肝癌组织中lncRNA-PRR34-AS1的表达特性及其对肝癌细胞增殖、迁移的影响和潜在分子机制

目的　分析长链非编码RNA-PRR34-AS1在肝癌组织中的表达特性，探究其对肝癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子作用机制。方法　收集2020年6月～12月于榆林市第二医院行手术治疗的30例肝癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织标本，采用实时荧光定量PCR实验（RT-qPCR）检测组织中LncRNA-PRR34-AS1相对表达水平。通过转染siRNA介导敲低PRR34-AS1基因表达，利用细胞增殖实验和细胞迁移实验验证PRR34-AS1对肝癌细胞增殖、迁移的影响；通过生物信息学数据库网站预测PRR34-AS1与JAK1结合的基因位点，双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系，探究其在肝癌发生发展中的调控作用。结果　30例临床肝癌组织中PRR34-AS1表达显著高于癌旁正常组织（5.714±0.612 vs 2.981±0.572)，差异有统计学意义(t=17.870，P=0.000），PRR34-AS1具有高表达预后差的临床特征。敲低PRR34-AS1后，转染24，48和72 h时siRNA-PRR34-AS1#1组和siRNA-PRR34-AS1#2组细胞增殖率较对照组明显降低，差异均有统计学意义（F=83.440～89.297，均P<0.001）；siRNA-PRR34-AS1#1组（38.451±4.263）和siRNA-PRR34-AS1#2组（42.106±3.512）细胞愈合迁移速率较对照组（83.247±6.205）显著减慢，差异均有统计学意义（F=83.357，P＜0.001）。JAK1是PRR34-AS1的靶基因，siRNA-PRR34-AS1#1组（0.453±0.019）和siRNA-PRR34-AS1#2组（0.476±0.022）细胞中JAK1相对表达较对照组相比（1.002±0.003）明显降低，差异均有统计学意义（F=716.287，P＜0.001）。转染敲低JAK1表达后，各转染时间点siRNA-JAK1#1组和siRNA-JAK1#2组细胞增殖速率较对照组明显减缓，差异均有统计学意义（F=45.465~76.548，均P<0.05）。30组临床肝癌组织中JAK1表达显著高于癌旁正常组织（5.963±1.214 vs 4.052±0.876)，差异有统计学意义(t=6.992，P=0.000），PRR34-AS1与JAK1表达呈显著正相关（r=0.907，P<0.05）。在敲低PRR34-AS1表达的肝癌细胞中回补JAK1后，肝癌细胞增殖、迁移速率又回归到正常水平。结论　肝癌中PRR34-AS1显著高表达，其可能通过正向调控JAK1表达影响JAK/STAT信号通路，进而调控促进肝癌细胞的增殖和迁移。     

ECE2通过上调E2F1和MYC来促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的　通过检测内皮素转化酶2（ECE2）在乳腺癌中的表达，探究其对乳腺癌细胞增殖、迁移的影响及潜在分子机制。方法　选取20 例临床乳腺癌组织及其对应癌旁正常组织样本，通过qRT-PCR 检测ECE2 基因在乳腺癌组织中的表达特征。通过siRNA 介导敲低ECE2 表达，利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别验证敲低ECE2 表达对乳腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及凋亡的影响。通过分析与ECE2 共表达基因参与的信号通路，探索ECE2 在乳腺癌发展进程中的潜在分子机制，进一步通过细胞增殖回补实验进行验证。结果　20 例临床乳腺癌组织中ECE2 表达较癌旁正常组织显著上调（30.342±6.564 vs 21.753±8.244），差异有统计学意义（t=3.645，P=0.000）。转染敲低ECE2 表达后，siECE2#1 组和siECE2#2 组在24，48，72 h 的吸光度值较对照组明显降低，差异有统计学意义（F=71.409~211.681，均P ＜ 0.01）。siECE2#1 组（0.515±0.014）和siECE2#2 组（0.511±0.006）细胞克隆形成速率明显低于对照组（3.473±0.147），差异有统计学意义（F=467.152，P ＜ 0.001）。siECE2#1 组（56.423±1.137）和siECE2#2 组（42.036±0.754）细胞迁移愈合速率显著低于对照组（78.124±1.352），差异有统计学意义（F=805.162，P ＜ 0.001）。siECE2#1 组和siECE2#2 组细胞凋亡率较对照组明显降低，细胞周期显著阻滞在G1 期。siECE2#1 组和siECE2# 组细胞中E2F1 mRNA 和蛋白表达水平明显低于对照组，差异均有统计学意义（F=703.020，136.301，均P＜ 0.001）；MYC mRNA 和蛋白表达水平也明显低于对照组（F=613.395，102.573，均P ＜ 0.001）。在敲低ECE2 表达的乳腺癌细胞中分别回补E2F1 和MYC 后，细胞增殖速率回归至正常水平。结论　ECE2 高表达诱导促癌基因E2F1和MYC 的高表达进而促进乳腺癌细胞的增殖及迁移，阻碍细胞周期停滞在G1 期，参与乳腺癌的发展进程。     

长链非编码RNA CDKN2BAS 在子宫内膜癌组织表达及其生物学功能研究

目的 探讨长链非编码RNA CDKN2BAS（long non-coding RNA CDKN2BAS,LncRNA CDKN2BAS）在子宫内膜癌（endometrial cancer,EC）组织表达,以及沉默该基因对人EC 细胞HEC-1B 生物学功能的影响。方法 收集2018 年3 月～ 2021 年3 月在黄石市中心医院接受手术治疗的107 例EC 患者资料,实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测癌组织和癌旁组织中LncRNA CDKN2BAS 表达。培养HEC-1B 细胞,分成siRNA 组、si-NC 组和C 组,分别转染LncRNA CDKN2BAS 抑制序列、对照序列和不作任何处理,并分别采用qRT-PCR,MTT 实验和Transwell 实验检测细胞中LncRNA CDKN2BAS 表达及其对HEC-1B 细胞增殖活性、迁移和侵袭力影响。结果 EC 组织中LncRNACDKN2BAS 表达量为2.73±0.25,高于癌旁组织中的1.00±0.13,差异具有统计学意义（t=63.903,P<0.001）;LncRNA CDKN2BAS在FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期（2.83±0.25）、组织学分级G3级（2.85±0.24）和出现淋巴结转移（2.84±0.26）的EC 组织中的表达量较Ⅰ～Ⅱ期（2.67±0.23）,G1 ～ G2 级（2.67±0.22）和未出现淋巴结转移（2.68±0.22）的EC 组织明显升高（t=3.246,3.894,3.270,均P<0.05）;siRNA 组细胞中LncRNA CDKN2BAS 表达量低于si-NC 组和C 组（0.30±0.12 vs 1.02±0.10,1.01±0.12）,差异具有统计学意义（F=77.210,P<0.05）;siRNA 组细胞24,48,72 和96h 时A 值低于si-NC 组和C 组,差异具有统计学意义（F=5.003 ～ 8.495,均P<0.05）;siRNA 组迁移细胞数和侵袭细胞数低于si-NC 组和C 组,差异具有统计学意义（F=21.956,22.407,均P<0.05）。结论 EC 组织中LncRNACDKN2BAS 表达量升高,沉默人EC 细胞HEC-1B 中LncRNA CDKN2BAS 表达可抑制细胞增殖活性,减少细胞迁移和侵袭数量。     

LINC01503 调控ERK 磷酸化促进食管鳞状细胞癌放疗抵抗的机制研究

目的 探究长链非编码核糖核酸 (LncRNA) LINC01503调控细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路磷酸化促进食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）放疗抵抗的作用机制。方法 收集 2014年 6月～2017年 12月内蒙古自治区人民医院 ESCC患者癌组织及癌旁组织标本 79例,采用实时荧光定量 PCR检测 LINC01503在 ESCC组织中的表达水平,分析 LINC01503与 ESCC患者临床病理参数、放疗敏感性及预后的关系。构建 ESCC放疗抵抗细胞株 KYSE150R,检测 KYSE150R细胞中 LINC01503的表达;转染 siRNA下调 KYSE150R中 LINC01503的表达。 CCK8实验检测各组细胞放疗敏感性;流式细胞试验检测各组细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中 ERK1/2,PERK1/2,细胞周期蛋白 D1（cyclin D1）,细胞周期素依赖性激酶 4（cyclin dependent kinase 4,CDK4）,凋亡蛋白 Bcl-2和 Bax蛋白表达。结果 与癌旁组织相比, LINC01503在 ESCC组织中表达上调（4.15±1.21 vs 0.96±0.43）,差异有统计学意义（t=22.083,P<0.001）。LINC01503高表达与患者 T分期、淋巴结转移、 TNM分期、放疗抵抗有关,差异均有统计学意义（t=2.322～2.939,均 P<0.05）。LINC01503预测预后的曲线下面积为 0.780（95%CI:0.676～0.884）,灵敏度和特异度分别为 81.58%,67.05%。LINC01503高表达组 5年生存率低于 LINC01503低表达组 [41.86%（18/43）vs 63.89%（23/36）],差异有统计学意义（χ2=4.430,P=0.035）。与 si-NC组相比, si-LINC01503组 KYSE150R细胞的放疗敏感性增加,差异均有统计学意义（t=17.391～33.692,均 P<0.001）;si-LINC01503组 KYSE150R细胞周期阻滞在 G0/G1期（61.47%±3.60% vs 52.15%±2.11%）,细胞凋亡增加（31.95%±2.40% vs 3.68%±0.47%）,差异均有统计学意义（t=4.602,20.022;P=0.004, 0.002）;PERK1/2（0.24±0.03 vs 1.25±0.09）,cyclin D1（0.18±0.06 vs 1.40±0.14）,CDK4（0.87±0.09 vs 1.37±0.16）和 Bcl-2（0.16±0.03 vs 0.85±0.07）蛋白表达降低, Bax蛋白表达增加（0.69±0.06 vs 0.22±0.05）,差异均有统计学意义（t=4.718～18.440,均 P<0.05）。结论 LINC01503通过促进 ERK磷酸化调控细胞周期和凋亡促进 ESCC细胞放疗抵抗,是逆转 ESCC放疗抵抗的潜在分子靶点。     

miRNA-195靶向调控 CCND2和 MYB抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的机制研究

目的　研究 miRNA-195在宫颈癌组织和细胞中的表达，分析其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响和作用机制。方法　检测 35例临床宫颈癌组织及其对应癌旁正常组织中 miRNA-195，通过 Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与宫颈癌患者预后的关系；采用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证 miRNA-195对宫颈癌 siHa，Hela细胞增殖、迁移的影响；通过 microRNA数据库预测 miRNA-195的靶基因，双荧光素酶基因实验验证靶向结合关系； qRT-PCR验证 miRNA-195对靶基因的调控；分析宫颈癌中靶基因的表达作用及与 miRNA-195的相关性，通过细胞回补实验验证 miRNA-195是否通过靶向调控蛋白表达在宫颈癌中发挥功能。结果　宫颈癌组织中 miRNA-195相对表达低于癌旁正常组织（ 21.03±5.17 vs 40.67±7.92），差异有统计学意义（ t=12.285，P<0.001），且具有低表达预后差的临床特征（ Logrank P=0.032）。过表达 miRNA-195抑制了宫颈癌细胞的增殖（ t=6.725~21.433，均 P＜ 0.01）和迁移速率（ t=12.443，16.749，均 P<0.001）。CCND2和 MYB是 miRNA-195的靶基因，过表达 miRNA-195显著抑制了 CCND2和 MYB mRNA的蛋白表达（ P<0.01）。宫颈癌组织中 CCND2较癌旁正常组织显著高表达（ 52.67±4.79 vs 39.86±6.39），差异有统计学意义（ t=12.453，P<0.001）；MYB较癌旁正常组织显著高表达（ 43.06±6.43 vs 22.07±6.85），差异有统计学意义（t=13.217，P<0.001）；且分别与 miRNA-195表达呈负相关（ r=-0.726，-0.592，均 P<0.05）。过表达 CCND2和 MYB显著促进了宫颈癌细胞的增殖和迁移速率，敲低 CCND2和 MYB表达则得到与之相反的结果（ F=144.947，875.160，均 P<0.001）；在过表达 miRNA-195细胞中分别回补过表达 CCND2和 MYB后细胞增殖、迁移速率基本回归到正常水平。结论　miRNA-195可通过靶向调控 CCND2和 MYB表达抑制宫颈癌癌细胞的增殖和迁移，进而参与宫颈癌的发生发展。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织叶酸代谢基因MTR 的表达水平及其作用机制研究

目的 研究叶酸代谢相关基因甲硫氨酸合成酶(methionine synthase,MTR) 在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的差异表达以及对于人绒毛滋养层细胞HTR8 迁移及侵袭能力调控的机制研究。方法 2018 年1 月～ 2020 年12 月在成都市龙泉驿区妇幼保健院分娩的30 例妊娠期高血压,28 例子痫前期和20 例重度子痫前期患者及25 例正常产妇作为研究对象,分娩时采集研究对象胎盘组织。使用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR detecting system,qPCR)及蛋白质印迹法(western blotting,WB) 检测了各组胎盘组织中MTR,上皮型钙黏附蛋白(E-Cadherin,E-Cad),锌指E 盒结合蛋白-1(zinc finger E-box binding protein1,ZEB1) 基因转录及蛋白表达情况。进一步通过siRNA 敲减人绒毛滋养层细胞HTR8 中MTR 基因的表达,研究MTR 对于E-Cadherin 和ZEB1 基因的调控作用。通过Transwell 迁移及侵袭实验验证敲减MTR 后对于HTR8 细胞迁移和侵袭的影响。结果 与对照组相比,随着妊娠期高血压疾病分期的进展,子痫前期与重度子痫前期患者胎盘组织中E-Cadherin 的表达增加（1.14±0.35, 1.53±0.41 vs 1.00±0.30）,胎盘组织中MTRmRNA 的表达量逐渐增加（1.72±0.17, 2.58±0.13 vs 1.00±0.33）,妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中ZEB1 的表达量下降（0.48±0.10, 0.13±0.06 vs 1.00±0.22）,差异具有统计学意义（F=13.28,67.1,65.41,均 P ＜ 0.01）。随着疾病分期进展,MTR 及E-Cadherin 的蛋白表达量明显增加,而ZEB1 的蛋白表达量明显降低。siRNA 可以显著抑制HTR8中MTR 基因mRNA 的表达,敲低MTR 基因后可显著抑制上皮相关标志物E-Cadherin 基因mRNA 的表达, 可以显著促进间充质相关标志物ZEB1 基因mRNA 的表达,差异具有统计学意义（t=5.906,6.715,9.777, 均 P ＜ 0.01）。敲减HTR8 细胞中MTR 基因可显著促进迁移能力,侵袭实验结果显示敲减MTR 基因可促进HTR8 细胞的侵袭能力,差异具有统计学意义（t=6.241,22.37, 均 P ＜ 0.01）。结论 妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中MTR 基因表达上调, MTR可通过调节HTR8 细胞EMT 相关基因E-Cadherin,ZEB1 表达,从而抑制其迁移及侵袭能力。MTR 可能成为妊娠期高血压疾病潜在的治疗靶点之一。     

hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴促进胰腺癌细胞增殖与迁移的机制研究

目的　检测环状核糖核酸（circular RNA ,cicrRNA）hsa_circ_0006950 在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法　利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测hsa_circ_0006950 在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950 干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell 实验检测hsa_circ_0006950 对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950 的miRNA 分子靶标及其调控网络（hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2）,双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950 和miR-124-3p,miR-124-3p 和EZH2 的靶向结合关系;转染过表达/ 干扰miR-124-3p 和过表达EZH2 细胞系,探究miR-124-3p 和EZH2 及hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果　胰腺癌组织中hsa_circ_0006950 表达明显高于癌旁正常组织（3.57±0.52 vs 1.01±0.03）,差异有统计学意义（t=21.980,P ＜ 0.001）。胰腺癌细胞PANC-1（7.51±0.62）,AsPC-1（5.26±0.45）,Capan-2（3.69±0.38）,SW1990（3.25±0.32）and BXPC-3（3.86±0.35）中hsa_circ_0006950 相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7（1.00±0.01）中的表达,差异有统计学意义（F=88.585,P ＜ 0.001）。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950 表达组细胞增殖能力（0.79±0.17 vs 1.83±0.42）,克隆形成率（51.42%±5.84% vs 78.76%±13.65%）和迁移数目（104.64±24.73 vs 218.21±31.57）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008）。miR-124-3p 是hsa_circ_0006950 的下游靶基因,EZH2 是miR-124-3p 的直接靶标。hsa_circ_0006950 靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p 靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p 组PC 细胞增殖（0.21±0.16 vs1.75±0.47）,克隆形成率（47.85%±4.13% vs 81.54%±2.33%）和细胞迁移数目（118.74±24.65 vs 202.36±31.45）明显降低,差异均有统计学意义（t=5.378, 14.317, 3.390, 均P ＜ 0.001）;共转染过表达EZH2 后,miR-124-3p 对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950 组细胞中同时下调miR-124-3p 或过表达EZH2 后,hsa_circ_0006950 对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论　胰腺癌中hsa_circ_0006950 显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950 可能通过靶向下调miR-124-3p 表达,进而上调EZH2 表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。     

Tiotidine and cimetidine--kinetics and dynamics

Tiotidine and cimetidine kinetics and dynamics were compared to assess mechanisms of the longer duration of effect of tiotidine in man. Both drugs has similar lag times for absorption. Tiotidine with a meal was more slowly absorbed than when fasting and was also more slowly absorbed than cimetidine with a meal. The elimination rates for both drugs did not differ; they were both approximately 2 to 3 hr. Oral doses of cimetidine achieved areas under the plasma concentration curve approximately three times that of tiotidine but these concentrations were only 1/10 as potent. The cimetidine concentration inducing 50% inhibition of food-stimulated gastric acid secretion was 0.41 +/- 0.04 whereas it was 0.04 +/- 0.003 microgram/ml for tiotidine. The effect of tiotidine lasted longer than that of cimetidine because the doses recommended for use in man resulted in higher concentrations in plasma relative to effective concentration than clinical doses of cimetidine.