家蝇幼虫抗茵肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用

目的从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽，观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽，然后经过研磨、离心和层析等过程，分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽，采用流式细胞术（FCM）分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响。结果通过DNA含量直方图可以看出，实验组的速殖子数少于对照组，且两组分布参数存在较明显差异。正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少，抗菌肽组则相反，处于M1期的较M2期的多，且M1峰值明显前移。结论家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽，其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫。     

家蝇抗菌肽对弓形虫的抑制作用研究

目的研究家蝇抗菌肽对弓形虫速殖子的抑制作用。方法对家蝇幼虫针刺感染细菌，诱导其产生抗菌肽，以离心法提取其血淋巴中所含的抗菌肽。结果家蝇血淋巴中抗菌肽有杀伤弓形虫速殖子的作用。结论提取的血淋巴中含有抑制弓形虫的成分。     

昆虫抗菌肽对人淋巴瘤细胞杀伤作用及筛选

目的 筛选对人淋巴瘤细胞Daudi有抑制或杀伤作用的昆虫抗菌肽。方法 针刺感染大肠埃希菌以诱导昆虫(家蝇幼虫、成虫、蛹)产生抗菌肽,再经研磨、离心、层析等步骤提取其血淋巴中抗菌肽。将所提取的抗菌肽作用于肿瘤细胞Daudi,以流式细胞仪检测其作用效果。结果 3种抗菌肽对肿瘤细胞Daudi均有杀伤力,家蝇成虫的荧光吸收率为97.86%,幼虫为85.45%。以家蝇成虫的效果更为明显。结论 家蝇成虫抗菌肽可作为潜在的抗人淋巴肿瘤药物开发。     

家蝇蛹抗弓形虫抗菌肽的分离纯化

目的从家蝇蛹血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇蛹大量表达抗菌肽，然后经过研磨、离心和AKTA^TM purifier层析等步骤，将家蝇蛹抗菌肽进行分离纯化，采用血细胞计数法和MTT比色法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽。结果经ResourceS阳离子柱层析，测定280m处紫外吸收值，在保留体积为9．4ml处出现1个紫外吸收峰，经检测对弓形虫速殖子有杀伤作用，再将其用于Superdex G75凝胶柱层析后，测定280m处紫外吸收值，出现6个紫外吸收峰，发现第6个峰具有抗弓形虫作用。结论家蝇蛹血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽。     

家蝇幼虫血淋巴不同Tricine-SDS-PAGE分析方法比较

目的用3种不同的三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。方法分别用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法,分离胶中有尿素组分的三层胶方法,分离胶中有甘油组分的三层胶方法分析家蝇三龄幼虫血淋巴。结果家蝇幼虫血淋巴中含有丰富的小分子多肽,用不含尿素也不含甘油的分离胶组成的普通Tricine-SDS-PAGE方法不能有效分离分子量在<10.700 kDa的小分子蛋白或多肽;分离胶中有尿素组分的三层胶方法虽能清晰分离家蝇幼虫淋巴中<16.949kDa的小分子蛋白或多肽,但对其分子量的测定可能不够准确;而分离胶中有甘油组分的三层胶方法既能很好分离>14.4 kDa的蛋白,也能清晰分离<8.159 kDa的小分子多肽,并能较准确的反映其分子量大小,用于分析家蝇幼虫血淋巴效果较好。结论分析家蝇幼虫血淋巴应采用分离胶中有甘油组分的三层胶的电泳方法。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽分子鉴定

目的 十二烷基磺酸钠对家蝇幼虫分泌型抗菌肽进行分子鉴定。方法 对纯化所得的家蝇幼虫分泌型抗菌肽使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及肽指纹图谱方法进行分子鉴定。结果 SDS-PAGE结果表明,纯化得到的2个抗菌组分,主要成分的分子量在14.157 kDa左右,另一组分的分子量为7.579 kDa,但蛋白含量明显低于上一组分;分别将这2个抗菌肽分子命名为家蝇幼虫分泌型抗菌肽Ⅰ和抗菌肽Ⅱ,抗菌肽Ⅰ经肽指纹图谱分析,精确分子量为14.264 kDa,其与溶菌酶序列有一定同源性,序列覆盖率为20%,但两者生物学特性不同,推测为不同蛋白质。结论 从家蝇幼虫分泌物中分离得到的抗菌肽与溶菌酶有一定同源性,但生物学特性有差异。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌抑制作用

目的探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽的抗菌机制。方法利用透射电镜、十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及流式细胞仪等技术初步探索了家蝇幼虫分泌型抗菌肽对大肠埃希菌作用机理。结果经20、40及80μg/mL抗菌肽作用后,大肠埃希菌液的A570值分别增加了0.170、0.032、-0.030,对照组增加了0.363;菌体外胞内酶含量各组分别增加0.148、0.230、0.324,对照组无变化;电镜观察显示抗菌肽可使菌体皱缩,细胞内容物外泄;SDS-PAGE检测发现,作用后菌体的某些蛋白条带浓度降低或消失,有新的条带出现;流式细胞仪显示抗菌肽作用后处于细胞周期中复制期(R期)的细菌量只占总数的11.89%,而对照组占45.25%,比实验组高33%。结论家蝇幼虫分泌型抗菌肽可通过改变细菌细胞膜的通透性,抑制细菌某些蛋白的合成等发挥抗菌作用。     

家蝇抗菌活性物质研究进展

  目的  探讨家蝇幼虫体外分泌型溶菌酶的表达及分泌物抗菌抗炎活性。  方法  收集家蝇3日龄幼虫体外分泌物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）实验检测溶菌酶表达,并采用比浊法测定溶菌酶含量;用超滤管对分泌物进行纯化,得到分子量为10～30 kDa组分并进行抑菌曲线测定和细胞水平抗炎活性筛选。  结果  家蝇幼虫体外分泌物中存在溶菌酶,含量为（0.432 ± 0.01）μg/mg;家蝇幼虫体外分泌物中的10～30 kDa组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长均存在抑制作用;与对照组[（0.42 ± 0.02）μmol/L]比较,脂多糖组RAW264.7细胞中NO含量[（15.34 ± 2.05）μmol/L]明显升高,分泌物组RAW264.7细胞中NO含量[（7.32 ± 0.62）μmol/L]明显下降,表明家蝇幼虫体外分泌物中的10～30 kDa组分具有一定的抗炎功效。  结论  家蝇幼虫体外分泌物10～30 kDa组分中含有溶菌酶,具有抗菌抗炎活性。     

STAg不同途径免疫对小鼠弓形虫感染保护作用

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻、灌胃和皮下注射免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用。方法 40只6~7周龄BALB/c小鼠随机分为4组,前3组分别以20μg STAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理。末次免疫后14 d,用速殖子2×10⁴个/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康状况,记录体重,计算存活率。攻虫后30 d颈椎脱位处死小鼠,计数脾和脑组织速殖子。结果 滴鼻免疫小鼠的健康状况好于其他组,存活率(70%)高于皮下(60%)、灌胃(60%)和对照组(40%)。滴鼻组脾虫荷为369.48,皮下注射组脾虫荷为386.94,显著低于灌胃组(630.40)和对照组(664.93)(F=3.611,P<0.05)。滴鼻组(36.45)、灌胃组(34.85)和皮下注射组(40.22)脑虫荷差异无统计学意义(F=1.999,P>0.05),但均显著低于对照组(57.32)(F=1.999,P<0.05)。结论 20μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导了较强的抗弓形虫感染作用,优于皮下和灌胃免疫。     

家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠免疫功能影响

目的 探讨家蝇幼虫分泌型抗菌肽对正常小鼠免疫功能影响.方法 选用BalB/c小鼠,随机分为对照组(生理盐水)和家蝇幼虫分泌型抗菌肽(腹腔注射)5、10、20mg/kg组,每天1次,7d后处死小鼠,测量体重、胸腺/体重比值、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、刀豆蛋白A诱导小鼠脾T淋巴细胞转化率、碳粒廓清能力及半数溶血值.结果 10、20mg/kg抗菌肽组小鼠脾脏指数分别为(7.41±0.93)和(7.56±1.05),胸腺指数分别为(3.80±0.69)和(3.51±1.02),巨噬细胞吞噬率为(38.81±7.88)%和(40.16±9.74)%,脾脏酸性磷酸酶活性分别为(268.60±36.64)、(270.48±54.62)U/g,脾T淋巴细胞转化率分别为(0.31±0.11)%和(0.32±0.09)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.05).抗菌肽组小鼠体重及血清半数溶血值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 家蝇幼虫分泌型抗菌肽对小鼠具有增强免疫功能作用.     

家蝇幼虫抗菌肽对K562细胞膜的质量浓度阈值作用

目的探讨家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用。方法通过针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇3龄幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化家蝇3龄幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法和光镜观察法筛选对K562有抑制作用的抗菌肽;用不同质量浓度的峰5、峰8处理K562细胞,采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率和生长曲线的变化;用光学显微镜和荧光显微镜检测细胞膜形态的变化;用荧光分光光度计检测细胞膜荧光素的渗漏;用激光共聚焦显微镜观察细胞膜的损伤程度。结果低质量浓度(<50μg/ml)对细胞存活率无明显影响,细胞整体形态变化不大,细胞荧光素渗漏较少[(18.95±0.05)～(22.49±0.68)],细胞损伤甚微;高质量浓度(≥50μg/ml)使细胞存活率明显下降,细胞形态变化逐渐增大,细胞荧光素渗漏较多[(62.77±4.08)～(70.81±0.18)],甚至大分子荧光素DextranFITC可以通过。结论家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用存在质量浓度阈值,低质量浓度时可引起膜通透性增加,高质量浓度时可引起细胞膜严重损伤。家蝇幼虫抗菌肽可能通过直接杀伤作用抑制K562细胞生长,其作用机制首先是通过对膜作用,然后可能进一步对膜作用从而使膜上孔洞不断扩大或者进入细胞后经过其他途径抑制K562细胞生长。     

舍蝇抗菌肽的提取及其对肿瘤细胞生长的抑制作用

目的：研究含蝇抗菌肽的提取对肿瘤细胞生长的抑制作用；方法：对舍蝇幼虫采用针刺损伤及金黄色葡萄球菌感染诱导方法，并通过研磨、加热、阳离子交换柱层析及Sephadex G—50葡聚糖凝胶柱层析等步骤提取抗菌肽；结果：经SDS—PAGE电泳分离到2条带，分子量分别为4kD，9．6kD；结论：提取的舍蝇抗菌肽能有效地抑制人胃癌细胞MGC80—3和BGC—823，人乳腺癌细胞MCF—7及人肺癌细胞SPC—A—1的体外增殖，并且呈浓度依赖关系。     

昆虫抗菌肽两种提取方法的比较

目的 检测用两种不同方法提取的昆虫抗菌肽对作用细胞的影响。方法 对家蝇幼虫采用针刺感染大肠埃希菌诱导产生抗菌肽，经研磨、层析提取其抗菌肽，并通过流式细胞仪测定用生理盐水或磷酸缓冲液这两种方法提取的抗菌肽对癌细胞和正常细胞的影响。结果 两种方法处理的家蝇幼虫抗菌肽对人髓样白血病细胞（K562）均有杀伤作用；而对正常人淋巴细胞，生理盐水处理的抗菌肽比缓冲液伤害作用小。结论 缓冲液可能对细胞造成高渗作用促进细胞死亡；而生理盐水无此作用，对细胞不造成伤害。     

黄粉虫幼虫抗肿瘤细胞K562抗菌肽的分离纯化

目的从黄粉虫幼虫体内分离纯化具有抗肿瘤细胞K562的抗菌肽。方法通过超声诱导黄粉虫幼虫大量表达抗菌肽。然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化黄粉虫幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法和光镜观察法筛选对K562有杀伤作用的抗菌肽。结果离心上清液上样固相萃取柱,经10％、30％、80％的乙腈水溶液洗脱,只有80％的乙腈水溶液分离组分有活性（P〈O．01）。该活性组分经反相高效液相色谱纯化后分离出5个具有抗肿瘤活性的峰物质,这5个峰活性都较强（P〈0．01）,其中峰9、峰4能初步确定为抗菌肽,其他3种有待于进一步的实验证明。结论黄粉虫幼虫体内存在抗肿瘤细胞K562的抗菌肽和抗菌物质,而且不止一种。     

5种杀虫剂对家蝇的抗性测定研究

目的为有效控制家蝇的危害，了解家蝇对5种常用卫生杀虫剂的抗性现状。方法采用点滴法，检测家蝇现场品系对敌敌畏、三氯杀虫酯、氯菊酯、高效氯氰菊酯和溴氰菊酯对5种杀虫剂的抗药性水平。结果家蝇对5种常用卫生杀虫剂的抗性水平均不同：家蝇对三氯杀虫酯和氯菊酯的抗性属低抗水平，LD50分别为2．9176、0．0134μg／只，溴氰菊酯和高效氯氰菊酯属中抗水平，LD50分别为0．0295、0．0039μg/只，敌敌畏属高抗水平，LD50为0．1311μg／只。结论家蝇的现场品系对5种杀虫剂存在不同程度的抗性，对敌敌畏与部分拟除虫菊酯类杀虫剂产生了明显的抗性，而对三氯杀虫酯和氯菊酯相对敏感，应通过交替、轮换和复配使用杀虫剂控制和延缓抗药性发展。     

六组昆虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳

目的分析家蝇成虫、幼虫和蛹,淡色库蚊、美洲大蠊、德国小蠊6组昆虫的抗菌肽成分。方法通过针刺感染大肠杆菌诱导各种昆虫及各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯凝胶电泳分析其组成。结果淡色库蚊成虫(5条带)、家蝇蛹(4条带)、家蝇成虫(5条带)、家蝇幼虫(7条带)、美洲大蠊和德国小蠊(各3条带)。结论家蝇幼虫的抗菌肽种类较多,可能与其抗菌、抗肿瘤效果有关。     

家蝇成虫抗菌肽对4种肿瘤细胞的作用观察

目的观察家蝇成虫抗菌肽对肿瘤细胞的作用效果。方法针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇成虫产生抗菌肽,经研磨、离心、层析等步骤提取其抗菌肽,将其作用于肿瘤细胞109、K562、Daudi及T24,以流式细胞仪检测其作用效果。结果该抗菌肽对4种肿瘤细胞的有效杀伤力M1均在85%以上。结论家蝇成虫抗菌肽可作为潜在的抗肿瘤药物开发。