食管鳞状细胞癌中细胞周期素 D1和 P16蛋白的表达及意义

目的：探讨食管鳞状细胞癌中周期素D1（CyclinD1）和P16蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法及Western blot方法检测食管鳞状细胞癌组织及食管正常黏膜组织中CyclinD1及P16蛋白表达水平,并分析其与临床病理学指标之间的关系,探讨食管鳞状细胞癌组织中CyclinD1与P16蛋白表达的相关性。结果免疫组化显示,CyclinD1在食管癌组织中的阳性表达率高于食管正常黏膜组织（P＜0.05）,P16在食管癌组织中的阳性表达率低于食管正常黏膜组织（ P＜0.05）。 Western blot 检测结果显示,食管癌组织中CyclinD1蛋白表达量明显高于食管正常黏膜组织（P＜0.05）,P16蛋白表达量明显低于食管正常黏膜组织（P＜0.05）。 CyclinD1的表达与肿瘤浸润深度、是否淋巴结转移、肿瘤分化程度有关（P＜0.05）,P16的表达与是否淋巴结转移有关（P＜0.05）。食管癌组织中CyclinD1与P16蛋白表达之间无明显相关性（P＞0.05）。结论检测CyclinD1和P16蛋白表达有望作为评估食管鳞状细胞癌生物学行为和预后的参考指标。     

circPVT1在食管鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析环状RNA circPVT1在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,并探讨circPVT1对ESCC细胞增殖、凋亡的影响.方法 收集2017年9月至2019年12月在河北省胸科医院行手术治疗的ESCC患者的ESCC组织及相应癌旁组织,共40例.采用qRT-PCR检测ESCC组织与...     

人食管鳞状细胞癌细胞株MT-3 mRNA的表达

目的 研究人食管鳞状细胞癌细胞金属硫蛋白-3(MT-3)mRNA的表达.方法选取5种人食管癌细胞株,其中TE-1、TE-13、TTN和ECA-109为食管鳞状细胞癌细胞株,OE33为食管腺癌细胞株.应用RT-PCR技术检测各细胞株中MT-3 mRNA的表达.以正常人外周血单核细胞作为正常对照.结果 RT-PCR产物回收经DNA 序列测定表明为目的 基因MT-3 mRNA.凝胶电泳图像显示所有被测样本均有MT-3 mRNA表达;数据分析显示,人食管癌细胞株TE-1、TE-13、TTN、ECA-109和OE33中MT-3 mRNA的相对表达量分别为0.230±0.023、0.516±0.020、0.140±0.009、0.176±0.015和0.085±0.011,明显低于正常对照的0.762±0.026,经比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论人食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3 mRNA表达水平下降.提示食管鳞状细胞癌的发生可能与MT-3 mRNA的异常低表达有关.     

上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨上调环状RNA_8199表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:RT-PCR检测ESCC细胞系KYSE520中环状RNA_8199的表达;Sanger测序对环状RNA_8199反向剪接位点的PCR产物进行验证;将KYSE520细胞中提取的RNA分为RNase R处理组与对照组,R...     

人食管鳞状细胞癌细胞株MT-3 mRNA的表达

目的 研究人食管鳞状细胞癌细胞金属硫蛋白-3(MT-3)mRNA的表达.方法选取5种人食管癌细胞株,其中TE-1、TE-13、TTN和ECA-109为食管鳞状细胞癌细胞株,OE33为食管腺癌细胞株.应用RT-PCR技术检测各细胞株中MT-3 mRNA的表达.以正常人外周血单核细胞作为正常对照.结果 RT-PCR产物回收经DNA 序列测定表明为目的 基因MT-3 mRNA.凝胶电泳图像显示所有被测样本均有MT-3 mRNA表达;数据分析显示,人食管癌细胞株TE-1、TE-13、TTN、ECA-109和OE33中MT-3 mRNA的相对表达量分别为0.230±0.023、0.516±0.020、0.140±0.009、0.176±0.015和0.085±0.011,明显低于正常对照的0.762±0.026,经比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论人食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3 mRNA表达水平下降.提示食管鳞状细胞癌的发生可能与MT-3 mRNA的异常低表达有关.     

LncRNA MEG3对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的 本研究旨在探究LncRNA MEG3在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）组织和细胞中的表达水平及对OSCC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。 方法 qRT-PCR法检测OSCC患者口腔粘膜组织、肿瘤组织、及Tca8113细胞系中LncRNA MEG3的表达水平。构建pcDNA3.1-MEG3重组质粒转染Tca8113细胞,分为3组：转染过表达pcDNA3.1-MEG3的质粒（MEG3组）和空质粒pcDNA3.1-NC （NC组）;空白对照组（BLANK组）加入PBS。分别采用qRT-PCR法、CCK-8法、流式细胞术和Transwell检测LncRNA MEG3表达、细胞增殖、凋亡率和侵袭能力。结果 与正常口腔粘膜组织和细胞相比,LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中的表达下调（P<0.05）。体外实验发现,与空白对照组和NC组相比,过表达LncRNA MEG3组细胞增殖和侵袭能力受到抑制,凋亡率明显升高（P<0.05）。结论 LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞中低表达;LncRNA MEG3过表达可抑制OCSS细胞的增殖和侵袭,促进凋亡。     

circPDE3B在食管鳞状细胞癌组织中的表达及对癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨circPDE3B在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及对癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:收集ESCC及相应癌旁正常食管组织各30例,采用qRT-PCR法检测circPDE3B的表达。将KYSE150细胞分组,分别转染si-NC、si-circPDE3B#1、si-circPDE3B#1+inhibitor NC、si-circPDE3B#1+miR-1294 inhibitor。采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验验证circPDE3B和miR-1294的靶向关系。结果:ESCC组织中circPDE3B的表达高于癌旁正常食管组织(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circPDE3B#1和si-circPDE3B#1+inhibitor NC组KYSE150细胞增殖抑制,克隆形成数、迁移细胞数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05);miR-1294 inhibitor可部分逆转以上变化(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示circP...     

microRNA-145对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨microRNA-145(miR-145)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖的影响。方法用脂质体法将miR-145转染入ESCC细胞,实验分为正常对照组、随机序列组和miR-145组。在荧光显微镜下观察细胞生长及基本形态,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-145的表达,采用噻唑蓝(MTT)增殖试验检测细胞增殖情况,用伤口愈合实验检测细胞迁移。结果 72h后,MTT增值实验显示,miR-145组[表达值为(0.56+0.04)]的癌细胞增殖速度较正常对照组[表达值为(0.98+0.09)]和随机序列组[表达值为(0.95+0.11)]明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-145对ESCC细胞的增殖可能有抑制作用。     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗（IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响。 方法 CNE-2分为急速照射（ART）组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min。另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同。照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平。 结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义（P均＞0.05）;Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义（P均<0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组。 结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗(IMRT)对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响.方法 CNE-2分为急速照射(ART)组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min.另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同.照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平.结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加.模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义(P均＞0.05);Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义(P均<0.05),且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组.结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高.     

Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌中表达的免疫组织化学研究

目的为探讨Cyclin D1和CyclinB1在鼻咽癌中的表达、相关性及临床意义.方法用免疫组化SP法分别检测Cyclin D1和Cyclin B1在58例鼻咽癌组织标本中的表达.结果Cyclin D1和Cyclin B1在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为58.6%(34/58)和60.3%(35/58);Cyclin D1和Cyclin B1 阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期存在显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌组织中Cyclin D1和Cyclin B1的表达一致率为60.3%(35/58),无显著相关.结论Cyclin D1和Cyclin B1表达均可以反映鼻咽癌的生存情况,在鼻咽癌预后预测中有重要意义.     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,CyclinD1及pRb的影响

目的 :分析外源性p16表达对CDK4,CyclinD1及pRb的影响 ,探讨其抑制细胞生长的机制。方法 :绘制生长曲线 ,比较细胞倍增时间 ,分析HNE1,# 4 - 2及 # 3- 2克隆中细胞增殖状况 ;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变 ;结合WesternBlot方法 ,分析外源性p16表达对CDK4,CyclinD1及pRb的影响。结果 :生长曲线示 ,HNE 1倍增时间为 2 3 4h ,# 3- 2和 # 4 - 2分别为 2 8 8h和 31 2h。流式细胞仪示 ,HNE1和 # 3- 2细胞周期无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,# 4 - 2细胞G0 /G1期细胞数明显增多 ,S期的细胞数显著降低 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。WesernBlot示外源性p16表达对CDK4表达水平影响并不显著 ,但下调 # 4 - 2中CyclinD1的表达 ,# 3- 2中CyclinD1的表达反而增强 ;各细胞系均可检测到低磷酸化的pRb ,但在 # 4 - 2 ,# 3- 2中表达强于HNE1及Hela细胞 ;HNE1还可检获高磷酸化的pRb。结论 :外源性p16表达使细胞停滞在G1期 ,抑制细胞生长 ,但其主要机制并非改变CDK4表达水平 ;而对CyclinD1的影响 ,随p16表达水平而变动 ,最终表现为抑制pRb磷酸化。     

硫链丝菌肽对人鼻咽癌HNE-1细胞生长及Foxm1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(TST)对人鼻咽癌HNE-1细胞株增殖能力及Forkhead box protein M1(Foxm1)表达的影响。方法以MTT法分别测定不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于人鼻咽癌HNE-1细胞48h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度(1、2μmol/L)TST分别作用于HNE-1细胞48h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法和Western blot检测HNE-1细胞中Foxm1蛋白表达以及不同浓度TST作用于HNE-1细胞48hFoxm1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于HNE-1细胞48h后的增殖抑制率分别为8.31%、17.46%、34.28%、58.68%、87.91%、99.05%;浓度分别为1、2μmol/L的TST作用于HNE-1细胞48h后,均使HNE-1细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于HNE-1细胞48后,经免疫细胞化学法和Western blot均检测到Foxm1蛋白在HNE-1细胞胞质中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人鼻咽癌HNE-1细胞株具有明显的增殖抑制作用,可能与降低肿瘤细胞中Foxm1蛋白表达有关。     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,Cyclin D1及pRb的影响

目的：分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响,探讨其抑制细胞生长的机制。方法：绘制生长曲线,比较细胞倍增时间,分析ＨＮＥ１,＃４－２及＃３－２克隆中细胞增殖状况;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变;结合Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法,分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响。结果：生长曲线示,ＨＮＥ－１倍增时间为２３．４ｈ,＃３－２和＃４     

COX-2、Cyclin D1和p-ERK1/2在食管鳞状细胞癌组织中的表达

目的 检测环氧化酶-2(COX-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2在食管鳞状细胞癌(ESCC)、食管上皮内瘤变及正常黏膜组织中的表达,探讨其在ESCC发生、发展过程中的作用及其临床病理意义.方法 采用免疫组化法检测90例ESCC、21例食管上皮内瘤变及69例正...     

三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D_1基因表达的影响

目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞CyclinD1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/LLaCl3,培养3、5、7d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测CyclinD1的基因表达。结果:0.1、1.0mmol/LLaCl3组培养3、5、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加;CyclinD1的转录和蛋白表达均显著减弱。结论:LaCl3可通过下调CyclinD1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。     

下调SOAT1表达对食管癌增殖和转移的影响

目的 通过siRNA干扰技术敲低食管癌细胞内甾醇氧乙酰基转移酶-1(SOAT1)表达,探究SOAT1异常表达对其生长、迁移及侵袭能力的影响.方法 Western blot和PCR方法检测食管癌组织及细胞系中SOAT1蛋白及mRNA相对表达量;通过RNA干扰技术下调KYSE30细胞内SOAT1的mRNA及蛋白表达;采用C...     

二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响

目的 研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响.方法 不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Western blot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinase 2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell dividecycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响.结果 DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性.DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响.结论 DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的袁达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一.