人血清格列吡嗪高效液相色谱测定方法的研究

采用HPLC法测定人血清格列吡嗪药物浓度 ,色谱柱为LichrosorbSi6 0 5 μm 15 0× 4.6mmI.D。流动相为甲醇 :水=5 0 :5 0 ,流速 1ml/min。二极管阵列检测器检测波长为 2 75nm。进样量为 2 0 μl。该方法灵敏度较高 ,检测速度快 ,精密度和回收率均可满足测定血清格列吡嗪浓度的要求。     

骨组织中吡嗪酰胺浓度的高效液相色谱测定

背景：测定结核病化疗药物在病变椎体组织中的生物分布对脊柱结核的治疗具有重要价值。 目的：建立吡嗪酰胺在骨组织中药物浓度的高效液相色谱分析法并测定其在脊柱结核病椎组织中的浓度。 方法：取10例脊柱骨折患者前路椎体次全切除减压的椎骨制备成空白骨匀浆,高效液相色谱法测定吡嗪酰胺骨组织药物浓度。取18例脊柱结核患者(2HRZ/H2R2Z2化疗方案)的病椎硬化骨、亚正常骨、坏死组织以及髂骨为骨组织标本,采用高氯酸蛋白沉淀法获得骨匀浆吡嗪酰胺上清,对方法的专属性、回收率与精密度以及线性范围进行评价。 结果与结论：吡嗪酰胺在265 nm波长下有较大吸收,保留时间7.48 min,无干扰峰出现。在0.048~3.120 μg/g骨匀浆浓度范围内吡嗪酰胺峰面积与骨样本浓度线性关系良好(r=0.999 91),绝对回收率在89.18%~93.75%,方法回收率为96.30%~100.45%,日内、日间精密度分别为4.26%~8.78%和5.12%~9.01%。应用此方法测得吡嗪酰胺在病椎硬化壁为最低抑菌浓度,壁外亚正常骨及对照髂骨达到有效治疗浓度,壁内核心病灶未检测到分布。提示吡嗪酰胺在脊柱结核病椎中存在明显的组织分布差异,硬化壁是其经正常椎体向核心病灶穿透的组织屏障。     

用高效液相色谱技术产前快速诊断β-地中海贫血

目的探讨应用高效液相色谱技术(HPLC)在孕中期快速产前诊断β-地中海贫血(β-地贫)的可行性。方法夫妇双方均为β-地贫基因携带者的孕妇73例,在妊娠19~31w通过经母腹脐静脉穿刺的方法抽取胎血。胎血血红蛋白(Hb)各组分比例的测定采用HPLC,胎血β-地贫基因的检测采用PCR-反向点杂交的方法。结果HPLC检出18例胎血只有HbF而无HbA,PCR-RDB证实此18例胎儿基因型均为β-地贫基因突变纯合子或双重杂合子。剩余55例胎血都有不等量的HbA,其中4例HbA值为0.5%~0.7%,均为带有-28基因突变的双重杂合子;51例HbA值范围1.4%~10.4%,其中30例为β-地贫基因突变杂合子,21例基因型正常。结论对于重型β-地贫,用HPLC测定胎血HbA值和胎儿基因型分析进行产前诊断有很好的相符性。HPLC用在孕中期可以作为产前快速诊断重型β-地贫的一种方法。     

变性高效液相色谱技术快速检测下呼吸道致病性细菌的实验研究

目的 运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测5种下呼吸道致病性细菌,建立一种快速检测下呼吸道致病性细菌的分子生物学方法.方法 以下呼吸道致病性细菌16S rRNA基因的保守区设计通用引物,并在引物前加上40-bpGC,特异性扩增该基因的保守区和可变区,运用DH-PLC技术对PCR产物进行分析.选取50株临床分离菌株验证该方法的有效性.结果 通用引物可特异性扩增细菌16S rRNA,PCR产物经DHPLC分析后每种细菌均能得到特征性的洗脱峰.DHPLC检测临床分离菌株结果显示,与常规培养方法的符合率为100%.结论 DHPLC技术具有准确、简便、快捷和高通量等特点,在临床检测下呼吸道致病性细菌中具有潜在的应用价值.     

应用变性高效液相色谱技术快速诊断儿童型脊髓性肌萎缩症

目的 介绍变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLC)技术在儿童型脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy，SMA)基因诊断中的应用。方法 PCR扩增25名正常人、1份标准样品及25例SMA患者运动神经元生存基因(survival，motor rleuron，SMN)第7外显子及其侧翼区域，PCR产物变性、复性后直接上样于DHPLC系统。通过改变A、B缓冲液的比例来分离各种DNA成份。结果 各种不同DNA成份以色谱峰的形式表现出来。23名正常标本呈现3个峰，依次为SMN1／SMN2异源双链峰、SMN2同源双链峰、SMN1同源双链峰。2名正常标本及1份标准品只有SMN1峰，表明缺失了SMN2。22例SMA患者只有SMN2峰，表明缺失了SMN1。另3例SMA患者呈现3个峰，表明无SMN1或SMN2缺失。结论 DHPLC诊断SMA具有敏感、准确、快速、简便等优点。     

应用变性高效液相色谱技术检测parkin基因突变

目的应用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)检测早发性帕金森综合征(early-onset parkinsonism,EOP)致病基因parkin突变。方法散发EOP患者82例,提取外周血细胞DNA,通过PCR扩增parkin基因的12个外显子,应用DHPLC进行变异筛查,峰形异常者进行DNA测序以明确序列变异的种类和位置。结果以100名健康者为正常对照,在82例EOP患者中检测出3种突变,均为点突变,内含子区突变包括IVS1-39G→T和IVS9 18C→T;编码区突变为T1422C,导致所编码的441位氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸(Cys441Arg)。结论在散发EOP患者中发现3个杂合型点突变,探讨应用DHPLC在EOP患者中开展parkin基因诊断的可行性。     

高效液相色谱法测定的雌激素受体临床应用于人乳腺癌

应用体积排阻高效液相色谱法(SEHPLC)分析13例人乳腺癌组织的雌激素受体。此法能迅速检出雌激素受体的8S及4S亚单位,为选择对内分泌治疗敏感的乳腺癌病人提供了新的依据。     

高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量

目的通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定聚乳酸材料中乳酸单体的残留量,完善此类材料的质量评价方法。方法用三氯甲烷溶解聚乳酸材料样品后,加入等体积磷酸二氢钾水溶液(20 mmol/L,pH=2.87)涡旋振荡,静置分层后取上清液,采用C18 Synergi4u Hydro-RP 80A色谱柱,进样20μL,以流速0.6 m L/min,磷酸二氢钾水溶液为流动相,柱温30℃,紫外检测波长210 nm,外标法定量并进行方法学研究,包括液相色谱系统适应性、线性范围、检出限、定量限、回收率。结果本方法中理论塔板数为10660,拖尾因子为1.32,分离度为3.81,重复性相对标准偏差为0.54%(n=5),乳酸在浓度1.05~105μg/m L范围内与峰面积保持良好的线性关系(r=0.999979),检出限为0.42μg/m L,定量限为1.05μg/m L,萃取平均回收率为94.76%(n=6),其相对标准偏差为3.04%。聚乳酸样品中乳酸单体平均残留量为144.17μg/g。结论高效液相色谱法测定聚乳酸中乳酸单体残留量具有良好的线性范围,准确度高,重复性好,萃取回收率较高且操作简单,可用于聚乳酸材料中乳酸单体残留量测定。     

高效液相色谱技术检测α地中海贫血价值初探

目的探讨应用高效液相色谱技术(HPLC)快速诊断小儿α地中海贫血(α地贫)的可行性。方法收集经分子生物学方法诊断为α地贫的87例患儿EDTA-K2抗凝血标本2ml,采用HPLC方法测定各血红蛋白组分含量,对α地贫进行非基因检测。结果HPLC检出30例11天至3个月α地贫患儿均有一血红蛋白Bart′s(HbBart′s)峰,14例血红蛋白(HbH)病患儿均有一HbH峰。剩余的43例4个月至11岁标准型或静止型α地贫患儿未检出有任何异常峰。结论HPLC与基因分析对诊断3个月以内的α地贫以及HbH病患儿有很好的符合率。而对于4个月以上的标准型与静止型α地贫患儿无诊断意义。     

高效液相色谱法测定人红细胞膜脂肪酸含量及组成

本文采用高效液相色谱法测定了４２例正常成人红细胞膜脂肪酸（ＦＡ）含量及组成。结果表明：该法分离效果好、定量准确。重复性变异系数平均５．５％，回收率平均９４．７％。人红细胞膜主要由廿二碳六烯酸（Ｃ２２６）、花生四烯酸（Ｃ２０４）、亚油酸（Ｃ１８２）、软脂酸（Ｃ１６０）、油酸（Ｃ１８１）和硬脂酸（Ｃ１８０）等六种ＦＡ组成，其中花生四烯酸含量最高，其次为硬脂酸。不饱和脂肪酸占７１．６％。     

家兔血浆中替拉扎明的HPLC测定及药动学研究

建立家兔血浆中替拉扎踢（Tirapazaming，TPZ）测定的高效液相色谱法（HPLC），并进行TPZ在家兔体内的药代动力学研究。血浆样品用甲醇沉淀蛋白后进样；流动相为甲醇-50mmol／L磷酸二氢钠溶液（10：90，磷酸调pH6．5），在266nm波长处检测，按外标法进行血药浓度计算。在此色谱条件下，TPZ峰形良好，血浆内源性成分对药物测定无干扰；检测限为0．5ng，在血药浓度0．150～59．98mg／L范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系，r=0．9995；方法回收率〉95％（n=3），日内精密度和日间精密度的RSD〈6%（n=5）。TPZ在家兔体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型。该法灵敏、简便、准确，适用于TPZ在家兔体内的药代动力学研究。     

反相高效液相色谱法测定血清中的5-羟色胺

建立了一种简便、快速测定血清中5-羟色胺的反相高效液相分析方法。采用的色谱柱为Bondapak C18不锈钢柱(5μm,250mm×4.6mmi.d.),流动相为:甲醇—水—乙酸(70:30:0.1 V/V),流速:1ml/min,荧光监测器,激发波长278nm,发射波长333 nm。结果表明:该方法线性关系良好(r=0.99992),5-羟色胺测定的线性范围为0.10~2.00μg/mL,最低检测限为0.02μg/mL(S/N=3)。5-羟色胺在血清样品中的加标回收率为92.37%~100.12%。该测定方法结果准确,可用于临床研究。     

肾病患者血清IL-8,FN和尿IL-8水平检测的临床意义

目的 :了解肾病患者血清IL - 8、FN和尿IL - 8水平、变化及意义。方法 :采用ELISA夹心法在疾病活动期和激素冲击治疗后 8周测定 5 1例肾病患者血清IL - 8、FN和晨尿IL - 8水平 ,并以 36例随机健康者作比较。结果 :肾病患者血清及尿IL - 8含量显著高于正常人组 (P <0 0 1)但与Scr无显著相关性 (r =0 .12 5 ,P >0 .0 5和r =0 .0 75 ,P >0 .0 5 )而血清FN水平则低于正常人组 (P <0 0 5 )。激素治疗 8周后 ,血、尿IL - 8水平均降低 (P <0 0 5 ) ,血清FN水平有所升高 ,但与治疗前比较无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :IL - 8、FN与肾病的发病机制有关 ,测定血清IL - 8、FN和尿IL - 8有助于判断肾病患者的炎症活动状况 ,有一定的临床价值。     

超敏C-反应蛋白在急性冠脉综合征病程中检测的临床意义

目的:观察超敏C-反应蛋白(HS-CRP)在急性冠脉综合征(ACS)病程中水平的变化,以了解HS -CRP同ACS患者中冠状动脉粥样硬化进展的关系。方法:对35例临床确诊ACS住院患者进行检测,分别在 入院时、1周、1月进行检测HS-CRP,对照组是30例经确诊无ACS及近4周无感染史的健康体检者。结果: ACS患者组HS-CRP值水平明显高于对照组(P<0.01)。结论:HS-CRP可能是动脉粥样硬化病变进展过程 中反应疾病演变的一个标志。     

新生儿缺血、缺氧性脑病患儿血浆INS、NPY检测的临床意义

目的:探讨了新生儿缺血、缺氧性脑病患儿血浆胰岛素(INS)、神经肽Y(NPY)水平的变化及意义.方法:应用放射免疫分析测定了94例新生儿缺血、缺氧性脑病患儿血浆INS和NPY水平及相关性研究,并与30名正常新生儿作比较.结果:新生儿缺血、缺氧性脑病患儿血浆INS和NPY水平均非常显著地高于正常新生儿组(P＜0.01),且两者呈明显正相关(r=0.6112,P＜0.01).结论:测定新生儿缺血、缺氧性脑病患儿血浆INS和NPY水平的变化与疾病的危重程度、发生发展和预后密切相关.     

脑外伤患者血清和脑脊液NSE测定的临床意义

目的 :探讨了颅脑外伤患者血清和脑脊液神经元特异性烯醇化酶 (NSE)的水平及其临床意义。方法 :采用放射免疫分析对 36例颅脑外伤患者进行了血清和脑脊液NSE测定。结果 :颅脑外伤患者血清和脑脊液NSE水平均显著地升高 ,尤以重型组为甚。结论 :测定颅脑外伤患者血清和脑脊液NSE水平对了解病情 ,并有助于判断愈后。     

中西医结合治疗DVT过程中血浆CGRP水平

目的 :探讨急性深静脉血栓形成 (DVT)中西医结合治疗过程中血浆降钙素基因相关肽 (CGRP)水平及其临床意义。方法 :选择 5 0例急性深静脉血栓形成及 30例本病后遗症接受中西医结合治疗的病人 ,利用放射免疫分析动态观察其血浆CGRP水平。结果 :DVT患者中西医结合治疗后 6h血浆CGRP即明显升高 ,72h达高峰 ,与临床疗效最佳时间相符 ,而 30例后遗症病人则无明显变化。结论 :血浆CGRP水平可作为中西医结合临床治疗效果的一种检测指标 ,并可作为疾病进程的实验室指标。     

肺癌患者血清SS和VEGF检测的临床意义

目的:探讨了血清生长抑素(SS)和血管内皮生长因子(VEGF)水平在肺癌患者中的变化。方法:分别应用放射免疫分析和双抗体夹心ELISA对31例肺癌患者进行了血清SS和VEGF水平测定,并以35名正常健康人作比较。结果:肺癌患者血清SS和VEGF水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),且SS和VEGF呈明显正相关(r=0.6021,P<0.01)。结论:检测肺癌患者血清SS和VEGF水平的变化对了解病情,指导临床实践均具有重要的临床价值。