肝细胞癌中耐药基因的表达及意义

目的通过对肝细胞癌（HCC）中3种耐药基因MDR1、MRP、GST-π的检测,探讨肝细胞癌中耐药基因的表达特点及临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测3种耐药基因在51例肝细胞癌组织和10例正常肝组织中的表达。结果 （1）MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中的表达分别为0.55±0.27、0.62±0.29、0.64±0.31,正常肝组织中的表达分别为0.23±0.10、0.25±0.07、0.26±0.12,耐药基因在肝细胞癌中的表达高于正常肝组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）;（2）耐药基因的表达与肿瘤Edmondson分级呈正相关（P〈0.05）;（3）MRP与GST-π的表达相关。结论肝细胞癌中存在有原发性耐药的现象,且多种机制并存。MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中有较高的表达。联合检测对制定科学有效的治疗方案有一定价值。     

原发性肝癌REIC/Dkk-3基因mRNA低表达及其意义

原发性肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率很高。Tsuji等从几种永生细胞系中发现一段新的REIC／Dkk-3基因序列表达明显下调，而在正常细胞系中表达正常，提示REIC／Dkk-3可能是一种新的抑癌基因。为探讨REIC／Dkk-3基因表达与人肝细胞癌的关系，本研究应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）对肝细胞癌癌灶及癌旁组织中REIC／Dkk-3基因mRNA的表达进行了定量检测，以探讨REIC／Dkk-3基因与肝癌发生发展、病理分型及肿瘤生物学行为之间的关系。     

DLC-1基因在肝细胞癌组织中表达的研究

目的 研究肝癌缺失基因-1（DLC-1）在人原发性肝癌组织中的表达及与肝细胞癌侵袭转移的关系。方法收集51例复旦大学附属中山医院外科手术切除的肝细胞癌及癌旁正常组织标本，用荧光定量RT-PCR方法分析组织中DLC-1基因的表达。结果在51对配对的肝细胞癌与癌旁无瘤肝组织中，前者DLC-1基因表达水平明显低于后者（P〈0．01），且高侵袭性肝细胞癌组明显低于低侵袭性肝细胞癌组（P〈0．05）。结论DLC-1基因在HCC组织中呈低表达，其表达水平与其侵袭性高低相关。     

基因芯片在肝细胞癌相关基因筛选中的初步研究

目的探讨基因表达谱芯片技术在筛查肝细胞癌相关基因群表达中的作用。方法采用美国Affymetrix公司的U133A2．0基因表达谱芯片，按一步法抽提肝细胞癌及正常肝脏组织总RNA，分离纯化两种组织的mRNA；经逆转录合成掺人生物素标记的cDNA合成探针，与芯片杂交和严格洗片后，用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像，分析肝细胞癌及正常肝组织中差异表达的基因。结果在18400条基因中，肝细胞癌组织与正常肝脏组织间有2756条（14．98％）存在差异表达的基因，其中上调基因1772条和下调基因984条，对2756条差异表达基因作了初步功能分类，这些基因与肝细胞癌的发病机制存在相关性。结论基因表达谱芯片技术可以筛选出肝细胞癌表达异常的相关基因群，对其进一步研究有助于认识肝细胞癌的发病机制。     

癌-睾丸抗原GAGE基因mRNA在肝细胞癌的表达及临床意义

GAGE基因是Van den Eynde等应用细胞毒性T淋巴细胞（CTL）筛选法，从一黑色素瘤细胞株cDNA文库中筛选出的肿瘤抗原基因，它能在多种来源不同的肿瘤组织表达，而在正常组织的表达仅限于睾丸组织，因此属于癌-睾丸抗原（CT抗原）。本研究中采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝细胞癌（HCC）组织及相应癌旁组织中GAGE基因mRNA4的表达情况，     

乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌发生中的作用机制

HBx蛋白（HBxAg）被认为是乙型肝炎病毒（HBV）致肝细胞癌（HCC）的病毒蛋白,能影响肝细胞的生长、转化、迁移和凋亡以及DNA的修复等过程,己成为近年来研究的热点之一。HBx是一种多功能的病毒蛋白,有转录调控作用,对肝细胞内许多癌基因和／或抑癌基因的表达有直接或间接的影响,在肝癌形成中起重要作用。通过对HBx在肝癌发生、发展中机制的深入研究,有望在HCC防治方面开辟新途径。     

核蛋白类基因在人肝细胞癌中的变化及其意义

在人肝细胞癌及其癌旁组织中至少发现七种基因的重排、扩增、点突变或过量表达等，其中ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｅｔｓ－２和ｐ５３基因属于核蛋白类，它们的产物大多具有与ＤＮＡ结合的能力，对肝细胞恶性转化及维持起着重要作用，抑癌基因ｐ５３在人肝癌中的异常变化是目前研究的重点。对核蛋白类基因的研究有利于进一步明确人肝细胞癌的发生机制，并且对人肝细胞癌的诊断及治疗均有重要意义。     

肝细胞生长因子及其受体c-met原癌基因在人肝细胞癌中的表达及意义

近年，随着对肿瘤转移机制的深入研究，发现一些细胞因子参与并调控了肿瘤细胞的运动［１］。我们采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术研究肝细胞生长因子（ＨＧＦ）及其受体ｃｍｅｔ原癌基因在肝细胞癌中的表达变化规律，以探讨ＨＧＦ及其受体系统与肝...     

肝细胞癌组织中的miRNA-21基因表达变化

目的检测肝细胞癌组织中miRNA-21基因、RECK蛋白的表达变化。方法取60例肝细胞癌患者的肿瘤组织标本（观察组）和癌旁组织标本（对照组）,用PAGE/Northern blot分析法检测其中的miRNA-21基因表达。结果观察组miRNA-21基因表达表达量为19.3±3.39,对照组为2.35±1.63,两组相比P〈0.05。结论肝细胞癌组织中miRNA-21基因表达上调。     

肝细胞癌组织微血管密度与血小板源性生长因子BmRNA表达的关系

目的初步探讨肝细胞癌组织中血小饭源性生长因子B（PDGPB）mRNA的表达与微血管密度（MVD）之间的关系。方法用RT-PCR法柃测51例肝细胞癌和20例正常肝组织PDGF-BmRNA。采用免疫组化（sABC）法检测MVD的表达。结果肝细胞癌组织PDGFBmRNA的表达量明显高于正常肝组织，两者比较有显著性差异（P〈0．01）。肝癌组织和正常肝组织的MVD值分别是29．43±4．818和14．56±1．96（P〈0．01）。结论PDGF-B作为一个血管内皮细胞生长调节因子，在肝癌的发生、发展过程中可能起着重要的促进生长和转移作用。     

肝细胞恶性转化与肝癌诊断的特异性标志物

肝细胞癌(HCC)是由病毒、化学致癌物等多病因作用,因癌基因或癌相关基因激活、抗癌基因失活或胚胎期某些癌基因重新复活等诸多因素引起肝细胞生长失控而致癌变,其中数百种基因调控和表达与肝癌发生、发展相关.手术切除仍是肝癌治疗的首选方法,早诊断、早治疗是提高肝癌患者生存率的惟一途径.随着多种"组学"如基因组学、蛋白质组学、转录组学等新技术的发展和对肝癌发生机制研究的深入,越来越多的与肝细胞恶性转化相关分子标志物被发现,有望成为肝癌早期特异性诊断的潜在分子标志物.     

肝癌细胞表达差异片段MRG 98.2的临床意义

目的 筛选肝细胞癌（HCC）相关基因,探讨其在HCC发病中的临床意义。方法 用差异显示技术对比研究正常肝组织、HCC组织及癌旁肝组织之间mRNA的表达差异,以肝cDNA片段MRG98．2为探针,对10例HCC及癌旁肝组织进行斑点印渍分析,并通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测这些标本血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平。结果 从HCC组织中获得的差示片段MRG98．2在7例HCC标本中表达阳性（70％）,癌旁肝组织弱表达（2／10）或无表达。VEGF mRNA在7例MRG98．2 阳性表达的HCC组织中的6例表达上调。结论 MRG98．2是HCC相关的基因片段,其表达与VEGF mRNA相关,并可能与肿瘤浸润转移、患者的预后不良有关。     

乙型肝炎病毒X蛋白对肝细胞癌生长因子激活作用的研究

目的研究乙型肝炎病毒Ｘ（hepatitisBvirus,HBx）蛋白对生长因子激活作用,探讨HBx蛋白对肝细胞癌生长的影响。方法构建Ｘ基因真核表达载体,转染入HepG2细胞后,细胞组织化学和免疫印迹法检测胰岛素样生长因子－Ⅰ受体（insulin-likegrowthfactorⅠreceptor,IGF-ⅠR）和血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）表达。结果转染HBx基因HepG2细胞（X细胞）IGF-ⅠR表达阳性率为84%±3%,转染空载体对照细胞（X0细胞）为26%±4%;免疫印迹法检测Ｘ细胞有明显条带。VEGF表达Ｘ细胞阳性率为83%±5%,X0细胞为28%±6%,差异有非常显著意义;Ｘ细胞IGF-ⅠR表达增高近1.5倍。结论HBx蛋白可同时激活IGF-ⅠR和VEGF,在肿瘤恶性生长、转移中起有重要作用。     

肝细胞癌组织中VEGF和p57~（kip2）的表达及意义

目的探讨肝细胞癌血管内皮生长因子（VEGF）和有丝分裂抑制因子（p57kip2）表达特征及其在肝细胞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法检测63例肝癌组织、癌旁组织和20例良性肝病组织中VEGF和p57kip2表达。结果肝癌组织中VEGF及p57kip2表达均与癌组织分化程度无关;VEGF高表达者生存期明显短于低表达者,p57kip2高表达者存活期明显长于低表达者;P均〈0.05。p57kip2表达与VEGF表达呈负相关（rs＇=-0.272 5,P=0.030 7）。结论 VEGF和p57kip2可能参与了肝细胞癌生长过程的调控,与肝细胞癌的发生发展及自然病程有关。     

肝细胞癌相关肿瘤抗原基因的筛选与分析

目的 筛选和分析肝细胞癌相关的肿瘤抗原。方法 用肝细胞癌组织构建cDNA表达文库，通过重组cDNA表达文库血清学分析法，用自体患者和异体患者的血清对文库进行筛选。将所得阳性噬菌体克隆体内剪切获得其pBK-CMV噬菌粒。通过限制性核酸内切酶鉴定插入cDNA片段，并作测序和生物信息学分析。同时将阳性克隆中的LIMS1插入片段进行原核表达。结果 自体血清筛选得到14种基因，异体筛选获得11种基因，两组中均筛选到kinectin，共有24种肝细胞癌相关的肿瘤抗原基因。其中有8种基因目前还不清楚其功能，其余16种基因根据确定的或者推断的功能可以分成8组。LIMS1原核重组蛋白表达成功。结论 本研究为肝细胞癌的免疫治疗提供了候选基因，并为理解肝细胞癌发生和发展的机制提供了线索。     

survivin、bcl-2、在肝细胞肝癌组织中的表达及意义

采用流式细胞术对肝细胞肝癌（HCC）、癌旁肝硬化组织、正常肝组织中survivin、bcl-2基因蛋白的表达进行定量检测。结果survivin蛋白表达的荧光指数（FI）值明显高于癌旁组织、肝硬化和正常肝组织,与分化程度、预后有关,与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移无关,与bcl-2蛋白表达呈显著正相关。结论survivin基因高表达促进HCC的发生、发展,与bcl-2起协同作用,可作为判定HCC预后的指标。     

PPM1A和P-Smad2在原发性肝癌中表达及意义研究

目的探讨肝癌及癌旁组织中P-Smad2蛋白与PPM1A的表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测31份肝癌（HCC）、25份癌旁组织及13份非癌性肝组织中P-Smad2蛋白和PPM1A的表达。结果①癌旁和病理分级小于Ⅱ级的癌组织中PPM1A表达以核为主，胞浆表达弱或不表达，病理分级大于Ⅲ级及以上的癌细胞中则以胞浆表达为主。正常、慢性肝炎和肝硬化组织中，PPM1A表达以核为主，胞浆无表达，差别有统计学意义（P〈0．05）。②P-Smad2在正常肝细胞、慢性肝炎、肝硬化、癌旁和病理分级Ⅰ-Ⅱ级的癌组织中表达以胞核和胞浆明显，胞浆表达主要聚集在核周，病理分级分级Ⅱ-Ⅲ级及以上的癌组织中，P-Smad2表达则以核为主，差别有显著性（P〈0．05）。③PPM1A和P-Smad2在癌组织的表达部位呈现负相关性（r=-0．345，P=0．001）。结论PPM1A与P-Smad2在肝癌组织的胞核和胞浆表达转位及强度与其组织病理改变有密切关系，二者可能通过其相互作用。共同参与肝癌的发生发展机制。     

P27和skp2在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨肝细胞癌P27和skp2蛋白的表达情况与临床病理意义。方法用免疫组化二步法检测P27和skp2在60例肝细胞癌及20例癌旁组织中的表达。结果60例肝细胞癌P27的阳性表达率为23％（14／60）,癌旁组织为80％（16／20）,60例肝细胞癌高分化癌阳性表达率为47％（7／15）,低分化癌为16％（7／45）。P27在肝细胞癌中的表达明显低于癌旁组织,P27蛋白的表达随病理分级增高而降低。60例肝细胞癌skp2阳性表达率为47％（28／60）,癌旁组织为15％（3／20）,60例肝细胞癌高分化癌阳性表达率13％（2／15）,低分化癌为58％（26／45）,可见skp2在肝细胞癌中表达明显高于癌旁组织（P〈0．05）,低分化癌明显高于高分化癌（P〈0．01）。结论P27和skp2蛋白的表达情况与肝细胞癌的发生发展及恶性度有关。     

Shh信号通路在肝癌中的表达及与β-catenin的关系

目的探讨原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）中Sonic Hedgehog（Shh）信号通路基因和15-catenin的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法对49例HCC和相应癌旁肝组织中Glil和β-catenin蛋白表达。荧光定量PCR检测2个肝癌细胞系和正常肝细胞中相应基因mRNA的表达情况。结果免疫组化染色与RT-PCR示Glil在HCC组织中的阳性表达率为77．56％,而癌旁肝组织为40．82％,两者差异具有显著意义（P〈0．05）。β-catenin蛋白在HCC中的表达显著高于癌旁肝组织（P〈0．05）,且与Glil的表达呈正相关（r=0．594,P=0．000）。Glil和β-cateninmRNA在肝癌细胞株中高表达,在正常肝细胞中低表达（P〈0．05）。结论Glil和β-catenin在肝癌细胞中均过度表达,可能协同作用促进肝癌细胞异常增殖,参与HCC的发生和发展。     

PITX1和Pan-ras在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究抑癌基因PITX1和其下游癌基因Pan-ras在正常胚肝细胞株L02，肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中的表达，探讨其在肝癌发生发展中的作用和关系。方法应用SABC免疫组织化学染色技术和westem blot蛋白质印迹以及半定量RT-PCR检测L02、HepG2和SMMC-7721细胞株中PITX1和Pan-ras基因的表达情况，并分析其意义。结果PITX1在肝癌细胞（HepG2、SMMC-7721）中表达比正常肝细胞L02显著降低，Pan-ras在肝癌细胞（HepG2、SMMC-7721）中的表达与正常肝细胞L02相比显著升高。结论PITX1在肝癌细胞中的低表达，以及Pan-ras的高表达，可能导致肝癌无限增殖，构成了肝癌细胞信号传导网络中的重要一环。