应用实时荧光PCR法建立献血者血小板特异性抗原HPA-1～6/10/15/21基因分型资料库

目的 研究中山地区单采血小板献血者人类血小板特异性抗原HPA-1～6/10/15/21共9对抗原基因多态性区域分布特点，建立中山地区血小板献血者HPA基因分型资料库。方法 用实时荧光定量PCR-TaqMan探针法对中山地区192名单采血小板献血者进行HPA-1～6/10/15/21基因分型，计算基因型频率、基因频率。结果 HPA-1～6/10/15/21中，HPA-4、10系统呈单特异性，只检测出aa基因型，未检出等位基因HPA-b;HPA-1、2、5、6、21基因型以aa占绝大多数；HPA-3、15具有较高的杂合度，基因型HPA-3aa、HPA-3ab、HPA-3bb频率分别是0.307 3、0.494 8、0.197 9;基因型HPA-15aa、HPA-15ab、HPA-15bb频率分别是0.270 8、0.505 2、0.224 0。结论 中山地区血小板献血者HPA-1～6/10/15/21基因与其他地区的同类资料相比显示出地域差异性，建立HPA基因分型资料库有助于解决血小板不配合输注产生同种免疫的问题。     

抗HPA-3a抗体所致新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜一例并文献复习

目的 探讨抗血小板特异性抗原(HPA)-3a抗体所致新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的诊断和治疗.方法 采用多重PCR及基因测序技术检测1例出血伴血小板减少新生儿及其父母HPA-1~21bw系统基因型,采用流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测患儿及其母亲血清血小板特异性抗体并进行特异性鉴定.结果 患儿出生后2 h出现全身多发皮下出血点、血尿及咖啡色呕吐物.基因分型显示患儿为HPA-3ab、母亲为HPA-3bb、父亲为HPA-3aa;患儿及母亲血清中均含与患儿父亲血小板反应的特异性抗体,经MAIPA技术鉴定为抗HPA-3a抗体.结论 发现1例抗HPA-3a抗体所致NAITP患者,通过临床特征分析为该病的诊断和治疗提供借鉴与参考.     

新乡地区献血者HPA1-18系统基因分型研究

目的研究新乡地区固定单采血小板献血者HPA1-18系统基因多态性分布,为输血患者寻找相容性血小板提供可靠依据。方法采用PCR-SSP法对150名固定单采血小板献血者标本进行HPA1-18系统的基因分型。结果HPA1-18系统基因在本地区固定献血者中分布频率分别为HPA-1a 0.990和-1b 0.010,HPA-2a 0.947和-2b 0.053,HPA-3a 0.376和-3b 0.624,HPA-15a 0.476和-15b 0.524;其余HPA系统只检测到a等位基因,故其基因频率均为1.000。结论HPA-2、3、15系统杂合度较高,抗原分布不配合率相对高,在临床配合性血小板输注中必须加以重视。     

乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群HPA-15基因多态性分析

目的分析乌鲁木齐地区哈萨克族献血人群血小板特异性抗原HPA-15基因多态性,为临床血小板输注提供依据。方法采用聚合酶链-序列特异性引物技术(PCR-SSP)对乌鲁木齐地区100名无血缘关系的哈萨克族献血者的HPA-15系统进行基因分型,计算基因型频率和基因频率。结果哈萨克族献血人群HPA-15a/15a、HPA-15a/15b、HPA-15b/15b基因型频率分别为0.21、0.53、0.26。HPA-15a、HPA-15b的基因频率分别为0.475和0.525。HPA-15a、HPA-15b抗原不配合率分别为0.1997和0.1747。结论乌鲁木齐地区哈萨克族HPA-15抗原不配合概率高,可能导致产生同种免疫性血小板抗体的概率增加,在临床血小板输注中的作用值得重视。     

流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针基因分型方法在血小板供者资料库建立中的应用

目的 探讨高通量流式细胞仪结合序列特异性寡核苷酸探针(FLOW-SSO)技术在人类血小板抗原( HPA)基因分型中的应用.方法 采用FLOW-SSO技术对1378例汉族血小板捐献者HPA1～6,15系统的基因型进行检测;并以10份国际输血协会(ISBT)第12届血小板免疫学术研讨会提供的质控样品对FLOW-SSO技术的可靠性进行考核.以3家供应商提供的不同聚合酶链反应-序列特异引物法(PCR-SSP)试剂,对50份血小板样品的基因分型结果进行比对试验.分型结果采用x2检验考察HPA系统的基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.结果 通过FLOW-SSO方法获得的1379例血小板供者HPA等位基因频率如下,HPA-1a为0.9927,HPA-1b为0.0073,HPA-2a为0.9536,HPA-2b为0.0464,HPA-3a为0.5700,HPA-3b为0.4300,HPA-4a为0.9982,HPA -4b为0.0018,HPA-5a为0.9804,HPA-5b为0.0196,HPA-6a为0.9822,HPA-6b为0.0178,HPA- 15a为0.5337及HPA-15b为0.4663.基因频率检测结果经x2检验,其分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.ISBT提供的10份样品考核结果相符率为100％.50份血小板样本采用3种不同的PCR-SSP试剂测定的HPA1～6,15基因分型结果,与FLOW-SSO技术测定结果完全一致.结论 FLOW-SSO基因分型技术有便捷、重复性好及高通量等特点,适用于血小板供者资料库的血小板基因分型.     

河北地区汉族人群人类血小板同种抗原等位基因频率研究

目的 调查河北地区汉族人群人类血小板同种抗原(HPA)系统等位基因频率.方法 该地区汉族人群血小板捐献者血液样本765份,采用PCR-SSP方法检测HPA1-17基因型,统计基因频率.结果 河北地区汉族人群中除HPA-1、2、3、4、5、6、15基因系统有b基因型别外,其他HPA基因系统均为a/a纯合子,HPA-3、15抗原不配合概率较高,分别为0.369 4、0.374 8.结论 在河北汉族人群中,HPA-3、15抗原不配合概率高,推测HPA-3、15是引起本地区血小板输注反应的主要原因,在血小板输血中应加以重视.     

特发性血小板减少性紫癜与HPA等位基因相关性研究

目的探讨HPA-1—6、15等位基因与特发性血小板减少性紫癜(ITP)的相关性。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR-SSP)法,对ITP组(n=25)和健康对照组(n=25)进行HPA-1—6、15共7个抗原系统基因分型,采用ELISA法和微柱凝胶法检测2组人群血小板吸附抗体及血小板游离抗体。结果ITP组HPA-3的基因频率明显异于对照组(P<0.01),其中HPA-3 a基因频率高于对照组,HPA-3b基因频率低于对照组,其余等位基因在2组间未发现有明显区别(P>0.05);ITP组血小板游离抗体检测到17例阳性(68%),吸附抗体检出21例(84%),对照组血小板抗体未检出。结论本次研究显示HPA-3抗原系统和ITP的发病可能存在一定的关联;血小板吸附抗体在ITP中检出率明显高于游离抗体。     

血小板特异性糖蛋白抗体在血小板输注无效患者中分布的研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1～17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a～14a、16a、17a(1.000),7～14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。     

张家口地区机采血小板捐献者HPA分型研究

目的:分析河北省张家口地区血小板捐献者血小板特异性抗原HPA1-5,15系统的基因多态性。方法:采集血小板捐献者静脉血并提取DNA,采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法进行血小板特异性抗原分型,计算基因频率、基因型频率并与国内外其他地区进行比较是否存在差异及是否表现地区特异性。结果:HPA-1、HPA-2、HPA-4系统中基因表达均为纯合子aa,未出现表达纯合子bb的存在者,其中HPA-1和HPA-4系统各发现杂合子ab表达1例(1%),HPA-2系统发现杂合子ab表达14例(14%);HPA-5系统基因表达主要为纯合子aa(98%),极少数表达纯合子bb(2%);HPA-3和HPA-15系统基因表达杂合程度较高,HPA-3系统基因表达aa、ab、bb表达比例分别为46%、40%、14%,HPA-15系统基因表达aa、ab、bb表达比例分别为21%、64%、15%。结论:张家口地区血小板特异性抗原HPA1-5,15系统基因频率具有本地区特点;HPA-3和HPA-15系统基因表达杂合程度较高,引发同种免疫及血小板输注无效的可能性较大,因此应引起注意。     

吉林地区人群HPA-1～6,15系统基因多态性分析

目的调查吉林地区人群人类血小板抗原(HPA)基因多态性。方法采用PCR-SSP方法对419名血小板捐献志愿者进行血小板抗原HPA-1~6,15系统基因分型,通过统计方法对分型结果进行基因多态性分析。结果血小板抗原HPA-1~6,15系统基因频率分别为HPA-1aa 0.984,HPA-1ab 0.016,HPA-2aa 0.872,HPA-2ab 0.123,HPA-2bb 0.004,HPA-3aa 0.350,HPA-3ab 0.483,HPA-3bb 0.166,HPA-4aa 0.992,HPA-4ab 0.008,HPA-5aa0.996,HPA-5ab 0.004,HPA-6aa 0.984,HPA-6ab 0.016,HPA-15aa 0.318,HPA-15ab 0.492,HPA-15bb 0.190。结论吉林地区人群HPA-1~6和HPA-15系统基因多态性具有本地区特点,HPA-3和HPA-15系统不配合率最高,HPA-2系统次之。     

同种免疫性血小板减少症患者CD109与细胞表面HPA—15（Gov）多态性关联

背景 针对CD109细胞表面的人类血小板同种抗原（HPA）-15系统的同种抗体能够引起胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT），输血后紫癜和血小板输注无效。然而，抗-HPA-15的检测因血小板在制备及保存期间CD109分子的不稳定性和表达的差异而变得很困难。研究设计和方法本研究对1403例患者进行了HPA-15同种抗体的分析，其中930例为FNAIT，473例为多次输血（PT）患者，以已知表型的血小板，测定特异性固相血小板抗原的单克隆抗体（MAIPA）检测法测定。建立了一种DNA分型技术，     

长春地区无偿献血者HPA1-6,15基因分型及频率调查

目的调查北方汉族人群人类血小板抗原（HPA）的基因频率及分布规律。建立一支HPA-1a,-2a,-4a,-5a,-6a阴性及已知HPA抗原的献血者队伍。方法随机抽取172名长春地区固定无偿血小板捐献者静脉血3ml,枸橼酸钠抗凝;采用TIANGEN试剂盒提取DNA。基因定量仪测定DNA的浓度和纯度。采用PCR-SSP方法进行试验。最后进行统计学分析。结果各表现型的频率分别是：HPA-1aa 0.988,HPA-1ab 0.012,HPA-2aa 0.833,HPA-2ab 0.159,HPA-2bb 0.008,HPA-3aa 0.355,HPA-3ab 0.482,HPA-3bb 0.163,HPA-4aa 0.988,HPA-4ab 0.012,HPA-5aa 0.971,HPA-5ab0.029,HPA-6aa 0.977,HPA-6ab 0.023,HPA-15aa 0.286,HPA-15ab 0.498,HPA-15bb 0.216。未发现HPA 1bb、4bb、5bb、6bb。各基因型的频率分别是：HPA-1a 0.994,HPA-2a 0.913,HPA-3a 0.596,HPA-4a 0.994,HPA-5a 0.985,HPA-6a 0.988,HPA-15a 0.535。其中基因频率占99%以上的有HPA-1a-、4a。各基因型的不配合率分别是HPA-1a 0.011,HPA-2a0.147,HPA-3a 0.366,HPA-4a 0.011,HPA-5a 0.028,HPA-6a 0.023,HPA-15a 0.374。结论本研究有助于在长春地区建立已知HPA抗原的机采血小板捐献者队伍,可以提高血小板抗体的检出率,为同种免疫性血小板减少症患者提供HPA相合的血小板。     

应用PCR—SSP法分析中国人血小板抗原基因型频率

本研究建立了在同一PCR反应条件下同时检测人血小板抗原（human platelet antigen,HPA）系统HPA-1到HPA-5的PCR-SSP检测法。应用该方法分析了110例健康献血员的HPA-1到HPA-5的基因型,并以此为依据推算了中国人HPA-1到HPA-5各亚型的基因频率。结果表明HPA-1a和HPA-1b的基因频率分别为0.91和0.09,HPA-2a和HPA-2的基因频率分别为0.86和0.14,HPA-3a和HPA-3b的基因频率分别为0.60和0.40,HPA-4a和HPA-4b的基因频率分别为0.92和0.08,HPA-5a和HPA-5b的基因频率分别为0.85和0.15。结论：基因组DNA的血小板抗原PCR-SSP分型法切实可行,可广泛应用于临床血小板抗原的分型。     

北京地区汉族献血人群血小板HPA1-17基因多态性的研究

目的分析北京地区588名汉族无偿献血人群HPA基因多态性分布特点,计算HPA抗原不配合率的大小,分析有临床意义的HPA抗原系统并建立已知HPA基因型的血小板供者数据库。方法基因分型采用PCR-SSP(Polymerase Chain Reaction with Sequence-Specific),计算基因频率、基因型频率和χ2值,确定是否符合哈迪——温伯格平衡定律,并与国内外不同人群进行比较分析是否存在差异。结果 588名献血者均表达出HPA-a基因中的1a-17a基因;仅表达HPA-b基因中的1b-8b和15b;在基因型中主要以aa纯合子表达为多,其次是ab基因型表达较多,bb纯合子表达最少。具有最高杂合度的是HPA-3和HPA-15,HPA-3的aa、bb、ab基因型频率分别是0.352 0、0.4286、0.219 4;HPA-15的aa、bb、ab基因型频率分别是0.205 8、0.471 1、0.323 1。HPA9-14、16、17只表达a基因,抗原不配合率最低。χ2检验计算结果,HPA-3基因分布不符合哈迪——温伯格平衡定律,其余基因符合哈迪——温伯格平衡定律。结论该研究表明北京地区588名献血者的HPA基因分布具有自身特点,建立北京地区HPA基因供者库,在临床治疗方面具有重要意义。     

国内首例抗HPA-5b引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的检测、诊断及分析

本研究旨在探讨抗HPA-5b抗体引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜（NAITP）的实验检测及临床诊断。临床监测患儿血小板计数及其他临床表现;多重PCR及DNA测序检测患儿及其父母HPA-1—21bw系统基因型;流式细胞术（FCM）和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术（MAIPA）检测及鉴定患儿及其母亲血清中的血小板特异性抗体。结果表明：患儿临床症状较轻,基因分析显示患儿为HPA-5ab,父亲为HPA-5ab,母亲为HPA-5aa;患儿母亲血清中含与父亲血小板反应的血小板特异性抗体为抗HPA-5b抗体。结论：该病例为抗HPA-5b抗体引起的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜。     

PCR-SSP在人类血小板抗原1—6、15系统基因分型中的应用

目的探索PCR-SSP技术在人类血小板抗原(HPA)-1、2、3、4、5、6、15系统的基因分型中的应用。方法合成23条序列特异性引物,通过调节引物浓度、Mg2+离子浓度和探索最佳PCR扩增条件,建立HPA-1—6、15系统同步扩增基因分型方法。用该法盲检100名献血者HPA-1—6、15系统的基因分型结果,与用美国G&T公司的HPA-1—6、15系统的基因分型试剂所测试的这100名献血者的基因分型结果进行比较。结果该分型方法和美国G&T公司试剂同时检测100名随机献血者,其HPA-1—6、15分型结果完全一致,符合率达100%,基因频率分别是:HPA-1a和1b为1和0,HPA-2a和2b为0.98和0.02,HPA-3a和3b为0.63和0.37,HPA-4a和4b为0.997和0.003,HPA-5a和5b为0.997和0.003,HPA-6a和6b为1和0,HPA-15a和15b为0.548和0.450。结论该分型方法具有简便、快速、准确的特点,适合常规HPA基因分型。     

献血者血小板1-16抗原基因遗传多态性分析及已知HPA型供者数据库的建立

本研究的目的是分析人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）基因多态性,根据分布频率来判断HPA抗原不配合比率以及抗体产生的机会,确定有临床意义的血小板抗原系统,并建立邯郸地区血小板基因频率数据库和供者库.采用SSP-PCR方法对邯郸地区148名随机献血者进行HPA1-16抗原32个等位基因的检测分析,并与不同人群的分布频率进行比较.结果表明：每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a基因;HPA-4a、7a-14a、16a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、-2、-5、-6主要以a/a纯合子为多,a/a基因型频率分别是0.9595、0.8108、0.9865、0.9797,没有b/b纯合子出现.在HPA1-16中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.2230、0.5270、0.2500;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.3851、0.5135、0.1014.经x2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.邯郸地区随机献血者HPA1-5系统基因频率与石家庄地区相似（P＞0.05）;与我国台湾人群进行HPA1-13、HPA-15的比较,HPA-1、-2、-6具有明显的不同（P＜0.05）,其它相似（P＞0.05）;与韩国人群进行HPA1-8的比较,除HPA-3具有明显不同外（P＜0.05）,其余均相似（P＞0.05）;与美国黑人进行HPA1-5的比较,HPA-1、-2、-5具有明显的差异（P＜0.05）;与英国人进行HPA1-11的比较,HPA-1、-5具有明显的不同（P＜0.05）.结论：北方地区中国人群HPA-2、-3、5、-15系统具有多态性,且HPA抗原分布不配合比率较高,这必然造成免疫暴露的机会增加,提示在临床上可能具有重要的免疫学意义.同时,在此次研究数据的基础上建立了邯郸地区血小板基因频率数据库和血小板已知型供者库.     

拉萨藏族献血人群HPA-1～6、15基因多态性

目的 了解血小板特异性抗原(HPA)-1～6、15基因多态性在拉萨藏族献血人群中的分布特征.方法 采用聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术对405名藏族无关献血者作HPA-1～6、15基因分型.结果 405名无关献血者HPA各等位基因的频率分别为:HPA-1a:0.9383,HPA-1b:0.061 7;HPA-2a:0.971 6,HPA-2b:0.028 4;HPA-3a:0.617 3,HPA-3b:0.382 7;HPA-4a:0.992 6,HPA-4b:0.007 4; HPA-5a:0.949 4,HPA-5b:0.050 6; HPA-6a:0.991 4,HPA-6b:0.008 6;HPA-15a:0.603 7,HPA-15b:0.396 3.人群资料比对结果显示,与南方汉族人群(n=1 554)相比,拉萨藏族献血人群HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15系统基因频率具有明显差异;与新疆柯尔克孜族人群(n =105)相比,仅HPA-2系统基因频率具有明显差异.拉萨藏族献血人群HPA-1b等位基因频率明显低于高加索人群(n=119),而与新疆柯尔克孜族人群(n =105)相近,但明显高于亚洲其他黄种人群.结论 拉萨藏族献血人群的HPA各位点基因频率显示出明显的民族和地域性特征.     

重组表达糖蛋白GPIIIa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体

目的:应用偶联血小板GPIIIa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体。方法:以倍比稀释成12个浓度(原液~1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度。以8份抗HPA-1a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性。结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml)。微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照。36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果。其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPIb/IX和非HPA-1特异性的抗-GPIIb/IIIa)未发生交叉反应。结论:基于重组偶联血小板GPIIIa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定。     

江苏地区汉族人群血小板CD36抗原表达差异的研究

目的了解江苏地区汉族人群血小板上CD36抗原表达的差异。方法应用流式细胞技术检测江苏地区140位汉族献血者血小板上CD36抗原的表达,并分析其表达量。结果本组江苏汉族献血者中,血小板上CD36抗原表达缺失型占比2.86%(4/140);非缺失型占比97.14%(136/140),其中低表达29例、中表达93例,高表达14例,三者的平均荧光强度(MFI)分别为1 821.4±21.8 vs 3 920.4±10.0 vs 8 787.4±63.7(P0.05)。在CD36抗原表达的非缺失型中,男性127例、女性9例,其血小板上CD36抗原的MFI分别为3 678.36±13.5 vs 5 296.0±314.4。结论江苏地区汉族人群血小板CD36抗原表达具有多样性。