金匮肾气丸、右归丸对肾阳虚小鼠模型以药反证的脑基因芯片研究

目的:在基因水平上探讨补肾中药金匮肾气丸、右归丸对肾阳虚小鼠模型的作用机制.方法:昆明种小鼠分为正常组、模型组、金匮组和右归丸组.正常组和模型组每天灌胃蒸馏水0.5 mL;金匮组和右归丸组每天分别灌胃金匮.肾气丸混悬液和右归丸混悬液0.5 mL,含生药129 mg·kg~(-1).造模组和治疗组均采用雄雌鼠比例1:6同笼喂养,雄鼠每日游泳1次,直至无力下沉时捞出,达4周,以诱导产生"劳倦过度、房室不节"肾阳虚证.观察动物的畏寒、活动及反应、饮食和皮毛等情况.用36K mouse genome array鼠脑芯片检测正常组和肾阳虚模型组鼠脑基因,并以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异显著基因,用qRT-PCR对部分差异表达基因进行验证.结果:模型组/正常组上调基因,二药治疗组/造模组基因下调23个基因,主要是与炎症/免疫、神经传递/信号转导等相关基因;造模组/对照组下调基因而治疗组/造模组基因上调的基因有6个,其主要是与细胞周期/细胞结构、神经传递/信号转导、转录等有关基因.qRT-PCR也证实了金匮组/模型组、模型组/正常组的GH和Scgb3a1的差异表达.结论:金匮肾气丸、右归丸可使肾阳虚小鼠模型显著下凋的激素、黑色素显著上调并促进细胞增殖,从而在基因水平上探讨了金匮肾气丸和右归丸的药物作用机制及其差别.     

右归丸对“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠脑基因芯片的影响

目的 研究右归丸对"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型脑基因的影响,以期从基因水平上研究其药物作用机理.方法 对照组、模型组和治疗组雄性小鼠各为10只、15只和10只.对照组和模型组每日每只灌胃蒸馏水0.5ml,治疗组每日每只予右归丸混悬液0.5ml,模型组和治疗组雄雌鼠比例1∶6同笼喂养且雄鼠每日游泳30～40分钟共4周,以诱导产生"劳倦过度、房室不节"肾阳虚证.用36K鼠脑芯片检测3组鼠脑基因,并各以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异显著基因.结果 模型组/对照组共筛选出186个差异表达基因,其中上调基因150个,下调基因36个.治疗组/模型组筛选出155个差异表达基因,其中上调基因64个,下调基因91个.模型组/对照组上调而治疗组/模型组下调的基因有32个,主要是炎症/免疫、神经传递/信号转导等基因.模型组/对照组下调而治疗组/模型组上调的基因有12个,主要是与黑色素、孤儿核受体相关的基因.结论 右归丸可使肾阳虚小鼠模型显著下调的黑色素显著上调,改善与孤儿核受体有关激素的作用并促进细胞增殖.     

"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型脑基因芯片研究

目的:应用基因芯片探讨"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型脑基因改变,试图说明传统中医建模方法及其肾阳虚表现,力求从基因水平上揭示肾阳虚的本质。方法:采用雄雌鼠比例1:6同笼喂养和雄鼠每日游泳4周,以诱导"劳倦过度、房室不节"肾阳虚鼠模型。用36K mouse genome array鼠脑芯片检测正常对照组和肾阳虚模型组鼠脑基因,并以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异显著基因,并进一步查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能归类。结果:诱导成功"劳倦过度、房室不节"肾阳虚鼠模型,绘制了对照组与模型组基因表达谱比较的散点图。共筛选出186个差异表达基因,其中上调基因150个,下调基因36个。其中共有已知基因98个,上调已知基因71个,下调已知基因27个。下调基因中主要为生长激素、泌乳素、促性腺激素、黑色素和脑脂肪酸结合蛋白(B-FABP)相关基因;上调基因主要为炎症/免疫、促细胞凋亡相关基因以及影响多巴胺生成的限速酶、影响凝血纤溶机制和精子发育代谢的相关基因。结论:通过基因芯片对肾阳虚动物模型的检测,从基因水平上对肾阳虚证的本质做了一些诠释。     

金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸组织端粒酶活性的促进作用

目的探讨金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸组织端粒酶活性的影响。方法以"劳倦过度,房事不节"制备肾阳虚小鼠模型,随机分为模型组及金匮肾气丸治疗组(治疗组),每组15只,另选取15只正常雄鼠作为正常组。正常组常规饲养,每天灌胃蒸馏水0.1mL/10g;模型组造模同时每天灌胃蒸馏水0.1mL/10g;治疗组造模同时每天灌胃金匮肾气丸混悬液0.1mL/10g(浓度0.241g/mL)。共干预4周。4周后采用ELISA法检测各组小鼠睾丸组织端粒酶活性。结果 "劳倦过度、房事不节"法复制肾阳虚模型成功,同时金匮肾气丸对肾阳虚模型小鼠的体征有一定的改善作用。与正常组比较,模型组小鼠睾丸端粒酶活性降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组端粒酶活性升高(P<0.01)。结论 "劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠睾丸端粒酶活性较之正常小鼠明显降低,金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠睾丸端粒酶活性得以恢复。     

金匮肾气丸对"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠睾丸结构功能的影响

目的:以"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠为模型.观察金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸结构功能的影响.方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,以Colldege效应诱导雄性小鼠房室不节,建立肾阳虚小鼠模型.设正常组、模型组与金匮肾气丸治疗组.计算睾丸指数,光镜观察睾丸大体结构,透射电镜观察睾丸超微结构,放射免疫分析法测定睾酮(T)含量.结果:模型组睾丸指数和睾酮的分泌量比正常组有明显下降,而经治疗后均有明显升高;模型组睾丸大体结构及超微结构均有不同程度的损害,金匮肾气丸治疗组未见结构明显改变.结论:金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠睾丸受损结构得以一定程度的恢复,可改善睾丸的分泌功能.     

“劳倦过度 房室不节”肾阳虚小鼠睾丸生殖相关基因的研究

目的:应用基因芯片技术探讨"劳倦过度、房室不节"肾阳虚模型小鼠睾丸生殖相关基因的改变,从基因水平上探讨肾阳虚证和"肾主生殖"的本质。方法:连续4周雄雌鼠按比例1:6同笼喂养,每天更换动情期雌鼠,雄鼠每日游泳,建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型。用小鼠全基因组Oligo芯片检测对照组和模型组睾丸基因,以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异表达基因,查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能分类。结果:成功建立"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型,筛选出大量差异表达基因,其中上调2425个,下调3080个。上调基因前百位中已知基因41个,下调基因前百位中已知基因62个,主要涉及细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、炎症/免疫、细胞凋亡、转录/翻译、增殖/分化及细胞周期等。结论:模型小鼠出现与生殖细胞增殖、凋亡、精子发生和运动、能量代谢相关的基因改变,揭示了肾阳虚证及"肾主生殖"的部分实质。     

“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠模型睾丸基因芯片研究

目的:应用基因芯片探讨劳倦过度、房室不节肾阳虚小鼠模型睾丸基因改变,从基因水平上探讨肾阳虚证和肾主生殖的现代科学机制。方法:连续4周采用雄雌鼠比例1:6同笼喂养和雄鼠每日游泳,建立劳倦过度、房室不节肾阳虚小鼠模型。用小鼠全基因组Oligo芯片检测对照组和模型组睾丸基因,以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异表达基因,查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能分类。结果:成功建立劳倦过度、房室不节肾阳虚小鼠模型,绘制了对照组与模型组基因表达谱比较的散点图,筛选出差异表达基因,包括上调2425个,下调3080个。其中上调基因前百位中已知基因41个,下调基因前百位中已知基因62个,主要涉及细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、炎症/免疫、细胞凋亡、转录/翻译、增殖/分化及细胞周期等。结论:肾阳虚小鼠睾丸基因发生广泛的改变,从基因水平对肾阳虚证的本质及肾主生殖的理论做出了一些诠释。     

金匮肾气丸对“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠精子质量的影响

以“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠为模型，观察金匮肾气丸对肾阳虚小鼠精子质量的影响。结果肾阳虚模型组小鼠与正常对照组相比，精子活率和精子密度明显下降（P〈0.05）；而金匮肾气丸给药组小鼠与模型组相比，精子活率和精子密度明显升高（P〈0.05）。表明金匮肾气丸可以改善肾阳虚小鼠的精子质量。     

肾气丸对肾阳虚小鼠血清T3、T4的影响

目的:探讨肾气丸对"房事不节、劳倦过度"诱发的肾阳虚模型小鼠血清L、L水平的影响.方法:选健康雄性昆明种小白鼠45只,随机分为对照组、房事不节 劳倦过度组(模型组)和治疗组,每组各15只.用强迫小鼠游泳方法造成劳倦过度,同时以Colldege效应诱导雄性小鼠房事不节,建立肾阳虚小鼠模型,用肾气丸作为治疗药物,观察各组血清L3、T4水平的变化.结果:肾阳虚组小鼠与正常对照组对比,血清T3、T4水平明显下降(P<0.01),治疗组小鼠与模型组相比,血清T3、T4水平明显升高(P<0.05).结论:肾气丸能上调肾阳虚小鼠的血清T3、T4水平可能是其治疗肾阳虚证的机理之一.     

金匮肾气丸对肾阳虚变应性鼻炎缓解期小鼠Th1/Th2细胞因子的影响

目的 观察金匮肾气丸对肾阳虚变应性鼻炎(AR)缓解期小鼠Th1/Th2细胞因子的影响,探讨中医在AR缓解期“治未病”的可能机理。方法 建立肾阳虚AR小鼠模型,实验分肾阳虚AR组、金匮肾气丸组和正常对照组。采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清中Th1/Th2细胞因子和组胺,并观察小鼠鼻黏膜肥大细胞、嗜酸性粒细胞浸润情况。结果 金匮肾气丸能改善肾阳虚AR模型小鼠鼻黏膜的变态反应症状;降低肾阳虚AR小鼠血清IL-4水平,升高IFN-γ、IL-2水平,降低组胺含量(P ＜ 0.01)。结论 金匮肾气丸对肾阳虚AR小鼠的治疗作用可能与其下调小鼠血清IL-4,上调IFN-γ、IL-2水平,纠正失衡的Th1/Th2有关。     

用基因芯片技术研究青少年肾阳虚体质差异表达基因

利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因，从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。利用体外转录方法，将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针，运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果：共筛选出127条符合标准的差异表达基因，其中63条呈上调表达，64条呈下调表达。提示：与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相：关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因研究

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,63条呈上调表达,64条呈下调表达。提示:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。其中,PSMB7基因及CXCR4基因的表达差异均较明显,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关。     

清胆胶囊对胆石病C57小鼠肝脏基因表达谱的影响

目的探讨清胆胶囊对胆石病C57小鼠肝脏基因表达谱的影响。方法将38只SPF级C57BL/6J雌性小鼠随机分为对照组（n=10）、模型组（n=15）及清胆胶囊组（n=13）。对照组喂以正常饲料,模型组和清胆胶囊组喂以高脂致石饲料,其中清胆胶囊组在予高脂饮食的同时,予清胆胶囊干预。于实验第8周末处死,应用Oligo GEArray芯片检测肝脏基因表达的改变。结果与对照组比较,模型组出现显著差异表达的基因共35条,上调基因34条,下调基因1条,为Col3a1;与模型组比较,清胆胶囊组出现显著差异表达的基因38条,其中下调基因36条,上调基因2条,为Il3和Ppard;与模型组比较,对照组和清胆胶囊组同时下调两倍的基因27条,主要为代谢酶相关基因、脂肪酸结合蛋白基因、炎症和纤维化相关基因等。结论从基因学角度分析显示,清胆胶囊可以改善肝脏的炎症损伤,减少胆汁中胆固醇结晶的形成,降低结石形成的几率。     

基因芯片技术研究虚寒证大鼠肝全基因表达谱

目的:采用基因芯片技术研究虚寒证大鼠肝全基因表达谱的改变。方法:使用中药复方生石膏、龙胆草、黄柏和知母建立虚寒证大鼠模型,应用基因芯片检测各组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能分类注释。荧光定量PCR验证芯片结果。结果:虚寒模型组与空白对照组比较有99条基因差异表达,主要涉及刺激应答功能。结论:虚寒证可能通过多种刺激应答相关基因的下调,导致免疫应答功能、防御应答功能及对其他生物体刺激应答功能的降低。虚寒证的物质基础可能与此类基因的异常表达相关。     

Effect of acupuncture at Renying(ST 9) on gene expression profile of hypothalamus in spontaneously hypertensive rats

OBJECTIVE: To investigate changes in gene expression profiles in the hypothalamus related to the effects of acupuncture at the Renying(ST 9) acupoint in spontaneously hypertensive(SH) rats.METHODS: We randomly divided 18 SH rats into Renying(ST 9) group and model control group, 9 body weight-matched Wistar-Kyoto rats were used as blank controls. Acupuncture was performed manually for 20-min daily over 28 d in the Renying(ST 9) group. Rat Gene 2.0 array technology was used for the determination of gene expression profiles and the screened key genes were verified by real-time quantitative polymerase chain reaction(RT-PCR) analyses.RESULTS: The different groups exhibited differential gene expression: compared with the blank control group, 48 genes were up-regulated and 91 genes were down-regulated in the model group;compared with the model group, 79 genes were up-regulated and 80 genes were down-regulated in Renying(ST 9) group. The RT-PCR results of the key genes including Chi3 l1, Ephx2, Klk1, 5-HT1 A and Cbs were consistent with that of gene chip analysis.CONCLUTION: Acupuncture at Renying(ST 9)could significantly lower the blood pressure of SH rats and affect their hypothalamic gene expression profile. Genes associated with the contraction of vascular smooth muscle and the regulation of inflammation, neurotransmitters may be involved in acupuncture's antihypertensive mechanism.     

敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用影响的研究

目的 研究敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用的影响.方法 用氢化可的松给小鼠皮下注射,造成肾阳虚动物模型,观察敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠体重、负重游泳时间、常压耐缺氧能力、负重游泳后肝糖原和血清乳酸含量的影响.结果 与模型组比较,敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重,显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间,提高负重游泳后肝糖原含量,降低运动后血清乳酸含量.结论 与模型组比较,敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重,显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间,提高负重游泳后肝糖原含量,降低运动后血清乳酸含量.     

甘肃黄芪对多柔比星心肌病大鼠心肌组织部分基因表达的影响

 目的比较正常大鼠和多柔比星心肌病大鼠心肌组织部分基因表达谱的差异,探讨甘肃黄芪对上述基因表达谱的影响。方法30只Wistar大鼠随机分3组:对照组即生理盐水组(n=10),多柔比星组(n=10)和黄芪+多柔比星组(n=10)。分别从3组心肌组织中抽提总RNA,用Cy3,Cy5荧光标记,经逆转录合成动物来源的cDNA探针;cDNA探针与4000点基因表达谱芯片杂交,结果由软件分析表达信号。结果共有923条基因出现差异表达,其中586条基因表达下调,337条基因表达上调。凋亡相关基因表达在多柔比星心肌病时上调;氧化和能量代谢相关基因的表达在多柔比星心肌病时下调。6个在多柔比星组上调的基因在黄芪+多柔比星组下调,8个在多柔比星组下调的基因在黄芪+多柔比星组上调,3个在多柔比星组上调的基因在黄芪+多柔比星组表达进一步增强。结论凋亡和能量代谢障碍及免疫因素在多柔比星心肌病的发病机制中参与作用,甘肃黄芪对多柔比星诱导的心肌病大鼠的心脏保护作用是通过多基因多途径调节相关基因表达而实现的。     

回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达的调节机制

目的:观察回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达的调节机制,探讨调节的基因与神经组织保护、修复、生长和再生的关系。方法:采用Allen's法制备大鼠脊髓损伤模型,分为假手术组(A组),损伤组(B组),烙灸组(C组),应用表达谱基因芯片对脊髓损伤大鼠的基因表达分析,筛出先上调后下调及先下调后上调的基因,并用RT-PCR对其中8条基因表达水平验证。结果:电泳结果显示提取到高纯度的RNA,质量完好,无蛋白质及DNA残留。损伤组对比假手术组出现功能已有阐述差异基因1 146个,其中上调712个,下调434个。烙灸组对比B组出现功能已有阐述差异基因5 542个,其中上调3 006个,下调2 536个。模型组对比假手术组及烙灸组对比烙灸组基因差异表达取并集,然后从中挑选出样本中先上调后下调及先下调后上调的基因,共24个基因,其中先上调后下调的13个,先下调后上调的11个。抽取部分差异表达基因Olr1528、Trim72、Serpinb3a、GAP-43、Slc5a7、LOC288521、Vegp2、Cyp2d1进行RT-PCR验证,验证结果与芯片结果相符合。结论:回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠基因表达具有一定的调节作用,调节的基因与神经组织保护、修复、生长和再生密切相关。