米氏方程及奈氏方程的意义及其在生理学中的应用

Michaelis与Meten二人于1913年建立了酶反应速度与底物浓度的关系的等轴双曲线方程,此方程是以底物与酶形成复合物这一中间过程为基础的,但必须有以下两个前提即(1)在反应初期底物浓度可看作与反应前浓度相等。(2)酶与底物必结合成复合物,此又离解为酶与底物。底物,酶与复合物三者之间可迅速建立平行。虽然复合物也可以分解为产物与酶,但分解速度远小于复合物的离解速度,它不会影响底物,酶与复合物之间的平衡关系。     

一种新型酶生物传感器电极

以色列的Rosen等人发明了一种用于人体内乳酸脱氢酶—5(LDH—5)定量检测的生物传感器电极。通过该酶与底物中乳酸和烟硂胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的相互作用产生丙酮酸,并引起NAD减少。抗—LDH_5抗体固定于一种相应玻璃     

NAD +代谢调控巨噬细胞炎症反应研究进展

细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( nicotinamide adenine dinucleotide,NAD +)通过从头合成、补救合成、Preiss-Handler三条合成途径以及以NAD+为底物的三种酶家族[聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、CD38、沉默...     

医疗装置和传感器表面水凝胶的固定技术

本文介绍了一种通过光化学的方法将水凝胶涂复在医疗装置和传感器表面上新的固定技术。这种以光化学为基础的研制方法由三个步骤构成:1)先将作为底物涂层的光反应聚合物(m-叠氮苯乙烯)涂复在装置上;2)然后将可透光的亲水性共聚物复涂在上面;3)由于涂复顶层的苯乙烯材料和涂复底层材料共价键分子间的二聚作用,以及具有叠氮化物类材料光学反应性的底层涂复物/底物的相互作用,当紫外线辐射时可导致顶部涂层材料透光。为了验证这项技术,作者检测了二种样本材     

(ADPR)_n与真核细胞的DNA修复

多聚ADP-核糖[(ADPR)_n]是六十年代新发现的普遍存在于真核细胞核内的一类核酸大分子。它由一种特异的核内酶——多聚ADP-核糖聚合酶或称ADP-核糖基转移酶(AD PRT)以尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为底物催化生成。近二十年来,各国学者对(ADPR)_n的结构,功能进行了广     

一种新的、敏感的检测HBsAg方法-嵌合抗体红细胞免疫技术的建立及初步应用

本文用异型双功能交联剂N-琥珀酰3-(2-Wbv啶基二硫)丙酸酯(SPDP)制备的高效价单克隆抗乙肝表面抗原-多克隆兔抗绵羊红细胞(Mc抗HBs-Pc抗SRBC)嵌合抗体替代ELISA中的酶标抗体,用绵羊红细胞(SRBC)代替酶的底物作为指示剂,建立了一种新的,敏感的固相嵌合抗体红细胞免疫技术(CEIA)。经初步检测HBV感染病人血清中的HBsAg,     

泛素结合结构域在泛素化底物鉴定中的应用

泛素化(Ubiquitylation)是目前真核细胞内已知的最复杂的翻译后修饰。泛素化底物的识别需要一类特异性受体蛋白介导,这些受体蛋白往往包含一个或多个泛素结合结构域(UBDs)。UBD-泛素间的特异性结合决定了泛素化底物功能的特异性。目前已发现20多种UBDs超家族可识别泛素化底物上的特异性功能团进而传递信号。因此深入了解UBD的识别机制对新UBD的发现及泛素化底物的鉴定具有重要意义。     

一种较理想的ELISA辣根过氧化酶的比色底物

<正> 辣根过氧化酶(HRP)已被广泛地应用于神经组织化学及酶标免疫技术(定位及定量)的研究。在酶标免疫吸附测定(ELISA)时,较常用的三种底物为5-氨基水杨酸(5AS)、邻联甲苯胺(OT)和邻苯二胺(O-PD),其中5AS生色较差,空白较高;而OT的生色很不稳定,易受温度影响,O-PD则在上述各点及灵敏度方面优于5AS及OT,成为目前最常用的比色底物。但O-PD也有缺点,如溶液需暗处保存,否则空白加深,且Ames试验证明有致癌性。本文介绍一种国内尚未报道的可应用于ELISA而优于O-PD的比色底物,即     

一种较理想的用于ELISA的辣根过氧化酶底物

比较了辣根过氧化酶(HRP)的三种还原底物,邻苯二胺(O-PD)、2,2′-连氮-双〔3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐〕(ABTS)及3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)的动力学,发现(1)不论以游离 HRP、HRP-IgG 或 HEP-Fab′为酶制剂,其 Km 均以 TMB 为最小;(2)TMB 所需的 H_2O_2最适浓度最低;(3)以 TMB 为底物时,酶活力受 pH 的影响最小;(4)酶活力测定的灵敏度最高;(5)蓝色的氧化产物可用于酶标定位,而加酸停止反应后的黄色产物又可用于酶标免疫测定的定量比色。再加上三种化合物中,仅 TMB 为非致癌性,故 TMB 是一个比较理想的 ELISA 的 HRP 底物。     

苯丙氨酸羟化酶和酪氨酸羟化酶结构和功能的同源性

在高等真核生物中,芳香族氨基酸:苯丙氨酸和酪氨酸各自被特异的羟化酶氧化。苯丙氨酸羟化酶(PAH)和酪氨酸羟化酶(TYH)虽然具有不同的底物专一性和物理性质,但它们在结构和功能方面却有许多相似之处,都以四氢生物喋呤为辅酶利用分子氧氧化芳香族氨基酸底物;它们与还原性喋呤辅酶、氧分子、铁和底物的结合位点也相同;两种羟化酶都通过类似的机制,即形成暂时的带电的四维中间代谢物,催化芳香族氨基酸的羟基化。PAH和TYH分别对苯丙氨酸和酪氨酸具有相当的底物专一性,但两种氨基酸能竞争性地抑制羟化酶的活性,并在适当的条件下能互相成为羟化反应的     

植入式葡萄糖传感器国际研讨小组会

用于氧和葡萄糖测定的电化学传感器的体外标定,可借助于对无底物溶液(基极电流i_b)和线性范围内不同底物浓度的溶液(底物相关电流i_s)的常规逐点测定实现。然而,传感器植入后,,有关ib的信息就无法获知。同样,标定操作也只有待变化测量腔隙内的底物浓度后,方可进行。为了说明所假定的ib值是     

同步培养基中无叶绿素ZC眼虫突变的NAD~ 激酶和NADP~ 磷酸酶活性的节律

为研究辅酶Ⅰ(NAD~ )激酶和辅酶Ⅱ(NADP~ )磷酸酶的活性,我们首先确定了温度为16℃,在全黑暗中自由运转的Z染色体绿叶绿小体突变小眼中同步培养基中的饱和底物浓度和米氏常数。在昼夜不同时间,分析超声波率和离心后的粗细胞提取物上清夜和悬浮颗粒液中底物的浓度,以确定两种酶的活性。     

β-内酰胺酶动力学研究进展

1 β-内酰胺酶底物动力学 class A β-内酰胺酶底物动力学性质上显示出多样性。A型β-内酰胺酶底物动力学参数的变化在头孢菌素中表现得尤为突出,K_(cat)/K_m值对不同的头孢菌素底物变化范围达2～3个数量级,耐对青霉素类底物则变化不大。大多数青霉素(包括苯唑西林和氯唑西林)都是A型β-内酰胺酶的良好底物,侧链上含氨基的氨苄西林和含羧基的羧苄西林都能象苄青霉素一样被A型β-内酰胺酶高效水解,尽管前者的K_(cat)值稍低,但K_(cat)/K_m值却相差无几,说明侧链取代对动力学性质无太大影响。而侧链上具有空间障碍基因的物质(如苯唑西林,甲氧西林)也是A型β-内酰胺酶的良好底物。但底物整个酰基侧链对反应动力学就有不同的影响结果,对青霉素而言,酰基     

胰岛素受体底物家族中的两个新成员

胰岛素受体底物蛋白参与多种激素、细胞因子的信号转导,可联系下游台SH2结构域的蛋白。它是一种极为重要的信号传递中介分子。胰岛素受体底物家族有4个成员。本文从基因结构、蛋白质结构介绍新发现的两个成员(IRS-3、IRS-4)的一些基本特征。     

磷酸脂酶C-γ_1(PLC-γ_1)在细胞信息传递中的作用

部分细胞因子,如表皮生长因子(EGF)、血小板生长因子(PDGF)等信息传递使者到达细胞膜时,其受体是一种酪氨酸激酶.该受体酶有3个结构域(domain),即膜外、跨膜和胞质结构域.细胞因子与膜外结构域结合后,受体激酶本身的酪氨酸残基自动磷酸化,并被激活.受体激酶的激活又能激活细胞质内含SH_2结构域的蛋白质(酶),使其产生第二信使调整细胞的新陈代谢,PLC-γ_1因含有SH_2结构域,因此,它是受体激酶的底物,当被激活时,产生两种第二信使,即二酞基甘油(DAG)和三磷酸肌醇(IP_3).DAG形成后,能激活蛋白激酶C(PKC).PKC是一个酶家族,参与许多细胞活动的调控,特别是细胞分化和增殖的调控.另有人认为PCK还可以活化Na~+-H~+交换机构而导致细胞内pH升高.IP_3形成后则引起Ca~(2+)从钙库中释放(主要来自内质网),Ca~(2+)的释放又可以激活钙调蛋白(CAM)系统,导致底物蛋白质磷酸化,细胞产生相应的生理效应.     

高雪氏病:应用非标记的可靠的神经鞘脂底物N-软脂酰基二氢葡萄糖脑苷脂进行无症状的高雪氏病基因携带者的检出

高雪氏病是一种与葡萄糖脑苷脂β-葡萄糖酶活性缺乏有关的常染色体隐性神经鞘脂类代谢性疾患,在世界各民族中都存在,但此病的携带者频率在Axhkenazi的犹太人中相当高(估计为:1∶12～1∶25)。为了建立一种准确而方便的生化检测方法,将无症状的高雪氏病基因携带者从正常人群中检测出来,本文作者应用可靠的非标记神经鞘脂类底物N-软脂酰基二氢葡萄糖脑苷脂和人     

从鸡蛋黄中提取卵磷脂

卵磷脂(Lecithin)是卵磷脂—胆固醇—酰基转移酶(LCAT)的底物之一,也是制备人工脂质体(Liposome)的材料,最近有人用其治疗动脉粥样硬化、糖尿病和肾脏病。国外合成的二肉桂酸磷脂酰胆碱(DMPC)价格昂贵,国产的卵磷脂纯度不够。鸡蛋黄中含有大量的卵磷脂,因此我们选用新鲜鸡蛋为原料,参考Banghan等人的方法,获得了纯的卵磷脂。 主要试剂:中性氧化铝(100～200目)、     

胰岛素受体底物与信号转导

胰岛素受体底物 (IRS)家族包括 4种异构体蛋白 ,是多种信号转导受体的共同底物 ,其中通过与胰岛素受体 (IR)及胰岛素样生长因子 1(IGF 1)受体结合而介导的信号转导系统与糖代谢及生长发育 ,胰腺功能密切相关。IRS异构体具有组织特异性及不同亚细胞定位 ,共同介导胰岛素和IGF 1信号转导网络 ,发挥胰岛素和IGF 1的多向性细胞信号转导效应。蛋白激酶C等因素通过抑制IRS的酪氨酸磷酸化影响胰岛素和IGF 1的信号转导效应并与糖尿病的发生有关     

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶的研究 Ⅱ.酶学性质与生物毒性

浙江产眼镜蛇蛇毒胆碱酯酶具有乙酰胆碱酯酶的特征,有以下几点事实:1.乙酰胆碱酯是酶的最适底物;2.过量底物抑制酶活性;3.BW_(62)C_(47)、BW_(284)C_(51)是典型的真性胆碱酯酶抑制剂,对蛇毒胆碱酯酶也同样具有抑制作用。     

神经节苷脂沉积症的生物化学与遗传学

神经节苷脂的生物合成,由一类与膜结合的转移酶所催化。分解代谢中(见图1),神经节苷脂从细胞膜进入溶酶体的转运过程尚不了解。神经节苷脂在溶酶体酸性水解酶的作用下,从分子的亲水端开始逐步降解。这种水解酶的隐性遗传性缺陷,使底物降解过程受阻,因而使未降解的物质沉积。许多神经鞘脂类水解酶是键特异性水解酶,只降解几种有关的底物(寡糖、糖蛋白和脂类)。若缺乏这种水解酶,便导致底物在溶酶体内