肝癌细胞仑伐替尼耐药的基因筛选及其通路研究

目的 基于CRISPR/Cas9技术筛选肝癌仑伐替尼耐药相关基因并探究其潜在关系。方法 应用CRISPR/Cas9 sgRNA全基因组文库技术结合Affymetrix表达谱芯片筛选肝癌对仑伐替尼耐药的相关基因。通过TCGA数据库分析这些基因在肝癌中的表达及预后的关系,最终确定采用THOC2为肝癌仑伐替尼耐药基因并用于后续研究。采用免疫组织化学（immunohistochemical,IHC）染色、Western blotting、RT-PCR检测THOC2在肝癌细胞株（MHCC-97H、MHCC-LM3、SMMC-7721）及仑伐替尼耐药/敏感肝癌组织中的表达情况。通过慢病毒感染构建高表达THOC2的SMMC-7721-THOC2肝癌细胞,采用免疫共沉淀（Co-IP）等技术探讨THOC2介导肝癌仑伐替尼耐药的可能机制。结果 发现7个与肝癌仑伐替尼抵抗密切相关的耐药基因,包括THOC2、CTNNB1（β-catenin）、MET（c-Met/HGFR）、HTATIP2、C10orf11、PRDX3、MAST4。TCGA分析提示THOC2在肝癌与癌旁中表达存在统计学差异,且与肝癌临床分期及预后密切相关。IHC染色、Western blotting、RT-PCR检测发现THOC2主要分布于胞核中,其在仑伐替尼耐药组患者中的表达水平高于药物敏感组患者;THOC2在高转移潜能的肝癌细胞株（MHCC-97H、MHCC-LM3）中的表达较在SMMC-7721中更显著;Western blotting、Co-IP进一步表明上调THOC2后Wnt/β-catenin通路下游靶点BAX、cyclinD1和c-myc蛋白水平显著增高,且THOC2与β-catenin存在相互作用关系。结论 THOC2基因高表达可能通过Wnt/β-catenin通路参与调控肝癌对仑伐替尼的耐药。     

结肠瓣膜成形术诱导SD大鼠短肠综合征模型结肠上皮化生的机制研究

目的 结肠瓣膜成形术可以使瓣膜前结肠上皮具有类似小肠的吸收功能,本研究拟进一步阐明结肠瓣膜成形术诱导结肠上皮向小肠上皮化生的机制。方法 将40只大鼠随机分配到两组（各20只）,对照组大鼠切除80%小肠,实验组同时行结肠瓣膜成形术。实验后30周处死大鼠,取回肠、瓣膜前结肠及瓣膜后结肠作检测。原位荧光免疫组化法检测肠上皮细胞内Wnt7b蛋白和β-catenin蛋白。结果 实验组大鼠比对照组的大鼠重。HE染色光镜检查发现瓣膜近端的结肠具有类似小肠上皮的特征（上皮增厚、肠隐窝增长以及杯状细胞减少）。免疫组化检查发现瓣膜近端结肠上皮的Wnt7b蛋白和β-catenin蛋白比瓣膜远端结肠上皮的大幅增多。结论 结肠瓣膜成形术促进结肠上皮的吸收功能,其机制很可能是Wnt/β-catenin通路介导的肠上皮干细胞再生。     

胆管癌中14-3-3蛋白各亚型的表达及其临床意义

目的 探讨14-3-3蛋白各亚型在胆管癌组织中的表达情况及其临床意义.方法 采用石蜡包埋组织,进行免疫组织化学染色,分析14-3-3蛋白各亚型在20 例胆管癌及5 例胆管癌旁正常组织的表达状态,探讨其与胆管癌临床病理参数之间的关系.结果 14-3-3 蛋白β、γ、ε、ζ、η、θ和σ亚型在胆管癌组织原发灶表达的阳性率分别为85.00% (17/20)、85.00% (17/20)、55.00% (11/20)、75.00% (15/20)、50.00% (10/20)、80.00% (16/20) 和80.00%(16/20).其中,β、γ、η、σ、ε和θ亚型与癌旁正常胆管组织比较,具有统计学意义(P<0.05),而ζ亚型无统计学意义(P>0.05);14-3-3蛋白阳性表达率与胆管癌的分化程度、恶性级别及是否淋巴结转移均无差别(P>0.05).结论 14-3-3蛋白七个亚型中β、γ、η、σ、ε和θ亚型在胆管癌原发组织中高表达,表明14-3-3蛋白在胆管癌的发生过程中具有重要作用.     

Wnt/β-catenin信号通路重要分子及其靶基因在原发性肝癌中的作用机制

肝癌是我国及某些亚非地区常见的恶性肿瘤之一,死亡率较高.近年来我国肝癌的发生率有上升趋势,因此了解肝癌的发生发展机制及其治疗刻不容缓.但目前对其发生机制仍不清楚.其中细胞信号转导对其发生、发展、转移起着至关重要的作用.如Notch信号通路、Wnt信号通路、Ras、Jnk信号通路、mTOR通路等,目前倍受关注的是Wnt/β-catenin转导途径.经典Wnt信号通路研究最多且相关机制解释较为清楚,其激活的重要标志是β-catenin于胞质稳定表达及核内定位.研究表明,Wnt信号通路各蛋白表达水平改变及相关基因突变参与了原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生.     

《国际泌尿系统杂志》稿约

Wnt信号通路是指由Wnt蛋白家族成员作为信号分子的信号转导过程,参与多种生命活动的调节,包括细胞的增殖、分化、极化、凋亡等.最近的研究显示,Wnt信号通路参与了全身多种器官的组织细胞活化及组织纤维化.深入研究Wnt信号通路在组织纤维化尤其是腹膜透析相关腹膜纤维化发生中的作用,将有助于进一步揭示腹膜纤维化的发生机制,为腹膜纤维化的防治提供新的干预靶点.     

胆囊癌中TβR Ⅰ与细胞增殖及细胞周期的关系

目的 探讨T13R Ⅰ与胆囊癌细胞增殖和细胞周期的关系,分析其在胆囊癌发病中的机制,评价其对胆囊癌预后的价值.方法 用免疫组化法对原发性胆囊癌及胆囊腺瘤、慢性胆囊炎行转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor β receptor type Ⅰ,TβR Ⅰ)、增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期素E(Cychn E)进行检测,对胆囊癌患者进行随访.结果 胆囊癌中TβR Ⅰ阳性表达率34.29%,显著低于胆囊腺瘤、胆囊炎(P均小于0.05).伴淋巴结和远处转移者TβR Ⅰ阳性表达率明显低于无转移者(P<0.05),TβR Ⅰ阳性表达率与PCNA LI呈负相关(r=0.4024,p=0.0166).TβR Ⅰ表达阳性者预后比阴性者好(P<0.05).结论 TβR Ⅰ与胆囊癌细胞增殖和细胞周期关系密切,是判断胆囊癌发生发展的重要生物学标志.TβR Ⅰ低表达而导致TGF-β负性生长调控作用的逃逸,可能是胆囊癌变过程中的重要机制.TβR Ⅰ是判断胆囊癌预后的良好指标.     

Pygo2在经典Wnt信号通路中的作用及其研究进展

Wnt信号通路在正常组织发育以及肿瘤形成中起着重要作用.经典wnt信号通路通过促进关键蛋白β-catenin进入细胞核,与TCF/LEF结合,从而激活靶基因转录.Pygo是Wnt信号通路中新发现的成员,通过BCL9/Lgs与β-catenin结合,从而促进靶基因的转录.Pygo2的异常表达,与发育异常、肿瘤的形成有着紧密的联系.Pygo2在经典Wnt信号通路中的作用机制模式已经确定,但是与染色质重塑方面的机制有待进一步研究.最近研究发现Pygo2参与H3K56Ac,从而促进基因的表达.     

Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖凋亡中的作用及意义

目的 观察Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖和凋亡中的作用,并探讨其可能的机制.方法 培养小鼠肝癌细胞株H22,将细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h.用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,应用免疫组化法检测各相关处理过的细胞株,RT-PCR、Western blotting法分别检测H22细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白.结果 培养24、48、72、96 h后,A、B组与C组比较,细胞增殖差异明显(P均<0.05).A、B、C组细胞凋亡率分别为25.52％±2.13％、0.91％±0.18％、8.91％±1.50％,A、B组与C组比较差异明显(P均<0.05).与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均<0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均<0.05).结论 Notch1信号通路在抑制小鼠肝癌细胞株H22增殖、促进其凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hesl、Bcl-2表达有关.     

肝细胞癌Wnt信号通路相关基因的表达及其意义

目的 观察肝细胞癌(HCC)中Wnt信号通路相关基因的表达状态,探讨HCC与该信号通路的关系.方法 应用基因芯片对5例HBV感染相关HCC癌和癌旁组织进行检测,并采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对芯片筛选结果进行验证.结果 芯片(含126个Wnt信号途径相关基因)杂交结果显示,对比癌旁组织,癌组织内3组以上同时出现上调的基因数为7个(5.56%),其中Fzd2基因在4组出现明显上调(19.21倍);癌组织内3组同时出现下调的基因数为9个(7.14%),其中PYGO2基因(14.76倍)和SHFM3基因(16.97倍)在4组出现明显下调.HCC和癌旁组织差异表达基因主要涉及Wnt信号途径中相关Frizzled信号传导、细胞周期、转录和蛋白降解等方面.实时定量RT-PCR的结果显示,对比癌旁癌组织Fzd2和DVL3分别上调为22.11倍和17.12倍,PYGO2下调14.69倍,一致于芯片杂交实验的结果,说明结果的可靠性.结论 HBV感染相关性HCC的发生发展涉及Wnt信号通路,该通路中一些关键基因的异常表达为此提供了证据.     

T细胞因子4在肾癌中的表达及其意义

目的　研究Wnt/Frizzled信号通路在核内的转导及其主要信号分子T细胞因子 4(TCF4)在肾癌发生发展中的作用。　方法　采用RT PCR及NorthernBlot的方法检测了TCF4基因在肾癌组织及正常肾组织 ,肾癌细胞系GRC I和正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达。　结果　TCF4在肾癌组织及细胞系中强表达 ,且存在剪接性突变 ,形成了 30 0bp左右的突变基因。　结论　TCF4作为Wnt/Frizzled信号通路的核内信号分子 ,在肾癌发生和发展中具有重要作用 ,其致病机理与TCF4的剪接性突变有一定关系。     

Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路参与细胞增生分化的调节、基因表达调控和细胞迁移等重要生物过程.近年研究发现,Wnt/β-catenin信号通路的异常与乳腺癌等多种肿瘤的发生、发展密切相关.深入研究Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌中的作用,有助于进一步揭示乳腺癌的发生机制,为乳腺癌的防治提供新的思路及干预靶点.本文就Wnt/β-catenin通路的组成及调控机制、Wnt/β-catenin通路与乳腺癌发生、发展的关系及Wnt/β-catenin通路在乳腺癌诊治中的展望作一综述.     

Wnt/β-catenin信号通路作为肝细胞癌的治疗靶点的新进展

肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,同时也是排列全球第三位的肿瘤相关致死原因。由于其手术治疗的效果无法令人满意,迫使人们深入研究肝癌的发病、转移和侵袭过程中的分子机制,来开发更有效的早期诊断和治疗手段。而在肝癌信号调控的一系列反应中,Wnt/β-catenin信号通路在肝癌的发生阶段起到关键的作用。本文通过复习相关文献,系统总结了Wnt/β-catenin信号通路在肝癌起始阶段的分子机制,并对其在作为肝癌分子靶点的利弊进行了展望。     

经典Wnt信号通路在原发性肝癌发生中的作用

原发性肝癌（HCC）是世界第5大肿瘤,死亡率高,其发病率呈上升趋势。研究表明,多种信号通路参与了HCC的发生发展如p53信号通路、Rb信号通路、经典Wnt信号通路等[2]。Wnt基因家族编码蛋白的异常表达可引起经典Wnt信号通路的激活,进而导致核心因子β-catenin稳态并定位于核内,激活下游靶基因的转录,与肿瘤发生有关。了解该通路在HCC发生发展中的作用有重要意义。     

急性胰腺炎的炎症递质

炎症递质在急性胰腺炎及其并发的多器官功能不全综合征中起重要作用,多器官功能不全是急性胰腺炎死亡的主要原因.近年来的研究进一步证实了TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8IL-10、PAF、ICAM-1、C5α及神经肽P物质等炎症递质在急性胰腺炎及随后的全身炎症反应综合征的发病机制中起着关键性作用.     

Wnt/β-catenin信号通路调节软骨代谢作用于骨坏死疾病的研究进展

越来越多的学者认为骨坏死疾病的发生与软骨细胞代谢异常有关,而Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的激活能促进软骨细胞分化,同时也能促进软骨分化中的细胞死亡。因此暗示该通路能够通过调节软骨代谢影响骨坏死疾病的发生发展。其次,软骨细胞特异性β-catenin基因条件敲除小鼠模型的成功建立,有助于阐明Wnt/β-catenin信号通路调节软骨代谢的作用机制,为骨坏死疾病的病机阐述以及针对性治疗提供支持。本文就Wnt/β-catenin信号通路、软骨代谢与骨坏死三者间的关系展开综述。     

Eur Urol:Wnt信号通路的活化与mCRPC对阿比特龙及恩杂鲁胺一线治疗的耐药相关

Wnt信号通路是一类以分泌型Wnt蛋白为配体激活的信号通路,主要包括经典Wnt/β-catenin信号通路和非经典Wnt/Ca 2+信号通路。大约10%~20%的转移性去势抵抗型前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate cancer,mCRPC)患者体内存在Wnt信号通路调控基因的体细胞突变,主要包括CTNNB1和RSPO2的激活突变和APC、RNF43和ZNRF3的失活突变。近年来文献报道指出传统及新型内分泌治疗会诱发经典Wnt/β-catenin信号通路的活化,从而促使非雄激素依赖性前列腺癌细胞生长,另外,非经典Wnt/Ca 2+信号通路的活化也会导致机体对恩杂鲁胺在内的雄激素受体拮抗剂出现耐药。因此,目前理论上认为Wnt信号通路的活化可以降低新型内分泌制剂的治疗效果。对此,发表于2019年European Urology杂志上题为《Wnt-pathway activating mutations are associated with resistance to first-line abiraterone and enzalutamide in castration-resistant prostate cancer》基于临床肿瘤标本DNA测序结果,对存在Wnt信号通路的活化的mCRPC患者是否对一线药物阿比特龙或恩杂鲁胺产生耐药进行相关分析研究。     

Pygo2与肿瘤的研究进展

Pygopus2(Pygo2)是2002年发现的,为Wnt信号通路中β-catenin的下游功能蛋白.已有研究证明,Pygo2通过Wnt信号通路参与人类多种疾病的发生发展,尤其是肿瘤性疾病.目前发现其具有调控组织发育、转录共激活及染色质重塑作用,并且与多种恶性肿瘤有密切关系.了解Pygo2蛋白在生长发育中的作用及肿瘤调控中的机制对认识肿瘤发生和演进、临床诊断及治疗有十分重要的意义.深入研究Pygo2在肿瘤发生发展中的作用有助于找到新的靶点,从而为肿瘤治疗提供新的方法.     

肝硬化合并肝癌患者围手术期糖代谢的临床分析

目的 探讨肝硬化合并肝癌患者围手术期糖代谢的临床特点,以便更好地控制患者术前血糖. 方法 检测40例肝硬化合并肝癌患者空腹及服糖后0.5,1,2,3 h血糖(BG)、胰岛素(INS)、C肽(C-P)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛β细胞功能指数(HOMA-IS),10名健康者为对照. 结果 肝癌组糖耐量显著低于正常组.血清胰岛素测量:正常对照组空腹为(10.3±3.7)mIu/L,服糖后0.5,1,2,3 h分别为35.2±12.8,65.1±10.2,19.5±11.2,12.2±10.1 mIu/L;肝癌组空腹为(20.4±5.7)mIu/L(P<0.05),服糖后0.5,1,2,3h分别为55.1±12.6,95.1±14.2,75.3±21.5,36.4±16.5 mIu/L(P值均<0.05).血清C肽测定:正常对照组空腹为(1.5±0.3)ng/ml,服糖后0.5,1,2,3 h分别为4.1±0.1,6.1±1.4,1.9±0.6,2.1±0.9ng/ml;肝癌组空腹为(3.2±0.1)ng/ml(P<0.05),服糖后0.5,1,2,3 h分别为6.3±0.3,10.1±0.9,8.3±1.2,4.8±1.1 ng/ml(P值均<0.05).胰岛素抵抗指数(IR)对照组和肝癌组分别是2.42和5.26(P<0.05),胰岛β细胞功能指数(IS)对照组和肝癌组分别是93.6和177.4(P<0.05).肝癌组中Child B的患者口服葡萄糖2h后,血糖、胰岛素和C肽明显高于对照组和Child A的患者. 结论 肝硬化合并肝癌患者容易引起糖代谢异常,主要表现为糖耐量降低、胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能异常,糖代谢异常与肝功能状态有关.     

胃癌组织中HIF-1α,CD68及CD206在胃癌及癌旁组织中的表达及临床意义

目的 分析低氧诱导分子-1α（HIF-1α）及肿瘤相关巨噬细胞（TAM）相关抗原CD68、CD206在胃癌及癌旁组织中的表达情况。方法 利用免疫组化技术检测43例胃癌和癌旁组织中HIF-1α、CD68、CD206的表达状态,计算三种蛋白表达的阳性率及阳性细胞数,揭示其与临床因素的相关性。结果 HIF-1α、CD68、CD206的阳性表达率分别为58.1%、69.8%、51.2%,均高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌、癌旁组织中每个视野下CD68⁺细胞数分别为（39.7±7.6）、（8.5±2.8）个;CD206⁺阳性细胞数分别为（32.0±9.2）、（3.4±1.8）个;HIF-1α⁺细胞数（22.9±5.6）、（2.1±1.2）个;组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）。胃癌组织中CD206⁺细胞数与HIF-1α⁺细胞数表达呈正相关（P<0.01,R²=0.641）。三种蛋白的表达与胃癌病理分期、淋巴结转移明显相关（P<0.05）。结论 胃癌组织中CD68、CD206、HIF-1α表达率及阳性细胞数明显增加,且CD206与HIF-1α表达呈正相关。胃癌缺氧区域对M2型巨噬细胞有趋化作用,促进胃癌发生发展。     

Wnt信号通路在肾病发病中的作用

Wnt信号通路早先发现时被认为其主要与细胞增殖旺盛的胚胎发育和肿瘤发生相关[1].目前研究发现,在肾脏发育及急性肾小管损伤中.Wnt信号通路发挥了积极的促进其发育和修复损伤的作用[2,3];但却又是多囊肾病及肾癌的关键发病机制之一[4,5].南此表明,肾脏的发育、形态以及功能的维持均有赖于Wnt信号通路正常"开启"和及时"关闭".本文就近年来Wnt信号通路在肾脏疾病发生、发展中的作用作一综述.