EB病毒感染对人胃上皮细胞GES-1增殖的影响

目的:探讨EB病毒感染人胃上皮细胞GES-1后对GES-1增殖的影响。方法:用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,同时以正常人胃上皮细胞GES-1为对照。经G418筛选出EBV感染阳性克隆,进行细胞形态学检测,并采用免疫组织化学染色法测定EBNA1的表达以鉴定EBV感染细胞克隆。对上述细胞用细胞计数法及MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术对细胞周期进行分析。结果:感染EBV的GES-1细胞大部分为EBNA1表达阳性,通过G418筛选,获得了稳定的EBV感染细胞克隆。EBV感染组细胞体积变大,核浆比增加。细胞计数法及MTT法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖速度明显加快。流式细胞分析结果显示EBV感染组细胞S期延长。结论:EBV感染后使GES-1细胞稳定且高表达EBNA1,并且能够促进GES-1细胞的增殖。     

bcl-2基因转染对人胃上皮细胞GES-1增殖的影响

目的:观察bcl-2基因脂质体法转染人胃上皮细胞系GES-1及其转染后对GES-1细胞增殖的影响. 方法:以脂质体法转染构成bcl-2基因表达的人胃上皮细胞系GES-1细胞模型,空载体质粒pcDNA3转染GES-1细胞及正常GES-1细胞为对照;经酶标免疫组织化学法鉴定bcl-2基因表达阳性细胞;用HE染色法进行形态学观察;并采用细胞计数及MTT法分析bcl-2转染后对GES-1细胞增殖的影响. 结果:脂质体法转染bcl-2基因后,细胞高表达Bcl-2蛋白;HE染色后形态学观察无明显改变;细胞计数法绘制细胞生长曲线结果显示bcl-2基因转染6 d后细胞生长速度明显超过对照组,MTT法结果显示bcl-2基因转染第24,48,72 h, A490 nm值分别为4.15±0.31,5.98±0.56,8.94±0.79,对照组分别为3.01±0.20,4.76±0.52,7.69±0.84,两组相比较具有显著性差异(P＜0.05). 结论:bcl-2基因转染使GES-1细胞稳定且高表达Bcl-2蛋白,并促进了细胞增殖.     

bcl-2基因转染对人胃上皮细胞GES-1细胞周期的影响

①目的探讨bcl-2基因转染对人胃上皮细胞GES-1细胞周期的影响。②方法采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的pcD-NA3/bcl-2和脂质体(lipofectamine)法转染人胃上皮细胞系GES-1,同时以pcDNA3(NEOr)空载体质粒转染同一细胞作为对照,用新霉素418(G418)筛选出bcl-2转染的阳性克隆。流式细胞术检测各组细胞细胞周期。③结果bcl-2基因转染组S期细胞数明显较对照组增多。④结论bcl-2基因转染可使S期细胞增多,提高转染细胞的增殖能力。     

EB病毒感染人胃上皮细胞GES-1细胞株的建立与鉴定

①目的建立EB病毒感染的人胃上皮细胞细胞株，并进行鉴定。②方法将舍有NEOr基因的重组EBV感染人胃上皮细胞GES-1．同时以pcDNA3（NEOr）空载体质粒经脂质体法持染同一细胞为对照，用有限稀释法进行克隆，经G418筛选，用免疫荧光组织化学法鉴定EBV编码的核抗原1（EBNA1）的表达情况，直至获得100％表达EBV的单克隆细胞株。③结果感染EBV的GES-1细胞大部分为EBNA1阳性，而转染pcDNA3（NEOr）空载体质粒的GES-1细胞均为EBV阴性。（蓟结论成功地建立EB病毒感染的人胃上皮细胞GES-1细胞株，对EB病毒致胃癌机制的研究具有重要的意义。     

EB病毒转化人胃上皮细胞GES-1中bcl-2基因的表达

目的 研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后bcl-2基因的表达状况,探讨6cl-2基因在EBV相关胃癌发生中所起的作用.方法 采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV产生细胞系Akata 1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照:采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1基因的表达以鉴定EBV感染细胞克隆及测定EBV感染细胞中Bcl-2蛋白的表达.结果 与对照相比较,感染细胞中Bcl-2蛋白的表达阳性.结论 EBV感染可使人胃上皮细胞Bcl-2蛋白表达增高,EBv对人胃上皮细胞的转化作用可能与bcl-2基因的过度表达有关.     

腹水草水提液对乙醇损伤人胃黏膜上皮细胞活性及凋亡的影响研究

[目的]研究腹水草水提液对人胃黏膜上皮细胞株GES-1细胞的保护作用,探讨其对乙醇损伤后GES-1细胞凋亡的影响。[方法]采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法测定腹水草水提液和阳性对照药雷尼替丁对GES-1细胞的最大安全浓度(maximum non-toxic concentration,TC0),其中以不加药物处理的细胞为正常组,采用SPSS 19.0统计软件计算腹水草水提液对GES-1细胞增殖的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。分别以含低(20μg·mL~(-1))、中(40μg·mL~(-1))、高(80μg·mL~(-1))剂量腹水草水提液和雷尼替丁(45μg·mL~(-1))的DMEM培养基培养GES-1细胞48 h后,改用含5%乙醇的DMEM培养基培养4 h,运用SRB法和Annexin-V/PI双染法分别检测GES-1细胞的活性和凋亡情况。[结果]与正常组相比,在5~160μg·mL~(-1)剂量范围内,腹水草水提液对GES-1细胞存活率无显著影响(P﹥0.05);当腹水草水提液剂量≥320μg·mL~(-1)时,细胞存活率显著降低(P0.05或P0.01);TC0和IC50分别为160μg·mL~(-1)和5 096μg·mL~(-1)。与正常组比较,雷尼替丁剂量在2.8~180μg·mL~(-1)范围内,GES-1细胞存活率均﹥90%;当雷尼替丁剂量≥360μg·mL~(-1)时,细胞存活率显著降低(P0.05);TC0和IC50分别为180μg·mL~(-1)和5 396μg·mL~(-1)。经低、中、高剂量腹水草水提液和雷尼替丁预处理48h后,GES-1细胞的存活率均显著高于模型组(P0.01);腹水草水提液中、高剂量组细胞的存活率均显著高于雷尼替丁组(P0.05,P0.01)。模型组细胞凋亡率显著高于正常组(P0.01);经腹水草水提液低、中、高剂量预处理后,细胞凋亡率显著低于模型组(P0.01),且呈剂量依赖性;高剂量组的凋亡率低于雷尼替丁组,但两组间差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]在腹水草水提液5~160μg·mL~(-1)和雷尼替丁2.8~180μg·mL~(-1)的剂量范围内,两者对GES-1细胞均无毒性。腹水草水提液显著提高乙醇损伤后GES-1细胞的存活率,并降低其凋亡率。中、高剂量腹水草水提液对乙醇损伤细胞的保护作用优于雷尼替丁。     

半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃黏膜上皮细胞GES-1凋亡的影响

[目的]观察半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃上皮细胞GES-1调亡的干预作用。[方法]实验分正常组、感染组和半夏泻心汤组,感染组和半夏泻心汤组按50∶1的细菌∶细胞比例感染GES-1细胞,正常组和感染组均以正常鼠血清进行培养,半夏泻心汤组以含药鼠血清进行培养,采用MTT法检测细胞的增殖情况,DAPI染色分析细胞凋亡情况。[结果]与正常组比较,感染组的细胞增殖显著下降（P〈0.05）,细胞凋亡明显提高（P〈0.05）。与感染组相比,10%、15%的含药血清能促进细胞增殖（P〈0.05）,半夏泻心汤组能降低细胞凋亡（P〈0.05）。[结论]半夏泻心汤具有改变幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞凋亡的作用。     

EB病毒BARF1基因对人胃上皮细胞恶性转化的作用

目的 探讨EB病毒编码BARF1基因在人胃上皮细胞恶性转化中的作用.方法 用携带BARF1基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,通过G418筛选,获得稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株.GES-1细胞被分为4组,包括1个转染BARF1基因的细胞组,1个转染BARF1基因并...     

幽门螺杆菌毒素蛋白Tipα对人胃黏膜上皮细胞株GES-1的影响

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导相关蛋白(Tipα)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1的影响.方法 从Hp 26695菌株获取位于Hp 0596的Tipα基因,并将其开放读码框序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1.将重组质粒pcDNA3.1-Tipα和空质粒脂质体转染人胃黏膜上皮细胞GES-1,用G418筛选阳性克隆.同时用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹的方法检测Tipα基因的表达.以空质粒转染的GES-1细胞和正常的GES-1细胞作为对照组.采用MTY,流式细胞术,ELISA和Western印迹的方法分别检测细胞的增殖、细胞周期、致炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-8的变化,Bcl-2和P53基因的表达.结果 成功构建了Tipα基因重组真核表达质粒.Tipα基因和空载体分别转染GES-1细胞,通过G418筛选出了稳定转染株.MTY检测结果显示与对照组相比,转染重组质粒pcDNA3.1-Tipα的GES-1 (GpcDNA3.1-Tipα)生长曲线上升,提示GpcDNA3.1-Tipα细胞比转染空质粒组(GpcDNA3.1)和正常对照组(GES-1)增值更快.流式细胞术细胞周期分析显示GpcDNA3.1-Tipα细胞进入S期的比例多于GES-1细胞组和GpcDNA3.1细胞组[(45.33±1.03)%vs(38.24±1.25)%、(33.94±1.67)%],G1期比例低[(41.39±0.08)%vs(49.74±0.12)%、(49.27±0.15)%],细胞凋亡率明显低(0.76±0.04 vs 16.84±2.16、8.36±1.07).ELISA结果显示:GpcDNA3.1-Tipα,GpcDNA3.1和GES-13组细胞胞内TNF-α的浓度,各组之间差异无统计学意义(P＞0.05),而胞外TNF-α浓度,GpcDNA3.1-Tipα组高于两个对照组(均P＜0.05);GpcDNA3.1-Tipα胞内和胞外IL-1β、IL-8的浓度均高于两个对照组(P＜0.05).Western印迹结果与两个对照组比较,GpcDNA3.1-Tipα细胞Bcl-2表达增加,而P53基因表达则受到抑制.结论 GpcDNA3.1-Tipα细胞能稳定高表达Tipα蛋白,诱导致炎细胞因子TNF-β,IL-1β,IL-8的高表达,促进细胞的增殖,减少细胞凋亡,可能通过上调Bcl-2基因,下调P53基因.Tipα作为一种新的Hp毒素蛋白在Hp致胃癌发生中可能发挥重要作用.     

胃粘膜上皮细胞系GES-1细胞凋亡密度依赖性的研究

目的：探讨细胞密度对GES－1细胞调亡的影响及其机制。方法：细胞凋亡的存在以Giemsa染色证实，bcl－2基因的表达采用细胞原位杂交技术。结果：正常培养情况下GES－1细胞凋亡呈细胞密度依赖性；8mg／L的五肽胃泌素能增强bcl－2基因的表达但不能抑制密度依赖的细胞凋亡。结论：bcl-2基因表达可能与GES-1细胞凋亡的密度依赖性无关。     

康复新液对非甾体抗炎药诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞损伤的影响

目的:观察康复新液对非甾体抗炎药引起的GES-1细胞形态损伤和凋亡相关蛋白变化的影响,为其临床治疗胃溃疡提供科学依据。方法:采用非甾体抗炎药制备胃黏膜上皮细胞损伤模型,MTT法测定不同浓度康复新液对其增殖和形态变化影响;Hoechst/PI染色检测凋亡发生情况; Western blot测定细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果:浓度过高或过低的康复新液均会对GES-1细胞的生长有一定的抑制作用,适当浓度的康复新液能一定程度减轻非甾体抗炎药引起的细胞损伤,减少凋亡细胞和死细胞数量;与非甾体抗炎药组相比较,康复新液组和非甾体抗炎药+康复新液组Bcl-2和Bax水平比值升高,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:康复新液能抑制非甾体抗炎药引起的GES-1细胞损伤,其作用机制可能与减轻非甾体抗炎药引起的GES-1细胞凋亡有关。     

AQP1、AQP2和AQP3在人膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其意义

目的：观察水通道蛋白1（Aquaporin 1,AQP1）、水通道蛋白2（Aquaporin 2,AQP2）、水通道蛋白3（Aquaporin 3,AQP3）在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织中的表达与分布,探讨其意义。方法：取膀胱尿路上皮癌组织25例及正常膀胱组织25例,应用免疫组织化学方法检测AQP1 、AQP2和AQP3在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱组织中的表达及分布。结果：AQP1散在表达于正常膀胱组织中微血管和小动脉的内皮细胞的细胞膜及细胞质,在膀胱尿路上皮癌组织中AQP1大量表达于肿瘤的血管内皮细胞的细胞膜及细胞质;膀胱尿路上皮癌中AQP1表达水平较正常膀胱组织明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);AQP2主要表达于膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织的细胞间质中,两者表达强度基本相同,差异无统计学意义(P＞0.05);AQP3主要表达在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织的黏膜上皮细胞的胞质及胞膜,在癌组织中的表达强度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：AQP1 、AQP3在膀胱尿路上皮癌组织中表达明显增高。提示AQP1、AQP3可能与膀胱尿路上皮癌的发生和发展密切相关,其机制需要进一步深入研究。     

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的:观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨?方法:real-time PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 mRNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)?波形蛋白(vimentin)]的变化情况?结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的mRNA表达水平与未转染组相比提高(6.18 ± 0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和mRNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87 ± 6)个,而空载对照组为(41 ± 6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调?结论:Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关?     

不同程度低氧对体外培养人胃粘膜上皮细胞株GES-1中MICA表达的影响

目的 研究不同程度低氧对体外培养人胃粘膜上皮细胞株GES-1中MICA基因表达的影响.方法 建立GES-1细胞体外低氧培养模型.采用RT-PCR和免疫细胞化学技术分别检测模型MICA基因和蛋白的表达变化.结果 在缺氧环境下培养0、48和72 h后MICA蛋白表达(57.67±2.30、96.14±1.75、259.59±3.51)及mRNA/β-actin比值(0.22±0.03、0.37±0.02、0.68±0.03)都随缺氧时间不同表达量存在差别(P＜0.05),且表达量随缺氧时间延长而升高,直线相关分析显示二者表达呈显著正相关.结论 低氧可以刺激胃上皮细胞株GES-1中MICA基因的表达量显著增加.     

半边莲、玉米须、腹水草等对于正常人的利尿作用

根据文献所载,中药和民间药中用作利尿药的很多,其中也有不少种经过实验研究而得出一定结论。最近报告,对于晚期血吸虫病的腹水病例半边莲、腹水草、虫笋-葫芦、龙虎草等均能去除腹水,减少腰围,改善病人的情况。玉米须、商陆、泽泻、杜仲对慢性肾炎,肝     

急性高原低氧对小鼠学习记忆及海马CA1区PKA、CREB表达的影响

目的 初步探讨急性高原低氧对小鼠学习记忆能力以及海马CA1区PKA、CREB表达的影响.方法 将小鼠随机分为两组：高海拔对照组（青海省西宁地区,海拔2361米）、急性高原组（青海省果洛州花石峡地区,海拔4300米）.两组小鼠在不同海拔均喂养5天后,应用跳台实验观察小鼠训练时的潜伏期及错误次数,评估急性高原低氧对小鼠学习记忆能力的影响;两组小鼠在不同海拔均喂养8天后断头取脑,通过免疫组织化学法半定量观察海马区环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP response element—binding protein,CREB）、蛋白激酶A（PKA）的表达.结果 急性高原组跳台实验潜伏期显著短于高海拔对照组（P＜0.05）,且错误次数显著增多（P＜0.05）;CREB及PKA主要在海马CA1区表达,且急性高原组表达量明显低于高海拔对照组（P＜0.05）.结论 急性高原低氧可能使小鼠学习记忆能力下降,其作用机制可能与CREB、PKA表达降低导致cAMP-PKA-CREB通路障碍有关.     

氨氯地平对造影剂致人肾小管上皮细胞毒性的保护作用

目的:从细胞分子水平探讨氨氯地平对造影剂(泛影葡胺)致人肾小管上皮细胞毒性的保护作用及其机制.方法:选择人肾小管上皮细胞株(human kidney cell,HKC)为研究对象,实验分为4组,即模型组(泛影葡胺111 g/L)、预防组(泛影葡胺111 g/L 氨氯地平10-5 mol/L)、氨氯地平对照组(氨氯地平10-5 mol/L)和培养基对照组(单纯无血清DMEM-F12培养基),采用四甲基偶氮唑盐试验和细胞培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定泛影葡胺对HKC细胞毒性,采用Hochest33258荧光染色和流式细胞仪DNA分析观察泛影葡胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡.采用Western blot和免疫荧光法检测凋亡调控基因Bax的蛋白表达,采用荧光比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性.结果:与模型组相比,预防组细胞活力明显增高,细胞培养上清中LDH浓度明显减低,细胞凋亡率显著降低,Bas蛋白表达下调,caspase-3活性降低.结论:氨氯地平可显著减轻泛影葡胺所致的肾小管上皮细胞损伤,对泛影葡胺诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用,其机制可能为通过Bas和caspase-3介导调控造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡.     

白藜芦醇对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察白藜芦醇对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度白藜芦醇保护组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200mg/L过氧化氢,白藜芦醇保护组加入不同浓度(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)后加入200μmol/L过氧化氢。采用CCK-8检测细胞抑制率,SOD及MDA试剂盒检测细胞培养液中SOD与MDA含量。结果通过CCK-8法检测发现50mg/L、100mg/L白藜芦醇保护组作用2h,8h,24h可以明显降低细胞抑制率,且与氧化损伤组相比差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组50mg/L、100mg/L SOD活性与氧化损伤组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);白藜芦醇保护组12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L 2h、8h、24h MDA含量与氧化损伤组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇对过氧化氢诱导的人RPE细胞氧化损伤有一定的保护作用,提示白藜芦醇对AMD的预防和治疗有一定的作用。