人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系

目的:探讨人胃癌细胞株CDX2基因表达与其启动子区甲基化的关系.方法:不同浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞株,甲基化特异性PCR(MSP)检测用药前后CDX2启动子甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测CDX2和DNMT1 mRNA和蛋白表达.结果:MKN45细胞株CDX2基因启动子区域高甲基化,CDX2 mRNA表达极低,蛋白不表达;经3种浓度5-aza-CdR处理MKN45细胞72 h后,细胞中CDX2 mRNA和蛋白表达均出现上调,而DNMT1表达出现下调.结论:CDX2基因表达下调与其启动子CpG岛高甲基化有关,DNMT1可能参与该过程的调节.     

膀胱癌DNA甲基化的研究进展

在恶性肿瘤中,相关的癌基因或抑癌基因由于异常的甲基化导致了其表达的升高或降低这一生物学改变普遍存在.膀胱癌作为泌尿系统肿瘤中死亡率和复发率很高的恶性肿瘤,其相关基因的甲基化状况也是很多学者研究的热点,本文将就其相关研究进展做一综述.     

死亡相关蛋白激酶启动子区甲基化状态与膀胱癌的关系

目的探讨死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)在膀胱癌中CpG岛的甲基化状态及其意义。方法收集40对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)检测DAPK基因启动子区CpG岛的甲基化状态;并对MSP产物进行TA克隆。结果40对癌组织及其癌周正常组织中,7例癌组织检测到DAPK异常甲基化,1例癌周正常组织检测到异常甲基化(7/40vs.1/40,P>0.05);原发性与复发性膀胱癌中的甲基化阳性率分别为2/15、5/25,二者差异无显著性(P>0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异均无显著性(P>0.05)。结论DAPK启动子在膀胱癌中的甲基化阳性率较低,并且与膀胱癌的分级、分期无相关性,因而在选择分子学指标辅助膀胱癌早期诊断时,DAPK的甲基化检测需慎用。     

乳腺癌组织ABCG2基因启动子区甲基化状况与其表达

目的研究多药耐药基因ABCG2启动子区甲基化状态与其在乳腺癌组织中表达的关系，探讨ABCG2基因表达的表观遗传学机制。方法采用甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR，MSP）检测15例乳腺癌组织及配对癌旁组织中ABCG2启动子区-359--353两特异位点的甲基化情况，并经MSP产物测序检测位点的甲基化状态；用Q—PCR检测ABCG2基因mRNA的表达水平；并应用统计学Spearman等级相关性方法分析二者的相关关系。结果15例乳腺癌组织中有13例（86．67％）ABCG2基因启动子区的特异位点存在高甲基化（P〈0．05），MSP产物的测序验证了特异位点的甲基化，并且mRNA表达水平相对增高，二者之间存在显著正相关性（Х^2=0．6842，P〈0．05）。结论ABCG2基因的启动子区-359～-353位点存在高甲基化，可促进该基因在乳腺癌组织中的表达。     

膀胱癌中GDF15基因启动子区甲基化检测及逆转其甲基化状态对5637膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 检测生长分化因子15(GDF15)在膀胱癌中的甲基化状态,探讨其启动子区异常甲基化对于膀胱癌发生发展的作用.方法 应用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)联合T-载体PCR产物(TA)克隆检测人膀胱移行细胞癌细胞系5637、HT1376、KU19-19、膀胱癌组织、癌旁组织、正常组织样品中GDF15启动子区甲基化状态,并用甲基化酶抑制剂5-Aza-2-deoxycitydine(5-Aza-dc)处理5637,观察处理前后平均甲基化率的变化情况,Western blot法检测5637处理前后蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测迁移情况,Transwell法检测侵袭能力.结果 5637、HT1376、KU19-19细胞中GDF15启动子区平均甲基化率为89.29%、10.71%、8.33%,肿瘤组织、癌旁组织及正常组织分别为86.91%、9.52%、5.95%,膀胱癌组织中 GDF15启动子区甲基化率较癌旁组织和正常组织中高,差异有统计学意义(P<0.05);5-Aza-dc可以逆转5637中GDF15的甲基化状态:与处理前相比,处理组5637细胞系GDF15蛋白表达增加,增殖、迁移、侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 膀胱癌中GDF15基因表达与甲基化状态有关,启动子区高甲基化导致基因沉默,逆转甲基化状态可以使基因蛋白表达增加,细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低.GDF15基因甲基化异常状态有可能成为膀胱癌诊断的潜在靶点.     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

p16基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的探讨p16基因在乳腺癌组织中的表达及其启动子区域甲基化情况,并分析p16基因启动子甲基化与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP方法和甲基化PCR(MSP)方法检测47例乳腺癌和20例乳腺增生组织p16蛋白表达及其启动子甲基化情况。结果乳腺癌组织p16蛋白阳性表达率低于乳腺增生组织(48.9%vs.70.0%),启动子甲基化率高于乳腺增生组织(38.3%vs.20.0%),但差异均无统计学意义(P>0.05);p16基因表达下降与其高甲基化呈负相关(r=-0.33,P=0.02);p16基因启动子甲基化与年龄、肿瘤直径、临床分期、雌激素受体(ER)以及孕激素受体(PR)无关(P>0.05),而与组织分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论p16基因启动子甲基化诱导p16蛋白低表达在乳腺癌早期发生过程中作用有限,但在乳腺癌发展过程中发挥作用。     

膀胱癌中eya4基因启动子区甲基化状态及其临床意义

目的 探讨膀胱癌细胞系和膀胱移行细胞癌组织中EYA转录共激活磷酸酶4(eya4)基因启动子区CpG岛甲基化状态及在临床病理特征中的意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测eya4基因在5株膀胱癌细胞系、1株膀胱永生化上皮细胞系和75例膀胱移行细胞癌组织及癌旁组织,并结合临床病理特征行统计学分析.结果 eya4基因启动子区在5株膀胱癌细胞系中,有4株出现甲基化,其甲基化率为80%;在人正常膀胱细胞系中甲基化阴性.eya4在膀胱癌组织中的甲基化率为70.7%(53/75),显著高于癌旁组织(24%,18/75),差异有统计学意义(x2=32.760,P<0.01).eya4基因启动子区CpG岛甲基化在临床病理特征中如单发膀胱肿瘤与多发膀胱肿瘤相比,直径≤3 cm的膀胱肿瘤与＞3 cm的膀胱肿瘤相比,低级别膀胱肿瘤与高级别膀胱肿瘤相比,浅表性膀胱肿瘤与浸润性膀胱肿瘤相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但与年龄和性别无关.结论 基因eya4启动子区甲基化与膀胱癌的发生发展有关,可能作为膀胱移行细胞癌诊断的一个新的标志物.     

膀胱癌组织中Rock-2和MMP-2的表达及相互关系的研究

目的探讨Rock-2和MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达特点及其相互关系。方法选取活检病例中已诊断为膀胱移行细胞癌65例标本（2004-2007年）,采用SABC免疫组织化学方法,检测65例膀胱癌组织以及正常膀胱黏膜Rock-2和MMP-2的表达情况。结果正常膀胱黏膜中,Rock-2和MMP-2均为阴性表达。Rock-2和MMP-2的表达与移行细胞癌的病理分级及临床分期呈正相关,而且二者的表达强弱呈显著的正相关。结论Rock-2和MMP-2在膀胱移行细胞癌的发生以及侵袭、转移中发挥着重要作用,MMP-2可能是Rho/Rock信号转导通路促进肿瘤转移和侵袭的下游分子。     

膀胱尿路上皮癌中PTEN表达与其基因甲基化的关系

探讨膀胱尿路上皮癌（BUCC）中第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（ PTEN）表达与其基因启动子甲基化的关系。方法应用Western blot、甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）,检测41 例BUCC和18 例正常膀胱组织中PTEN蛋白的表达水平及其基因启动子甲基化状态,并分析两者的相关性。结果BUCC 中PTEN 蛋白表达低于正常膀胱组织（p <0.05）,而BUCC 中基因启动子甲基化率为53.66%（22/41）,高于正常膀胱组织的0.00%（0/18）（ p<0.05）;与甲基化阴性组的BUCC 组织相比,22 例甲基化阳性 组的PTEN 表达水平降低（ p<0.05）。结论BUCC 中PTEN 蛋白的表达水平下调,这与其基因启动子高甲基化密切相关。     

膀胱癌分子病理学与预后之间关系的研究

目的从分子水平上探讨影响膀胱移行细胞癌的复发、进展及转移等的主要因素。方法应用免疫组化方法对18种涉及肿瘤细胞生长调控的蛋白在83例膀胱移行细胞癌中表达进行检测，采用Kaplan—Meier法、Log—rank检验及Cox比例风险模型对影响预后的因素进行统计分析。结果影响肿瘤术后复发的主要蛋白是bFGF、IGF—IR、Fas、PCNA。影响肿瘤术后进展及转移的主要蛋白是bFGF。结论加强膀胱癌分子病理学的检测有助于“个体化”监测及治疗方案的制定，bFGF是膀胱癌预后较有价值的标记物。     

炎症反应标志物与膀胱癌预后关系的研究进展

]膀胱癌在手术后仍有较高的复发率。膀胱癌相关的多种炎症反应标志物可预测其发生、发展和预后。本文就中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板/淋巴细胞比值、全身免疫炎症指数、预后营养指数、白蛋白/球蛋白比值与膀胱癌的关系研究做一综述。     

氨基酸转运蛋白家族成员在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 探讨氨基酸转运蛋白家族成员在膀胱癌中的表达及意义。方法 免疫组织化学法检测93 例膀胱癌患者癌标本中L 型氨基酸转运载体1（LAT1）、系统ASC 氨基酸转运蛋白2（ASCT2）、胱氨酸/ 谷氨酸转运体功能亚基（xCT）、Ki-67 和CD34 的表达。结果 LAT1、ASCT2 和xCT 的阳性表达率分别为55.9%（52/93）、77.4%（72/93）和65.6%（61/93）。ASCT2 的阳性表达与LAT1、Ki-67 相关。单因素分析表明,ASCT2 表达、疾病分期与总生存期关系密切。而肿瘤直径、疾病分期与无病生存期关系密切。多元回归分析证实,ASCT2 表达是膀胱癌患者术后预后差的独立预测因子。结论 ASCT2 能够作为膀胱癌患者的预后判断指标。     

DNMT3b 基因在人膀胱癌组织中的表达及与临床预后的相关性

目的 探讨DNMT3b 在人膀胱癌组织的表达和意义及与膀胱癌患者术后生存期的相关性。方法 采用免疫组织化学技术（IHC）分别检测 DNMT3b 基因在 38 例手术切除人膀胱癌组织和38例相应癌旁组织的蛋白表达水平,分析其表达水平与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、T分期,淋巴转移和TNM分期临床病理参数的相关性,探讨DNMT3b对患者预后影响。结果 在38例膀胱癌组织中,DNMT3b 高表达率为 63.16%,而在对应的38例癌旁组织中高表达率为13.16%,两者间具有显著差异（P<0.05）。DNMT3b 在膀胱癌组织中高表达与患者病理分级（P=0.002）、肿瘤大小（P<0.001）、T分期（P<0.001）、淋巴转移（P=0.039）和TNM分期（P<0.001）相关,而与性别、年龄无明确相关性。多因素Logistic 回归分析发现,DNMT3b 的蛋白表达水平与肿瘤大小（P=0.008）和TNM 分级（P=0.042）相关。Kaplan-Meier生存分析显示,DNMT3b高表达组患者的总生存期明显缩短,与低表达组相比具有显著差异性（P=0.021）。结论 DNMT3b在膀胱癌组织中高表达,与病理分级、肿瘤大小、原发肿瘤范围、淋巴转移和临床分期等临床病理特征及总生存期密切相关,结果提示DNMT3b有望成为判断膀胱癌预后的标志物和肿瘤防治的新的靶点。     

影响乳腺癌预后的临床病理及生物学因素

目的通过检测与乳腺癌预后相关的临床病理及分子生物学指标,对照随访结果,筛选影响乳腺癌患者预后的因素。方法应用免疫组化SP法检测乳腺癌组织中S100A4、nm23-H1、C-erbB-2、p53、ER及PR的表达,对比临床病理指标及随访结果,应用多因素Logistic回归的统计学方法分析。结果在11项可能影响乳腺癌患者预后的相关因素中,单因素分析显示,肿瘤大小、淋巴结转移状况、组织学分级、S100A4、C-erbB-2、p53、ER状态与预后相关（P〈0.05）;而临床分期、病理类型、PR状态及nm23-H1与预后不相关（P〉0.05）;多因素Logistic回归分析发现,腋淋巴结转移状况和组织学分级是影响乳腺癌患者预后最有价值的指标（P〈0.05）。结论肿瘤大小、S100A4、p53、C-erbB-2、ER状态对乳腺癌患者预后有明显的提示作用,但不是独立的预后指标;淋巴结转移状况和组织学分级是判断预后最有价值的因素。     

胃癌组织hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化状态研究

目的 探讨hMSH2基因启动子区的甲基化状态与微卫星DNA不稳的关系。方法 采用甲基化特异性PCR方法检测hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态，采用PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳。结果 正常胃粘膜未见hMLH1和hMSH2基因启动子区的高甲基化。68例胃癌中检出hMLH1高甲基化11例，占16．2％，而且均为去甲基化和高基化并存，未见有hMSH2高甲基化者。将MSI分为高频率MSI（MSI－H，≥2个位点）8例、低频率MSI（MSI－L,仅为1个位点）9例和MSI阴性（MSS）51例3组，结果MSI－H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI－L和MSS组（P＜0．01）。结论 hMLH1高甲基化可能参与了MSI病理途径，而hMSH2甲基化状态可能与MSI途径无关。     

BRCA-1/2蛋白在膀胱癌中的表达及其临床意义*

目的：旨在检测乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene, BRCA)-1/2蛋白在膀胱癌组织中的表达情况,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化方法检测70例患者的膀胱癌组织和10例正常膀胱黏膜组织中BRCA-1/2的表达水平,并结合其临床资料及组织病理学特点,分析BRCA-1/2的表达与膀胱癌发生、发展的关系。结果：膀胱正常组织中BRCA-1/2的阳性表达率均为100%,而BRCA-1/2在膀胱癌组织中阳性表达率分别为37.1%和47.1%,差异有统计学意义(P＜0.001)。BRCA-1/2的表达与膀胱癌的临床分期、病理分级和肿瘤个数也有统计学意义(P＜0.05)。同时,结果也表明BRCA-1/2具有相互协同作用(r=0.51, P＜0.001)。结论：BRCA-1/2与膀胱癌的生物学行为之间存在密切相关,可能有助于膀胱癌的诊断及预后的评估。