2016年6月至2017年4月辽宁省人感染H7N9禽流感病毒HA和NA基因特征分析

目的 本文对2016-2017年辽宁省人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因遗传进化特征分析。方法 使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对选取的4株H7N9禽流感病毒株HA和NA基因进行扩增并测序,用生物信息学软件分析其基因进化变异特征。结果 2016年6月至2017年4月辽宁省4株毒株的HA和NA基因与WHO最新推荐的A/Hunan/02650/2016疫苗株的同源性最高,其HA基因的核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性分别为99.3%~99.6%,99.8%~100%;NA基因的核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性分别为97.7%~99.7%;98.3%~99.6%。本省所有毒株均属长江三角洲谱系,但主要聚集在两个次分支。4株病毒HA蛋白裂解位点333-342氨基酸序列均为PEIPKGR↓GLF,在338-339位点无连续的多个氨基酸插入(KRTA),属于低致病性禽流感病毒分子特征。HA受体结合位点均出现S138A、G186V、Q226L、T221P氨基酸的突变,NA茎部区均出现“QISNT”缺失,且NA蛋白上相关耐药位点上的氨基酸并未发生突变,3株毒株NA蛋白上糖基化位点第42位发生氨基酸序列NCSH→NCTH突变。结论 2016-2017年辽宁省人感染H7N9禽流感病毒HA和NA基因关键位点氨基酸发生突变,使病毒具有双受体结合特性以及毒力增强。     

2015-2017年贵州省威宁13株H9N2亚型禽流感病毒HA基因序列分析

目的 了解2015-2017年贵州省威宁H9N2亚型禽流感病毒的分子特征,为禽流感病毒的研究与防控提供依据。方法 对选取的13株病毒进行核酸的提取、血凝素基因(hemagglutinin,HA)的扩增和测序,运用生物信息学软件对H9N2禽流感病毒(AIV)HA基因的同源性、遗传进化、受体结合关键位点、致病相关位点和糖基化位点变异情况进行分析。结果 13株H9N2AIV的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.1%~99.9%和95.7%~100%,均属于DK/HK/Y280/97分支。HA基因与致病性高低相关的裂解位点区域2株为PSRSNR↓GLF,11株为PSRSSR↓GLF,均属于低致病性毒株。与传播感染相关的受体结合位点均发生E198T和Q234L的突变,具有人样受体结合特征。13株毒株HA均含7个与毒力相关的糖基化位点,218位点均存在一个糖基化位点缺失,313位点均存在一个糖基化位点的增加。结论 贵州省威宁县H9N2AIVs属于DK/HK/Y280/97系,均为低致病性禽流感病毒,存在人易感位点,病毒一直处于不断的变异之中,故应加强其监测与防控。     

H7N9禽流感病毒重组质粒构建及应用

目的构建一种含H7N9禽流感病毒全长血凝素/神经氨酸酶/基质蛋白（HA/NA/M）基因的重组质粒,为核酸检测方法提供一种通用的阳性定量标准品。方法设计H7N9禽流感病毒HA、NA及M抗原基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H7N9禽流感病毒总RNA后用实时荧光定量PCR获得相应片段,用3次酶切连接方法,依次插入到pGEM-T easy质粒,进行测序确认;线性化后的重组质粒用T7 RNA聚合酶进行体外转录,RNA转录产物纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证。结果HA、NA和M基因扩增片段大小分别约为1.7、1.3、1.1 kb,与预期相符;构建的重组质粒pGEM-HA-NA-M插入片段的测序结果与GenBank 公布序列一致;由重组质粒体外转录获得同时含有H7N9禽流感病毒HA、NA、M全长开放阅读框序列的RNA片段质量浓度为399.5 ng/μL,梯度稀释后用3种实时荧光定量PCR方法均获得了良好的标准曲线。结论成功构建重组质粒pGEM-HA-NA-M,由此质粒体外转录获得的RNA片段可作为H7N9禽流感病毒核酸快速检测方法通用的阳性定量标准品。     

2013-2017年苏州市H7N9禽流感病毒流行特征及耐药突变监测分析

目的 分析2013-2017年苏州市人感染H7N9亚型禽流感病毒疫情流行特征,获取神经氨酸酶基因数据进行耐药变异分析。方法 应用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time PCR）方法检测疑似病例咽拭子标本甲/乙型及H7N9亚型流感病毒核酸。H7N9阳性标本送中国疾病预防控制中心所属国家流感中心进行病毒分离和神经氨酸酶基因测序分析。结果 2013年4月~2017年5月间苏州市共报告82例人感染H7N9禽流感实验室确诊病例,苏州人感染H7N9病毒总体病死率为41.46%（34/82）。患者中位年龄为58岁,男女性别比例约为2.9：1（61/21）。85.37%（70/82）的确诊患者发病前有活禽暴露史。序列分析表明神经氨酸酶基因同源性为97.7%~100.0%。A/Suzhou/88/2016（H7N9）和A/Suzhou/54/2016（H7N9）分别发生H274Y及R292K耐药突变。A/Suzhou/63/2016（H7N9）等部分分离株NA蛋白出现42位潜在糖基化位点缺失。结论 H7N9病毒仍在不断进化,直接接触活禽或被病毒污染的环境是人感染H7N9病毒的主要途径;有必要密切监测可能出现的耐药突变及耐药毒株的扩散。     

北京市某区1例人感染H7N9禽流感病毒的HA和NA基因特征分析

目的 了解北京市某区1例人感染H7N9禽流感病毒基因特征,为禽流感病例的早期发现、疫情控制提供参考。方法 提取病例临床样本病毒核酸,反转录扩增后进行病毒血凝素基因(hemagglutinin, HA)、神经氨酸酶基因(neuraminidase, NA)序列测定。获得的病毒序列与全球流感共享数据库中H7N9禽流感病毒株进行序列分析,比较该病毒与北京市既往发现株和其他省市毒株同源性,构建系统发育树,并对部分耐药位点和糖基化位点进行分析。 结果 北京市某区1例H7N9禽流感病毒为低致病性禽流感。HA、NA与北京既往发现的29株毒株氨基酸同源性为97.2%~100%和96.8%~100%,基于系统进化分析与之最为相近的疫苗株为A/Hunan/02650/2016。HA蛋白受体结合位点发生了G186V、Q226L突变,HA和NA的糖基化位点均未发生变化。 结论 该区出现的H7N9病毒与北京地区既往发现H7N9毒株具有高度同源性,部分氨基酸位点存在变异,但未发生耐药突变。     

H7N9禽流感病毒HA2基因真核表达与免疫原性初步研究

目的利用真核表达载体构建H7N9禽流感病毒血凝素刺突茎部(HA2)的真核表达质粒,在293F细胞中表达HA2蛋白,并初步探讨其免疫原性。方法根据pMD18-T-HA中的序列设计H7N9禽流感病毒HA2扩增引物,在下游引物中引入胰酶酶切位点;目的基因经特异性酶切位点克隆入自身带有Fc标签的pFUSE-IgG1-Fc1载体,构建重组质粒HA2-Fc;将重组质粒转染293F细胞,通过间接免疫荧荧光(IFA)和免疫印迹法(WB)鉴定HA2蛋白的表达和免疫原性。结果成功构建H7N9禽流感病毒HA2基因真核表达质粒HA2-Fc,并在293F细胞中表达出分子量大约为50kDa的重组蛋白。IFA和WB显示该蛋白与抗H7N9病毒鼠多抗具有良好的免疫反应。结论成功构建表达HA2亚单位的真核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫原性,为筛选H7N9广谱疫苗候选分子、广谱中和抗体,及深入研究其致病机理和免疫机制奠定基础。     

2016年盐城市1例人感染H7N9禽流感病毒HA、NA基因变异分析

目的 了解盐城市禽流感H7N9病毒株HA基因和NA基因分子进化特征,为更好预防和治疗人感染禽流感H7N9病例提供科学依据。方法 通过荧光定量PCR方法对标本进行流感病毒分型检测,对禽流感H7N9病毒荧光PCR阳性的标本,采用一步法RT-PCR方法对H7N9病毒HA基因和NA基因全长编码区进行扩增,扩增产物经纯化测序,采用相应的生物信息软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果 盐城市禽流感H7N9病毒株HA基因和NA基因有着独特的进化方式,A/JSYC/1/2016(H7N9)病毒株HA裂解位点附近氨基酸序列为PEIPKGR/GL,属于低致病性禽流感病毒。HA基因编码蛋白受体结合位点出现了G186V、Q226L氨基酸位点的变化,增强了病毒对人的感染能力,NA基因编码蛋白主要可能的神经氨酸酶抑制剂耐药位点未发生E120G、R153K、H276Y、R294K的变异。结论 2016年盐城市禽流感H7N9病毒株HA基因和NA基因处于基因点突变的抗原漂移变化中,某些变异位点具备了感染人的某些分子特征。     

2013 - 2017年山东省人感染H7N9禽流感流行特征分析

目的 分析山东省2013 - 2017年人感染H7N9禽流感流行特征和外环境应急监测结果,探讨影响人感染H7N9禽流感疫情传播的因素。方法 收集2013 - 2017年确诊的人感染H7N9禽流感病例的流行病学和外环境应急监测资料进行描述性研究。结果 研究期间,山东省共报告29例人感染H7N9禽流感病例,死亡12例,病死率41.38%。病例以冬春季节高发,病例年龄中位数为55岁,男女比例为6.25∶1,86.21%的病例有活禽或者活禽市场接触史,活禽市场外环境标本检测阳性率为9.30%。结论 山东省人感染H7N9禽流感冬春季高发,病例呈现高度散发状态,病毒具有一定人传人能力,禽类和活禽市场接触是主要的感染途径,职业人群和农村地区病例有所增多。     

新型人感染H7N9禽流感病毒病原学研究进展

2013年中国暴发的新型人感染H7N9禽流感引起了全世界的关注。本文通过整理目前已发表在数据库（PubMed）上的新型人感染H7N9禽流感病原学方面文章,对关于该病毒核酸检验、序列分析、溯源研究,以及其致病力、耐药性和传播力研究等方面已经明确的结论进行综述。该病毒核酸可以通过各种数量实时定量PCR方法检测,有较好的敏感度和特异性,能较快获得检测结果,其中逆转录实时荧光定量PCR仍是目前检测的主流方法。该病毒来自于禽类,对禽类属于低致病性病毒,但经过近几年的多次重组事件后,已能和人呼吸道受体α-2,6Gal结合,并可通过直接接触传播感染人类引起较为严重的临床过程。除H7N9之外,其他新重组形成H7亚型,如H7N7,亦具有较高的哺乳动物感染力,因此需加强对禽流感病原监测。相比容易感染青少年的高致病性人禽流感H5N1病毒,新型H7N9病毒更易引起老年人的严重呼吸系统症状。虽然已经出现耐神经氨酸抑制剂毒株,但是该病毒临床仍可用奥司他韦等药物进行治疗,目前已发现其他药物可以抑制耐药与非耐药毒株在体内的复制。如出现聚集性病例,其感染来源可能存在共同暴露史,但亦不能排除存在有限的、非持续的人传人可能。     

贵州省2014-2018年人感染H7N9禽流感病例流行病学调查分析

目的 了解贵州省Ｈ７Ｎ９禽流感病例的特征,为进一步防控提供参考。方法 收集贵州省2014-2018年人感染Ｈ７Ｎ９禽流感临床及流行病学疫情资料,用描述性流行病学方法分析其流行特征。结果 2014-2018年贵州省共确诊21例人感染H7N9人禽流感病例,死亡11例,病死率52.3%。以男性、中老年、农民为主,61.9%的病例发生在黔东南和黔南地区,2017年病例数占总病例数的80.9%,未发现聚集性疫情和二代病例。病例发现以不明原因肺炎监测发现为主,从暴露到发病、发病到首诊、发病到确诊、发病到抗病毒药物使用及发病到死亡的时间中位数分别为5天、3天、7天、7天和14天;有无基础性疾病的病死率差异无统计学意义（〖XC小五号.EPS;P〗=0.38,P=0.54）,后期病例病死率低于前期（〖XC小五号.EPS;P〗=4.24,P=0.04）。19例本地病例均有明确的活禽或活禽市场相关环境接触史,其中94.7%的活禽市场或活禽相关场所均检出H7核酸阳性,平均阳性率为32.3%(1.34%～82%),全面长期关闭活禽市场后疫情得到有效控制。 结论 接触活禽或活禽市场环境是感染的主要因素;加强活禽市场外环境监测,规范化管理及长期关闭活禽市场,可有效预警和控制疫情;加强基层医疗机构救治水平可有效降低病死率。     

人感染H7N9禽流感的流行特征

目的：对我国发生人感染 H7N9禽流感的流行病学特点进行分析,为H7N9禽流感的预防控制提供依据。方法人感染 H7N9禽流感确诊132例的病例相关数据来源于2013年3－5月中国国家卫生和计划生育委员会网站（http：／／www ．chinapop ．gov ．cn／yjb／h7n9／list ．shtml）和我国台湾地区卫生署疾管局网站（http：／／www ． cdc ．gov ．tw／）,通过Excel 2007软件进行统计分析,总结其发病地点、时间、患者性别和年龄分布、临床症状轻重等因素。结果132例H7N9禽流感确诊病例基本为散发状态,绝大多数发生在华东地区,浙江、上海和江苏3省市较多,各占34．85％、25．00％、20．45％;病例数在前3周呈上升趋势,第3周峰值达47例,随后逐渐下降,至第6周后基本无新增确诊病例;男女性别比为2．34∶1,男性病例远多于女性;年龄分布在4～91岁,以中老年人为主,＞45岁确诊病例占75．76％;确诊病例大部分表现为重症或病死,该两者占76．52％,其中死亡38例,病死率达28．79％。结论人感染H7N9禽流感确诊病例的流行病学特征与其他禽流感例如 H5N1显然不同,具体原因有待于进一步研究确定。     

我国H7N9禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因的分子进化分析

  目的  通过对安徽省安庆市人感染H7N9禽流感外环境标本检测,分析外环境中病毒污染情况,研究判断人感染H7N9的风险,为制定防控措施提供依据。  方法  于2017年1月5日 — 2月22日,采用完全随机抽样的方法,采集安庆市38家农贸市场、4例确诊人感染H7N9禽流感病例居家禽类相关标本共324份,用实时荧光定量RT-PCR方法进行甲型流感病毒通用核酸检测,对阳性标本进一步进行H7N9检测。  结果  安庆市H7N9禽流感病毒阳性率28.40 %,11个县（市、区）中有10个检出H7N9病毒阳性,阳性率90.90 % （10/11）。主城区阳性率37.68 %（26/69）高于非主城区,差异有统计学意义（χ² = 9.23,P < 0.05）;鸡、鸭、鸽子标本中,鸡标本阳性率最高31.75 %（80/252）,差异有统计学意义（χ² = 6.57,P < 0.05）;农贸市场来源的标本阳性率为29.77 %（92/309）,病例家来源的标本阳性率为0,差异有统计学意义（χ² = 6.24,P < 0.05）;不同类型标本中,咽拭子和肛拭子阳性率最高,分别为42.86 %（9/21）和40.00 %（2/5）,其次为饮水和污水;发生人感染病例前外环境标本阳性率38.71 %（12/31）高于发生后,但2者间的差异无统计学意义（χ² = 1.79,P > 0.05）。  结论  安庆市农贸市场存在H7N9禽流感病毒污染。     

中国2013-2017年人感染H7N9禽流感的流行病学特征

目的 对我国人感染H7N9禽流感的流行病学特点进行分析,为H7N9禽流感的预防控制提供依据。方法 以2013年3月至2017年4月公开发表的人感染H7N9禽流感数据为对象,利用Excel 2007软件对数据进行统计学分析,描述其三间分布、暴露史及聚集性。结果 中国共确诊人感染H7N9禽流感病例1 416例,死亡559例,病死率为39.5%,2016年病例最少（127例）,病死率最高（57.5%）;报告病例前三位的省份主要是浙江、广东、江苏;发病年龄M＝55岁,男女性别比为2.3∶1,男性病例远多于女性。66%的病例在发病前确定有活禽相关暴露史,31%的病例暴露情况不详,仅有3%的病例无相关活禽暴露史。共发生35起家庭聚集性病例,共涉及72例病例,占总发病例数的5%。结论 H7N9禽流感疫情有较明显的季节分布及区域分布特点;存在有限的家庭聚集性;感染病例多与禽类接触有关。     

广西南宁市一起家庭聚集性人感染H7N9禽流感疫情的调查

目的 探讨南宁市一起人感染H7N9禽流感的传播模式。方法 应用现场流行病学方法调查2例病例及其82名密切接触者, 对采集的相关标本进行H7N9禽流感病毒核酸检测和病毒分离, 并分析基因序列和进化树同源性。结果 病例A在最后一次暴露于广东中山市活禽市场后4 d于当地发病, 并在发病后第2天返回广西南宁市横县家中。病例B(病例A之子, 5岁)无明确禽类接触史, 但与病例A同居一室密切接触, 4 d后发病。从2例中均分离出H7N9禽流感病毒, 2株病毒基因序列和系统进化树分析具有高度同源性, 且关系最近。指示病例(病例A)的其他81名密切接触者未出现人感染H7N9禽流感病毒症状。结论 二代病例(病例B)可能在无防护情况下密切接触指示病例而感染, 提示H7N9禽流感病毒可通过人-人传播, 但其传染力有限且非持续性。     

H7N3 live attenuated influenza vaccine has a potential to protect against new H7N9 avian influenza virus

After recent emergence of new avian influenza A(H7N9) viruses in humans many people and Governments are asking about H7 influenza vaccine which could provide cross-protection against new viruses, until H7N9 vaccine is prepared from a relevant strain. Here we scientifically justify that available H7N3 live attenuated influenza vaccine (LAIV) can be protective against H7N9 viruses due to the presence of conserved immune epitopes in its hemagglutinin. We used Immune Epitope Database analysis resource to predict B-cell and CTL epitopes distributed across H7N3 HA molecule and assessed their identity with new H7N9 viruses at near 70% and 60% of the epitopes, respectively. In addition, we tested serum samples of volunteers participated in phase I clinical trial of H7N3 LAIV for the presence of anti-H7N9 hemagglutination-inhibition and neutralizing antibodies and found seroconversions in 44.8% of vaccinated persons, which suggests the potential of H7N3 LAIV to protect against new H7N9 avian influenza viruses.     

浙江省人感染H7N9禽流感流行特征与防控对策

目的 分析人感染H7N9禽流感的流行特征、研究进展和目前防控面临的问题,提出防控对策。方法 采用流行病学个案调查与描述性分析方法,收集人感染H7N9禽流感确诊病例流行病学和防控措施相关资料,分析病例流行病学特征和疫情防控措施效果。结果 浙江省共确诊人感染H7N9禽流感病例44例,死亡6例;男性27例,占61.36%;平均年龄60.18岁(32~86岁);≥50岁35例,占79.55%;农民和离退人员30例,占68.18%。40例(90.91%)集中于杭州和湖州。78.38%(29/37)有慢性基础性疾病,78.95%(30/38)发病前有禽类暴露史;病例的1004名密切接触者均未发现感染。病例可疑暴露场所外环境标本H7N9阳性率高达43.21%(35/81)。暂停市场活禽交易对控制疫情有效。结论 人感染H7N9禽流感流行特征尚未完全明了,需要多部门联合开展监测、研究和防控。     

安徽省人感染H7N9禽流感病例临床流行病学分析

目的 分析安徽省人感染H7N9禽流感的临床流行病学特征,为临床救治提供参考依据。方法 以2013年以来安徽报告的确诊H7N9禽流感病例为研究对象,采用描述流行病学方法分析病例的基本情况、就诊过程、临床表现、转归等分布特征。结果 病例的年龄为2～91 (中位数= 58)岁,男性占72.63%,职业主要是农民和离退休人员,主要临床表现是肺炎、呼吸衰竭和ARDS,男性出现肝肾功能不全、心力衰竭和中毒性休克的比例要明显高于女性。病死率64.21%,死亡病例年龄的中位数高于存活病例,病死率随着年龄增加升高,患有心血管疾病的病例死亡风险较高。存活病例与死亡病例相比,发病至首诊的时间间隔较短。结论 H7N9禽流感病例病程进展快,多重症,死亡率高。提高大众的禽流感自我防控能力,基层医疗机构的早发现、诊断、早期使用抗病毒药物治疗能力是提高禽流感治愈率和降低病死率的关键措施。