用聚合酶链反应检测临床标本中的淋球菌

根据淋球菌染色体随机克隆片段ＯＲＦ－Ｉ基因疗列设计的一对聚合酶链反应引物，能特异地对所有血清型淋球菌扩增出预期的４６１ｂｐ片段。采用两种不同的标本处理方法，检测５７份临床标本的结果表明，标本的ＰＣＲ前处理过程对ＰＣＲ检测结果有重要影响。若以培养的结果为“金标准”，ＰＣＲ的敏感性为９７．３％。ＰＣＲ不但具有简便快速的优点，对已用药的患者及女性宫颈标本的检测可能较培养法更为准确可靠，可推荐作为临床常规     

应用PCR技术快速检测淋球菌

自淋球菌４．２Ｋｂ质粒ｐＪＤｌ基因序列选择一对引物序列合成引物，ＰＣＲ扩增产物为２３０ｂｐ片段。经３０次循环后，最低可检出１０ＣＦＵ。特异性试验结果表明，这对引物与白念珠菌有部分同源性，ＰＣＲ扩增产物小于７５ｂｐ。与脑膜炎奈瑟菌及其他１３种常见的细菌、４种念珠菌、沙眼衣原体、解脲支原体、正常女性宫颈分泌物中的细菌均无同源性。临床标本检测结果表明，与涂片法和培养法相比较，阳性检出率可达１００％。试验表明，应用本方法可直接快速检测分泌物中的淋球菌。     

聚合酶链反应检测生殖支原体的研究

具有致病性的生殖支原体（Ｍｇ）生长缓慢，不易培养，而血清学诊断与肺炎支原体又有交叉反应，这给Ｍｇ的临床诊断带来困难。为了进一步解决Ｍｇ的临床检测问题，本研究采用Ｍｇ粘附因子基因序列合成一对引物ＭｇＰａ１和ＭｇＰａ３，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测Ｍｇ。结果表明，对Ｍｇ能产生特异性扩增，片段大小为２８１ｂｐ，而对肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体及淋球菌等则不能扩增出任何片段。作者认为，ＰＣＲ为一种高度特异和敏感性的方法，它为Ｍｇ的临床检测提供了重要的手段。我们还对引物浓度、退火温度及模板量对ＰＣＲ扩增结果的影响进行了初步探讨。     

PCR检测淋球菌不适于淋病的判愈

ＰＣＲ检测淋球菌不适于淋病的判愈王泉江，伍振飞，孙晓娟海南省海口市人民医院皮肤科（邮政编码５７０００１）聚合酶链反应（ＰＣＲ）对淋病的诊断有重要意义，但能否作为淋病判愈的标准之一值得探讨。我们把ＰＣＲ和淋球菌培养法进行比较，探讨ＰＣＲ作为淋病判愈标准...     

聚合酶链反应检测淋球菌感染695例结果分析

聚合酶链反应检测淋球菌感染６９５例结果分析文平中，陈洛夫海南医学院蛋白质核酸研究室（邮政编码５７０１０２）１９９３年３月～１９９４年４月我们应用本室自行设计的淋球菌ＰＣＲ引物检测６９５例临床拟诊淋球菌感染患者，现将结果分析如下。检测对象本院附属医院妇...     

用改进的PCR方案测定PCR指纹条带序列后设计的特异引物对新生隐球菌新生变种作基因分型

新生隐球菌新生变种通过用 (ＧＡＣＡ) 4 引物采用ＰＣＲ指纹法可产生 4条主要条带 (42 0、4 75、5 4 0和80 0ｂｐ) ,根据它们不同的组合可以被再分为 6种基因型 (ＶＮ1～ＶＮ6 )。该研究的目的是确定能扩增这4条主要条带的特异性引物。首先须测定这 4条主要条带的核苷酸序列 ,为此作者建立了一种无需克隆载体的改进的ＰＣＲ测序方案以克服用 (ＧＡＣＡ) 4作单循环测序引物的缺陷 ;而后以获得的序列设计新引物 ,通过对新生隐球菌和其他酵母株的扩增 ,以证实新引物具有种的特异性 ,可用作新生隐球菌的分子分型。材料和方法 :①抽提 12株新生…     

复合PCR同时检测淋球菌沙眼衣原体和解脲支原体

目的：建立复合ＰＣＲ同时检测淋球菌（ＮＧ）、沙眼衣原体（ＣＴ）和解脲支原体（ＵＵ）。方法：用复合ＰＣＲ检测了１１６例尿道（宫颈）拭子，与传统方法及单对引物ＰＣＲ对照。结果：与ＮＧ涂片或培养、ＣＴ直接免疫荧光检查、ＵＵ培养比较，复合ＰＣＲ检测ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ敏感性分别为１００％、９６．９％和３３．３％，特异性分别为９４．３％、９２．９％和９４．４％，与ＮＧ－ＰＣＲ、ＣＴ－ＰＣＲ、ＵＵ－ＰＣＲ的符合率分别为１００％、９７．４％和４１．３％。结论：复合ＰＣＲ可快速、敏感、特异地一次性检出ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ泌尿生殖道感染，并可初步区分ＵＵ正常寄居抑或致病二种不同状态。     

多引物聚合酶链反应同时检测沙眼衣原体及解脲支原体和淋球菌

为了能够一次性检测出沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）和淋球菌（ＮＧ）所引起的泌尿生殖道感染，我们应用ＣＴ隐匿型质粒ＰＬＧＶ４４０引物、ＵＵ解脲酶基因引物、ＮＧ４．２ｋｂ隐匿型质粒ｐＪＤ１引物，采用多引物ＰＣＲ方法对性病门诊８６例患者进行了检测。在８６份标本中ＣＴ阳性２３例，ＵＵ阳性２２例，ＮＧ阳性１８例，ＣＴ、ＵＵ二重感染５例，ＣＴ、ＮＧ二重感染３例，ＵＵ、ＮＧ二重感染４例，ＣＴ、ＵＵ、ＮＧ三重感染２例。其中２０份标本与单一ＰＣＲ相对照结果完全一致。本研究结果表明：多引物ＰＣＲ具有一次可检测多种病原体，且有快速、敏感、简便、特异的优点，适用于临床检测。     

荧光定量聚合酶链反应及培养法检测淋球菌的结果分析

淋病是淋病奈瑟氏菌 (Ｎｅｉｓｓｒｉａｇｏｎｏｒ ｒｈｏｅａｅ)引起的一种性传播疾病 (ＳＴＤ) ,是我国目前性病中发病率最高的病种。传统的实验室诊断方法主要有直接涂片革兰染色镜检法和淋球菌培养法。随着分子生物学技术的发展 ,有些单位采用荧光定量聚合酶链反应 (ＦＱ ＰＣＲ)检测淋球菌 ,本文以淋球菌培养法作为“金标准” ,比较分析ＦＱ ＰＣＲ技术检测淋球菌 ,分析结果如下。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　标本来源　 10 6例标本均来源于我所性病门诊初诊患者宫颈 尿道分泌物 ,其中男 79例 ,女 2 7例。1.1.2　仪器与试剂　仪器为…     

连接酶链反应检测女性尿标本中的奈瑟淋球菌

目的 评价连接酶链反应（ＬＣＲ）技术诊断女性淋病的价值。方法 对１７０例ＳＴＤ门诊女性就诊者作宫颈拭予淋球菌培养和尿标本ＬＣＲ检测,对两项检测结果不一致的标本作聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测,参照“扩大的金标准”确定ＬＣＲ技术和培养的敏感性和特异性。结果 １７０例患者中１６例ＬＣＲ检测阳性（９．４％）,１４例培养阳性（８．２％）,对８例两项结果不一致的标本作了ＰＣＲ检测。ＬＣＲ检测的敏感性、特异性、阳性预期值和一预期值分别为９４．１％、１００％、１００％和９９．４％;而培养法分别为８２．４％、１００％、１００％和９８．１％。结论 尿标本ＬＣＲ检测对诊断女性淋病具有较高的敏感性和特异性,适宜作大规模的ＳＴＤ普查,使筛查女性无症状感染者的机会大大增加。     

细胞培养与尿液聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体感染

目的 为了建立以尿液为标本的检测沙眼衣原体的聚合酶链反应（ＰＣＲ）－微孔板杂交法。方法 以１００例性病门诊就诊者的尿液和尿道（男性）或宫颈（女性）标本，分别作沙眼衣原体ＰＣＲ－微孔板杂交法和细胞培养。两者结果不一致时用第二种不同引物作ＰＣＲ。结果 与“扩大金标准”比较，尿液ＰＣＲ－微孔板杂交法的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为８０．０％、９７．３％、９０．９％和９３．６％；细胞培养的敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值分别为８４．０％、１００．０％、１００．０％和９４．９％。结论 尿液ＰＣＲ－微孔板杂交法检测沙眼衣原体感染的技术性能与细胞培养相当，但有取材方便、快速的特点、将其用于性病门诊就诊者的诊断是可行的。     

聚合酶链反应技术检测生殖支原体感染

建立多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测生殖支原体（Ｍｇ），设计Ｍｇ种属特属性引物及功能性结构蛋白基因引物，先进行标准株的特异性与敏感性试验，然后进行临床标本的ＰＣＲ扩增反应。分泌物标本用ＮＰ－４０裂解液一步法制备模板ＤＮＡ。三对引物有良好的特异性。对Ｍｇ标准株模板敏感性可达１０＾－６μｇ。临床标本检测，广东地区性病门诊２６１例的Ｍｇ－ＤＮＡ阳性率明显高于上海、常州及南京地区（ｘ＾２＝１６．１，Ｐ〈     

自我采集阴道拭子检测沙眼衣原体感染、淋病和毛滴虫病

多种性传播疾病 (ＳＴＤ)在青年人中流行 ,然而这些人群接受ＳＴＤ检查的依从性却很差 ,提高对危险人群检测方法的依从性是很有必要的。作者于1997～ 1998年 ,在匹兹堡某学生健康中心 ,对 2 2 8名从 13～ 19岁高中女生应用由受试者自我采集的阴道拭子进行沙眼衣原体、淋球菌和阴道毛滴虫的检测 ,来判断这种方法的可行性和可接受性。每位受试者入选时首先以调查表形式进行问卷调查 ,然后发给每人一个试剂盒 ,学生按示意图用阴道拭子自我采集样本 ,放入ＰＣＲ运送液中 ,4℃保存送到实验室 ,再用ＰＣＲ扩增方法检测沙眼衣原体、淋球菌和阴道毛…     

快速循环PCR诊断单纯疱疹病毒感染的应用评价

20多年来 ,单纯疱疹病毒 (ＨＳＶ)已被认为是免疫力正常者发生反复感染 (生殖道、皮肤和眼 )的重要原因 ,常导致危及生命的系统性疾病。作者进行了ＨＳＶ的快速循环ＰＣＲ实验诊断研究 ,从怀疑有ＨＳＶ感染的患者中共取 5 0 0份样本 (生殖道样本2 88份、皮肤样本 192份和眼部样本 2 0份 ) ,应用快速循环ＰＣＲ(ＤＮＡ聚合酶和腺苷激酶靶基因 )、常规ＰＣＲ和细胞培养法进行ＨＳＶ检测。结果 :快速循环ＰＣＲ (ＤＮＡ聚合酶靶基因 )在30个循环内检测ＨＳＶ阳性 15 8例 ,其中 135份经细胞培养法 ,2 3份经腺苷激酶靶基因ＰＣＲ证实 ;在31～ 4 5…     

ELISA检测淋球菌抗原的初步报告

淋球菌的常规实验室检测方法为镜检和分离培养。Ｍａｎｉｓ等［１，２］先后报道了用酶免疫（Ｇｏｎｏｚｙｍｅ）实验检测淋球菌的方法。我们建立了一种检测淋球菌抗原的ＥＬＩＳＡ方法，并对临床３１６份样品进行检测，同时与培养、镜检及ＰＣＲ方法进行了比较。一、资料...     

PCR和核酸杂交技术检测性罪错妇女宫颈沙眼衣原体感染

ＰＣＲ和核酸杂交技术检测性罪错妇女宫颈沙眼衣原体感染蔡挺，邵吉民，周琳，郑巧形浙江医科大学（邮政编码３１００３１）我们采集性罪错妇女宫颈细胞，用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合生物素化寡核苷酸探针检测沙眼衣原体ＤＮＡ，同时分离培养淋球菌，以探讨衣原体感染在...     

PCR检测部分病原真菌的实验研究

为探讨和评价ＰＣＲ技术在检测和鉴定病原真菌方面的作用,重点是引物的选择。首先比较了来自ｒＤＮＡ基因序列的通用引物的通用性,并用３对种特异性引物进行２次套式扩增。结果表明３对通用引物均能扩增出预期的靶ＤＮＡ带,平均大小分别为６２０ｂｐ,４８５ｂｐ和５８０ｂｐ;３对种特异性引物分别扩增出白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉ＤＮＡ,并提高了敏感性。说明用通用引物和种特异引物进行ＰＣＲ扩增可以用于病原真菌的检测和     

PCR检测164例STD患者5种常见病原体结果

ＰＣＲ检测１６４例ＳＴＤ患者５种常见病原体结果黄干军近年来我们用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１６４例性传播疾病（ＳＴＤ）患者进行了淋球菌（ＧＣ）、沙眼衣原体（ＣＴ）、解脲支原体（ＵＵ）、人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的ＤＮＡ检测，现报告...     

gD基因在生殖器疱疹PCR诊断中的研究

依据国外已发表的疱疹病毒（ＨＳＶ）糖蛋白Ｄ基因（ｇＤ基因）的核苷酸保守区序列设计了一对引物，建立了用疱疹病毒ｇＤ基因做疱疹病毒诊断基因的ＰＣＲ方法。对４８例拟诊为疱疹病毒感染的临床标本进行病毒细胞培养和ＰＣＲ检测。结果表明，ＰＣＲ对ＨＳＶ２感染的敏感性为８４％（２０／２４），特异性为９１％（２２／２４）。经标准株及限制性内切酶的酶切证实和序列分析，表明该方法特异、敏感     

聚合酶链反应和直接免疫荧光法检测沙眼衣原体感染的方法比较

沙眼衣原体所致泌尿生殖道感染是最常见的性传播疾病之一。对１１０例患者进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）与直接免疫荧光法（ＤＦＡ）检测，比较二者在临床检测中的优缺点。ＰＣＲ引物为主要外膜蛋白基因片段，阳性６５例（５９１％），阴性４５例（４０９％）。ＤＦＡ阳性４３例（３９１％），阴性６７例（６０９％），ＰＣＲ和ＤＦＡ阳性率有显著性差异（Ｐ＜００１），病程长短对ＰＣＲ阳性率无明显影响（Ｐ＞００５），病程长短对ＤＦＡ阳性率有显著影响（Ｐ＜００１），病程长者ＤＦＡ阳性率低。ＰＣＲ特别适用于临床中病程长且ＤＦＡ阴性患者。