mTOR／p70s6k通路与运动诱导的肌肉蛋白质合成

肌肉运动可以激活一些生长因子,这些生长因子是肌肉蛋白质合成的有力刺激物。mTOR信号转导通路通过增加特异性mRNA的翻译从而在不同水平上控制蛋白质合成,mTOR是被其上游信号P13K和Akt所激活的,最后在力学负荷过载的情况下激活其效应子p70s6k。运动经由P13K／Akt／mTOR/p70s6k信号转导通路能有效刺激肌肉合成代谢信号分子的激活。虽然对磷脂酸、整联蛋白的研究已经取得了一定的进展,但是还有一些问题需要进一步研究,特别是其与mTOR信号转导通路的关系。由于不同的运动模式对于mToR／p70s6k信号通路的影响是不一样的,因此更详细地了解不同运动模型的类型、强度和时间,有利于更好地了解mTOR/p70s6k信号转导通路。     

雷帕霉素靶蛋白和p70S6激酶及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性

目的探讨雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p70S6激酶(p70S6kinase,p70S6K)及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学法检测132例胃癌患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织标本和30例慢性非萎缩性胃炎患者胃镜下活检正常胃黏膜组织标本中mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达,分析胃癌患者mTOR、p70S6K及Lgr5蛋白阳性表达率与临床病理特征的关系,对胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达的相关性进行分析。结果胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率分别为65.15%、61.36%、70.45%,癌旁组织分别为24.24%、22.73%、34.09%,均高于正常胃黏膜组织(10.00%、13.33%、6.67%),且胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P0.05);不同性别,年龄≥50岁与50岁胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P0.05),肿瘤直径≥5cm胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率(72.73%、74.03%、80.52%)高于肿瘤直径5cm者(54.55%、43.64%、56.36%),TNM分期Ⅰ+Ⅱ期者(50.98%、45.10%、54.92%)低于Ⅲ+Ⅳ期者(74.07%、72.84%、80.52%),组织学分级G_1+G_2期者(53.70%,50.00%,55.56%)低于G_3+G_4期者(73.08%、69.23%,80.77%),淋巴结转移N_0者(42.22%、44.44%、46.67%)低于N_1+N_2+N_3者(77.01%、70.11%、82.76%),侵犯程度T_1+T_2期者(42.11%、42.11%、44.74%)低于T_3+T_4期者(74.47%、69.15%、80.85%),差异均有统计学意义(P0.01);胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达呈正相关(r=0.579,P=0.004 6;r=0.502,P=0.007 1)。结论mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达与胃癌肿瘤浸润程度、淋巴结转移、TNM分期、组织学分级密切相关,可作为评估胃癌患者预后的指标。     

脊髓损伤模型大鼠星形胶质化形成与Akt/mTOR/p70S6K信号通路的激活

背景:既往研究集中于如何促进大鼠脊髓损伤后的神经再生,但对于如何抑制脊髓损伤后星形胶质细胞过度增殖反应的因素、从而改善神经再生的环境研究尚少。目的:观察Akt/m TOR/p70S6K蛋白激酶信号转导通路对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质化形成的影响,从而为改善脊髓损伤后神经再生环境、修复脊髓损伤提供分子学机制依据。方法:建立SD大鼠轻型脊髓损伤模型,分为4组:实验组造模后行ATP治疗7 d;对照组造模后行等量生理盐水治疗7 d;干预组造模后行等量的ATP联合雷帕霉素治疗7 d;假手术组椎板切除后行等量生理盐水治疗7 d。分别于造模后1,3,7,14 d采用免疫组化、Western blot法检测Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、p70S6K、p-p70S6K、胶质纤维酸性蛋白表达变化,并采用BBB运动功能评分评价大鼠脊髓损伤后经不同方法治疗后运动功能的恢复情况。结果与结论:假手术组大鼠脊髓中Akt/m TOR/p70S6K信号通路分子呈低水平表达,在脊髓损伤后其表达增加。外源性ATP可显著增强大鼠受损脊髓中Akt/m TOR/p70S6K信号分子的表达,而雷帕霉素可明显抑制ATP诱导的表达上调。激活的Akt/m TOR/p70S6K信号通路可显著减弱受损脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白的表达、抑制脊髓损伤后过度的星形胶质细胞增生反应,促进脊髓损伤后BBB运动功能评分增加,而雷帕霉素阻碍了由ATP诱导的上述效应。结果证实,ATP通过诱导Akt/m TOR/p70S6K信号通路激活抑制大鼠脊髓损伤后星形胶质瘢痕的形成,具有改善脊髓损伤后神经再生环境、促进脊髓损伤修复和改善神经功能的潜能,此信号通路是治疗脊髓损伤的重要干预环节。     

石菖蒲对抑郁模型大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨石菖蒲对抑郁模型大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。方法:采用孤养结合慢性不可预见应激方法造成大鼠抑郁,在7、14、21、28d时,检测各组大鼠旷场实验中水平运动、垂直运动得分,并用Western印迹法检测各组大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白的表达变化。结果:21d、28d时,与对照组比较,模型组垂直运动和水平运动得分减少(P0.01);与模型组比较,中、西药组垂直运动和水平运动得分增加(P0.05、0.01)。21d、28d时,与对照组比较,模型组大鼠海马Akt、mTOR、p70S6K和elF-4E蛋白的表达下调(P0.01);与模型组比较,中、西药组大鼠海马Akt、mTOR、p70S6K和elF-4E蛋白表达增加(P0.01)。结论:石菖蒲的抗抑郁效应可能通过激活mTOR信号通路相关蛋白的表达而实现。     

百草枯中毒大鼠肺组织热休克蛋白70表达及乌司他丁干预研究

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)在百草枯(Paraquat PQ)中毒大鼠肺组织中表达及乌司他丁干预对其影响.方法 72只Spragne-Dawley(SD)大鼠随机(随机数字法)分为3组:空白对照组(A组)、染毒组(B组)和乌司他丁组(C组),每组各24只.B组和C组PQ灌胃(80 mg/kg)染毒建立急性中毒模型.C组于PQ灌胃后30 min腹腔注射给UTI(10万U·kg-1·d-1).观察染毒后12,24,48,72 h各组肺组织HSP70的表达、湿/干重比(W/D)和病理改变.HSP70采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定.计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,组间单因素方差分析,结果以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与A组相比,各时间点B组和C组肺组织HSP70的表达明显增强,尤以C组为甚,差异有统计学意义.B组和C组肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血.但C组病理改变较轻.结论 乌司他丁增强HSP70的表达,从而减轻PQ中毒大鼠急性肺损伤.     

PI3k/Akt/mTOR信号通路与儿童急性T淋巴细胞白血病

PI3k/Akt/m TOR信号通路在细胞生长、增殖和生理条件下生存起着核心作用。该信号通路被认为是一个有效的靶向治疗癌症的创新性治疗策略,其异常激活已被证实与急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)相关。尽管多药联合和大剂量化疗等治疗手段不断改进及各类造血干细胞移植的应用和推广,对耐药或复发T-ALL患者治疗效果仍然较差,该病的总体疗效和预后远不如常见的B细胞系淋巴细胞白血病。因此,迫切需要寻找更有效和更少细胞毒性的抗白血病靶向药物,本文就PI3k/Akt/m TOR信号通路与T-ALL关系的最新研究进展作一综述,以期为T-ALL发病的确切分子机制及治疗提供线索。     

糖尿病大鼠肺组织超微结构病理变化及罗格列酮干预研究

目的 观察糖尿病大鼠肺组织的超微结构病理变化及其罗格列酮干预效果.方法 通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法,建立2型糖尿病大鼠模型;采用透射电镜观察对照组、单纯糖尿病组、罗格列酮干预组3组大鼠肺组织超微结构改变;同时测定羟脯氨酸含量的变化.结果 单纯糖尿病大鼠肺组织出现了胶原纤维的聚集,细胞外基质的增加,出现了肺纤维化,罗格列酮组大鼠肺组织的胶原聚集明显减轻;12周[(0.77±0.03)μg/(nag·prot)与(0.63±0.0 3)μg/(mg·prot),t=7.071]、20周[(0.93±0.10)μg/(mg·prot)与(0.87±0.10)μg/(mg·prot),t=0.831]单纯糖尿病组肺组织中羟脯氨酸均高于对照组(P均<0.05).20周罗格列酮干预组的羟脯氨酸低于同期单纯糖尿病组[(0.85±0.08)μg/(mg·prot)与(0.87±0.10)μg/(mg·prot)t=0.834,P<0.05).结论 糖尿病大鼠出现了肺纤维化,罗格列酮干预能减轻糖尿病大鼠肺纤维化的程度.

Abstract：

Objective To observe the pathological infrastructure changes of lung tissue in diabetic rat with pulmonary fibrosis and the preventive effect of rosiglitazone intervention. Methods The experimental type 2 diabetic rats were yielded by high-sugar, high fat diet plus intraperitoneal injecting streptozotocin (STZ). The pathological infrastructure changes of lung tissue were observed by transmission electron microscopy in the control, diabetes mellitus group and rosiglitazone treatment group respectively, and the hydroxyproline contentswere determined simultaneously. Results We observed accumulation of collagen fibers and extracellular matrix in the lung tissue of simple diabetic rat, which indicated pulmonary fibrosis. The hydroxyproline contents were significantly higher in diatetes mellitus group when compared to the control at 12 weeks[ 0. 77 ± 0. 03μg/(mg·prot) vs.0.63 ±0.03 μg/(mg·prot)] and 20 weeks [0.93 ±0. 10 μg/(mg·prot) vs.0.87 ±0.10μg/ (mg·prot) ]. (Ps < 0.05) , but the rosiglitazone intervention significantly reduced the hydroxyproline 3contents in diabetes mellitus rats [0.85 ±0.08 μg/(mg·prot) vs.0.87 ±0. 10 μg/(mg·prot) ,P<0.05].Conclusion Pulmonary fibrosis occurred in diabetic rats lung tissue,while rosiglitazone can alleviate it.     

电针对大鼠失神经腓肠肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/70KD核糖体蛋白S6激酶信号通路的影响

目的探讨电针延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩的可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠18只随机分为假手术组(n=6)、模型组(n=6)和电针组(n=6)。后两组钳夹伤右侧坐骨神经制备失神经骨骼肌萎缩模型。造模后第2天,电针组电针右侧足三里穴和环跳穴,共2周。取双侧腓肠肌称重,计算腓肠肌湿重比;HE染色测量肌纤维横截面积和直径;Western blotting检测大鼠骨骼肌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、70KD核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和磷酸化p70S6K (p-p70S6K)蛋白表达;实时定量聚合酶链反应检测大鼠骨骼肌中mTOR、p70S6K基因表达。结果与假手术组相比,模型组和电针组腓肠肌湿重比、肌纤维横截面积及直径显著下降(P0.001),电针组明显高于模型组(P0.01)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p-mTOR、p70S6K和p-p70S6K蛋白表达升高(P0.01);电针组高于模型组(P0.05)。与假手术组相比,模型组右侧腓肠肌mTOR、p70S6K基因表达升高(P0.05);电针组高于模型组(P0.05)。结论电针可延缓失神经骨骼肌萎缩,可能与激活mTOR/p70S6K信号通路,影响骨骼肌蛋白合成有关。     

机械通气对大鼠肺组织TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的影响

目的探讨机械通气对大鼠肺组织转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路相关蛋白的影响。方法30只健康大鼠随机分为3组,每组10只。对照组插管后不进行机械通气,另两组进行机械通气,小潮气量组(L-VT)VT8 ml/kg,大潮气量组(H-VT)VT25 ml/kg,通气24 h。观察各组大鼠实验后肺病理变化,实验前(T1)、实验后6 h(T2)、实验后12 h(T3)、实验后24 h(T4)大鼠动脉血氧分压(Pa O2)变化及肺组织相关蛋白(TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7)水平变化。结果对照组及小潮气量组的肺组织未见明显的充血及水肿,大潮气量组可见肺间质水肿,肺内炎性细胞浸润。L-VT组各时间点Pa O2与对照组无显著差异(P0.05);而H-VT组Pa O2在12 h后出现下降趋势(P0.05)。随着机械通气潮气量的增加,TGF-β1、Smad2、Smad3表达呈现上调趋势,Smad7表达呈下降趋势。结论TGF-β/Smad信号通路相关蛋白可能作为呼吸机相关性肺损伤发病的重要参考指标。     

人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;WesternBlot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6Kp-4E-BP14种蛋白的表达。结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时PtenmRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。     

mTOR、p70S6K蛋白表达与Ⅱ和Ⅲ级人脑胶质瘤预后的相关研究

【目的】探讨mTOR/p70S6K信号通路蛋白在Ⅱ级和Ⅲ级人脑胶质瘤组织中的表达及其与脑胶质瘤患者预后的关系。【方法】采用免疫组化方法,检测148例脑胶质瘤组织中 mTOR和 p70S6K的表达,并分析二者的相关性。通过Kaplan-Meier法分析mTOR和 p70S6K表达水平与无进展生存期（PFS）和总生存时间（OS）的关系。COX 回归模型分析各临床因素与预后的关系。【结果】Ⅱ级和Ⅲ级胶质瘤间 mTOR 和p70S6K表达水平相比较差异均有显著性（P ＜0．05）,且 mTOR 和 p70S6K 的表达呈正相关关系（r ＝0．596,P＜0．01）。COX回归分析表明 p70S6K是影响胶质瘤患者预后的独立因素,p70S6K高表达患者较p70S6K低表达患者生存时间短（风险率：3．606;95％置信区间：1．066～12．201;P＝0．039）。mTOR的表达情况与预后不相关。【结论】p70S6K的表达水平对预测脑胶质瘤患者的预后有临床意义,可能成为脑胶质瘤基因治疗的潜在靶点。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路在肺部疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamyc in,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用。肺癌、哮喘、肺动脉高压、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonary obstructive disease,COPD)等疾病是呼吸系统常见疾病,其病理机制涉及细胞增殖及凋亡等,与PI3K/Akt/mTOR信号通路关系密切。     

结直肠癌组织microRNA-16-5p、microRNA-493-5p表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的 探讨结直肠癌组织微小RNA-16-5p(miR-16-5p)、microRNA-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法 选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果 总RNA A₂₆₀/A₂₈₀为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rRNA带亮度比值均>1.5,总RNA浓度750 ng/μL,说明RNA纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p...     

大鼠移植心脏组织中血小板衍生生长因子A mRNA表达及雷帕霉素的干预效应

目的:血小板衍生生长因子在平滑肌细胞的表型转化过程中起重要作用。观察大鼠移植心脏组织中血小板衍生生长因子AmRNA表达的变化及雷帕霉素的干预效应。方法:实验于2005-10/2006-01在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成。将60只SD大鼠、24只Wistar大鼠按随机数字表法分为3组:①同系移植组:供、受体各12只,均为SD大鼠。②异系移植组:供体为Wistar大鼠(n=24),受体为SD大鼠(n=24),受体大鼠随机分为雷帕霉素组(n=12)和环孢霉素组(n=12),术后分别给予雷帕霉素1.25mg/(kg·d)灌胃及环孢霉素A10mg/(kg·d)皮下注射,给药60d,给药结束后留取移植心脏待检。③另12只SD大鼠直接取心脏组织作为正常对照组。指标检测:①对移植心脏组织行VanGieson染色后采用Miassystem4.1医学图像分析管理系统分析血管狭窄程度。②应用反转录-聚合酶链反应检测血小板衍生生长因子AmRNA在移植心脏组织中的表达情况。结果:36只受体SD大鼠及12只正常SD大鼠全部进入结果分析,无脱失。①同系移植组、环孢霉素组及雷帕霉素组大鼠的冠状动脉狭窄指数均显著高于正常对照组[(13.12±0.72)%,(62.45±8.12)%,(28.91±3.24)%,(0.09±0.02)%(P<0.01)],环孢霉素组及雷帕霉素组高于同系移植组(P<0.05),环孢霉素组高于雷帕霉素组(P<0.01)。②正常对照组、同系移植组、环孢霉素组及雷帕霉素组大鼠的血小板衍生生长因子AmRNA相对含量分别为0.19±0.06,0.21±0.08,1.12±0.22及0.47±0.11,环孢霉素组、雷帕霉素组显著高于同系移植组(P<0.01),环孢霉素组高于雷帕霉素组(P<0.05)。结论:血小板衍生生长因子AmRNA的高表达与移植心脏的血管硬化有关;雷帕霉素具有预防大鼠心脏移植物血管病变的作用,其作用可能与抑制心脏组织中血小板衍生生长因子AmRNA的表达有关。     

mTOR-4EBP1/p70S6K1信号通路在良、恶性胸腔积液中的表达研究

目的 探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-真核启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)/核糖体蛋白S6激酶1(p70S6K1)信号通路在良、恶性胸腔积液中的表达情况,为恶性胸腔积液的发生机制及诊疗靶标研究提供新思路、新方法。方法 选取恶性胸腔积液作为恶性测定组(44例),良性胸腔积液作为良性对照组(44例),实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测mTOR、4EBP1及p70S6K1mRNA表达情况,Western blot检测mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、4EBP1、磷酸化4EBP1(p-4EBP1)、p70S6K1及磷酸化p70S6K1(p-p70S6K1)蛋白表达情况。结果 RT-qPCR结果显示,恶性测定组中mTOR、4EBP1及p70S6K1 mRNA表达水平明显高于良性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot结果显示,恶性测定组中p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K1蛋白表达水平明显高于良性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组mTOR、4EBP1、p70S6K1蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0....     

大鼠烧伤感染模型肺组织热应激蛋白70的表达及意义

目的:了解实验大鼠热应激蛋白70(Heatstressproteins,HSP70)的表达与烧伤脓毒症的关系,探讨其作用机制。方法:将36只雄性Wistar大鼠随机数字表法分成6组,每组6只。其中4组以92℃水,18s烫伤(烫伤面积20%),腹腔注射乳酸林格氏液休克复苏,48h后尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液0.5mL(菌量1.5×109CFU/mL)制成大鼠烧伤感染模型,分别对成模后0,4,24,48h时相点进行检测;另以正常组及烧伤48h组作为对照。以免疫组化法及WesternBlot检测各组肺组织HSP70的表达,同时以偶氮显色法检测各组血浆内毒素水平,并对大鼠肺组织进行大体及镜下观察。结果:Wistar大鼠在尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液后,其血浆内毒素水平迅速上升。与正常对照组相比,烧伤感染组大鼠的血浆内毒素水平明显升高(t=2.2281,P<0.05)。正常大鼠肺组织HSP70表达较弱,表达部位在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质。在烧伤感染条件下,大鼠肺组织HSP70表达逐渐增强,至成模后24h,HSP70表达累积量达到最高峰,并呈现较明显的核表达。成模后48h,HSP70表达逐渐减弱,核表达逐渐消失,主要在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质表达。结论:HSP70与烧伤感染后的应激反应有密切关系,其表达规律与热应激反应相似。在烧伤感染的早期(24h内),热应激蛋白表达水平与血浆内     

大鼠烧伤感染模型肺组织热应激蛋白70的表达及意义

目的：了解实验大鼠热应激蛋白70（Heat stress proteins,HSP70)的表达与烧伤脓毒症的关系，探讨其作用机制。方法：将36只雄性Wistar大鼠随机数字表法分成6组，每组6只。其中4组以92℃水，18s烫伤(烫伤面积20％)，腹腔注射乳酸林格氏液休克复苏，48h后尾静脉注射绿脓杆菌：PA103悬液0．5mL(菌量1．5&;#215;10^9CFU／mL)制成大鼠烧伤感染模型，分别对成模后0，4,24，48h时相点进行检测；另以正常组及烧伤48h组作为对照。以免疫组化法及Western Blot检测各组肺组织HSP70的表达，同时以偶氮显色法检测各组血浆内毒素水平，并对大鼠肺组织进行大体及镜下观察。结果：Wistar大鼠在尾静脉注射绿脓杆菌PA103悬液后，其血浆内毒素水平迅速上升。与正常对照组相比，烧伤感染组大鼠的血浆内毒素水平明显升高(t=2．2281，P&;lt;0．05)。正常大鼠肺组织HSP70表达较弱，表达部位在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质。在烧伤感染条件下。大鼠肺组织HSP70表达逐渐增强，至成模后24h，HSP70表达累积量达到最高峰，并呈现较明显的核表达。成模后48h，HSP70表达逐渐减弱，核表达逐渐消失，主要在肺泡上皮及支气管上皮黏膜细胞的胞质表达。结论：HSP70与烧伤感染后的应激反应有密切关系，其表达规律与热应激反应相似。在烧伤感染的早期(24h内)，热应激蛋白表达水平与血浆内毒素水平有一定的相关性。     

IL-24联合顺铂通过mTOR/P70S6K信号通路抑制宫颈癌淋巴转移的研究

目的探讨重组质粒p DC316h IL-24基因联合顺铂通过m TOR/P70S6K信号通路抑制人宫颈癌siha细胞淋巴转移。方法将造模成功的人宫颈癌siha细胞雌性裸鼠模型随机分为6组,每组7只:PBS对照组、p DC316h IL-24组、低剂量顺铂组、高剂量顺铂组、p DC316h IL-24+低剂量顺铂组、p DC316h IL-24+高剂量顺铂组。观察裸鼠一般状况及淋巴结转移情况,实验结束后采用聚合酶链反应(PCR)法测定移植瘤中IL-24 m RNA的表达,CK角蛋白检测获取的淋巴组织有否癌浸润,免疫荧光法检测转移淋巴组织中m TOR和P70S6K蛋白表达,并用Western blot印迹法对其表达做定量分析。结果 IL-24基因成功转染及表达;CK角蛋白检测获取的各组淋巴组织有癌浸润;干预后各组淋巴转移数有差异,其中联合组淋巴结转移数明显低于对照组(P<0.05),而IL-24+低剂量顺铂组、IL-24+高剂量顺铂组淋巴转移数无统计学差异(P>0.05);免疫荧光法成功检测到各组转移淋巴组织中m TOR/P70S6K的表达,采用Western印迹法进行定量分析,与其他组比较,联合组表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),且m TOR与P70S6K表达呈正相关性(r=0.968,P<0.001)。结论 IL-24+低剂量顺铂治疗能达到IL-24+高剂量顺铂的治疗效果;IL-24+低剂量顺铂能明显抑制宫颈癌siha细胞淋巴转移;IL-24联合顺铂在体内通过抑制m TOR/P70S6K信号通路的活性促进细胞凋亡,从而抑制人宫颈癌siha细胞的淋巴转移。     

HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响

目的:探讨HL-60白血病细胞中核干细胞因子Nucleostemin(NS)表达下调对其非依赖P53通路的候选途径PI3K/AKT/mTOR中相关蛋白表达是否有影响。方法:采用重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至P53缺失型HL-60细胞中干扰NS的表达。用Western blot技术评价转染后HL-60细胞NS蛋白的表达水平并检测干扰前后PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白水平的表达变化。结果:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见到GFP荧光表达较强(80%)。Western blot结果显示,NS蛋白表达明显下调,干扰表达有效;干扰HL-60细胞中NS的表达后AKT、p-AKT、p70s6k、p-p70s6k蛋白变化不明显(t_1=2.31,P=0.074;t_2=3.62,P=0.069;t_3=1.60,P=0.251;t_4=2.72,P=0.113),而mTOR复合物中的GβL蛋白表达明显下调(t=15.01,P=0.002)。结论:HL-60细胞中NS蛋白可影响mTOR复合物中GβL蛋白的表达,PI3K/AKT/mTOR通路可能为NS非依赖P53作用途径之一。