重组大鼠肝再生增强因子对系膜细胞增殖及分泌转化生长因子β的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR)对大鼠肾小球系膜细胞在白介素1β（IL－1β）刺激下生物活性的变化。方法 用^3H-TdR掺入法检测大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖情况，用ELISA法检测大鼠肾小球系膜细胞培养上清中TGF－β蛋白的含量。结果 rrALR在0.005pg/ml到0.1ng/ml的浓度范围内对IL－1β刺激下的GMC的增殖以及TGF－β的分泌有促进作用，并呈一定量效关系。而rrALR与无IL－1β刺激的大鼠GMC共培养则与对照组差异无显著性意义。结论 rrALR可促进IL－1β刺激下的GMC增殖及TGF－β的产生，具有炎症协同作用，同时对不同靶细胞具有不同作用。     

保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的增殖因子和细胞外基质成分的影响

目的：在肾小球硬化的进展中，肾小球内压升高是一种主要的启动因子，小球内压升高能增加系膜细胞的伸展强度。本研究探讨培养的大鼠系膜细胞中，机械性伸展对TGF－β和细胞外基质成分mRNA表达的影响，以及中药保肾片的抑制作用。方法：用机械性伸展装置刺激培养的肾系膜细胞，并在培养液中加入喂服中药保肾片大鼠的血清，用Northern blot分析TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA的表达。结果：机械性伸展以时间依赖性方式刺激TGF－β1和TGF－β3的mRNA表达，同时也发现机械性伸展能诱导系膜细胞外基质的主要成分I型、Ⅳ型胶原及纤维结合素的mRNA表达亢进，中药保肾片对系膜细胞机械性伸展诱导的细胞增殖因子TGF－β1和细胞外基质主要成分I型、Ⅳ型胶原的mRNA表达具有明显的抑制作用。结果：机械性伸展刺激能够诱导产生TGF－β1、3及I型、Ⅳ型胶原mRNA表达。中药保肾片延缓慢性肾衰竭的作用机理与抑制细胞增殖因子和细胞外基质成分mRNA的表达有关。     

通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素β1、白细胞介素10表达的影响

目的：探讨中药复方“通脉口服液”对大鼠肾小球系膜细胞（MsC）增殖及其产生白细胞介素融（IL-β1）和白细胞介素10（IL-10）的影响。方法：应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定通脉口服液含药血清对过度增殖状态下肾小球系膜细胞增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录聚合酶链反应（RT—PEn）法测定系膜细胞IL—β1 mRNA和IL-10mRNA表达及其蛋白水平。结果：通脉口服液含药血清在5％～20％浓度范围明显抑制脂多糖（LPS）刺激的系膜细胞增殖；在观察的2个时间点（6h、24h）上，LPS均可刺激系膜细胞IL-β1 mRNA的表达及提高IL-β1 分泌水平，在6h时间点上LPS可刺激系膜细胞IL-10mRNA的表达及提高IL-10分泌水平；而通脉口服液在10％浓度上能够明显抑制LPS诱导的系膜细胞IL-β1 分泌及其mRNA的表达，在6h时间点上促进LPS诱导的系膜细胞IL-10分泌及其mRNA的表达。结论：中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及LPS诱导的系膜细胞IL-β1 的产生，促进LPS诱导的系膜细胞IL-10的产生；肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之-。     

环孢素A对大鼠肾转化生长因子β1、肾素mRNA的影响

目的：探讨环孢素A（CsA)慢性肾毒性的发生机理。方法：给予进正常饮食或低盐饮食的大鼠灌服CsA 30mg.kg^-1.d^-1,采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）研究CsA对大鼠肾内转化生长因子β1（TGF－β1）及肾素mRNA表达的影响。结果：给予CsA的大鼠均有肾内TGF－β1 mRNA,肾素mRNA表达的增加，给予低盐饮食的大鼠这些改变更为明显。结论：CsA的慢性肾毒性与肾内TGF－β1 mRNA，肾素mRNA表达的增加有关。β     

白细胞介素13对肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素1β表达的影响

目的：探讨白细胞介素13（IL－13）对体外培养的大鼠系膜细胞的增殖及其产生白细胞介素1β（IL-1β）的影响。方法：用四甲基偶氮唑（MTT）法测定系膜细胞增殖,用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）及酶联免疫吸附（ELISA）法测定系膜细胞IL－1β mRNA表达IL-1β蛋白水平。结果IL－13在1．0,10,100ng/ml浓度范围呈剂量依赖性地抑制系膜细胞的增殖。含5％小牛血清（FCS）的RPMI 1640培养状态下的系膜细胞检测不出IL－1β,IL－13在抑制系膜细胞的增殖的相应浓度坷显著地抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNAg表达及L-1β分必,IL－13在10ng/ml浓度时即可几乎完全抑制LPS诱导的系膜细胞IL－1β mRNA表达,结论：IL－13对体外培养的系膜细胞增殖及炎症效应具有抑制作用。     

TGFα和EGF对前列腺癌细胞系EGFR表达的调控作用

目的：探讨转化生长因子（TGF）α和表皮生长因子（EGF）对前列腺癌细胞系中表皮生长子受体（EGFR）表达的调控作用。方法：采用RT－PCR和Western印迹法分别对TGFα和EGF刺激前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、ARCaP后EGFR mRNA表达及其蛋白水平进行定量分析。结果：EGF引起前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、ARCaP的EGFR mRNA升高2－5倍,TGFα引起各细胞系EGFR mRNA升高2－10倍。TGFα使各细胞系EGFR不同程度升高;EGF处理的LNCaP EGFR蛋白水平略升高,PC3、ARCaP EGFR蛋白水平降低。结论：TGF／EGF-EGFR通路在前列腺癌发生发展中起重要作用;非依赖型前列腺癌中TGFα－EGFR自分泌环的作用可能强于EGF－EGFR自分泌环。     

转化生长因子β1反义RNA对肾小球系膜细胞基质合成及分泌的影响

目的：观察转化生长因子beta1(TGF-β1）反义RNA对系膜细胞基质合成的影响。方法：构建含TGF－β1反义RNA的重组腺病毒，将重组腺病毒转染系膜细胞，用Northern blot检测转染系膜细胞TGF－β1及ColIV mRNA的含量，用免疫组化半定量分析转染的系膜细胞中TGF－β1，纤连蛋白（FN）及胶原（Col)IV蛋白水平，并与无转染的系膜细胞对照组比较其表达的变化。结果：构建了含TGF－β1反义RNA的重组腺病，重组反义TGF－β1腺病毒转染系膜细胞后，与对照组相比，在第24hTGF-β1及Col IV的mRNA无明显抑制，在48hTGF－β1及Col IV mRNA抑制率分别为22．5％，18．2％，72h TGF-β1及Col IV mRNA抑制率分别为29．5％，27．3％，免疫组织化学半定时结果显示；与对照组相比，在48h始转系膜细胞TGF－β1，FN及ColIV蛋白含量开始下降，48h TGF-β1，FN及Col IV蛋白抑制率分别为16．5％，18．2％及14．6％，72h TGF－β1，FN及ColⅣ蛋白抑制率分别为23．5％，27．3％，26．8％。结论：重组反义TGF－β1可抑制系膜细胞合成细胞外基质，在肾小球肾炎及肾小球硬化的研究及治疗中有潜在的应用价值。     

雷公藤内酯醇对AngⅡ介导的肾小球系膜细胞核因子-κB活化及MCP-1表达的影响

目的：观察不同剂量雷公藤内酯醇对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的肾小球系膜细胞（GMC）核因子-κB（NF-κB）活化及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达的影响，探讨雷公藤内酯醇抑制肾小球系膜细胞炎症因子表达的可能机制。方法：分离培养大鼠GMC，用10^-6mol／L AngⅡ刺激GMC，将培养的大鼠GMC随机分为5组：正常培养对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ和3种不同浓度的雷公藤内酯醇共孵育组。分别采用酶联免疫激光扫描共聚焦显微镜、ELISA、RT—PCR法、Western Blot法，检测GMC内NF-κB p65核易位阳性率、细胞培养上清液中MCP-1水平、GMC内MCP-1 mRNA表达及ⅠκBα蛋白表达水平。结果：雷公藤内酯醇呈剂量依赖性下调AngⅡ介导的大鼠GMC内NF-κB p65水平，抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC MCP-1及MCP-1 mRNA的表达，抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC内ⅠκBα蛋白表达下调。结论：雷公藤内酯醇能够抑制AngⅡ诱导的大鼠GMC ⅠκB的磷酸化降解及NF—κB活化；抑制AngⅡ诱导的大鼠GMCMCP-1 mRNA表达MCP-1分泌。     

高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞Smad7的表达及姜黄素对其表达的影响

目的：观察高糖刺激下大鼠肾脏系膜细胞（MC）smad7的表达及姜黄素对Smad7表达的影响。方法：MC分6组，对照组给予正常培养液，4组给予含30mmol／L葡萄糖的培养液，分别于6、12、24、48h后收集细胞，另1组给予含30mmol／L葡萄糖和33．33μmol／L姜黄素的培养液共孵育6h后收集细胞。分别用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）和Western杂交分析法检测各组系膜细胞Smad7 mRNA和蛋白的表达情况。结果：正常MC有丰富的Smad7 mRNA表达，高糖刺激后表达明显增加，于6h达到高峰，Smad7蛋白的变化趋势与mRNA相同。MC加姜黄素共孵育后，Smad7 mRNA表达增加，高糖刺激6h组加或不加姜黄素，其吸光度相对值分别为1．113±0．124、2．235±0．356，Smad7蛋白吸光度值分别为12556±1335、24336±1866。结论：高糖刺激下，系膜细胞Smad7mRNA和蛋白表达呈时间依赖性，姜黄素可诱导高糖刺激下的系膜细胞Smad7表达，从而抑制转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）目的基因的转录。     

增塑剂对人腹膜间皮质细胞细胞外基质合成和分泌的影响

目的：探讨增塑剂邻苯二甲酸二辛酯（DEHP）与腹膜硬化的关系和可能机制。方法：分离人腹膜间皮细胞（HPMC）作体外培养，选择3种不同浓度的DEHP连续刺激5d，同时设阴性对照，分别在第1、5天进行检测。以^3H－脯氨酸掺入法测定细胞总胶原的合成和分泌；ELISA法检测培养液中纤连蛋白（FN）的含量；FN－mRNA、I型胶原mRNA(Co I-mRNA)、Ⅲ型胶原mRNA(Co Ⅲ-mRNA）和转化生长因子（TGF）－β1mRNA的表达采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法测定。结果：（1）HPMC表达FN、层连蛋白（LN）、Co Ⅲ和TGF－β1；（2）HPMC在不同浓度DEHP刺激下第5天时培养液上清FN及胶原的分泌量明显增加，其中高浓度组与对照组相比差异有显著性意义（P＜0．05）；（3）不同浓度DEHP刺激HPMC下在第5天时FN－mRNA、CoI-mRNA和CoⅢ-mRNA的表达与对照组相比均明显增加，差异有显著性意义，但各浓度之间差异无显著性意义；（4）不同浓度的DEHP刺激HPMC24h均引起TGF－β1mRNA表达增加，第5天时表达消失。结论：体外研究证实DEHP可促进人腹膜间皮细胞合成和分泌细胞外基质，且有一定的时间和剂量依赖性。早期可能通过TGF-β1介导。其在长期腹膜透析患者腹膜硬化的发生中可能起了一定作用。     

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞细胞外基质合成与降解的影响

目的 研究甲状旁腺素（PTH）对人肾小管上皮细胞（HK-2）合成分泌Ⅲ型胶原、纤连蛋白以及对纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）、基质金属蛋白酶1（MMP-1）、金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）基因表达的影响,以探讨PTH在肾间质纤维化发病机制中的作用。 方法 HK-2细胞培养于含5％ FBS的DMEM-F12培养液中,加入终浓度为0、10-12、10-11、10-10、10-9、10-8 mol/L PTH的培养液刺激HK-2细胞48 h,或10-8 mol/L PTH刺激HK-2细胞不同时间（0、12、24、48、72 h）。应用半定量RT-PCR法检测细胞中Ⅲ型胶原、纤连蛋白、PAI-1、MMP-1、TIMP-1基因的表达;Western印迹法检测HK-2细胞中Ⅲ型胶原的蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中纤连蛋白的含量。 结果 PTH 呈剂量和时间依赖性促进HK-2细胞中Ⅲ型胶原、纤连蛋白、PAI-1、TIMP-1 mRNA的表达,抑制MMP-1 mRNA的表达,MMP-1/TIMP-1 比值降低。PTH呈剂量和时间依赖性增加HK-2细胞中Ⅲ型胶原的蛋白表达及细胞培养上清液中纤连蛋白的含量。 结论 PTH通过促进HK-2细胞中PAI-1、TIMP-1的基因表达,抑制MMP-1的基因表达,导致细胞外基质合成增加而降解减少。     

Discrepant effects of vasoconstrictors on the growth of early passaged cultured rat mesangial cells

Summary: Mesangial cell growth stimulation by endothelin (ET) and arginine vasopressin (AVP) has been reported, but only in studies using late (3 times) pasaged cells. In the present study, we examined the effects of ET, AVP and platelet activating factor (PAF) on the proliferation of early (<3 times) passaged cultured rat mesangial cells which maintained their original characteristics. Cell growth was estimated by [³H]-thymidine incorporation into DNA and by counting cell nuclei. After 48 h preincubation in minimal essential medium containing 0.5% fetal calf serum, ET-1 (1-100 nmol/L), AVP (100 pmol/L-1 μmol/L) or PAF (1–100 nmol/L) was added to the incubation medium. In contrast to studies using late passaged cells, ET-1 attenuated and AVP did not increase thymidine uptake (ET-1: 18.4% inhibition at 10 nmol/L) or cell counts in early passaged cells, while the growth stimulatory effects of these agents were reproduced in late passaged cells. Platelet activating factor showed definite stimulation of cell growth in both early and late passaged cells in a dose-dependent manner. These data strongly suggest that ET-1 attenuates, and AVP does not stimulate, the cell growth of original mesangial cells. the PAF-induced cell growth seems to be the constant feature of mesangial cells in vivo.     

地塞米松对骨髓间充质细胞增殖及成骨、成脂分化的效应

目的 探讨不同浓度地塞米松(dexamethasone,DEX)作用不同时间对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖及成骨、成脂分化的影响.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,将状态良好的第三代细胞接种于96孔板中,随机分组为对照组(不加入DEX)及不同浓度(1 nmol/L、10 nmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)DEX作用组,培养1、3、5、7、9 d后,分别用细胞增殖检测(CCK-8)法检测细胞增殖状况.将BMSCs接种于6孔板中,随机分为对照组及不同浓度(1 nmol/L、10 nmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L)DEX作用组,培养7、14 d后分别用荧光定量PCR方法检测成骨、成脂相关基因的表达,培养14 d后用Western blot检测成骨、成脂相关蛋白的表达.培养5 d后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,培养14 d后进行油红"O"染色、茜素红染色.结果 较低浓度的DEX促进BMSCs增殖,而较高浓度DEX抑制BMSCs增殖.干预早期,较低浓度的DEX促进BMSCs成骨分化而高浓度DEX抑制其成骨分化;干预晚期,各浓度DEX均促进BMSCs成骨指标的表达,但是不能诱导BMSCs钙质沉积.DEX浓度依赖性地促进BMSCs成脂相关指标基因和蛋白的表达,并诱导BMSCs细胞内脂质沉积.结论 DEX可直接影响BMSCs增殖及向成骨、成脂方向分化,这种效应存在浓度和干预时间依赖性.     

舒芬太尼对高糖孵育下 H9c2细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 评价舒芬太尼对高糖孵育下H9c2细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 取H9c2细胞在含10%胎牛血清低糖DMEM/F12完全培养基中培养、传代,细胞接种于96孔(100μl/孔)和6孔(2ml/孔)细胞培养板,接种密度105/ml.采用随机数字表法,将细胞随机分为5组,每组12孔,正常糖对照组(NC组)用低糖培养基孵育细胞48 h;高糖对照组(HC组)用高糖(25 mmol/L)培养基孵育细胞48h;高糖+缺氧复氧组(HAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后,行缺氧3 h复氧3 h;高糖+舒芬太尼+缺氧复氧组(HSAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后加入舒芬太尼(终浓度为10-9mol/L),15min后行缺氧复氧处理;高糖+纳洛酮+缺氧复氧组(HNAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后加入纳洛酮(终浓度为10-6mol/L),10 min后加入舒芬太尼(终浓度为10-9mol/L),15 min后行缺氧复氧处理.各组处理后收集细胞,用MTT法测定细胞活力;收集细胞培养液测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;超声破碎法采集细胞匀浆液,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与NC组比较,其余各组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).与HC组比较,HAR组和HNAR组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).与HAR组比较,HSAR组细胞活力和SOD活性升高,LDH漏出量减少(P＜O.01),HNAR组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与HSAR组比较,HNAR组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).结论 舒芬太尼可减轻高糖孵育下H9c2细胞缺氧复氧损伤,其机制可能与激活阿片受体有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sufentanil on anoxia/rexogenation (A/R)-induced injury to H9c2 cells incubated in high-glucose culture medium. Methods The H9c2 cells were cultured in low-glucose DMEM/F12 culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum. The cells were seeded in 96-well or 6-well plates and randomly divided into 5 groups ( n = 12 wells each): normal glucose control group (group NC),high-glucose control group (group HC), high-glucose + A/R group (group HA/R), high-glucose + sufentanil +A/R group (group HSA/R), high glucose + naloxone + A/R group (group HNA/R). The cells were exposed to 95 % N2-5 % CO2 in an incubator at 37 ℃ for 3 h followed by 3 h reoxygenation. In group NC, the cells were incubated in low-glucose culture medium for 48 h. In group HC, the cells were incubated in high-glucose culture medium for 48 h. In group HA/R, the cells were incubated in high-glucose culture medium for 48 h before anoxia.In group HSA/R, after the cells were incubated in high-glucose culture medium for48 h, sufentanil was added to the culture medium with the final concentration of 10-9 mol/L at 15 min before anoxia. In group HNA/R, after the cells were incubated inhigh-glucose culture medium for 48 h, naloxone was added to the culture medium with the final concentration of 10-6 mol/L, 10 min later sufentanil was added with the final concentration of 10-9 mol/L at 15 min before anoxia. The cell viability was measured by MTT assay. The amount of lactic dehydrogenase (LDH) released in the supernatant and superoxide dismutase (SOD) activity were measured. Results The cell viability and SOD activity were significantly lower, while the amount of LDH released was significantly higher in the other groups than in group NC, in groups HA/R and HNA/R than in group HC, and in group HNA/R than in group HSA/R (P ＜ 0.01 ). The cell viability and SOD activity were significantly higher, while the amount of LDH released was significantly lower in group HSA/R than in group HA/R ( P ＜ 0.01 ). There was no significant difference in the parameters mentioned above between group HNA/R and group HA/R ( P ＞ 0.05). Conclusion Sufentanil can attenuate A/R-induced injury to H9c2 cells with high-glucose incubation, and the mechanism may be related to the activation of opioid receptors.     

一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A表达的影响

目的：探讨在体外一氧化氮对腹膜间皮细胞表面蛋白-A（SP-A）mRNA和蛋白表达的影响。方法：Ⅱ级SD雄性大鼠,腹腔注射25ml0.25%胰蛋白酶消化液后,2h后处死大鼠,获取的腹膜间皮细胞用DMEM/F12培养液（含10%FBS）培养于6孔培养板中,待细胞传致第3代时,加入不同浓度的SNAP（nirtic oxide donor）分为：正常对照组、0.6μmol/LSNAP组、0.9μmol/L SNAP组、1.2μmol/L SNAP组、2.4μmol/L SNAP组,每个组6孔,培养24h后提取细胞RNA及蛋白;另外,将1.2μmol/L SNAP与腹膜间皮一起培养,分别于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h及48h时提取细胞RNA及蛋白。分别用RT-PCR及Western blot检测腹膜间皮细胞SP-A mRNA的表达和蛋白的合成。结果：与正常对照组相比,SNAP能抑制SP-A mRNA的表达和蛋白的合成（P〈0.05）,且随着SNAP浓度的增高而增加,当SNAP浓度为1.2μmol/L时,随着培养时间的增加,SP-A mRNA的表达和蛋白的合成也逐渐被抑制。结论：一氧化氮能抑制腹膜间皮细胞SP-AmRNA的表达和蛋白的合成,且呈剂量及时间依赖性。     

P物质预先给药对去甲肾上腺素诱导大鼠离体心肌细胞β1受体表达的影响

目的 探讨P物质(SP)预先给药对去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠离体心肌细胞β1受体表达的影响.方法 出生1～3 d SD大鼠,分离心肌细胞后培养72 h.取15孔心肌细胞随机分为5组:C1组不加任何药物,NE1-4组分别给予10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L NE,每组3孔.另取12孔心肌细胞随机分为C2组、NE组、SN组和NSN组,每组3孔,NE组加入10-7 mol/LNE,SN组加入10-6 mol/LSP后30 min加入10-7 mol/L NE,NSN组加入NK-1受体拮抗剂S3144后30 min加入10-6 mol/L SP,30min后加入10-7 mol/L NE.加入NE后3 h时采用流式细胞仪检测心肌细胞β1受体表达.结果 与C1组比较,NE1～3组心肌细胞β1受体表达上调,NE3组β1受体表达上调最明显(P＜0.05);与C2组比较,NE组心肌细胞β1受体表达上调(P＜0.05);与NE组比较,SN.组心肌细胞β1受体表达下调(P＜0.05).结论 SP预先给药可抑制NE诱导的大鼠离体心肌细胞β1受体表达上调,其机制可能与NK-1受体激活有关.     

Effect of beraprost sodium on DNA synthesis in cultured bovine mesangial cells

Background This study was designed to investigate whether a stable analogue of prostacyclin, beraprost sodium, alters DNA synthesis in cultured bovine mesangial cells, and whether its action mediates that of endothelin-1 (ET-1). Methods Glomeruli were isolated from adult bovine kidneys, and cells were incubated in various combinations of beraprost sodium, fetal bovine serum, and BQ-123, an ET-1 receptor (ET-A) antagonist. For determination of the number of viable cells, cells were harvested with trypsin and subjected to the trypan blue dye-exclusion assay. Results Beraprost sodium caused 32% inhibition of basal ET-1 secretion and 43% inhibition of serum-stimulated ET-1 secretion at a concentration of 10⁻⁷ mol/L. In addition, BQ-123 significantly attenuated tritium-labeled thymidine ([³H]thymidine) incorporation into serum-stimulated mesangial cells. Finally, beraprost sodium (10⁻⁷ mol/L) caused 48% inhibition of [³H]thymidine incorporation into mesangial cells stimulated by ET-1. Conclusion These results suggest that prostacyclin can regulate DNA synthesis in cultured bovine mesangial cells, in part, by modulating ET-1 production and action.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺微血管内皮细胞APJ mRNA和Apelin mRNA表达的影响.方法 培养并鉴定24 h新生SD大鼠肺微血管内皮细胞,取2～4代培养细胞,细胞密度5×105个/ml,培养至80%融合后,进行药物干预.第一部分实验分为5组(n=4):加入AngⅡ至终浓度分别为10-9 mol/L(Ⅱ组)、10-1 mol/L(Ⅲ组)、10-7mol/L(Ⅳ组)、10-6 mol/L(Ⅴ组),Ⅰ组不加入AngⅡ,24 h后采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.第二部分实验分为6组(n=4):加入AngⅡ至终浓度为10-7mol/L,分别在孵育即刻(Ⅰ组)、1 h(Ⅱ组)、6 h(Ⅲ组)、12 h(Ⅳ组)、24 h(Ⅴ组)、48 h(Ⅵ组)时,采用RT-PCR技术测定Apelin mRNA和APJ mRNA的表达水平.结果 第一部分实验结果:与Ⅰ组比较,Ⅱ组Apelin mRNA表达上调,APJ mRNA表达下调,Ⅲ组～V组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调(P<0.05或0.01),与Ⅱ组比较,Ⅲ组～Ⅴ组Apelin mRNA和APJ mRNA表达下调,呈浓度依赖性(P<0.01).第二部分实验结果:Apelin mRNA在10-7mol/L AngⅡ孵育6 h内表达上调,孵育1 h时达高峰(P<0.05或0.01),孵育6 h后Apelin mRNA表达下调,且呈时间依赖性(P<0.01);而APJ mRNA在孵育12 h后呈时间依赖性持续下调(P<0.01).结论 AngⅡ呈浓度和时间依赖性地下调Apelin mRNA和APJ mRNA的表达,可能是其参与肺微血管内皮细胞损伤的发生机制.     

Cbl相关蛋白在高糖刺激下肾小球系膜细胞中的作用

目的：探讨高糖对肾小球系膜细胞（GMC）Cbl相关蛋白（CAP）mRNA表达的影响,以及糖尿病肾病发生发展中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的下游信号分子CAP的重要作用。方法：系膜细胞株分为8组,正常对照组,生理浓度胰岛素组（10^-9mol／L）,低浓度胰岛素组（10^-9mol／L）,高浓度胰岛素组（10^-6mol／L）,高糖组（30mmol／L）,甘露醇组,高糖加高浓度胰岛素组,高糖加生理浓度胰岛素组。采用RT—PCR法,观察高糖刺激与不同浓度胰岛素作用下,系膜细胞中CAPmRNA的表达及其变化。结果：正常对照组系膜细胞中（CAPmRNA有一定表达。高糖组CAPmRNA表达明显下降;低浓度胰岛素组和高浓度胰岛素组分别为对照组的1．91倍和2．15倍（P〈0．01）;高糖加入高浓度胰岛素组CAPmRNA表达为单纯高糖组的2．14倍（P〈0．01）。结论：（1）正常系膜细胞中CAPmRNA有一定表达;（2）高糖可抑制CAPmRNA表达;（3）胰岛素能部分拮抗高糖导致系膜细胞中CAPmRNA表达的下调作用;（4）CAP在糖尿病肾病发生发展过程中是其重要因子之一。