小肠隐窝细胞株(IEC-6):中药生物活性成分筛选的药理模型

目的利用小肠隐窝细胞株(IEC-6)作为模型,筛选党参的生物活性成分.方法IEC-6 细胞以1×104的密度接种于96孔培养板,加入200μL含有50ml/L 超滤胎牛血清、10mg/L胰岛素及 50mg/L庆大霉素的DMEM培养液,24小时后,分别用胃泌素、党参提取物A、B、C、D治疗,对照组用D-PBS.细胞培养24小时后,用MTT法观察细胞增殖,细胞培养12小时后,分别用RT-PCR方法、放射技术和高效液相色谱方法检测细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC) mRNA水平、ODC活性及细胞内腐胺含量.结果与对照组比较,胃泌素明显促进IEC-6细胞增殖,明显增加ODC mRNA 水平、ODC活性及细胞内腐胺含量.党参提取物 A、B、C、D以剂量依赖方式作用于IEC-6细胞,提取物A 250mg/L～2000mg/L、提取物 B 125mg/L～2000mg/L、提取物 C 2000mg/L及提取物D 250mg/L～2000mg/L明显促进细胞增殖,而提取物C 30mg/L和125mg/L抑制细胞增殖.结论 通过检测中药对细胞增殖的调节作用,IEC-6 细胞可以作为黏膜损伤修复药物筛选的药理模型,方法简单,结果准确.     

中药清热降浊方对IEC-6细胞株增殖与凋亡的影响

目的:观察清热降浊方对IEC-6细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT比色法计算清热降浊方干预后的IEC-6细胞存活率,观察清热降浊方对IEC-6细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC和PI双标流式术检测清热降浊方对IEC-6细胞凋亡的影响。结果:清热降浊方干预24 h后,与正常胎牛血清培养相比,低浓度中药复方组细胞存活率显著增加(P0.01),其中2.5%浓度含药血清组细胞存活率最高(162.42%),故选用2.5%浓度含药血清作为工作浓度。通过流式细胞术检测细胞凋亡率的结果显示,清热降浊方干预24 h后,不同葡萄糖状态下细胞的凋亡率均明显下降。相比高糖(正常培养,加胎牛血清)组,高糖加含药血清组细胞凋亡率下降了7.92%;相比低糖(加胎牛血清)组,低糖加含药血清组细胞凋亡率下降了10.92%。结论:清热降浊方能够促进IEC-6细胞增殖,减少细胞自然凋亡。     

黄连素对IEC-6细胞株增殖与凋亡的影响

目的：观察黄连素对IEC-6细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用WST-1法观察黄连素干预后的IEC-6细胞存活率,观察黄连素对IEC-6细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC和PI双标流式术检测黄连素对IEC-6细胞凋亡的影响。结果：利用WST-1法检测后得到的OD值,计算IEC-6细胞存活率,黄连素干预24h后,与正常胎牛血清培养相比,低浓度黄连素组细胞存活率显著增加,其中1μg/mL黄连素组细胞存活率最高（220.17%）,故选用1μg/mL黄连素浓度作为工作浓度。通过流式细胞术检测细胞凋亡率的结果显示,黄连素干预24h后,不同葡萄糖状态下细胞的凋亡率均明显下降。相比高糖（正常培养,加胎牛血清）组,高糖加黄连素组细胞凋亡率下降了6.23%;相比低糖（加胎牛血清）组,低糖加黄连素组细胞凋亡率下降了8.51%;相比超高糖（加胎牛血清）组,超高糖加黄连素组细胞凋亡率下降了9.3%。结论：黄连素能够促进肠道L细胞系IEC-6细胞株增殖,并减少其凋亡。     

IEC-6细胞迁移药理实验模型建立的研究(英文)

建立适合肠上皮整复研究的IEC-6细胞迁移药理实验模型,并观察黄芪糖复合物对细胞迁移的影响。方法:设立不同的细胞接种密度、划痕后观察时间、辅助材料Matrigel浓度、血清饥饿处理法、细胞迁移抑制剂DF-MO(二氟甲基鸟氨酸)浓度等以考察模型的建立条件,并在已建立的模型上观察受试药的效果。结果:①细胞宜以4×105/mL接种6孔板;②宜划痕后24 h观察细胞迁移数;③5%Matrigel为适宜浓度;④血清饥饿可造成细胞迁移数明显减少,应使用含血清的培养液。⑤DFMO 2.5~5 mmol/L为抑制细胞迁移适宜浓度。⑥黄芪糖复合物及阳性药精脒能促进细胞迁移。结论:建立了适宜药理实验的IEC-6细胞迁移模型,在此模型上可反映受试药对细胞正常迁移及迁移抑制的药效作用。     

醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究

目的：比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制。方法：以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统（HCS）分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路。结果：与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性（P<0.01）,HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度（P<0.05,P<0.01）,并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度（P<0.05,P<0.05）,降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度（P<0.01,P<0.01,P<0.05）,且呈一定的剂量相关性。结论：醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响

目的:研究四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。方法:以IEC-6细胞为研究对象,采 用MTT比色法,观察四君子汤总多糖时正常及消炎痛作用下该细胞增殖的影响。结果:四君子汤总多糖不同剂量于不同 的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用,当采用消炎痛造成IEC-6细胞生长抑制模型时,四君子汤总多糖可使其 恢复至正常水平。结论:四君子汤总多糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用,它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发 挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

白芍总苷对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6基因表达谱影响的研究

目的：本研究主要观察白芍总苷（TGP）对大鼠小肠上皮细胞基因表达谱的影响，以期进一步了解TGP的作用机制。方法：采用基因芯片技术观察给予TGP前后大鼠小肠上皮细胞株IEC-6基因表达谱的变化情况。结果：在给予TGP后，大鼠IEC-6细胞株共有48条基因表达出现明显差异。其中9条基因表达上调，37条基因表达下调，分别涉及包括细胞分化发育、细胞增殖、粘附等方面的基因。结论：TGP可通过多种途径影响小肠上皮细胞功能。我们的研究为TGP治疗自身免疫性疾病提供了基因水平的依据。     

白术、黄芪、党参促进IEC-6细胞损伤后的快速修复

目的研究白术、黄芪、党参提取物对体外胃肠黏膜上皮细胞损伤的快速修复作用。方法采用Tips划痕法建立小肠上皮(IEC-6)细胞迁移模型,首先考察不同的IEC-6细胞接种密度、划痕后修复时间、不同的血清浓度以建立稳定的迁移模型;接着采用表皮生长因子(EGF)及其阻断剂AG1478对迁移模型进行评价;最后考察三味中药对IEC-6细胞迁移的作用效果。结果 (1)细胞的最佳接种密度为1×105个/m L;(2)宜在划痕后8 h计算细胞迁移率;(3)1%血清浓度为最适宜浓度;(4)EGF明显促进了IEC-6细胞迁移,AG1478明显抑制了细胞迁移;(5)白术、黄芪、党参提取物均可促进IEC-6细胞迁移。结论益气健脾中药可促进胃肠黏膜损伤后的快速修复过程,其机制是否与影响EGFR信号通路有关有待进一步研究。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的:观察四君子汤总多糖(PPS)在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法:采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型,观察四君子汤PPS在造模后0 h8、h及24 h对细胞迁移面积的影响。结果:四君子汤在细胞迁移的8 h及24 h,对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100~400μg/ml范围内。结论:四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复,其机制与促进细胞迁移有关。     

4种中药提取物对大鼠小肠上皮细胞IEC-6增殖及其葡萄糖吸收的影响

目的 利用大鼠小肠上皮细胞系(IEC-6),研究单味中药提取物对小肠上皮细胞增殖和葡萄糖吸收转运功能的调控作用.方法 藿香、苍术、黄柏和石膏等4种中药被定向提取,MTT细胞增殖试验筛选提取物的适宜作用质量浓度,测定各处理组细胞的葡萄糖吸收率和Na+,K+-SATP酶活性,同时采用荧光定量PCR技术分析细胞中钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)、葡萄糖转运载体2(GLUT2)和Na+,K+-ATP酶的mRNA表达量.结果 各中药提取物对大鼠小肠上皮细胞增殖的影响与其作用质量浓度有关.50μg/mL苍术挥发油和10μg/mL黄柏生物碱可提高IEC-6细胞葡萄糖的吸收功能,并显著上调了SGLT1和Na+,K+-ATP酶mRNA表达量;50μg/mL藿香挥发油促进了细胞的葡萄糖吸收,但仅对GLUT2的基因表达有上调效应(P<0.05);而50μg/mL石膏水提物对细胞葡萄糖的吸收无促进作用(P>0.05).结论 苍术挥发油、藿香挥发油和黄柏生物碱对细胞增殖和葡萄精吸收均有促进作用,但其影响机制并不完全一样.     

甘草黄酮提取物对小肠上皮细胞IEC-6迁移及多胺的影响

目的 观察甘草黄酮提取物对小肠隐窝上皮细胞IEC-6迁移及迁移过程细胞内多胺量的影响。方法 划痕法制备细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）存在情况下,甘草黄酮提取物对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测IEC-6细胞在正常及DFMO存在条件下,给予甘草黄酮提取物12、24 h后细胞内多胺（精脒）的量。结果 甘草黄酮提取物可逆转DFMO或4-AP所致IEC-6细胞迁移抑制;其给药12、24 h后可提高细胞内精脒的量,并逆转DFMO对多胺合成的抑制。结论 甘草黄酮提取物促进细胞迁移的作用与影响细胞内多胺调控信号通路有关。     

生物方剂分析药理:阐明方剂吸收生物活性成分的研究策略

综述了生物方剂分析药理研究策略提出的背景、完善过程和内涵。该策略是一种能够阐明方剂体内吸收生物活性成分的思路与方法,是一种吸收成分与母方疗效比较的研究模式,其主要的3个要点是:方剂成分在血中的测量、吸收成分与母方疗效的比较、吸收成分剂量等于母方中的量。以冠心Ⅱ号为实例,用该策略阐明其体内药效物质。并论述了该策略的研究意义。     

中药药理实验教学中问题式教学(PBL)的运用

PBL是美国神经学教授Barrows于1969年提出的"以问题为基础的学习(PBL)教学模式[1]。即以学生为中心,教师为引导的讨论式教学方法[2]。通过一个PBL课程,学生自主组织学习,分析、解决课程中的问题,从而加深对知识的认知,锻炼学生解决问题的能力。现在大学教育普遍存在学生学习被动,缺乏探究性学习习惯,分析解决问题能力差;教师不注重培养学生的自主学习能力,解决问题能力。为此,我们依托中药药理实验的教     

基于转基因秀丽隐杆线虫模型的抗阿尔茨海默病中药成分筛选思路

转基因秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是近20年发展起来的优良衰老模型,被应用于包括阿尔茨海默病在内的神经退行性病变的药物筛选与基因组学研究。秀丽隐杆线虫模型具有操作简单、筛选周期短、能提供多个靶点等特点,分析了利用其进行抗阿尔茨海默病中药成分筛选的可行性与优势,以期为药学工作者提供新思路。     

Ⅳ型胶原酶模型的建立及其在中药活性成分筛选中的应用

目的建立Ⅳ型胶原酶筛选模型,并运用此模型对中药活性成分进行评价。方法利用Ⅳ型胶原酶特异性水解明胶释放的末端氨基与2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)发生显色,吸光度值可以衡量Ⅳ型胶原酶含量,优化Ⅳ型胶原酶浓度、琥珀酰凝胶浓度、显色剂用量及时间参数。结果确定了Ⅳ型胶原酶筛选模型的条件:5.0×10^-5 g/L酶溶液、20 g/L琥珀酰凝胶溶液、60μl 0.05%TNBS、显色30 min,阳性药盐酸四环素在1.0 g/L下对该酶的抑制率是19.39%,并呈现一定的量效关系,表明成功建立该筛选模型。应用该模型筛选发现,阿魏酸和川芎嗪具有明显的抑制Ⅳ型胶原酶活性,而水杨酸和小檗碱则具有促进作用。结论Ⅳ型胶原酶的筛选模型成功建立并应用到中药活性成分筛选中,为快速评价中药活性成分及其作用机制提供了有益参考。     

在中西医结合思想指导下中药药理研究的某些进展(一)

在中西医理论与实践相结合的基础上,近年来中药药理作用的研究取得了大幅度的进展。本文拟就其中某些较突出的进展加以综述,以说明根据中医理论进行中药研究是具有指导意义的,并带有方向性的研究途径。中药药理研究之所以获得显著而又迅速的进展,有赖于多方面的客观因素的相互促进作用,探讨这个问题无疑是比较复杂的。我们以为中西医结合的     

在中西医结合思想指导下中药药理研究的某些进展(二)

三、补益药的药理研究进展中医对补益药的含义和应用范围之广及其在中医临床的重要意义均可以从"补益"二字去理解。凡能补益正气,扶持虚弱,治疗各种因病引起的虚衰症的药物都称为补益药。可用于病后虚弱之体,促进机体早日恢复健康;又可用于病中,所谓"邪盛正虚",配合祛邪药以战胜疾病,促进疾病治愈。补益药的古方与     

中药新药新制剂的质量药理和临床研究方法--规范研制现代中药新药新制剂的创新设计(2)

目的:探索现代中药新药新制剂的质量标准、药理实验和临床观察实验方法。方法:根据《药品非临床研究质量管理规范》(GLP)、《药品临床试验管理规范》(GCP)、《中药新药临床研究指导原则》、《中药命名原则要求》和《医疗机构制剂注册管理办法》(试行)的要求,对中药新药新制剂质量标准、药理实验和临床观察实验方法进行了系统研究。结果:找出了规范制定制剂质量标准、规范开展药理实验和临床观察的实验方法。结论:对提高我国药厂和医院制剂室开发新药新制剂的研制水平具有重要的参考作用。     

薄荷主要成分(薄荷油)诱导阳虚模型的实验研究

目的:建立甲状腺功能低下阳虚模型,为病理研究、药物研发奠定基础。方法:将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组,每天上午定时灌胃薄荷油1.25mL/kg,持续灌胃21d;分别在第14、21天检测血清甲状腺功能、物质能量代谢、肝肾功能等相关指标。结果:薄荷油诱导的阳虚模型组,与正常组相比,在第14天、21天出现三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)显著性降低(P0.05,P0.01);葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、白蛋白(ALB)、钠-钾-腺嘌呤核苷三磷酸酶(Na+-K+-ATPase)与正常组比显著性降低(P0.05,P0.01);而其血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)与正常组比较均没有统计学差异。结论:给大鼠灌胃薄荷油1.25mL/kg,在第14-21天可以出现较理想的甲状腺功能低下的阳虚动物模型,且未引起肝肾毒性反应。