水平;miR-98-3p模拟物(miR-98-3p mimics)和miR-98-3p抑制物(miR-98-3p inhibitors)瞬时转染...     

栝楼桂枝汤对谷氨酸诱导的BV-2细胞损伤的保护作用

目的研究栝楼桂枝汤水提物(Glgzd)对谷氨酸诱导的小鼠小胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用。方法用30 mmol/L谷氨酸作用于BV-2细胞诱导其损伤,采用MTT检测Glgzd对谷氨酸损伤后BV-2细胞的活性;倒置显微镜下观察Glgzd作用24 h后BV-2细胞形态的变化;透射电子显微镜下观察BV-2细胞的超微结构变化。结果谷氨酸诱导的BV-2细胞出现收缩、漂浮现象,活性显著降低,线粒体肿胀、空泡化,内质网扩张,细胞核出现明显的异染色质边聚等早期凋亡现象。经Glgzd干预后,BV-2细胞活性增加,细胞凋亡现象明显较少。结论栝楼桂枝汤可抑制谷氨酸引起的BV-2细胞损伤,并呈剂量依赖性,500~1 000μg/mL的效果较好。     

miR-98对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的研究microRNA-98(miR-98)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法将阴性对照、miR-98 mimics、inhibitor阴性对照、miR-98 inhibitor瞬时转入肝癌细胞株,应用噻唑盐(MTT)法、平板集落形成实验、Transwell小室侵袭法、流式细胞周期实验检测miR-98对SMMC7721细胞生长、增殖及侵袭能力的影响。进一步用Western blot检测Cyclin D1的表达水平。结果 MTT实验表明miR-98过表达后,肝癌细胞的生长能力明显高于对照组,平板克隆实验的结果说明miR-98可以使肝癌细胞的克隆形成率由17.33%升高至76.66%、Transwell小室侵袭实验表明miR-98使肝癌细胞的侵袭能力也明显增强。流式细胞周期实验发现miR-98过表达后,肝癌细胞停留在G1=66.71%期和S=35.89%期的数目显著高于对照组G1=38.93%,S=26.62%。而当miR-98被抑制后,SMMC7721肝癌细胞的生长增殖及侵袭能力减弱。Western blot实验检测发现miR-98过表达后,CyclinD1的表达也升高。结论 miR-98可能通过上调Cyclin D1的表达,增强SMMC7721细胞的生长增殖和侵袭能力,提示miR-98可能在肝癌的发生、发展中起重要作用。     

NHE-1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨NHE-1核酶基因转染对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）凋亡的影响。方法 构建NHE-1核酶基因逆转病毒载体,转染体外培养的大鼠PASMC,应用半定量RT-PCR法（sqRT-PCR）测定细胞内NHE-1 mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪测细胞周期、电镜及原位细胞凋亡检测（TUNEL法）观察细胞凋亡情况。结果 转染NHE-1核酶基因的细胞,NHE-1 mRNA表达量及pHi较空载体转染细胞及未转染细胞显著降低,细胞凋亡率显著增加,电镜示细胞凋亡,凋亡小体形成。结论 NHE-1核酶基因转染可通过NHE-1抑制、细胞内酸化,显著诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡。     

Tamoxifen induces apoptosis of mouse microglia cell line BV-2 cells via both mitochondrial and death receptor pathways

Little is known about whether tamoxifen (TAM) can affect resting state microglia apoptosis and about the cellular mechanism that may account for this. To explore this question, we incubated the microglia cell line BV-2 cells with TAM at different concentrations. Cell viability was assessed by the MTT assay, and flow cytometric analysis was performed to detect the cell apoptosis rate. Furthermore, mitochondrial membrane potential (Δψm) was tested by flow cytometry, and Bax, Bcl-2, Fas, and Fas-L expression was detected by Western blot. The results demonstrated that TAM decreased cell viability and induced apoptosis of BV-2 cells in a concentration- and time-dependent manner. In addition, disrup-tion of Δψm was followed by up-regulated expression of pro-apoptotic Bax, Fas and Fas-L, and down-regulated expression of anti-apoptotic Bcl-2. These results indicate that TAM may induce apop-tosis of BV-2 cells through both mitochondria- and death receptor-mediated pathways.     

薯蓣皂苷对肝癌细胞Bel-7402和正常人肝细胞LO2增殖和凋亡的影响

目的 研究薯蓣皂苷(dioscin)对肝癌细胞Bel-7402及正常人肝细胞LO2增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 将0.5～16μmol/L薯蓣皂苷干预Bel-7402肝癌细胞和LO2肝细胞24 h,使用MTT法检测细胞增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化...     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法:选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量(40、80、120、160和200μmol·L1)胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120μmol·L1胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果:胡桃醌的IC50为139.8881μmol·L1。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论:胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。     

PFOS对BV-2细胞的炎性损伤及机制研究

目的：探讨环境内分泌干扰物全氟辛磺酸(perfluorooctane suifonate,PFOS)对小鼠小胶质瘤细胞BV-2的损伤作用及其炎性反应。方法：利用体外培养的小胶质细胞,给予不同浓度和作用时间的PFOS进行染毒,通过MTT法检测BV-2细胞活力;实时定量PCR的方法观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthesis,iNOS）、白介素（interleukin,IL）-6 和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α mRNA的表达。ELISA法检测炎性因子IL-6,免疫蛋白印迹法检测核转录因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)等信号蛋白表达情况。结果：不同浓度PFOS对BV-2细胞染毒12、24 h后,细胞活力下降,引起明显的细胞损伤。ELISA结果显示, PFOS作用BV-2 24 h后,细胞炎性因子IL-6分泌增加。此外,PFOS还可引起iNOS、IL-6基因表达上调,而TNF-α表达有下降趋势。PFOS与细胞孵育后,炎性通路NF-κB明显激活,表现为磷酸化程度升高。且随染毒浓度的增加,p-NF-κB的表达有上升趋势;此外,随染毒时间的增加,p-NF-κB的表达亦有上升趋势。结论：PFOS可引起BV-2细胞活力降低,激活NF-κB通路,促进炎性因子的释放,该途径可为阐明PFOS引起的神经系统损伤的分子机制提供理论依据。     

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。     

多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN-45的抑制及诱导凋亡作用的研究

目的:研究多西紫杉醇对人胃腺癌MKN-45细胞的生长抑制作用及诱导人胃腺癌细胞凋亡作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞周期分布和凋亡率,应用电镜观察细胞凋亡的形态特点。结果:(1)多西紫杉醇在1.25~80μg.m l-1质量浓度范围内对MKN-45细胞株有抑制增殖作用,此作用与药物质量浓度呈正相关。(2)终质量浓度为20μg.m l-1的多西紫杉醇作用于MKN-45细胞8 h有凋亡峰的出现,12 h凋亡率接近50%。(3)以20μg.m l-1的多西紫杉醇诱导MKN-45细胞凋亡3 h和6 h与未加药的对照组比较,可见MKN-45细胞周期被阻滞在G2/M期,S期比例减少。(4)20μg.m l-1的多西紫杉醇作用MKN-45细胞12 h,可见典型的凋亡形态学改变。结论:多西紫杉醇可抑制人胃腺癌MKN-45细胞增殖,诱导MKN-45细胞凋亡。     

川楝素对K562细胞增殖和凋亡作用的影响

目的：探讨川楝素对人白血病K562细胞增殖和凋亡作用的影响.方法：MTT法检测川楝素对K562细胞和健康成人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的增殖抑制率.瑞氏染色观察川楝素对K562细胞、PBMC形态的影响.透射电镜观察K562细胞超微结构改变.流式细胞术检测细胞凋亡率.琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA片段化现象.比色法检测Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性变化.免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bcl-xl,Bax和Fas的表达.结果：川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性（P〈0.01）,作用72h后IC50值为（52.13±0.82）nmol/L,而对PBMC几乎无影响.普通光镜下分别观察K562细胞和PBMC,K562细胞可见典型的凋亡形态学改变,PBMC形态无明显变化.超微结构显示K562细胞核染色质聚集,固缩,可见凋亡小体;以10,30,50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率分别为9.66%,26.06%,52.70%（P〈0.01）;琼脂糖凝胶电泳可见典型“梯状”条带;川楝素激活K562细胞Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活性;凋亡相关蛋白Bcl-xl表达降低,Bax,Fas表达增强（P〈0.05）.结论：川楝素对K562细胞与PBMC之间具有选择抑制作用和诱导K562细胞凋亡的作用,可能通过线粒体途径和死亡受体途径双重机制介导.