抑制细丝蛋白A促进前列腺癌C4-2细胞迁移

目的 探讨细丝蛋白A(FLNA)对前列腺癌细胞迁移的影响。方法 设计并构建靶向FLNA的shRNA敲低质粒pSIH-H1-shFLNA。包装慢病毒后感染前列腺癌C4-2细胞,获得敲低FLNA的稳定细胞系C4-2-shFLNA。Western印迹检测前列腺癌C4-2细胞中FLNA蛋白表达和PC-1蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测FLNA以及PC-1 mRNA表达水平;Western印迹检测敲低FLNA对磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响;划痕实验和Transwell实验检测C4-2细胞体外迁移能力。结果 前列腺癌C4-2细胞敲低FLNA后FLNA mRNA和蛋白水平明显下调,PC-1 mRNA水平和蛋白水平表达增加,同时AKT磷酸化水平显著升高。划痕及Transwell实验证实在前列腺癌C4-2细胞中敲低FLNA后细胞迁移能力增强。结论 前列腺癌细胞中敲低FLNA能够激活PI3K/AKT信号通路,促进前列腺癌细胞迁移。     

双氢青蒿素联合吉非替尼抑制肺腺癌细胞周期和迁移能力的体外研究

 目的 探究双氢青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)联合吉非替尼(gefitinib, GEF)对肺腺癌细胞系的细胞周期和迁移能力的影响。方法 10 μM DHA和(或)50 μM GEF处理肺腺癌细胞系A549和SPC-A-1,四唑盐(methyl thiazolyl tetrazolim, MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印记法(western blot, WB)检测单独或联合应用DHA和GEF对细胞周期和迁移相关蛋白表达的影响。结果 MTT实验结果显示联合应用DHA和GEF(Com组)后,A549和SPC-A-1的增殖能力显著低于单药组和对照(NC)组,且具有时间依赖性(P＜0.05);碘化丙啶(propidium iodide, PI)单染流式细胞术检测细胞阻滞于G₀/G₁期;WB显示与NC组和单药组相比,Com组细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)和细胞周期素D1(Cyclin D1)表达显著下降;划痕实验中Com组细胞融合率显著低于NC组和单药组,并伴随基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)2和MMP9表达下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 DHA联合GEF可以显著抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,并阻滞细胞周期。     

丹参酮ⅡA对缺氧诱导下鼻咽癌CNE-2细胞增殖、VEGF表达及NO分泌水平的影响

目的研究丹参酮ⅡA对缺氧诱导下鼻咽癌CNE-2细胞增殖、VEGF表达及NO分泌水平的影响。方法实验设常氧对照组、缺氧组(CoCl2处理进行缺氧诱导)和实验组(CoCl2缺氧诱导加不同浓度丹参酮ⅡA处理)。丹参酮ⅡA浓度分别取0.5、1.0、2.0、5.0mg/L,处理时间分别为12h、24h和48h;MTT法检测丹参酮ⅡA对CNE-2细胞增殖的影响;ELISA方法检测VEGF蛋白表达水平;硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果 MTT实验表明,丹参酮ⅡA呈时间、剂量依赖性抑制缺氧诱导下CNE-2细胞的增殖(均P<0.05),5.0mg/L丹参酮ⅡA处理48h后其抑制率达到52.79%。ELISA实验发现丹参酮ⅡA可呈剂量依赖性降低缺氧诱导下CNE-2细胞VEGF的蛋白表达水平(剂量大于1.0mg/L后均P<0.05),5.0mg/L丹参酮ⅡA处理24h后VEGF表达水平降低37.21%;丹参酮可呈剂量依赖性降低CNE-2细胞NO分泌水平。结论丹参酮ⅡA可有效抑制缺氧诱导下CNE-2细胞的增殖,降低其VEGF蛋白的表达及NO分泌水平。     

miR-190对胶质瘤细胞生长及迁移抑制机制研究

目的探讨miR-190对胶质瘤细胞生长及迁移的抑制机制。方法通过实时荧光定量PCR法检测miR-190在人胶质细胞HEB和人胶质瘤细胞U87和U251细胞中的表达情况。细胞计数试剂盒(CCK8)实验和转移小室实验检测miR-190过表达和低表达时,U87和U251细胞的增殖和迁移能力。通过MIRDB软件预测miR-190可以靶向的蛋白质,荧光素酶报告基因实验分析miR-190对ZEB2的靶向作用。采用蛋白免疫印迹法检测miR-190过表达和低表达时,U87和U251细胞中ZEB2蛋白的变化情况。结果实时荧光定量PCR实验检测结果指出,miR-190在胶质瘤细胞系U87和U251中显著下调,明显低于正常胶质细胞HEB(P <0. 05)。miR-190表达上调时U87和U251细胞的生长受到抑制(P <0. 05)。转移小室结果显示,miR-190作用后,U87和U251细胞迁移能力下调(P <0. 05); miR-190受到抑制后,迁移细胞数量增加(P <0. 05)。MIRDB软件分析发现,miR-190与ZEB2的3'非翻译区具有结合位点。荧光素酶报告基因实验显示,miR-190能够下调ZEB2野生型的活性(P <0. 05),但是对ZEB2突变型没有作用(P> 0. 05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,miR-190能够显著抑制ZEB2蛋白水平的表达; miR-190表达受到抑制后,ZEB2蛋白水平上调。结论 miR-190可以通过抑制ZEB2的表达,抑制胶质瘤细胞的生长和迁移。     

miR-1抑制SDF-1表达和分泌调控HMSC-bm向肝癌细胞迁移

目的 明确肿瘤抑制性micro RNA-1（miR-1）能否通过抑制SDF-1的表达和分泌,调控骨髓间充质干细胞（HMSC-bm）向肿瘤组织的转移.方法 （1）分别利用miR-1表达质粒pSuper-miR-1和miR-1反义寡核苷酸,在肝癌细胞系HepG2中过表达或下调miR-1,Western blot和酶联免疫吸附实验分别检测肝癌细胞蛋白裂解物和培养上清液中SDF-1的表达和分泌水平;（2）构建融合SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因载体,将其与pSuper-miR-1共转染HEK293细胞,利用双萤光报告基因检测系统检测重组萤光素酶的表达情况.（3）利用pSuper-miR-1或miR-1反义寡核苷酸转染接种于Transwell下层小室的HepG2细胞过表达miR-1或下调miR-1水平,检测TransweH上层小室HMSC-bm向下层小室HepG2肝癌细胞的迁移情况.结果 （1）在肝癌细胞,HepG2过表达miR-1能够显著抑制SDF-1蛋白表达和分泌,而下调miR-1水平则能够诱导SDF-1的表达和分泌.（2） miR-1能够抑制携带SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因活性.（3）在Transwell下层小室的HepG2细胞中过表达miR-1后,上层小室中HMSC-bm向下层小室迁移细胞数量显著减少,而下调下层小室HepG2细胞中miR-1表达水平,则明显增加HMSC-bm向HepG2肝癌细胞的迁移.结论 miR-1能够直接抑制肝癌细胞SDF-1的表达和分泌,并藉此降低肝癌细胞对HMSC-bm的趋化作用.     

XAV939对卵巢癌细胞侵袭迁移的影响及Wnt/β-catenin信号的抑制作用

目的 探讨XAV939对卵巢癌细胞侵袭转移方面的影响及其对Wnt/3-catenin信号转导途径的抑制作用.方法 采用MTT法检测XAV939对卵巢癌细胞活力的抑制作用,划痕实验观察XAV939对细胞迁移能力的影响,Transwell细胞迁移实验检测XAV939对卵巢癌细胞侵袭转移的影响,Western blot方法检测wnt1、β-catenin、TCF4蛋白以及基质金属硫蛋白9 (Metallothionein matrix protein,MMP9)的表达水平.结果 XAV939作用48 h后,抑制率明显上升,尤其浓度达到8μmol/L(31％±1％,P =0.034)、16 μmol/L(51％±4％,P=0.028),且划痕和Transwell实验结果显示XAV939能抑制卵巢癌的侵袭和转移.此外,western blot结果显示,wnt1、β-catenin、TCF4、MMP9的表达水平均有所降低.结论 XAV939通过Wnt/β-catenin信号通路来抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移.     

微小核糖核酸-205靶向调控血管内皮生长因子-A对肝癌细胞的影响

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 205在肝细胞癌（HCC）中的作用及其与肝癌进展的关系，以及miR- 205是否通过靶向血管内皮细胞生长因子（VEGF）- A影响肝癌细胞增殖。方法 采用逆转录- 定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 205在HCC、相邻正常肝组织和肝癌细胞株HepG2、HuH- 7、SMMC- 7721、BEL- 7402、人正常肝细胞株L02中的表达。RT- qPCR检测转染miR- 205激动剂和空白对照的HepG2和HuH- 7细胞中miR- 205表达。Transwell和溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）法检测转染后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因检测VEGF- A是否为miR- 205直接作用靶标。VEGF- A siRNA敲低分析VEGF- A表达是否为miR- 205调控HCC细胞增殖、迁移和侵袭的关键介质。结果 miR- 205在HCC组织和肝癌细胞株中表达下调。miR- 205过表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。VEGF- A是HCC中miR- 205直接作用靶标，miR- 205通过靶向VEGF- A抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。 结论 miR- 205可通过下调VEGF- A表达抑制HCC生长、迁移和侵袭，这可能是未来HCC治疗的潜在靶点。     

ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响

目的 研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 稳定转染pEGFP-N1-ING5真核表达载体和pEGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株.将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组.采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株.ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05).结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标.     

miR-149-5p靶向FGF21对大鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤的促进作用

目的 探究miR-149-5p与成纤维细胞生长因子21(FGF21)的靶向关系，及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响。方法 将10只C56BL/6J雄性小鼠构建缺血再灌注(I/R)模型，qRT-PCR法检测I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平的变化。将培养至生长对数期的H9c2大鼠心肌细胞分为对照组、H/R组、H/R+miR-149-5pinhibitor组、H/R+miR-149-5p NC组、H/R+miR-149-5p mimics组、H/R+miR-149-5p mimics+FGF21组，并诱导H/R模型及转染处理。ELISA法检测H9c2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性；MTT法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡情况；qRT-PCR检测细胞中miR-149-5p的表达水平；Western blotting检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、FGF21蛋白的表达水平；双荧光素酶测定miR-149-5p与FGF21的靶向关系。结果 与假手术组比较，I/R小鼠心脏组织中miR-149-5p表达水平明显升高(P&l...     

过表达miR-29c靶向抑制AKT2增强肝癌HepG2细胞放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-29c靶向AKT2对肝癌细胞HepG2放射敏感性的影响。方法 RT-PCR检测人正常肝THLE-3细胞和肝癌HepG2细胞中miR-29c表达。给予不同剂量（0、2、4、6和8 Gy）的X射线照射后,RT-PCR检测HepG2细胞中miR-29c表达变化。经生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测miR-29c与AKT2的靶向关系。采用脂质体2000将miR-29c mimic/AKT2基因重组质粒和miR-29c inhibitor/慢病毒载体AKT2 shRNA转染至HepG2细胞中,并给予不同剂量X射线照射后,克隆形成实验和MTT实验检测miR-29/AKT2对HepG2细胞存活率和细胞活力的影响。结果 与THLE-3细胞相比,HepG2细胞中miR-29c明显降低,差异有统计学意义（t=17.816,P<0.05）;HepG2经2、4、6和8 Gy X射线照射后,细胞存活率较THLE-3细胞显著降低（t=4.541、6.823、7.218、9.363,P<0.05）,HepG2细胞中miR-29c表达显著下降（t=5.599、9.262、10.470、10.873,P<0.05）。miR-29c过表达可降低HepG2细胞存活率和细胞活力（t_存活率=4.307、7.668、7.668、6.894,P<0.05;t_细胞活力=3.443、8.116、13.434,P<0.05）;反之,抑制miR-29c表达则升高HepG2细胞存活率和细胞活力（t=4.003、6.713、7.141,P<0.05;t_细胞活力=4.282、5.113,P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明,AKT2是miR-29c的靶基因,Western blot检测结果显示,miR-29c可负向调控AKT2蛋白表达。沉默AKT2后,HepG2细胞的存活分数及细胞存活率趋势与miR-29c过表达相一致;反之,AKT2过表达则与抑制miR-29c表达相一致。结论 miR-29c可通过靶向AKT2增加肝癌细胞HepG2放射敏感性。