窦房结区甲醛湿敷法建立犬窦房结损伤模型

目的 探讨甲醛湿敷法建立犬窦房结损伤模犁的可行性和电生理特征变化.方法 20只实验犬按随机数字表法随机分为湿敷后2 h、4 h、1周及4周组(n=5).用20%甲醛湿敷窦房结区建立窦房结损伤模型.各组于湿敷前、湿敷后各自相对应时间点行电生理功能检测,同步记录体表心电图(electrocardiogram,ECG).结果 20只实验犬甲醛湿敷时间为3～12(6.2±2.6)min.5只犬甲醛湿敷后窦性心率(heart rate,HR)显著减慢[(140±11)、(89±6)次/min,P<0.01],无心律失常;4只犬除窦性心率明显减慢外出现窦性心律不齐、窦性停搏及频发房性早搏,但很快恢复为规整的窦性节律;11只犬予甲醛湿敷后P波消失,呈交界性逸搏心律,其中4只于湿敷后24 h行ECG监测时转为窦性心律,但HR仍显著低于湿敷前.湿敷后2 h、24 h、1周及4周组的HR均较甲醛湿敷前显著减慢(P<0.01);各组湿敷后的窦房结恢复时间(sinus node recovery time,SNRT)及校正的窦房结恢复时间(corrected sinus node recovery time,CSNRT)则均较湿敷前显著延长(P<0.01,P<0.05).结论 采用甲醛湿敷法可以成功建立犬窦房结损伤模型,其电生理改变与临床病态窦房结综合征表现相似.     

益阳活血方对损伤兔窦房结组织保护的形态学研究

目的探讨中药复方益阳活血方对甲醛引起的兔窦房结组织损伤的保护作用。方法取60只大耳白兔,随机分为正常组,模型组,阿托品组,益阳活血方高、中、低剂量组,每组10只,除正常组不造模外,余各组采用甲醛加压注射渗透法建立兔窦房结组织损伤模型,模型稳定后开始给药,疗程(7 d)结束后取材,光镜、电镜下观察窦房结组织病理形态学变化。结果除正常组外,各实验组均有不同程度的窦房结细胞损伤。光镜下主要表现为细胞肿胀,炎性细胞浸润以及细胞坏死等病变,电镜下主要表现为线粒体肿胀,嵴断裂、减少,核膜不规则,核仁裂解,染色质边集等。对比各治疗组窦房结组织病理形态学改变可以看出,益阳活血方高剂量组优于中、低剂量组及阿托品组。结论益阳活血方对窦房结组织病理性损伤有明显的保护作用,可能是治疗病态窦房结综合征的机制之一。     

爆炸致兔急性肺损伤时细胞凋亡作用机制的研究

目的:探讨细胞凋亡在爆炸致兔急性肺损伤(ALI)中的作用机制。方法:选取兔40只,随机分为空白对照组10只;实验组30只,空气爆炸损伤胸部,制作ALI模型,分别于爆炸损伤4、12、24 h后采样(每时间点各10只),测定肺干/湿重比、动脉血氧分压,原位末端标记检测肺组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2含量。选取肺组织,显微镜观察光镜下肺组织病理形态。结果:光镜下,实验组4 h起可见肺间质、肺泡明显水肿,肺泡腔大量红细胞、炎性细胞及浆液性渗出,肺间质增厚。与对照组比较,各实验组肺干/湿重比均明显升高(P<0.01),动脉血氧分压均明显降低(P<0.01)。凋亡指数均明显升高(P<0.01),Caspase-3与Bax/Bcl-2比值均较对照组升高(P<0.05~P<0.01)。结论:细胞凋亡在兔ALI的发生、发展过程中起重要作用,参与了肺组织损伤,促进ALI病情进展。     

两个时间段的急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡

摘要：目的：探讨两个时间段的急性酒精性肝损伤与肝细胞凋亡。方法：将40只大鼠随机分成对照组10只和实验组30只。实验组每只大鼠按体重15g/kg一次性灌胃47.5%酒精。对照组每只大鼠按体重15g/kg一次性灌胃生理盐水。灌胃后分8h和48h分批随机取肝组织用光镜、TUNEL、电镜检测。结果：实验组8h时间段大鼠肝组织水变性、细胞凋亡病变率均为100%,无明显脂肪变性,无片状坏死;48h时间段肝组织水变性、脂肪变性、片状坏死、细胞凋亡病变率均为100%。实验组8h时间段凋亡肝细胞核数占肝细胞核总数比是13.9%,48h时间段是43.2%,P ＜0.01。对照组大鼠未见异常病变。结论：急性酒精性肝损伤48h时间段较8h时间段明显加重。     

Mg2+对兔脑继发性脑损伤中细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨Mg2+对兔脑继发性脑损伤中细胞凋亡影响的实验情况。方法选择新西兰大白兔50只,随机分为实验组、对照组和假手术组,实验组及对照组各20只,假手术组10只;实验组及对照组动物在脑外伤后早期静脉使用硫酸镁后,通过对挫伤灶周围脑组织的病理学检查、透视电镜检查及细胞调亡的检测,分析镁离子对脑继发性损害中细胞调亡的影响。结果对照组脑损伤6 h后,组织病理学显示损伤病灶出血、组织间隙增宽、周围细胞水肿,脑损伤后48 h最为显著,损伤病灶内出现胞膜结构完整、细胞核固缩深染的神经细胞,即神经细胞凋亡,凋亡细胞相对密集;实验组神经细胞变性坏死较少、脑水肿较轻,两侧病变差异不显著;正常脑组织内TUNEL阳性细胞表达较少,损伤6 h的标本出现TUNEL散在少量阳性细胞,两组标本中的TUNEL阳性细胞数量随着损伤时间的延长而逐渐增加,峰期为24 h,实验组各时段的TUNEL阳性细胞显著低于同时段的对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论镁离子可降低兔脑继发性脑损伤中神经细胞凋亡数量,对脑损伤神经细胞起到保护作用。     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响.方法:SD大鼠60只,体质量290～310 g,随机分为假手术组、异丙酚组和对照组,每组20只.用改良Longa法制成鼠脑缺血/再灌注模型(缺血2 h,再灌2 h),光镜下观察细胞形态学变化,TUNEL法观察细胞凋亡变化.结果:光镜检查异丙酚组细胞肿胀坏死明显减轻,凋亡细胞及坏死细胞明显减少.再灌2 h后对照组凋亡细胞比率、凋亡细胞阳性率、TUNEL阳性率均较假手术组高(P＜0.01),异丙酚组凋亡细胞阳性率、TUNEL阳性率较对照组减少(P＜0.05).结论:异丙酚能减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,具有抑制神经细胞凋亡坏死的作用.     

右冠状动脉缺血再灌注致窦房结及其周围心房肌细胞的不均一凋亡

目的　观察右冠状动脉缺血再灌注(IR)致兔窦房结及其周围心房肌细胞的凋亡规律。方法　成年家兔2 2只,其中模型对照组10只,IR模型组12只用于在体右冠状动脉根部结扎或放松制作窦房结缺血6 0 min、再灌注6 0 min模型,采用末端标记TU NEL 法检测窦房结中央、窦房结周边及其周围心房肌细胞凋亡率及光、电镜下结构变化。结果　(1) IR组有8只(8/ 12 )窦房结及其周围心房肌均有细胞凋亡现象,其凋亡率(% )分别为11.3±3.7、15 .0±4 .5和2 4 .4±5 .9;(2 )光镜下,IR组窦房结起搏细胞边界不清,胞核固缩,胞浆嗜酸性增强,细胞呈腺样排列;电镜下,心房肌细胞呈明显凋亡征象。结论　IR可诱导窦房结及其周围心房肌细胞呈梯度不均一凋亡,且窦房结中央凋亡率最低。     

慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的影响

目的 探讨慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的损伤变化。方法 将12只10～12周龄的雄性SD大鼠采用抽签法分为对照组和实验组,每组各6只。实验组大鼠每天10点至18点置于间歇性低氧环境中暴露,对照组大鼠不做低氧处理,共4周。饲养时间结束后取大鼠胸主动脉标本行苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining,HE染色）及原位末端转移酶标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL）染色观察细胞病变情况,并计算病变细胞、凋亡细胞在视野中所占比例。结果 HE染色光镜下实验组可见血管内皮细胞肥大,排列不规则,细胞核、胞质着色淡,平滑肌细胞核肿胀;对照组见血管内皮细胞和平滑肌细胞排列规则、细胞核形态及染色正常。TUNEL染色光镜下实验组可见多个凋亡细胞,对照组偶见凋亡细胞。实验组大鼠主动脉组织的细胞病变率及凋亡率均显著高于对照组（P<0.01）。结论 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征所产生的慢性间歇性低氧可损伤大鼠胸主动脉...     

大鼠脊髓损伤早期Survivivn表达规律与细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠脊髓损伤早期不同时间段内脊髓组织中生存素（Survivin）表达变化规律和细胞凋亡的关系.方法：56只Wistar大鼠随机分两组：①假损伤组（对照组,n=8）与②损伤组（实验组,48只）;假损伤组仅打开T10及部分T,、Tn椎板,实验组均采用改良Allens法建立大鼠T10脊髓损伤模型,分别于伤后不同时间点（12h、24h、3d、5d、7d、10d）随机处死8只取材;分别用HE染色观察组织病理变化、免疫组织化学法观察脊髓组织中Survivin表达并对其进行定性定量分析和脱氧核糖末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）测定细胞凋亡指数,并进行相关性分析.结果：对照组大鼠在损伤及周边脊髓灰、白质中偶有Survivin蛋白表达、实验组12h有极少表达、3d时可见较多Survivin蛋白表达,然后开始下降;10d时与对熙组比较仍有统计意义（P＜0.05）.在脊髓损伤后对照组有少量细胞凋亡;而试验组12h就出现大量凋亡细胞,3d达高峰,5d和7d明显减少,10d仍有少量表达;实验组24h、3d、5d、7d、10d细胞凋亡和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：脊髓损伤后Survivin表达呈上升趋势并有一定的规律性,与细胞凋亡成正相关,脊髓损伤后Survivin的表达升高参与了押制神经细胞的凋亡,从而起到减轻脊髓损伤的作用.     

四氧嘧啶制作新西兰大白兔糖尿病心肌病模型方法的研究

目的探讨四氧嘧啶(ALX)制作新西兰大白兔糖尿病心肌病模型的方法.方法选取健康新西兰大白兔30只,随机分为实验组(20只)和对照组(10只).实验组经耳缘静脉注射5%ALX 溶液,24h 后再次注射,注射剂量均为80mg/kg;对照组注射等量的0.9%氯化钠注射液.分别监测两组兔注射后72h 及2、4周的空腹血糖,并在饲养4周后分别左心室心肌行 HE 染色,观察心肌细胞病理变化.结果实验组14d 内累计死亡8只,1只血糖恢复正常,成模率55%(11/20);对照组无死亡.实验组成模兔注药后空腹血糖均较对照组兔明显增高,差异均有统计学意义(均 P<0.05).4周后实验组兔心肌细胞排列不整齐,心肌细胞肿胀,间质纤维组织增多,心肌细胞浆空泡变性,炎细胞浸润.结论分次小剂量注射 ALX 制作糖尿病兔模型成功率较高,可建立稳定的糖尿病兔心肌病模型.     

海水浸泡对兔脊髓损伤Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的通过建立海水浸泡兔脊髓损伤模型,观察脊髓损伤后脊髓神经细胞凋亡相关基因表达情况,明确海水浸泡对脊髓损伤的影响。方法采用改良Allen’s打击器造兔脊髓损伤模型,根据随机数字表,将60只大耳白兔随机分为两组,实验组:海水浸泡组(切除椎板并造脊髓损伤模型,海水浸泡60 min,n=30),对照组:单纯损伤组(切除椎板并造脊髓损伤模型,但不浸泡,n=30)。根据处理后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h五个时间点分为5组,每时间点6只,在各时间点处死动物取伤段脊髓,光镜下观察伤段脊髓组织病理形态,并进行免疫组织化学染色检测Bcl-2、Bax的表达水平。结果两组伤后均出现创伤性脊髓水肿的病理改变,但水肿高峰出现不一致,且最终组织结果破坏实验组重于对照组。免疫组织化学检测,Bcl-2和Bax在两组各时间点均有阳性表达,Bcl-2表达强度实验组低于对照组,Bax表达强度在损伤6 h后强于对照组,之前则弱于对照组。结论海水浸泡延迟了脊髓创伤性水肿,但最终的损害更重,具有促进神经细胞凋亡发生的作用。     

实验性颈动脉粥样硬化纤溶系统活性与增殖细胞核抗原表达的观察

目的：观察在用空气干燥加高脂饮食法建立颈动脉粥样硬化(AS)模型过程中纤溶系统活性与增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化。方法：54只日本大耳兔分为3组，分别给予空气干燥加高脂饮食(n=24)、单纯高脂饮食对照(n=24)和正常饮食对照(n=6)，在实施空气干燥后的第3天、1w、2w、4w分别处死动物，观察颈动脉内膜和中膜的PCNA表达，测定不同时点的纤溶系统活性。结果：空气干燥加高脂饮食组出现较典型的AS病变，2w、4w时内膜增生明显，内膜与中膜PCNA表达明显增高，第4周时抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)明显降低而纤溶酶原(PLG)明显升高。结论：空气干燥加高脂饮食法可以形成典型的颈AS病变，病变形成与纤溶系统活性改变、内膜中膜细胞增生有关。     

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制.方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组.实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化.结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P＜0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均＜0.01).肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P＜0.01).结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生.     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化兔心肌组织线粒体途径凋亡的影响。方法健康雄性新西兰白兔70只,随机分为5组：正常组、病理对照组、病理＋低剂量Res组（4 mg·kg^-1·d^-1）,病理＋中剂量Res组（8 mg·kg^-1·d^-1）、病理＋高剂量Res组（16 mg·kg^-1·d^-1）。分笼饲养12周后,取左心室尖部心肌组织。H-E染色观察心肌组织形态学改变,原位末端标记法检测心尖部细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测bax、bcl-2的mRNA变化。结果H-E染色下各组细胞形态学改变不明显;病理对照组细胞凋亡指数高于正常组（P〈0.01）和Res干预组（P〈0.01）,Res作用下凋亡指数下降呈剂量依赖性（P〈0.05）;病理对照组bax、bcl-2mRNA表达量较正常组升高（P〈0.01）,而加入Res干预后,bax的表达量明显下降,bcl-2表达升高（P〈0.01）。结论Res可以减少促凋亡基因bax的表达,增加抗凋亡基因bcl-2的表达,降低Bax/bcl-2比值,抑制心肌细胞的凋亡。     

回医烙灸疗法对实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的观察回医烙灸疗法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法将30只新西兰兔随机分为正常对照组、模型组和回医烙灸组,每组10只。采用石膏固定的方法制作兔左膝骨性关节炎模型。造模6周后,回医烙灸组在膝关节局部行回医烙灸疗法,每2d1次,每次20min,治疗4周;正常对照组和模型组不予干预。治疗4周后处死3组动物,取胫骨平台和股骨内侧髁软骨,进行标本的形态学观测,末端标记（TUNEL）法检测软骨细胞凋亡情况。结果模型组TUNEL阳性软骨细胞散在于软骨全层,且数量多,凋亡指数显著高于正常对照组,2组比较差异有统计意义（P〈0．05）;回医烙灸组表层也有TUNEL阳性软骨细胞,但凋亡指数显著低于模型组,2组比较差异有统计意义（P〈0．05）。结论回医烙灸疗法可以减少兔膝骨性关节炎软骨细胞的凋亡,从而延缓膝骨性关节炎的病情进展。     

模拟缺血-再灌注诱导原代培养乳鼠窦房结细胞凋亡的研究

目的 模拟缺血-再灌注诱导培养窦房结细胞凋亡,为窦房结病变的病因研究与临床防治提供理论依据。方法 取Wistar乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,随机分为3组：正常对照组;模拟单纯缺血组;模拟缺血-再灌注组。应用TUNEL法对凋亡细胞进行定性检测,并用流式细胞技术对凋亡细胞进行定量检测。结果 ①单纯缺血4、8、16h以及缺血1、4、8、16h后再灌注3h各组均可见TUNEL阳性窦房结细胞。②从单纯缺血4 h起,随缺血时间延长,窦房结细胞凋亡率显著增加;而缺血-再灌注组也较相同时间单纯缺血时窦房结细胞凋亡率显著增加。结论 单纯缺血及缺血-再灌注均可诱导乳鼠窦房结细胞凋亡,且随缺血时间延长,细胞凋亡率逐渐增加。