雷帕霉素对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素（rapamycin）对培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon’s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后，用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng／ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9．32％，22．55％，41．42％，42．25％，43．57％。细胞周期分析显示，雷帕霉素（40ng／ml）作用后，G0／G1期细胞较对照组增多（41．76％vs44、19％，P〈0.05），S期细胞较对照组减少（45．42％vs40．18％，P〈0．05）。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

人Tenon’s囊成纤维细胞的离体培养及生长特性观察

目的离体培养人Tenon’s囊成纤维细胞，观察其生长特性。方法将人Tenon’s囊成纤维细胞进行离体培养及生长抑制实验，采用含10％胎牛血清的DMEM培养基，细胞计数法及MTT法描述细胞生长曲线。并通过免疫组织化学法对细胞进行鉴定。站果人Tenon’s囊成纤维细胞离体培养48h至7d处于对数生长期。细胞角蛋白染色阴性，波蛋白染色阳性。结论人Tenon’s囊成纤维细胞在体外易于生长，是细胞离体实验研究的良好材料。     

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的：观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法：将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24h后, 用MTT法测定细胞的增殖情况，用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果：用含10、20、40、80和160ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时，细胞增殖抑制率分别为9.32%，22.55%，41.42%，42.25%，43.57%。细胞周期分析显示，雷帕霉素(40ng/ml)作用后，G0/G1期细胞较对照组增多(41.76% vs 44.19%，P＜0.05)，S期细胞较对照组减少(45.42%　vs　40.18%，P＜0.05)。结论：雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果，且随浓度增加抑制作用增强，并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的:观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法:将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果:用含10、20、40、80和160 ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时,细胞增殖抑制率分别为9.32%,22.55%,41.42%,42.25%,43.57%。细胞周期分析显示,雷帕霉素(40 ng/ml)作用后,G0/G1期细胞较对照组增多(41.76%vs 44.19%,P<0.05),S期细胞较对照组减少(45.42%vs 40.18%,P<0.05)。结论:雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果,且随浓度增加抑制作用增强,并将细胞抑制在G1期的限制点内。     

苯扎氯铵对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响

目的观察苯扎氯铵对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞的增殖的影响。方法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。配制苯扎氯铵溶液,使其浓度依次为20、2～(2×10-7)μg/mL,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的苯扎氯铵作用下细胞的增殖,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果较高浓度组(浓度≥0.2μg/mL)的苯扎氯铵对人Tenon囊成纤维细胞存在明显的杀伤作用,20μg/mL时细胞几乎全部死亡,A值与阴性对照相比明显减少(P<0.01),浓度为2和0.2μg/mL时细胞形态变化明显。较低浓度组(浓度<0.2μg/mL),A值和细胞形态较阴性对照均没有明显变化(P>0.05)。比较不同时间下的剂量效应曲线,4和24h没有显著差异(P>0.05)。结论苯扎氯铵0.2μg/mL及以上浓度对体外培养的成纤维细胞具有细胞毒性,低浓度时则对细胞增殖没有明显的影响。     

钙调蛋白拮抗剂W-7对人Tenon囊成纤维细胞的抑制实验

目的观察钙调蛋白拮抗剂W-7对培养的人Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。方法1)人Tenon囊成纤维细胞离体培养及生长抑制实验:取对数生长期的Tenon囊成纤维细胞接种于96孔培养板中,分别加入不同浓度的W-7及丝裂霉素C(MMC),培养不同时间,用MTT法检测细胞增生抑制情况。2)药物对人Tenon囊成纤维细胞形态及线粒体代谢的影响:将人Tenon囊成纤维细胞接种在96孔培养板中,同时加入不同浓度的W-7及MMC,分别培养不同时间,观察细胞形态变化;同时加入MTT,观察细胞线粒体代谢变化。结果1)W-7依剂量及时间依赖方式明显抑制离体培养的人Tenon囊成纤维细胞增生。2)MTT显示W-7作用的细胞线粒体代谢存在,而MMC作用后细胞死亡,线粒体代谢消失。结论W-7可抑制人Tenon囊成纤维细胞增生。其对细胞线粒体代谢的影响较MMC小,不引起细胞膜完整性的破坏,可减轻炎症反应,是具有良好应用前景的抗斑痕药物。     

ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对人Tenon囊成纤维细胞增殖、凋亡和黏附性的影响

目的 观察ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(ocular Tenon capsule fibroblasts,OTFs)增殖、凋亡和黏附性的影响.方法 体外培养的第4～6代OTFs经溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导后,不同浓度Y-27632处理,采用MTT测定细胞增殖抑制率和细胞黏附抑制率,未经LPA诱导OTFs细胞同时采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术测定细胞凋亡率,以及细胞平板克隆增殖实验测定不同浓度Y-27632组OTFs细胞增殖克隆形成率.结果 6、30、150、750 μmol/L Y-27632各组经LPA诱导的OTFs细胞增殖抑制D(490)与LPA组比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),OTFs细胞黏附抑制D(490)与LPA组比较,同样具有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).随着Y-27632浓度增加,细胞凋亡率相应增加.未经LPA诱导的OTFs细胞克隆形成率随着Y27632浓度的增高而降低.结论 Y-27632有效抑制LPA诱导的OTFs增殖和细胞间黏附,诱导细胞早期凋亡.     

全反式维甲酸对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞（HTCFs）增殖及凋亡的影响。方法：体外培养HTCFs,采用流式细胞仪检测细胞周期改变、细胞凋亡率、抗凋亡基因bcl-2的水平,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA,研究不同浓度的ATRA对体外培养的HTCFs增殖及凋亡的影响,同时与丝裂霉素C（MMC）作比较。结果：用ATRA和MMC处理后,HTCFs细胞周期的分布发生了明显的变化,表现为G⁰/G¹期细胞数增多,S期细胞数减少;1×10_-9mol/L的ATRA即可诱导细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡率显著增高;ATRA组bcl-2的水平比空白对照组大约低了一倍;DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示：ATRA组为呈一定间隔的DNA梯形条带,MMC组呈现弥漫的片状图谱,无明显的条带。结论：ATRA可有效抑制体外培养的HTCFs的增殖,但与MMC的作用方式不同。MMC主要造成细胞坏死,而ATRA则主要诱导细胞凋亡,无明显细胞毒作用。     

纳米银抗菌钛种植体对成纤维细胞的影响

目的考查纳米银抗菌钛板对成纤维细胞早期生物学行为的影响。方法将原代培养的人牙龈成纤维细胞接种于纳米银抗菌钛种植体表面,通过对样品表面细胞形态学观察和细胞增殖的检测分析该表面对成纤维细胞早期生物学行为的影响。结果和对照组相比,成纤维细胞在纳米银抗菌钛种植体表面早期铺展形态有差异,而增殖差异无统计学意义（P〉0.05）。结论经过纳米银改性后的钛片对成纤维细胞早期生物学行为无不良影响。     

纳米二氧化钛颗粒对人肺成纤维细胞缝隙连接通讯的影响

目的：研究不同粒径纳米二氧化钛(TiO₂)颗粒对人肺成纤维细胞间缝隙连接通讯功能的影响。方法：将25 nm和80 nm两种不同粒径的TiO₂,以不同的质量浓度（0、10、20、40、80 mg/L）染毒人肺成纤维细胞24 h,采用激光漂白荧光恢复技术(FRAP)测定细胞间缝隙连接通讯水平。结果：荧光恢复结果显示,25 nm和80 nm的TiO₂均可影响细胞的荧光恢复率,随着染毒浓度的增加,这种抑制作用逐渐增强,对照组的荧光恢复率为20.81%±1.93%,25 nm 80 mg/L组的荧光恢复率为7.26%±0.91% (P<0.05),80 nm 80 mg/L组的荧光恢复率为9.94%±2.08% (P<0.05)。染毒组的细胞荧光恢复率显著低于对照组,相同的质量浓度下,粒径25 nm的TiO₂对细胞缝隙连接通讯的抑制作用略大于粒径80 nm的TiO₂。结论：纳米TiO₂可以抑制人肺成纤维细胞的缝隙连接通讯功能。     

兔Tenon’s囊组织原代成纤维细胞分离培养与鉴定

目的:改良和补充兔Tenon’s囊组织原代成纤维细胞的分离培养、鉴定方法,为开展抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物研究提供成熟的原代成纤维细胞。方法:应用组织块培养法,无菌条件下摘取组织,机械剪碎,于含10%胎牛血清的DMEM中培养,显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法鉴定,实时荧光定量PCR法检测细胞波形蛋白、角蛋白的mRNA水平。结果:分离培养的细胞具有成纤维细胞形态,7-10d从组织块周围大量爬出,15d铺满培养皿;免疫荧光法鉴定显示,波形蛋白表达阳性,角蛋白阴性表达;实时荧光定量PCR检测出细胞中波形蛋白mRNA水平远远高于角蛋白。结论:改良和补充了兔Tenons囊组织成纤维细胞原代培养与鉴定方法,为后续青光眼术后滤过泡抗瘢痕化的药物研究奠定基础。     

丝裂霉素C抑制人结膜囊成纤维细胞生长及增殖

目的　观察丝裂霉素 C( MMC)对培养人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的作用 .方法　用 MTT比色法、3H- Td R掺入法及流式细胞仪检测细胞增殖周期观察 MMC对培养的人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的影响 .结果　 0 .4 g· L- 1MMC作用 5 min后 ,可使成纤维细胞 MTT比色 A570 nm值 7d内无显著变化 ( P>0 .0 5 ) ,3H- Td R掺入实验 CPM第 1日较对照组降低了 72 .5 % ,至第 7日时仍低于对照组 86.2 % ( P<0 .0 1) .细胞增殖周期中 ,MMC组 S期细胞的百分比明显低于对照组 .结论　临床使用剂量 MMC可使结膜囊成纤维细胞增殖能力下降 ,处于增殖抑制状态 ,而不引起明显的细胞死亡 .     

保留Tenon’s囊的改良式翼状胬肉切除术的临床观察

目的:评价保留Tenon’s囊的改良式翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术的临床价值。方法:试验组单纯原发性翼状胬肉150例166眼行保留Tenon’s囊的改良式翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术,对照组单纯原发性翼状胬肉患者136例146眼行传统去除Tenon’s囊的翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术。观察两组患者手术持续时间、术后结膜充血时间、角膜上皮生长时间、BUT(泪膜破裂时间)、SIt(泪液分泌试验)、复发率,问卷调查了解术后疼痛等主观不适。结果:A组手术时间(25.43±3.18)min,较B组(33.87±3.74)min明显缩短。两组BUT、SIt结果分析均显示,A组术后泪膜功能恢复较快。术后1个月A组结膜充血16例(10.7%),B组24例(17.6%),差异有统计学意义。术后1个月A组主观不适评分(0.21±0.36)分,B组(0.38±0.45)分,差异有统计学意义。术后角膜上皮修复和复发率两组无明显差异。结论:保留Tenon’s囊的改良式翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞移植术在角膜上皮修复时间及复发率方面与传统术式并无显著差异,但改良术式能显著缩短手术持续时间、缩短泪膜功能恢复时间,且术后结膜充血时间更短,患者术后疼痛不适周期明显缩短,大大减轻患者痛苦,在临床应用中具备显著优势。     

纳米羟基磷灰石膜复合材料与小鼠成纤维细胞的相容性

目的探讨纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料(nano-Hydroxyapatite/ polyurethane,nHA/PU) 与小鼠成纤维细胞（L929）的生物相容性[1]。方法 将小鼠成纤维细胞与纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料体外复合培养,并设单独细胞培养的阴性对照和细胞与传统材料复合培养的对照组,倒置相差显微镜、扫描电镜行形态学观察,计数接种后的黏附情况,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞的生长周期,CCK-8法[2]检测材料对细胞增殖影响。结果 小鼠成纤维细胞在纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料上良好的黏附、生长、增殖,流式细胞仪分析接种到材料上的细胞,其细胞周期与空白对照组和传统对照对比差异均无显著统计学（P>0.05）,CCK-8检测显示材料对细胞增殖的影响小于传统材料。结论 纳米羟基磷灰石膜聚氨酯复合材料具有良好的细胞相容性,可望作为组织工程人工肛门括约肌的外层套囊材料。     

牙周膜成纤维细胞与静电纺丝纳米纤维的生物相容性研究

目的 研究不同比例的静电纺丝聚乳酸/聚己内酯(PLA/PCL)纳米纤维与牙周膜成纤维细胞(PDLF)的生物相容性,探索其作为牙周膜组织工程支架的可行性.方法 聚乳酸(PLA)和聚己内酯(PCL)分别按重量比75:25、50:50和25:75制成混合溶液,应用静电纺丝技术制成3种比例的纳米纤维支架.将PDLF接种于3种比例的支架上,经细胞培养,通过光学显微镜观察PDLF在3种支架上的形态;MTT法检测PDLF在支架上的增殖,荧光显微镜下计数细胞,检测粘附能力;活死细胞染色法比较PDLF在3种比例支架上的活力.结果 在体外培养条件下,PDLF在3种比例支架上均能生长,其中50:50支架上的PDLF增殖曲线最接近常规培养细胞的曲线,明显较其他2种支架上PDLF数量多;50:50支架对PDLF的粘附作用明显强于另外2种;50:50支架对PDLF活性的影响最小,优于其他比例的支架.结论 PDLF能在不同比例的PLA/PCL纳米纤维上生长,其中,按重量比为50:50合成的支架在与牙周膜成纤维细胞共培养时体现出较好的生物相容性,可作为牙周膜组织工程候选支架材料.     

丝裂霉素C对人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响

目的　观察丝裂霉素 C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响 .方法　用 3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察 MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用 .结果　 0 .4g· L- 1 MMC作用 5 min,可使结膜囊成纤维细胞对 3H-脯氨酸的摄取减少 5 5 %以上 (P<0 .0 5 ) ,并降低了 型前胶原 m RNA原位杂交信号 .结论　临床青光眼滤过手术中使用的 MMC剂量与作用时间 ,可减少成纤维细胞胶原的合成 ,有利于青光眼滤过手术成功率的提高     

金纳米花粒子对体外人成纤维细胞的毒性作用

目的：探讨具有近红外吸收功能的金纳米花粒子对人成纤维细胞的体外细胞毒性作用,为其在生物医学领域的应用提供依据。方法：分离培养人成纤维细胞,采用含不同浓度金纳米花粒子（1.875、3.750、7.500、15.000、30.000 mg·L-^1）的含金培养液进行培养,以不加金纳米粒子组为空白对照组,应用MTT比色法检测其细胞毒效应,倒置
显微镜观察细胞形态。结果：培养液中加入不同浓度金纳米花粒子后,各组细胞相对增殖率(RGR)分别为92.245%、88.980%、86.939%、75.782%和71.756%,加入30.000 mg·L^-1金纳米花组,其RGR与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,各组毒性评级均为一级。倒置显微镜下可见加入低浓度金纳米花粒子的人成纤维细胞形态正常,生长良好。结论：此种具有近红外吸收功能的金纳米花粒子体外细胞毒性具有剂量依赖性,低浓度金纳米花粒子具有良好的生物相容性。     

汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞中bax、bcl-2、TGF-β2mRNA表达的影响

目的 观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon's capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5 mol/LTet的培养液和1640培养液中培养48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞中bax、bcl-2和TGF-β2 mRNA的表达变化.结果 同对照组比较,Tet实验组中bax mRNA的表达量明显升高,bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 一定浓度的汉防己甲素可以通过降低bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量,同时提高bax mRNA的表达量来抑制TCFS的增殖,并可诱导其凋亡,可能成为一种潜在的抗青光眼滤过瘢痕药物.     

汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞中bax、bcl-2、TGF-β2 mRNA表达的影响

目的观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon’s capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5mol/LTet的培养液和1640培养液中培养48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞中bax、bcl-2和TGF-β2 mRNA的表达变化。结果同对照组比较,Tet实验组中bax mRNA的表达量明显升高,bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的汉防己甲素可以通过降低bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量,同时提高bax mRNA的表达量来抑制TCFS的增殖,并可诱导其凋亡,可能成为一种潜在的抗青光眼滤过瘢痕药物。