总补体活性检测实验技术改革

血清总补体活性测定常用50%溶血试验(CH50)进行检测.方法是以抗体致敏绵羊红细胞(SRBC)作为抗原抗体复合物,激活待测血清中C1,并进而引起补体活化的连锁反应,最终导致SRBC溶解,溶血程度与补体量在一定范围内显正相关.同时由于血清总补体活性测定需要使用绵羊红细胞,其来源受到限制,学校饲养有困难,外地购买既昂贵又不方便,实验中的溶血素制备或购买费时又耗资;溶血素滴定效价繁琐,还要消耗豚鼠.正式实验时间长实验安排较困难.而旁路活化途径溶血性(AP－H50)测定不需要溶血素,也不需要绵羊红细胞,它是根     

山羊红细胞在补体溶血试验中的应用

党规的补体溶血试验是用绵羊红细胞和抗绵羊红细胞抗体相结合后,再与血清中补体接触,补体被激活,导致绵羊红细胞溶解,出现溶血反应,此试验是医学基础学科必须掌握的基本技能之一,是临床上测定人体血清总补体活性,了解机体的免疫水平,阐明某     

24例系统性红斑狼疮免疫球蛋白及补体检测结果分析

目的　探讨血清免疫球蛋白 (Ig)及补体 (C)系统水平与系统性红斑狼疮 (SLE)的关系和意义。 方法　采用日立 7170S全自动生化分析仪对 2 4例SLE患者和 3 1例健康对照组的血清IgG、IgA、IgM、C3、总补体溶血活性 (CH5 0 )进行检测并比较其结果。结果　 2 4例SLE患者血清IgG、IgA、IgM、C3、CH5 0与对照组比较差异有高度显著性 (P均 <0 .0 1)。结论　血清Ig及C系统水平对SLE疾病的监测有临床意义     

人与豚鼠血清CH_(50)的比较测定

微生物学教材描述豚鼠血清补体活性最强。有关补体的实验,也都采取豚鼠血清作补体的来源。林飞卿教授等译的《免疫学与血清学》指出入补体对于致敏绵羊红血球的溶血效价是100,豚鼠是625。这里指的是补体的稀释倍数,而不是CH50单位。豚鼠血清CH_(50)比人究竟高多少?为此我们进行了比较测定。     

脂质体-免疫分析法测定血清总补体溶血活性及临床应用

目的:探讨血清总补体溶血活性(CH50)在临床中的应用价值。并观察室温下放置不同时间血清CH50的变化。方法:采用脂质体-免疫分析法检测50例健康成年人、14例慢性肝病患者和26例狼疮肾病患者(其中11例为活动期)血清的CH50及C3和C4含量。结果:结果表明健康成年人LIA法血清总补体溶血活性(CH50)范围为25~57U/M L。血清在室温下放置4H后,CH50明显降低。14例慢性肝病患者CH50及C3和C4较健康者降低,其中C3、C4与CH50的相关系数为0.857和0.807。26例狼疮肾病患者活动期与非活动期C3、C4含量无明显差异,而活动期较非活动期CH50明显降低,有极显著差异。结论:总补体溶血活性(CH50)检测,待测血清必需新鲜,室温放置不能超过4H。脂质体-免疫分析法(LIA)检测总补体溶血活性,主要反映补体经经典途径活化的活性。补体含量及活性联合检测对临床诊断意义更大。     

琼脂糖板溶血法测定血清总补体活性

我们参考了国外文献并结合实验室条件作了改进,建立了测定血清总补体活性的琼脂糖板溶血法。 1 材料 1.1 绵羊红血球、琼脂糖、溶血素 1.2 巴比妥缓冲液巴比妥0.575g、巴比妥钠0.185g、NaCl8.5g、MgCl_2·6H_2O0.168g、CaCl_2(无水)0.028g、     

抗"O"试验的模拟方法

目的 节约实验经费，同时解决还原溶血素超时影响实验时间安排的问题。方法 （1）溶血抑制法：用蒸馏水代替生理盐水和还原溶血素，用12g／L盐水代替1：200的阳性被检血清；或者用0．5g／L胆盐溶液代替还原溶血素，用20g／L氯化钙溶液代替1：200的阳性被检血清；（2）胶乳凝集法：用硫酸铝钾液代替阳性血清，用牙膏液代替ASO胶乳抗原。结果 溶血抑制法获得1：400效价，胶乳凝集法获得阳性凝集现象。结论 采用上述方法可分别代替抗“O”试验溶血抑制法或胶乳凝集法，可既经济又简便地开出该项教学实验。     

绵羊红细胞与鸡红细胞对小白鼠溶血素的影响的探讨

绵羊红细胞 (SRBC)是一种比较好的红细胞性抗原。近年我们做免疫功能测定仍用SRBC作为免疫原。由于SRBC来源比较困难 ,为了探索红细胞抗原问题 ,我们应用绵羊红细胞 (SRBC)与鸡红细胞(CRBC)分别免疫小白鼠 ,进行其血清溶血素 (抗体积数 )测定的比较。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　实验动物 :选用健康昆明种雄性小白鼠 (清洁级 ) ,体重 (2 0± 1 5g) ,由广西医科大学医学实验动物中心 (桂动许字〈2 0 0 0〉第 0 0 1号 )提供。1 2　SRBC悬液的制备 :选用健康绵羊 ,由广西军区30 3医院动物室提供。从绵羊颈静脉无菌取血 ,…     

绵羊红细胞与猪红细胞制备溶血素在医学免疫学实验教学中的应用比较

目的检测2种动物红细胞(绵羊红细胞SRBC和猪红细胞PRBC)免疫家兔所制得溶血素的效价,比较其在医学免疫学实验中的应用效果,以寻求制备符合免疫学实验及教学需求的高效价溶血素的较好方法.方法分别选择绵羊红细胞(SRBC)和猪红细胞(PRBC)经皮内多点注射、耳缘静脉注射家兔以制备溶血素,再用补体溶血试验检测2种溶血素效价的高低,并比较二者在免疫学溶血实验及教学中的运用效果.结果经补体溶血试验测得2种溶血素效价分别是:抗-SRBC为1:4 800;抗-PRBC为1:1 200.结论抗-PRBC溶血素效价低于抗-SRBC溶血素,但2种溶血素在溶血反应中均可产生较好的溶血效果,故PRBC能替代SRBC制备溶血素,并成功用于免疫学溶血实验及教学中.     

脂质体免疫法检测血清总补体的临床应用

采用脂质体免疫测定法测定 4 0例正常人标本及 112例病人标本的血清总补体活性 ,并与C3、C4作了相关比较 ,其中 83例与溶血法作了对照试验。结果脂质体免疫法对疾病的诊断与溶血法比较具有较好的一致性 ,且脂质体法具有简便、快速、自动化高等特点 ,灵敏度明显高于溶血法。脂质体免疫法和溶血法测定血清总补体活性的相关系数为 0 .63,脂质体免疫法测定总补体活性和C3、C4 的结果无明显相关性     

补体对红细胞C3b受体花环形成的影响

目的:探讨补体不同来源、不同浓度,是否溶血以及补体活化指示细胞时间等因素对红细胞C3b受体花环形成的影响.方法:采用改良的红细胞C3b受体花环(RBC-C3bRR)实验.结果:最佳补体条件为不溶血,浓度为1:2的豚鼠(3只以上)混合血清,补体活化指示细胞时间为15 min.结论:规范红细胞C3b受体花环形成的补体条件,有利于减小实验误差,提高实验的重复性及可比性.     

慢性肺心病病人红细胞免疫功能及血清补体变化

目的　探讨慢性肺心病病人红细胞免疫功能及血清补体变化。②方法　应用免疫黏附花环法和免疫单扩散法 ,对 43例慢性肺心病病人和 41例健康人红细胞免疫功能及血清补体进行检测。③结果　慢性肺心病病人红细胞C3b受体及免疫复合物花环率显著低于正常对照组 (t=11.40 15 ,9.5 0 72 ,P <0 .0 0 5 ) ,补体C5,CINH,BF显著高于正常对照组 (t=2 .45 72～ 5 .6 433,P <0 .0 5 ,0 .0 1) ,补体C1q,C3 ,C4 ,C9与正常对照组比较无显著差异 (t=0 .875 4～ 1.930 0 ,P >0 .0 5 )。慢性肺心病病人红细胞免疫功能改变与低氧有关 (t=3.0 370 ,4.46 32 ,P <0 .0 0 5 )。④结论　红细胞免疫功能及补体改变对慢性肺心病的病理生理过程有一定影响。     

补体监测在肝癌病人诊断治疗中的意义

目的 :观察肝癌病人及肝癌术后病人血清补体含量变化及临床意义。方法 :对 40例肝癌病人、15例肝癌术后病人、10例肝硬化病人及 2 6例正常人血清的C3 、C4 、CH50 含量进行检测。结果 :肝癌病人血清中的C3 、C4 、CH50 水平明显高于对照组和肝硬化组 (P <0 .0 1) ;而肝癌术后病人血清C3 、C4 、CH50 含量则接近正常水平 ,与对照组比较无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :血清补体的检测对肝癌的诊断、肝癌与肝硬化的鉴别诊断 ,及肝癌术后疗效的判断有一定的临床意义     

测定补体活性的新方法

以往是在Mayer法的基础上,利用稀释血清测定补体的溶血活性,并用CH50来表示。由于血清的稀释倍数高,不能反映抑制物或灭活物的活性,于是设法利用原血清测定包括抑制因子活性的新方法。     

制备豚鼠补体时避免溶血发生的方法学探讨

[目的]研究制备豚鼠补体时避免溶血发生的方法。[方法]方法1为先混合8只豚鼠的血清,再将绵羊红细胞(SRBC)加入到混合的豚鼠血清中进行吸附;方法2为先把SRBC分别加入到豚鼠血清中进行吸附,再将吸附后的8只豚鼠血清混合,然后肉眼观察2种处理方法所得样品的溶血现象,并在540nm波长下测定其吸光度(D)值。[结果]按方法1所制备的豚鼠补体,肉眼可见明显溶血现象;而采用方法2则溶血现象不明显,且方法2组样品吸光度值低于方法1组(P<0.05)。[结论]采用先吸附,后混合的方法,可较好地避免豚鼠补体制备时发生溶血。     

归脾汤对慢性肝炎恢复期患者的免疫调节作用

目的　观察归脾汤对慢性肝炎 (CH)患者细胞免疫及体液免疫的影响。方法　采用归脾汤治疗CH 111例 ,并观察其对血清免疫球蛋白 (IgA、IgM、IgG)、补体 (C3、C4 )及T细胞亚群 (CD3+、CD4 +、CD4 +/CD8+)的影响。结果　CH患者血清免疫球蛋白明显升高 ,补体及T细胞亚群下降。治疗组应用经方归脾汤治疗 15～ 30d ,免疫球蛋白及补体水平明显改善 (P <0 .0 5 ) ,CD3+、CD4 +及CD4 +/CD8+比例较治疗前升高 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。结论　归脾汤治疗CH患者能降低血清免疫球蛋白 ,升高补体及CD3+、CD4 +T淋巴细胞     

健身操运动对女大学生血清总补体活性的影响

目的 观察有氧健身操运动对女大学生血清中总补体活性的影响，为开展健身操运动提供实验依据。方法 从南华大学护理学院2003级学生中随机抽取30名女生分成3组，即对照组、实验1组与实验2组，后两组每周分别进行1次与3次有氧健身操运动，共12周。利用50％溶血法于0、2、4,6、8、10、12周测定机体血清总补体活性。结果 每周锻炼3次者，血清总补体活性出现先降低后增强的变化趋势。在第8周补体活性回复到运动前水平，第10周、12周活性增强，并维持较高水平。结论 坚持运动量适中的有氧运动，能增强血清总补体的活性，提高抗病能力。     

短程免疫制备实验用溶血素方法探讨

目的寻求采用短程免疫制备实验用溶血素（兔抗绵羊红细胞抗体）的较佳方法。方法采用3％的脱纤维绵羊红细胞（SRBC）,分别用连续5次注射的短程免疫和间隔一周注射的长程免疫方法,经耳缘静脉免疫家兔,用补体溶血实验检测两种免疫方法所制备溶血素的效价。结果短程免疫组溶血素效价为1：200,长程免疫组溶血素效价为1：800。结论采用高浓度的SRBC及合理搭配免疫间隔时间和次数的短程免疫程序是制备实验用溶血素的较佳方法。     

一种新的染色液用于红细胞花环试验

绵羊红细胞用抗人淋巴细胞单克隆抗体致敏后 ,可以直接用于检测外周血 T细胞及其亚群。为了更好地观察实验结果 ,作者在实验中摸索出一种新的染色液。现报告如下。1　材料、方法与结果1 .1　材料 :( 1 )淋巴细胞分离液 :上海试剂二厂生产。 ( 2 ) Hank's液 (1) 。 ( 3)致敏绵羊红细胞 :卫生部武汉生物制品研究所生产。 ( 4 ) Giemsa液 1 :磷酸盐缓冲液 1 0 ml,姬姆萨原液 6滴 ,瑞氏原液 1滴。( 5) Giemsa液 2 :磷酸盐缓冲液 1 0滴 ,姬姆萨原液1滴。 ( 6)新染色液 :本室配制。 ( 7)光学显微镜。1 .2　方法 :( 1 )取肝素抗凝血 2 ml,与 Hank…     

血凝试验检测尘螨致敏豚鼠血清中特异性抗体

将检测哮喘患者血清中尘螨特异性抗体的间接血凝试验用来检测动物血清中特异性抗体。 材料和方法 粉尘螨浸液由本教研室制备,蛋白浓度10mg/ml,实验时用生理盐水稀释至所需含量。 待测豚鼠血清共6组,每组抽血二次。其中4组用粉尘螨浸液分别加不同佐剂免疫及加强免疫,1组用无佐剂的粉尘螨浸液免疫,另1组为不含佐剂和粉尘螨浸液的对照组。 粉尘螨浸液致敏绵羊红细胞的制备:取双醛化固定经鞣化的2％绵羊红细胞悬液20ml,离心沉淀,继用0.1mol/L、pH4.8醋酸缓冲液洗涤1次后,按沉淀细胞4份(0.8ml)加粉尘螨浸液1份(0.2ml,蛋白质含量1mg/ml)立即加入0、1 mol/L、pH4.8醋酸缓冲液5ml,混匀后置37℃作用1h,离心沉淀后,再用1％兔血清磷酸缓冲液反复洗涤5次,最后用同液配制成1％致敏的红细胞液,并加防腐剂NaN_3至万分之一浓度。用生理盐水代替粉尘螨抗原处理绵羊红细胞作为对照。 用常规微量血凝法检测粉尘螨特异性抗体,在96孔V型微量血凝板上,用卡介苗(75mg/ml)0.02％和小牛血清白蛋白0.2％磷酸缓冲液灭活(56℃ 30min),待测血清由第1孔作对倍稀释成1:10～1:5120,然后在各孔中加等量(25μl)粉尘螨致敏的红细胞悬液,置微量振荡器上振荡3min,使