同步检测抗—HCV和HCV RNA提高HCV感染的检出率

探讨同步检测抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ可不提高ＨＣＶ感染的检出率。方法 对２７５例各类肝病患者用第二代试剂盒和逆转录聚合酶链反应分别检测血清抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 抗－ＨＣＶ阳性率为２８．４５％，ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为３３．５３％。全组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ总检出率为３２．７３％。     

HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析

目的 对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性.方法 采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR 检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核.结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性 25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%).结论 丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异.     

HCV核心蛋白在酵母双杂交系统中的表达及自激活作用检测

目的: 检测用含丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的cDNA片段构建的酵母双杂交诱饵载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用. 方法: PCR扩增含HCV核心蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中. 将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用. 结果: 成功获得含HCV核心蛋白的cDNA片段,HCV核心蛋白对酵母菌AH109无毒性,且对报告基因无激活作用. 结论: 利用酵母双杂交Gal4系统3研究与HCV核心蛋白相互作用的蛋白,证实了HCV核心蛋白无自激活功能.     

丙型肝炎病毒核心抗原检测在临床诊断HCV感染的价值

目的:评估丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断试剂在临床运用对HCV感染的诊断价值?方法:对临床214例确认HCV感染者?60例健康体检者?40例非HCV感染的其他肝炎患者同时检测HCVcAg?抗HCV和HCV RNA,并对78例HIV感染者进行HCV感染筛查,分析 HCVcAg试剂的敏感性?特异性?结果:214 例确认丙肝患者HCVcAg检测162例(75.7%)阳性,且HCV RNA水平越高,HCVcAg检出率也越高?当HCV RNA载量>106/ml时,HCVcAg与HCV RNA检测的符合率达98.7%;60例健康对照和40例非HCV感染的各种肝炎HCVcAg检测均为阴性,显示了HCVcAg对诊断HCV感染得高度特异性?对78份HIV感染者样本进行HCV RNA测定,有16例阳性,以HCVcAg法测定有15例阳性,以抗HCV法测定仅有9例阳性?结论:HCVcAg可作为HCV感染诊断的血清病毒标志物,也可用于使用免疫抑制剂,抗HCV产生受到抑制的患者,以及在一些不具备开展PCR的医院实验室作为HCV RNA检测的替代试验?     

HCV抗体3种检测方法的比较

应用化学发光酶免分析法(CLEIA)、粒子凝集法(PA)和快速金标法分别检测50例血清标本的HCV抗体，对3种方法进行比较分析。化学发光法的阳性率最高(78％)，敏感性高，特异性好；粒子凝集法和金标法阳性率(76％和60％)均低于化学发光法，虽然阳性率较低，但以化学发光法为基准无假阳性。化学发光法可作为判定HCV抗体是否阳性的标准。粒子凝集法和金标法操作简便，并且粒子凝集法可测定抗体效价。金标法不需要仪器和配制试剂，15min即可判定结果，可用于急诊检查。     

HCV-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的价值分析

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的价值.方法 选取2018年1月至2019年6月就诊于本院的140例疑似慢性丙型肝炎行抗HCV抗体检测阳性患者为研究对象,抽取患者3 mL空腹静脉血,使用荧光定量检测法HCV RNA,酶联免疫吸附法(ELISA)测定HCV-核心抗原,统计...     

HCV核心蛋白氨基酸替换与干扰素应答的关系

目的 研究慢性丙型肝炎病毒核心蛋白氨基酸替换与干扰素疗效的关系.方法 纳入HCV RNA阳性的慢性丙型肝炎患者108例,依据干扰素治疗结局分为持续病毒学应答组(76例)、非持续病毒学应答组(32例).逆转录巢式PCR (RT-nested-PCR)扩增核心蛋白区,分析其氨基酸替换模式及其与干扰素疗效的关系.结果 高频替换(频率＞10％)发生于Core蛋白第70、75、91、106、110、147、187位氨基酸残基,各位点之间存在广泛的连锁替换;两组间Core蛋白第70位的Q/non-Q替换(P=0.004)、91位的M/non-M替换(P=0.039)、110位的T/non-T替换(P =0.025)具有显著差异;70Q、91M、110T替换更倾向于发生不应答治疗结局,OR值及95％ CI分别为0.288 (0.120～0.693)、0.413 (0.177 ～0.966)、0.346 (0.133 ～0.896);同时携有上述2个以上的“抵抗型”替换者,治疗4周时HCV RNA水平下降更缓慢(P=0.001).结论 HCV Core区第70、91、110三个位点可作为Core区预测干扰素疗效的优选氨基酸位点.     

丙型肝炎病毒核心蛋白抑制肝癌细胞P16、P27的表达

目的：探讨HCV核心蛋白对肝瘤细胞P16、P27表达的影响。方法：将HCV核心基因cDNA插入真核表达载体PBK－CMV的Hind　Ⅲ和BamH I位点间，构建重组质粒PBK－HCVc。再将重组质粒PBK－HCVc和空载体分别导入肝癌细胞株HepG2中，G418筛选，RT－PCR、蛋白印迹鉴定HCV核心蛋白表达。免疫组化，蛋白印迹检测P16、P27蛋白表达；RT－PCR检测P16、P27mRNA。结果：重组质粒PBK－HCVc在HepG2细胞中有稳定表达；表达HCV核心蛋白的细胞HepG2-C的P16、P27在蛋白水平和mRNA水平较转染空载体的细胞HepG2-CMV明显下降。结论：HCV核心蛋白能抑制P16、P27表达，可能与肝细胞的癌变有关。     

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒的构建、原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

目的构建土拨鼠肝炎病毒核心蛋白质粒并进行原核表达、抗体制备。方法应用基因工程技术将编码截短型土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHcAg1～149aa）的基因片段装入原核表达载体pQE60上,在JM109菌内进行诱导表达,使用切胶回收及Ni-NTA柱两种方法纯化目的蛋白。将纯化蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附实验、免疫组织化学及Western blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了含截短型土拨鼠肝炎病毒核心区基因的质粒并获得表达,经纯化得到了分子量约为16.5kD的重组核心蛋白,免疫家兔获得了高效价的特异性多克隆抗体,而且与HBcAg有交叉反应。结论获得的重组截短型土拨鼠肝炎病毒核心抗原（1～149aa）纯度高,免疫原性强。获得的兔抗-WHc效价高,特异性好,与HBcAg有交叉反应。     

HCVC区与HBc融合蛋白在大肠杆菌中表达及鉴定

目的 HCV C119与HBc融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定。方法 PCR扩增HCV C1-119编码序列并取代HBc脊区基因，杂合HBc基因定向克隆至pET28b Nhe Ⅰ／Xho Ⅰ位点，经双酶切及核酸序列测定筛选、鉴定阳性克隆。工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后，10％SDS-PAGE电泳及Western blot检测、鉴定目的蛋白。结果 重组子经Nhe Ⅰ／Xho Ⅰ双酶切获得约880bp目的基因片段，DNA序列测定证实HCV C119基因正确插入并取代HBc脊区基因，杂合基因与HBV adr亚型及HCV日本株相应序列同源性超过97％，工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后表达约33kDa目的蛋白，并与HCV血清呈阳性反应。结论 正确克隆、表达了HCV C119与HBc融合蛋白pBCc。     

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D1的调控作用

[目的]探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)是否调控肝癌细胞中stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D 1的表达,参与肝癌细胞的恶性生物学行为.[方法]将含HCVc基因的真核表达质粒pEGFP-N3-HCVc瞬时转染人肝癌细胞HepG2使HCVc过表达,用siRNA-HCVc敲除HepG2细胞中HCVc的表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测HCVc、总stat3(stat3)、磷酸化stat3(p-stat3)及cyclinD1蛋白的表达;流式细胞术及MTT法检测细胞周期变化及细胞增殖情况.[结果]Western blot结果显示,通过瞬时转染而过表达HCVc的HepG2细胞中,HCVc、p-stat3及cyclinD1的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组;siRNA-HCVc敲除HCVc表达后,HCVc、p-stat3和cyclin D1蛋白的表达下调;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(JAK2特异性拮抗剂)处理可下调过表达HCVc的HepG2细胞中p-stat3和cyclin D1蛋白的表达.流式细胞术显示过表达HCVc可促进细胞向G2/M期进展.MTT法结果显示过表达HCVc使HepG2细胞增殖能力增加.[结论]HCVc可活化HepG2细胞中stat3通路,调控细胞周期蛋白cyclinD1的表达,促进细胞周期进展及细胞增殖,可能与肝癌的发展有关.     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表达及鉴定

 【目的】构建丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白E2基因的重组原核表达质粒，并获得E2蛋白的高效表达。【方法】通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCVE2区基因595bp，PCR产物分别经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体PET22b（＋）上，转化大肠杆菌DH5α菌株，获得阳性重组质粒PETB，阳性质粒转化BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE和Westemblot鉴定。【结果】成功地克隆了HCVE2区基因，构建了其原核表达质粒，并在BL21（DE3）菌中表达HCVE2重组蛋白，Western blot显示表达蛋白具有抗原性。【结论】HCVE2重组蛋白的表达和鉴定为进一步了解HCV糖蛋白E2的功能及其与CD81二者的相互关系打下基础。     

丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的原核表达及鉴定

【目的】构建丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白E2基因的重组原核表达质粒，并获得E2蛋白的高效表达。【方法】通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCVE2区基因595bp，PCR产物分别经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体PET22b（＋）上，转化大肠杆菌DH5α菌株，获得阳性重组质粒PETB，阳性质粒转化BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE和Westemblot鉴定。【结果】成功地克隆了HCVE2区基因，构建了其原核表达质粒，并在BL21（DE3）菌中表达HCVE2重组蛋白，Western blot显示表达蛋白具有抗原性。【结论】HCVE2重组蛋白的表达和鉴定为进一步了解HCV糖蛋白E2的功能及其与CD81二者的相互关系打下基础。     

HCV核心基因转染对QBC939细胞凋亡及细胞周期的影响

[目的]研究丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)对肝门部胆管癌细胞(QBC939)细胞凋亡及细胞周期的影响.[方法]将包含HCV-C基因的真核表达质粒pcDNA HCV-C和空载体,利用脂质体介导将其转染QBC939,经G418筛选获得稳定转染HCV-C的QBC939细胞(QBC939 HCV-C ),RT-PCR和免疫荧光法检测HCV-C蛋白表达,MTT法检测QBC939 HCV-C 细胞、空白质粒转染QBC939(QBC939pcDNA)细胞和未转染QBC939细胞生长增生率;流式细胞术(FACS)检测3组细胞凋亡率和细胞周期,以及QBC939 HCV-C 细胞经Fas抗体诱导凋亡后的细胞周期变化.[结果]①QBC939 HCV-C 细胞增殖率显著高于空白质粒转染QBC939和未转染QBC939细胞增殖率;②细胞未经Fas抗体诱导凋亡时,QBC939 HCV-C 细胞S期(20.1%±1.8%)高于未转染QBC939细胞S期(14.2%±3.6%),QBC939 HCV-C 细胞凋亡率(5.0%±0.7%)低于无HCV-C转染QBC939细胞凋亡率(9.2%±0.7%);③QBC939 HCV-C 细胞经Fas抗体诱导凋亡时,细胞S期低于未经诱导凋亡细胞S期.[结论]HCV-C蛋白具有抑制QBC939细胞凋亡和促进细胞增殖作用.     

维持性血液透析患者的丙型病毒性肝炎感染率

目的　评价血液透析(血透)患者丙型肝炎病毒(HCV)感染状况、HCV阳转率及危险因素。方法　采用第2代酶链免疫吸附试验(ELISA2,和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测62例血透患者血清抗HCV和HCVRNA,采用ELISA2随访1995年6月～1996年12月间199例血透患者HCV阳转情况。结果　62例患者中,抗HCVIgM阳性27例(43.6%),抗HCVIgG阳性29例(46.8%),HCVRNA阳性34例(54.8%),3项至少1项阳性37例(59.7%)。HCV阳性组与阴性组相比,两组在性别、年龄、肾功能、HBV标志、EPO应用、CAPD史无明显差异,而在平均透时间、输血史、ALT异常、肾移植史方面有显著性差异。1995年6月抗HCV阳性率为58.7%,每隔半年的阳性率分别为53.7%、54.8%和50.0%。在18个月随访期间,31例阳转;156例随访1～6月,阳转14例(8.9%),67例随访7～12月,15例(22.4%)阳转,6例随访13～18月,2例(33.3%)阳转;2例阳转并转为肝硬化。结论　血透患者中HCV感染严重,输血为血透患者感染HCV的主要途径,但也存在医源性传播的可能。     

丙型肝炎病毒核心抗原在HBV/HCV合并感染者血清中的检测状况及影响因素分析

 【目的】 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)在乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染者血清中的检出状况,并分析其影响因素。【方法】检测88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染患者血清HCVcAg和HCV RNA,对后者血清进行HBV DNA、HBeAg检测,分析HCVcAg检出率与HBeAg、HBV DNA定量检测关系。【结果】 88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染者血清HCVcAg的检出率分别是72.7%(64/88)和38.7%(24/62),χ²= 17.358,P < 0.001,HCV RNA检出率分别是81.8%(72/88)和53.2%(33/62),χ² = 20.11,P < 0.001;62例HBV/HCV合并感染者血清中,HBeAg阳性和HBeAg阴性感染者HCVcAg检出率分别为28.6%(12/42)和60%(12/20),χ² = 5.641,P = 0.011,HCV RNA阳性率分别为42.9%(18/42)和80%(16/20), χ²= 15.452,P < 0.001;HBV DNA阳性和阴性时HCVcAg检出率分别为39.1%(18/46)和37.5%(6/16),?字2 = 0.013,P=0.908;与单纯HCV感染者血清HCVcAg检出率72.7%(64/88),相比较HBeAg阴性合并感染者为60%(12/20),χ²= 1.266,P = 0.261,HBV DNA阴性合并感染者37.5%(6/16),χ²=7.635,P < 0.01。【结论】 HBV/HCV合并感染时HCVcAg检出率较低,可能是由于HBeAg抑制HCV的复制,从而减少HCVcAg的表达所致。     

丙肝病毒核心抗原的检测在诊断丙肝中的意义

目的：通过分别检测丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和定量检测HCV-RNA,探究丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的意义。方法对36例丙肝抗体阳性患者和120例丙肝抗体阴性患者同时检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。丙肝抗体检测采用间接ELISA法,丙肝核心抗原检测采用双抗体夹心ELISA法,丙肝HCV-RNA检测采用荧光PCR法定量检测。结果36例丙肝抗体阳性组中,HCV-cAg阳性28例,HCV-RNA阳性25例。120例丙肝抗体阴性的门诊肝炎患者中HCV-cAg阳性有2例,HCV-RNA阳性有1例。结论 HCV-cAg检测可以缩短HCV抗体检测窗口期,特异性高,操作简便,可将二者联合起来,提高丙型肝炎病毒的检出率及准确度。