槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

microRNA-21对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨microRNA-21(miR-21)在人甲状腺乳头状癌中的表达及其对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖和凋亡能力的影响?方法:通过qRT-PCR检测12对甲状腺乳头状癌组织(PTC)与癌旁正常组织中miR-21的表达差异;将miR-21抑制试剂(Anti-miR-21)?过表达试剂(miR-21 mimic)分别转染入K1细胞,并各自设立阴性对照组,运用qRT-PCR验证K1细胞中miR-21的表达;MTT实验检测miR-21对K1细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测转染后K1细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞凋亡增殖相关蛋白的表达情况?结果:miR-21在PTC组织中的表达明显高于癌旁正常甲状腺组织(P < 0.05);与阴性对照组相比,瞬时转染Anti-miR-21的K1细胞miR-21的表达明显减弱(P < 0.01);MTT实验结果显示抑制miR-21表达后,K1细胞的增殖能力明显下降(P < 0.05);流式细胞仪检测显示转染Anti-miR-21后的K1细胞凋亡明显增加,凋亡率为19.5%,阴性对照组的凋亡率为9.4%;Western blot结果显示转染Anti-miR-21组K1细胞Bcl-2表达降低,Bax表达升高?转染miR-21mimic的K1细胞增殖和凋亡无明显改动?结论:miR-21在人甲状腺乳头状癌中呈高表达,抑制miR-21的表达能显著降低K1细胞的增殖能力,增加K1细胞凋亡率?     

番茄红素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素（lycopene,LP）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞随机分为5组：正常对照组、LP（20、10、5μg/ml）组和顺铂（40μg/ml）组（阳性对照组）,每组10个复孔。给药干预48h后,观察比较各组细胞生长状况并采用MTT比色法测定细胞增殖抑制率;通过流式细胞术（flow cytometry）分析细胞周期的改变、检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3蛋白表达并进行半定量分析,反转录PCR（RT-PCR）技术检测Bax mRNA和bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果 与正常对照组比较,LP各组SKOV3细胞呈现不同程度的细胞脱壁、细胞间松散等病理性状态,以LP 20μg/ml组最为显著;LP（20、10μg/ml）组细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率显著升高,caspase-3蛋白表达量显著增高,bcl-2 mRNA表达显著下调、Bax mRNA表达显著上调,Bax/bcl-2表达比值显著升高,上述差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 LP具有抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并促进其凋亡的作用,作用机制可能与LP能够有效提高caspase-3蛋白表达并下调bcl-2 mRNA表达、上调Bax mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值有关。     

白藜芦醇对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 应用0、10、20、40、80 μmol/L Res处理SKOV-3细胞24、48、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞生长抑制率;Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果 Res对SKOV-3细胞的生长抑制作用存在浓度和时间依赖性(P<0.05),Res作用SKOV-3细胞后,VEGF蛋白表达明显降低(P<0.05).结论 Res能明显抑制SKOV-3细胞的增殖,其机制可能与下调VEGF表达有关.     

ROCK在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK）在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法：免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达。用ROCK抑制剂Fasudil处理SKOV3细胞,细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）分析细胞凋亡水平,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase－３,caspase－3）活性,Western blot检测凋亡相关蛋白p53表达,比较不同浓度Fasudil对细胞增殖、细胞凋亡、caspase-3活性以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果：ROCK在恶性卵巢上皮性肿瘤的阳性表达明显高于良性肿瘤（ ?字2=20.961,P=0.000）,在晚期上皮性卵巢癌组织中其表达高于早期肿瘤（ ?字2=16.675,P=0.000）。不同浓度Fasudil处理组SKOV3细胞24 h增殖抑制率和凋亡率均明显高于未加药组（F=402.537,P=0.000;F=124.251,P=0.000）,并均随药物浓度增加而逐渐升高,且Fasudil呈浓度依赖性地增强caspase-3活性（F=32.423,P=0.000）和p53蛋白的表达（F=31.599,P=0.000）。结论：ROCK在卵巢癌组织中有较高表达,可能在卵巢癌细胞增殖和凋亡抑制中扮演一定角色。     

雌、孕激素对人卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究雌、孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增值、凋亡的影响,从而为临床采用孕激素辅助治疗卵巢癌提供依据。方法体外培养卵巢癌细胞,分为孕激素、雌激素用药组,MTT比色法观察对细胞增殖的影响,流式细胞仪观察对细胞凋亡率的影响。结果随着孕激素浓度的增加,对卵巢癌细胞增值的抑制作用明显增强,而且细胞的凋亡率升高．而雌激素组药物对细胞凋亡及增殖无明显作用。结论孕激素能够抑制卵巢癌细胞的增殖,并能够诱导细胞凋亡,雌激素对细胞增殖及凋亡无明确作用。     

罗格列酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的研究

目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对人卵巢癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响.方法 在SKOV3细胞培养液中加入不同浓度RSG(0.1、1.0、10和100 μmol/L),采用MTT法测定RSG对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞术检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学方法 检测干预前后细胞中PPARγ、c-myc的mRNA和蛋白水平变化.结果 MTT法结果 显示,RSG可抑制SKOV3细胞生长,并呈明显的浓度和时间依赖方式.流式细胞术结果 显示,RSG能明显诱导SKOV3细胞凋亡,在10、100 μmol/L RSG作用于SKOV3细胞24 h后,凋亡率分别为45.75%和51.97%,均明显高于对照组(6.82%,P<0.05);并使细胞周期阻止于G1期,呈浓度依赖方式.Hoechst33258荧光染色显示RSG处理后的SKOV3细胞中出现凋亡小体.免疫细胞化学和荧光定量RT-PCR结果 显示,人卵巢癌SKOV3细胞表达PPARγ,RSG作用于SKOV3细胞24 h后PPARγ的mRNA和蛋白表达水平上调,而c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调.结论 RSG具有抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长和诱导凋亡作用,使细胞周期阻滞于G1期;并通过活化PPARγ,下调c-myc的mRNA和蛋白表达水平.     

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响.方法 人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV/PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响.结果 MTT结果 显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),空白载体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪AnnexinV/PI法检测结果 显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到(79.52±2.31)%,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义(P<0.05).结论 靶向AKT基因的小干扰RNA(siRNA)可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法.     

刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×107/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×1010/L,6×1010/L,12×1010/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490nm值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×1010/L数量组72h抑制率最高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48h达到凋亡最高值(18.23%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验...     

沙利度胺抑制卵巢癌细胞SKOV-3体外生长的研究

目的:探讨沙利度胺对卵巢癌细胞株SKOV-3的增殖抑制以及凋亡的影响,为后续临床治疗及基础研究提供依据。方法:采用MTT法测定不同浓度沙利度胺作用于SKOV-3细胞株24 h后的吸光度,测定其对SKOV-3的增殖抑制率,Tunel染色法鉴定细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡,Q-PCR法检测caspase3 mRNA表达水平,Western Blot法检测caspase3蛋白表达水平。结果:沙利度胺的浓度从31μg/m L增加至500μg/m L时,对于SKOV-3的增殖抑制率从6.22%上升至86%;300μg/m L沙利度胺处理SKOV-3 24 h后,流式细胞术检测其凋亡率上升为52.66%,明显高于空白对照(P<0.01)。Tunel法在荧光显微镜下观察,沙利度胺组可见大片绿色荧光。同时,沙利度胺处理后的SKOV-3的caspase3 mRNA及蛋白表达量与空白对照组相比也明显上升(P<0.01)。结论:沙利度胺能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖并且能够诱导其凋亡。     

Influence of deleted in colorectal carcinoma gene on proliferation of ovarian cancer cell line SKOV-3 in vivo and in vitro

Objective To elucidate the effects of the deleted in colorectal carcinoma(DCC) gene on proliferation of ovarian cancer cell line SKOV-3.Method An exogenous recombinant eukaryotic expression vector pcDNA3.1(+)-DCC,containing human DCC cDNA coding sequences,was constructed and transfected into SKOV-3 cells(SKOV-3/DCC).The pcDNA3.1(+) transfected cells(SKOV-3/Neo) and SKOV-3 cells were used as the positive and negative controls,respectively.Expressions of DCC mRNA and protein were analyzed by RT-PCR and immunocytochemical analysis,respectively.Cell growth was detected by soft agar colony formation assay and MTT assay.Flow cytometry and transmission electron microscopy were used to assess the effects of DCC on cell cycle distribution and ultrastructure,respectively.BALB/c mice were used to evaluate the effects of DCC on tumorigenicity in vivo.Results RT-PCR and immunocytochemical analysis revealed the exogenous DCC gene was successfully transfected into SKOV-3 cell lines and obtained permanent expression.The half maximal inhibitory concentration(IC50) of SKOV-3/DCC cells was significantly lower than that of SKOV-3 or SKOV-3/Neo cells(all P<0.05).DCC expression caused SKOV-3 cells to be arrested in G1 phase(78.0%),and electron microscopic analysis showed SKOV-3/DCC cells displayed typical morphological changes of apoptosis.Two mice xenografted with SKOV-3/DCC cells showed no tumor tumorigenecity.The tumor volume of BALB/c mice bearing SKOV-3/DCC cells(3.403 mm3) was smaller than that of SKOV-3 cells(9.206 mm3).Conclusion DCC gene may play an important role in suppressing the growth of SKOV-3 cell line and inducing apoptosis.     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的：探讨姜黄素(cureumin)对体外培养人卵巢癌细胞株HO-8910细胞增殖、细胞周期调控及细胞凋亡的影响.方法：选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养,以1．25—20μg/ml姜黄素分别处理HO-8910细胞6-24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,SABC免疫组化检测细胞凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax的表达。结果：姜黄素对HO-8910生长有抑制作用,并呈剂量时间依赖性。流式细胞仪分析证实姜黄素能使HO-8910细胞积聚在S和G2／M期,并出现亚二倍体凋亡峰。Fas、Fas-L、Bcl-2表达均上调,Bax加药前后均为阳性。结论：姜黄素对人卵巢癌细胞株H0．8910的增殖具有显著的抑制作用;Fas、Fas-L、Bcl-2的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡影响的研究

目的：探讨表没食子儿茶素中没食子酸酯(epigallocatechin-3-ganate, EGCG)对人卵巢癌A2780细胞株及裸鼠移植瘤细胞增殖的抑制、凋亡的诱导作用及相关分子机制。方法：(1)在体外,通过电镜及四甲基偶氮唑盐酶比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)观察不同浓度EGCG在不同时间点作用于A2780细胞后,对其细胞形态及增殖活力的影响。(2)在体内,通过建立A2780细胞裸鼠移植瘤模型,分别比较腹腔注射EGCG低、中、高剂量组和未注射EGCG组之间肿瘤体积及重量的变化;免疫组化及实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)检测增殖相关基因Ki-67及凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达情况。结果：体外EGCG诱导A2780细胞的形态学改变;MTT法结果显示,EGCG能显著地抑制A2780细胞的增殖活性,并呈时间-浓度依赖性;体内EGCG注射组与未注射组相比肿瘤体积随用药浓度增加而减小,中、高剂量组与对照组比较差异有统计学意义;免疫组化和RT-PCR结果表明,EGCG能下调Ki-67、NF-κB(p65)、Bcl-2及上调Bax蛋白及mRNA的表达。结论：体外EGCG可有效抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖活力;体内EGCG能明显抑制人卵巢癌A2780细胞、裸鼠移植瘤细胞的增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与下调Ki-67和NF-κB(p65),促Bax/Bcl-2比值增高有关。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的 探讨三氧化二砷对人卵巢癌细胞株3AO细胞体外增殖和凋亡的影响作用。方法 人卵巢癌细胞株3AO细胞体外培养。实验组三氧化二砷浓度分别为0．5、1．0、2．0、4．0、8．0μmol/L,设加入空白培养液为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）及流式细胞技术（FCM）,计算各组细胞的生长抑制率、细胞凋亡率,并进行细胞周期分析。结果 三氧化二砷有效地抑制3AO细胞生长,具有时间及浓度依赖性,P＜0．01;三氧化二砷作用后,3AO细胞凋记随时间及浓度升高而升高,P＜0．01;三氧化二砷使3AO细胞S期增加。结论 三氧化二砷抑制3AO细胞生长,诱导其凋亡,并使其S期阻滞。