RT-PCR检测NK1mRNA在哮喘豚鼠气道表达的研究

目的 应用RT-PCR半定量法检测哮喘豚鼠气道神经激肽1受体(NK1)mRNA表达的相对含量.方法 用卵蛋白超声雾化法制作哮喘豚鼠模型,随机分成正常对照组及诱喘组.RT-PCR技术检测(NK1)mRNA,图像分析测定(NK1)mRNA的相对含量.结果 诱喘组(NKl)mRNA的相对含量较正常组明显增多.结论 NK1参与了卵蛋白诱发哮喘的发病机制.     

吸入冷空气对哮喘豚鼠肺内神经激肽 A含量及基因表达的影响研究

目的研究冷空气吸入刺激对哮喘豚鼠血浆及肺组织中神经激肽A(NKA)含量及NKA mRNA表达的影响,并探讨其影响的机制.方法用卵蛋白超声雾化法制作豚鼠哮喘模型;哮喘组15例:按哮喘模型制作要求致敏及诱喘,诱喘后24 h取材.冷空气刺激组15例:致敏及诱喘同哮喘组,于诱喘前5 d、诱喘当天及取材当天(诱喘后24 h),每日吸入冷空气20 min;正常对照组:用生理盐水替代卵蛋白雾化溶液,方法同上.用酶联免疫法检测各组血浆及肺组织中NKA含量;用RT-PCR方法检测肺组织中NKA mRNA的相对含量.结果哮喘组豚鼠血浆、肺组织中NKA含量及肺组织中NKA mRNA的相对含量均明显高于正常组豚鼠,差异非常显著(均P＜0.01);冷空气刺激组哮喘豚鼠,其血浆、肺组织中NKA含量及肺组织中NKA mRNA的相对含量均明高于哮喘组豚鼠,差异显著(均P＜0.05).结论NKA参与了卵蛋白诱发的豚鼠哮喘发病机制;冷空气吸入刺激能显著增加哮喘豚鼠血浆及肺组织中NKA含量;冷空气吸入刺激具有在转录水平上调NKA mRNA表达的作用,由此导致血浆及肺组织中NKA蛋白含量增多.     

神经激肽B在支气管哮喘中的含量变化

目的 :研究哮喘患儿血浆中及哮喘豚鼠模型肺组织中神经激肽B (NKB)含量变化规律 ,探讨NKB与小儿哮喘发病机制的关系。方法 :酶联免疫方法测定 35例不同程度哮喘患儿血浆NKB在哮喘急性发作期及症状缓解期的含量变化 ;在豚鼠哮喘模型上对不同哮喘状态豚鼠肺组织中的NKB含量进行检测和对比分析。结果 :( 1)哮喘患儿急性发作期血浆NKB含量较其自身症状缓解期及正常对照组均明显增高 (P <0 .0 1) ;症状缓解期血浆NKB含量仍高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;( 2 )病情加重 ,患儿血浆NKB含量随之增高 ,与哮喘病情呈显著正相关。重度哮喘急性发作期较轻、中度哮喘急性发作期血浆NKB含量显著增高 (P <0 .0 5 ) ;重度哮喘与轻、中度哮喘缓解期比较 ,血浆NKB含量无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;( 3)哮喘豚鼠肺组织中NKB含量较正常豚鼠显著增高 (P <0 .0 1) ,反复诱喘豚鼠肺组织中NKB含量显著高于诱喘 1次豚鼠 (P <0 .0 1)。结论 :NKB在哮喘患儿血浆及哮喘豚鼠肺组织中的含量变化规律一致 ,与哮喘病情呈显著正相关。提示NKB参与小儿哮喘的发病机制     

NK2受体mRNA在哮喘豚鼠肺组织中表达的研究

目的 研究NK2受体mRNA在哮喘豚鼠气管、支气管及肺组织中的表达.方法 用吸入卵蛋白致敏及激发诱喘方法制作哮喘豚鼠20例;正常对照组10例,以生理盐水替代卵蛋白雾化溶液吸入.用RT-PCR的方法检测肺组织中NK2受体mRNA相对含量;用原位杂交的方法在显微镜下观察NK2受体mRNA在气管、支气管及肺组织中表达的部位及强度同时用光密度对NK2受体mRNA相对含量进行分析.结果 NK2受体mRNA主要分布在气管黏膜下及平滑肌周围;哮喘豚鼠肺组织中NK2受体mRNA相对含量为(1.04±0.112),高于正常对照组豚鼠(0.796±0.30),差异有统计学意义(P＜0.05);哮喘豚鼠气管、支气管黏膜下和平滑肌周围NK2受体mRNA表达的相对含量[OD(9.339±0.817 7)]较正常对照组[OD(2.265±0.74)]明显增高(P＜0.05).结论 哮喘豚鼠气管、支气管黏膜下平滑肌周围NK2受体mRNA相对含量表达上调,肺组织中NK2受体mRNA相对含量增多.     

组胺H1受体拮抗剂对哮喘气道炎症的作用

目的:评价H1受体拮抗剂在哮喘炎症防治中的作用。方法:采用3种治疗方案(生理盐水1 ml/d,酮替芬0.1 mg.kg-1d-1,氯雷他定2 mg.kg-1.d-1),测定3组哮喘豚鼠细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、P-选择素(P-S)、白介素8(IL-8)和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平的变化,以及肺功能损害和组织学改变。结果:氯雷他定治疗后,(1)血浆或血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中sICAM-1,sP-S,ECP和BALF中IL-8水平均较对照组下降(P＜0.05);(2)肺组织气道上皮和血管内皮细胞ICAM-1及IL-8表达明显下调,且氯雷他定效果优于酮替芬(P＜0.05);(3)血白细胞ICAM-1表达明显下调(P＜0.05);(4)动态肺顺应性和潮气量显著提高,气道阻力降低(P＜0.05);(5)气道炎症和嗜酸性粒细胞脱颗粒明显被抑制。结论:新一代的H1受体拮抗剂氯雷他定具有多方面抗炎作用,本研究可为临床防治哮喘气道炎症提供实验依据。     

microRNA-22-3p低表达上调幼年哮喘气道重塑大鼠的NK1R表达

目的 探讨幼年哮喘气道重塑大鼠的microRNA-22-3p(miR-22-3p)表达水平和神经激肽受体1(NK1R)表达水平的相关性.方法 将48只Wistar大鼠分为对照组、模型组、模型+mimic组、模型+mimic-NC组、模型+inhibitor组、模型+inhibitor-NC组.对照组注射生理盐水并吸入空...     

P物质及其受体神经激肽1受体与疼痛的相关性研究

很多疾病均可导致疼痛,如何有效缓解疼痛一直是困扰临床医师的难题。研究发现,P物质是一种十一氨基酸多肽,广泛地分布于神经系统和其他外周组织器官内,其G蛋白偶联受体神经激肽1受体密集分布于脊髓背角浅层。P物质及其受体NK-1受体与疼痛有密切关系。P物质作为兴奋靶组织器官的神经递质,从初级感觉传入纤维终末释放,介导痛觉传递。P物质和NK-1R结合也可以介导痛觉效应。P物质经酶解产生的N端片段和NK-1受体拮抗剂则产生镇痛作用。     

豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的研究

探讨血红素氧合酶 - 1(HO- 1)在豚鼠哮喘模型中的表达特点。将 2 4只豚鼠随机分为 4组 ,每组 6只 :1正常对照组 (A组 ) ;2哮喘即刻激发组 (B组 ) ;3哮喘发作 1周组 (C组 ) ;4哮喘发作 2周组 (D组 )。测定全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)的百分比含量并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察 HO- 1在豚鼠哮喘模型肺组织中的表达特点。发现 HO- 1主要表达在气道上皮细胞 ,各组 HO- 1阳性表达的平均吸光度分别为 0 .0 32±0 .0 0 4、 0 .112± 0 .0 11、 0 .12 3± 0 .0 11和 0 .135± 0 .0 12。哮喘各组 (B、C、D组 ) HO- 1的表达水平均显著高于 A组 (P<0 .0 1)。HO- 1的表达水平与全血 COHb的百分比含量及气道壁 EOS计数均呈显著正相关 (分别为 r=0 .88,P<0 .0 0 1和 r=0 .86 ,P<0 .0 0 1)。结果表明哮喘豚鼠气道上皮细胞 HO- 1的表达水平显著增加 ,提示 HO- 1可能参与了哮喘的发病过程     

哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT1)的表达及动态变化,探讨STAT1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响.方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0 h、24 h、72 h、5 d,以及地塞米松治疗后第5 d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量, 酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT1表达.结果豚鼠在诱喘后各个时相(0 h、24 h 、72 h及5 d) BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P＜0.001).气道上皮细胞中STAT1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P＜0.001; r=0.692,P＜0.01) .地塞米松能抑制上皮细胞STAT1表达(5 d与治疗组相比,P＜0.01).BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT1表达呈负相关(r=-0.499,P＜0.05).结论支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系.     

Zmu-1:DHP豚鼠气道对组胺的敏感性与组胺H1受体表达量的相关性研究

目的　研究Zmu-1：DHP豚鼠气道对组胺诱导产生的反应及气道组胺H1受体的表达量,阐明豚鼠气道敏感性与组胺H1受体数量的关系,为哮喘研究提供具有较高敏感性的速发型过敏的动物模型。方法　通过活体气管插管及雾化组胺气体吸入,测定豚鼠气道阻力和肺动态顺应性;采用离体气管片组胺滴定法,通过气管片收缩测定气管平滑肌对组胺的敏感性;采用同位素标记药物配位法,测定豚鼠气道组织组胺H1受体的密度及平衡解离常数。结果　当豚鼠吸入大于0.5mg/ml雾化组胺时,Zmu-1：DHP豚鼠气道阻力上升率和肺动态顺应性下降率与DHP豚鼠相比,其速度有增大趋势,但未达到显著水平 (P >0 0 5 );两个品系豚鼠雄性个体比雌性的敏感性显著增加（P <0.01）。当组胺浓度为10-5M和10-4M时,Zmu-1：DHP豚鼠气管片平滑肌的收缩率显著大于DHP豚鼠 (P <0.01-0.05 )。两个品系豚鼠气道组胺H1受体的密度及其平衡解离常数无显著差异(P >0 0 5 )。 结论　在一定的组胺浓度范围内,Zmu-1：DHP豚鼠气道平滑肌对组胺的敏感性大于DHP豚鼠,雄性豚鼠的敏感性大于雌性豚鼠。豚鼠气道对组胺的敏感性与其组胺H1受体数量未表现出显著的相关性,提示气道反应可能还受到平滑肌膜上其它受体和化学介质的作用。     

哮喘豚鼠脑内组胺含量的变化及中枢组胺H3受体的调节作用

目的　检测豚鼠哮喘急性发作时脑内组胺含量的变化 ,观察中枢组胺H3受体在哮喘未发作时对脑内组胺含量的影响。方法　哮喘急性发作组豚鼠给予腹腔注射卵蛋白致敏 ;阴性对照组豚鼠给予腹腔注射等量生理盐水 ;THIO组豚鼠在哮喘未发作期侧脑室内注射H3受体拮抗剂thioperamide (2 0 μg) ;生理盐水组豚鼠在哮喘未发作期侧脑室内注射等量生理盐水。断头处死动物后 ,在冰台上迅速分离出下丘脑、大脑皮质和海马 ,称重 ,匀浆 ,荧光法测定组胺含量。结果　哮喘急性发作组 ,下丘脑和大脑皮质中的组胺含量高于阴性对照组 ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ;海马内组胺含量差异无显著意义 (P >0 0 5 )。哮喘未发作期侧脑室注射thioperamide后 ,下丘脑和大脑皮质中的组胺含量均升高 ,与生理盐水组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,海马内组胺含量无显著变化 (P >0 .0 5 )。结论　中枢组胺含量与哮喘发作有关 ,脑内组胺H3受体可能通过调节组胺含量参与哮喘发病的病理生理过程     

Effects of tripholide on airway responsiveness in asthma in guinea pigs

TripholideextractedfromaChineseherbhasbeenwidelyusedasanimmuneinhibitortotreatsystemiclupuserythematosus,rheumatoidarthritisandnephriticsyndromeinChina.Inpatientswithasthma,thereareimmunefunctionaldisordersincludingtheincreaseoftheratioofCD4/CDSTcells,activationofThZ--likecellsandexcessiveproductionofThZ--likecytokinessuchasIL--5,IL3andgranulocyte--macrophageclony--stimulatingfactor(GM--CSF).Thesecytokinescaninduceeosinophiliaandactivationofeosinophilsintheairwayandplayanimportantrolei…     

雷公藤甲素对哮喘动物模型气道反应性的作用及机理

用卵白蛋白致敏和激发豚鼠，形成哮喘动物模型（哮喘组）。用雷公藤甲素（简称“雷公藤组”）处理哮喘模型后，测定以上二组和正常对照组豚鼠对组织胺的气道反应性、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中的嗜酸性粒细胞（Ｅｏｓ）绝对计数、低密度Ｅｏｓ（ＨＥｏｓ）百分比以及ＥＡＬＦ中的嗜酸性粒细胞活力增强活性（ＥＶＥＡ）。发现哮喘组气道反应性非常显著高于正常组（Ｐ＜０．００１）、雷公藤组（Ｐ＜０．０１），雷公藤组显著高于正常组（Ｐ＜０．０５）。而且，哮喘组Ｅｏｓ绝对计数和ＨＥｏｓ％均与气道反应值（ＰＣ２０值）显著相关（ｒ＝－０．７６和－０．８８，Ｐ＜０．０５和０．０１）。雷公藤甲素处理不能抑制哮喘模型肺内的Ｅｏｓ聚集，但却降低ＨＥｏｓ％至正常组水平。哮喘组ＢＡＬＦＥＶＥＡ显著高于对照组、雷公藤组。哮喘组ＢＡＬＦＥＶＥＡ与ＨＥｏｓ％呈显著的正相关（ｒ＝０．７５，Ｐ＜０．０５）。以上结果表明，雷公藤甲索具有降低哮喘动物模型气道反应性的作用，其机理可能与减少“活化”的ＨＥｏｓ有关。雷公藤甲素可能有潜在的临床应用价值。     

低氧吸入治疗对哮喘缓解期豚鼠气道平滑肌张力的影响

目的探讨低氧吸入治疗对哮喘的机制,为临床应用低氧吸入治疗儿童哮喘提供部分理论依据。方法采用10%卵蛋白(OA)腹腔注射致敏和5次1%OA吸入诱发复制哮喘豚鼠动物模型,设立正常对照组、哮喘对照组和低氧吸入治疗组3组。利用(13±0.5)%O2/N2低氧混合气体治疗干预,结束后3组均做血清皮质醇、支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和低密度EOS(HEOS)百分率以及气道平滑肌张力的测定,并进行统计学分析。结果(1)正常对照组和低氧吸入治疗组的血清皮质醇含量均高于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.01),但低氧吸入治疗组值与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05);(2)哮喘对照组和低氧吸入治疗组BALF中EOS绝对值及HEOS百分率均数均高于正常对照组,低氧吸入治疗组低于哮喘对照组,差异有统计学意义(P<0.01);(3)哮喘对照组气道平滑肌张力明显增高,而低氧吸入治疗组降低;(4)肺组织病理学检查显示,低氧吸入治疗组较哮喘对照组病理变化明显改善,主要表现为气道EOS浸润减少,肺泡间隔水肿减轻,Ⅱ型肺泡上皮细胞内板层小体接近正常。结论低氧吸入治疗能使哮喘缓解期豚鼠血清皮质醇升高,从而使其BALF中EOS数和活化的EOS(HEOS)减少,气道变应性炎症明显好转,气道高反应性(AHR)得以恢复,有利于预防哮喘复发和哮喘发作症状的减轻。     

糖皮质激素对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

摘要：目的探讨地塞米松减轻哮喘气道炎症的作用及其分子机制。方法采用卵白蛋白致敏法建立豚鼠哮喘模型，以定喘止咳片做药物对照，治疗1周后记录各组的诱喘潜伏期，并进行肺组织病理学检查，同时分离BALF液中T淋巴细胞采用流式细胞仪定量检测方法（FITC—AnnexinV／PI染色法）测定其凋亡率。结果地塞米松能显著延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期、减轻气道炎症、促进BALF中T淋巴细胞的凋亡，作用明显优于定喘止咳片（P〈O．05）。结论地塞米松有明确的抗炎平喘作用，促进气道T淋巴细胞凋亡可能为其主要的作用机制之一。     

Dynamic changes in infiltration and apoptosis of eosinophils in airway of asthmatic guinea pigs

Bronchialasthmaisachronicinflammatorydisorderinwhichmanykindsofcellsareinvolved.Amongthecells,eosinophilsplaytheimportantrole.Inadditiontotheincreaseofthedifferentiationandmaturingofeosinophilsinthebonemarrow,theprolongationofthelifespanandinhibitionoftheapoptosisofthesecellswerethoughttocontributetoeosinophiliaintheairwayofasthma[IJ.Inthisstudy,thedynamicchangesoftheeosinophilicaccumulationandapoptosiswereinvestigatedwithinsitutailing,examinationofthebronchoalveolarlavage(BAI-F)andhistologi…     

豚鼠耳蜗SP和SP受体分布的免疫组织化学研究

研究Ｐ物质（ＳＰ）和ＳＰ受体在豚鼠耳蜗的分布。方法：采用兔抗ＳＰ血清，兔抗ＳＰ受体血清和免疫组织化学ＡＢＣ法及葡萄氧化酶－ＤＡＢ－镍（ＧＤＮ）染色技术，结果：在Ｃｏｒｔｉ器各圈均可见ＳＰ样免疫反应阳性的纤维和终末，以顶回及底回分布密集，阳性纤维从骨螺旋板向内外毛细胞区呈放射状分布，纤维呈串珠状，含明显的膨体，阳性的终末位于内，外毛细胞的底部，耳蜗各回均可见ＳＰ受体样阳性反应，其分布状态与ＳＰ阳性母     

哮喘豚鼠肺组织PKC的表达及对TXA2释放的影响

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在哮喘发病中的作用。方法：采用卵蛋白雾化吸入致敏哮喘模型，在诱发哮喘２４ｈ后放射性同位素标记方法测定哮喘豚鼠肺组织总ＰＫＣ活性及膜活性变化，采用免疫组织化学的方法检测肺组织ＰＫＣ的表达，体外检测ＰＫＣ活化剂ＰＭＡ和抑制剂Ｈ－７对肺组织血栓烷Ａ２（ＴＸＡ２）释放的影响。结果：①哮喘组肺组织ＰＫＣ活性显著增加；②ＰＭＡ引起了肺组织ＴＸＡ２的释放的增加，而Ｈ－７则抑制了ＰＭ     

豚鼠脑干听觉中枢及内侧膝状体P物质受体阳性产物的分布

研究了Ｐ物质受体在豚鼠听觉脑干中枢及内侧膝状体的分布。采用兔抗ＳＰＲ血清和免疫组织化学ＡＢＣ法及葡萄糖氧化酶－ＤＮＡ－镍染色技术。结果；耳蜗核，上橄榄复合体，下丘及内侧膝状体广泛分布ＳＰＲ理性神经元，纤维及终末。